CN111398477B - 小儿止咳糖浆指纹图谱的构建方法及其应用 - Google Patents

小儿止咳糖浆指纹图谱的构建方法及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种小儿止咳糖浆指纹图谱的构建方法及其应用，涉及药物分析技术领域，包括采用超高效液相色谱分析待测样品，获取0～15min的色谱峰，得到小儿止咳糖浆指纹图谱；其中超高效液相色谱的分析条件为：流动相A包括洗脱缓冲液，流动相B包括乙腈；检测波长：0～12min为208～212nm；12～15min为235～239nm；流动相A在0～15min由95±5％v/v降至5±5％v/v；流动相B在0～15min由5±5％v/v升至95±5％v/v。该指纹图谱构建方法可以同时鉴别小儿止咳糖浆中多种化学成分，有效节约检测时间，对于全面评价小儿止咳糖浆的质量具有十分重要的意义。

Description

小儿止咳糖浆指纹图谱的构建方法及其应用
技术领域
本发明涉及药物分析技术领域，尤其是涉及一种小儿止咳糖浆指纹图谱的构建方法及其应用。
背景技术
小儿止咳糖浆为一种中药成方制剂，为红棕色的半透明黏稠液体，味甜。小儿止咳糖浆的主要成分包括甘草流浸膏、桔梗流浸膏、氯化铵和橙皮。甘草为豆科植物甘草的根及根状茎，具有祛痰止咳、镇咳、清热解毒、补脾益气、缓急止痛等功效；桔梗为桔梗科植物桔梗的根，有效成分包含皂苷，桔梗具有宣肺、祛痰、利咽、排脓、补气血、调畅气机、行气活血、止惊悸安心神和养气等功效；橙皮为芸香科植物甜橙的果皮，主要用于治疗脾胃气滞、脘腹胀闷、脾胃虚弱、消化不良、痰湿壅滞、恶心呕吐等症；氯化铵能刺激粘膜以增加痰量，使痰液易于排出，适用于干咳以及痰不易咳出等症状。小儿止咳糖浆主要用于小儿感冒引起的咳嗽，具有镇咳、祛痰、消炎等作用，是一种小儿止咳常用药。
我国目前推行的中药质量标准主要由药材或中成药制剂中单一或几个化合物的含量来对药物定性或定量，忽略了中药中多种成分、多种机制的协同作用，难以全面衡量中药的疗效和质量。指纹图谱是指制剂中所共有的、具有特征性的某类或数类成分的色谱或光谱的图谱，指纹图谱的建立对于有效控制其制剂的质量和真伪具有十分重要的意义。指纹图谱是基于对中药物质群整体作用的认识来实现鉴别中药真实性，评价中药质量一致性和产品稳定性的可行模式，具有信息量大和特征性强的优点。指纹图谱包括了对已知成分和未知成分的分析，具有高度特异性和选择性，可较充分地反映出中药复杂混合体系中各种化学成分含量分布的整体状况。
小儿止咳糖浆在《中国药典》中目前的质量控制方法主要体现在甘草和氯化铵的含量控制方面，而缺少对橙皮和桔梗的质量控制，不能达到对制剂进行全面质量评价的目的。因此提供一种小儿止咳糖浆的指纹图谱的构建方法，有助于小儿止咳糖浆的成分分析和质量鉴定。
有鉴于此，特提出本发明。
发明内容
本发明的第一目的在于提供一种小儿止咳糖浆指纹图谱的构建方法，该指纹图谱构建方法可以同时鉴别小儿止咳糖浆中多种化学成分，有效节约检测时间，对于全面评价小儿止咳糖浆的质量具有十分重要的意义。
本发明的第二目的在于提供一种采用上述小儿止咳糖浆指纹图谱的构建方法构建得到的指纹图谱。
本发明的第三目的在于提供一种小儿止咳糖浆的检测方法。
为解决上述技术问题，本发明特采用如下技术方案：
根据本发明的一个方面，本发明提供了一种小儿止咳糖浆指纹图谱的构建方法，包括采用超高效液相色谱分析待测样品，获取0～15min的色谱峰，得到小儿止咳糖浆指纹图谱；其中超高效液相色谱的分析条件为：
流动相A包括洗脱缓冲液，流动相B包括乙腈；
检测波长：0～12min为208～212nm；12～15min为235～239nm；
流动相A在0～15min由95±5％v/v降至5±5％v/v；
流动相B在0～15min由5±5％v/v升至95±5％v/v。
根据本发明的另一个方面，本发明还提供了一种采用所述构建方法构建得到的小儿止咳糖浆指纹图谱。
根据本发明的另一个方面，本发明还提供了所述小儿止咳糖浆指纹图谱的构建方法或所述小儿止咳糖浆指纹图谱在小儿止咳糖浆检测中的应用。
根据本发明的另一个方面，本发明还提供了一种小儿止咳糖浆的检测方法。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
本发明采用超高效液相色谱方法建立了一种小儿止咳糖浆指纹图谱构建方法，可以有效节约检测时间、减少流动相的用量、减少对照品和供试品的用量。采用本发明提供的超高效液相色谱分析条件得到的色谱峰分离度好，采用双波长检测可使小儿止咳糖浆中各主要成分同时体现在一张指纹图谱中，能够完整的反应小儿止咳糖浆中有效成分以及成分含量的分布。本发明提供的构建方法可同时鉴别甘草、橙皮、桔梗中的主要指标成分，对于全面评价小儿止咳糖浆的质量具有十分重要的意义，有效的避免了个别成分测定难以反映产品的真实投料情况的技术问题。基于小儿止咳糖浆指纹图谱建立的小儿止咳糖浆质量检测和控制方法能够全面分析样品中的主要成分相对含量，通过视觉直观辨识图谱的异同来判断样品的真伪、优劣，为辨别小儿止咳糖浆的真伪、全面评价小儿止咳糖浆的质量提供了全新的、快速准确的方法和手段。
附图说明
为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明实施例1构建的小儿止咳糖浆对照指纹图谱。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。本文中所用的专业与科学术语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法或材料也可应用于本发明中。
需要说明的是：
本发明中，如果没有特别的说明，本文所提到的所有实施方式以及优选实施方法可以相互组合形成新的技术方案；本文所提到的所有技术特征以及优选特征可以相互组合形成新的技术方案。
本发明中，除非有其他说明，数值范围“a～b”表示a到b之间的任意实数组合的缩略表示，其中a和b都是实数。本发明所公开的“范围”以下限和上限的形式，可以分别为一个或多个下限，和一个或多个上限。
本发明中，除非另有说明，各个反应或操作步骤可以顺序进行，也可以按照顺序进行。优选地，本文中的反应方法是顺序进行的。
根据本发明的一个方面，本发明提供了一种小儿止咳糖浆指纹图谱的构建方法，该方法采用超高效液相色谱分析待测样品，获取0～15min的色谱峰作为小儿止咳糖浆指纹图谱。
超高效液相色谱是一种基于小颗粒填料的液相色谱技术(Ultra PerformanceLiquid Chromatography，UPLC)。UPLC的理论基于范德米特(Van Deemeter)方程：HETP＝AdP+B/ν+CdP2ν，HETP为理论塔板高度；A为涡流扩散系数；dP为填料粒径；B为分子径向扩散系数；C为传质因子；ν为流动相线速度。由范德米特方程可以得出结论：颗粒度越小柱效越高。UPLC采用粒径小于2μm的小颗粒填料色谱柱和超高压系统，显著改善色谱峰的分离度和检测灵敏度。相比于高效液相色谱法测定，本发明采用超高效液相色谱可以有效缩短检测时间约30分钟，同时可以减少流动相用量、降低对照品溶液和供试品溶液的进样量。
本发明还优化了采用UPLC对小儿止咳糖浆进行分析时的工艺参数，在至少一些实施方式中，超高效液相色谱的分析条件具体如下：
流动相A包括洗脱缓冲液，流动相A在0～15min由95±5％v/v降至5±5％v/v，流动相A在0min时的体积浓度例如可以为但不限于为90％v/v、91％v/v、92％v/v、93％v/v、94％v/v、95％v/v、96％v/v、97％v/v、98％v/v、99％v/v或100％v/v；在15min时的体积浓度例如可以为但不限于为0％v/v、1％v/v、2％v/v、3％v/v、4％v/v、5％v/v、6％v/v、7％v/v、8％v/v、9％v/v或10％v/v。
流动相B包括乙腈，流动相B在0～15min由5±5％v/v升至95±5％v/v，流动相B在0min时的体积浓度例如可以为但不限于为0％v/v、1％v/v、2％v/v、3％v/v、4％v/v、5％v/v、6％v/v、7％v/v、8％v/v、9％v/v或10％v/v；在15min时的体积浓度例如可以为但不限于为90％v/v、91％v/v、92％v/v、93％v/v、94％v/v、95％v/v、96％v/v、97％v/v、98％v/v、99％v/v或100％v/v。
其中，％v/v表示流动相A或流动相B占流动相总体积的百分比。
在一些优选的实施方式中，超高效液相色谱的浓度梯度洗脱程序如下时可有效改善图谱基线不平的情况：
流动相A：0～4min由95±5％v/v降至80±5％v/v；4～14min由80±5％v/v降至50±5％v/v；14～15min由50±5％v/v降至5±5％v/v。
流动相A在4min的体积浓度例如可以为但不限于为75％v/v、76％v/v、77％v/v、78％v/v、79％v/v、80％v/v、81％v/v、82％v/v、83％v/v、84％v/v或85％v/v。
流动相A在14min的体积浓度例如可以为但不限于为45％v/v、46％v/v、47％v/v、48％v/v、49％v/v、50％v/v、51％v/v、52％v/v、53％v/v、54％v/v或55％v/v。
流动相B：0～4min由5±5％v/v升至20±5％v/v；4～14min由20±5％v/v升至50±5％v/v；14～15min由50±5％v/v升至95±5％v/v；
流动相B在4min的体积浓度例如可以为但不限于为15％v/v、16％v/v、17％v/v、18％v/v、19％v/v、20％v/v、21％v/v、22％v/v、23％v/v、24％v/v或25％v/v。
流动相B在14min的体积浓度例如可以为但不限于为45％v/v、46％v/v、47％v/v、48％v/v、49％v/v、50％v/v、51％v/v、52％v/v、53％v/v、54％v/v或55％v/v。
在一些优选的实施方式中，超高效液相色谱的浓度梯度洗脱程序为：
流动相A：0～4min由95±1％v/v降至80±1％v/v；4～14min由80±1％v/v降至50±1％v/v；14～15min由50±1％v/v降至5±1％v/v；
流动相B：0～4min由5±1％v/v升至20±1％v/v；4～14min由20±1％v/v升至50±1％v/v；14～15min由50±1％v/v升至95±1％v/v。
在一些更优选的实施方式中，超高效液相色谱的浓度梯度洗脱程序为：
流动相A：0～4min由95％v/v降至80％v/v；4～14min由80％v/v降至50％v/v；14～15min由50％v/v降至5％v/v；
流动相B：0～4min由5％v/v升至20％v/v；4～14min由20％v/v升至50％v/v；14～15min由50％v/v升至95％v/v。
在一些优选的实施方式中，流动相A包括磷酸缓冲液，磷酸缓冲液优选0.09～0.11％w/v磷酸溶液，磷酸溶液中磷酸浓度例如可以为但不限于为0.09％w/v、0.1％w/v或0.11％w/v，优选为0.1％w/v。
本发明在采用超高效液相色谱分析样品时，采用双波长检测，双波长检测可使小儿止咳糖浆中各主要成分同时体现在一张指纹图谱中，具体的：
在0～12min时，采用208～212nm的波长检测，例如可以为但不限于为208nm、209nm、210nm、211nm或212nm，优选为210nm。
在12～15min时，采用235～239nm的波长检测，例如可以为但不限于为235nm、236nm、237nm、238nm或239nm，优选为237nm。
在一些优选的实施方式中，流动相的洗脱速度为0.3～0.5mL/min，例如可以为但不限于为0.3mL/min、0.35mL/min、0.4mL/min、0.45mL/min或0.5mL/min，优选为0.35～0.45mL/min，更优选为0.4mL/min。
在一些优选的实施方式中，理论塔板数按照甘草酸铵峰计算不低于200000。
在一些优选的实施方式中，超高效液相色谱分析中，固定相包括十八烷基硅烷键合硅胶，十八烷基硅烷键合硅胶具有柱效高，传质速度快，稳定性好，耐溶剂冲洗和耐高温的优点。在一些具体的实施例中，色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，柱长为150mm，柱内径为2.1mm，粒径为1.8μm。柱温优选为25～35℃，例如可以为但不限于为25℃、28℃、30℃、32℃或35℃，优选为28～32℃，更优选为30℃。
在一些可选的实施方式中，当待测样品为供试品溶液时，供试品溶液包括浓度为9～11％v/v的小儿止咳糖浆溶液的续滤液，优选为10％v/v小儿止咳糖浆溶液的续滤液，续滤液指的是过滤小儿止咳糖浆时舍弃初始滤液后得到的滤液，以续滤液作为供试品溶液可以降低对样品进行前处理时带来的人为误差。小儿止咳糖浆溶液的溶剂优选包括甲醇，小儿止咳糖浆中主要是水溶性的成分，选择用甲醇稀释样品可以最大程度兼顾样品中小极性成分的测定，使供试液的指纹图谱中体现出的特征峰最多。
在一些可选的实施方式中，当待测样品为参照物溶液时，参照物溶液中包括甘草酸铵对照品、橙皮苷对照品和桔梗皂苷D对照品。其中参照物溶液中甘草酸铵对照品的浓度和橙皮苷对照品的浓度分别独立的为45～55μg/mL，例如可以为但不限于为45μg/mL、47.5μg/mL、50μg/mL、52.5μg/mL或55μg/mL，分别独立的优选为50μg/mL。参照物溶液中桔梗皂苷D对照品的浓度为19～21μg/mL，例如可以为但不限于为19μg/mL、19.5μg/mL、20μg/mL、20.5μg/mL或21μg/mL。参照物溶液的溶剂优选包括甲醇，更优选为45～55％v/v甲醇水溶液，甲醇浓度例如可以为但不限于为45％v/v、47.5％v/v、50％v/v、52.5％v/v或55％v/v，优选为50％v/v甲醇水溶液。
在一些优选的实施方式中，小儿止咳糖浆指纹图谱的构建方法如下：
(a)提供供试品溶液：取小儿止咳糖浆，精密量取1mL至10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，过滤，收集续滤液作为供试品溶液。
(b)提供参照品溶液：取甘草酸铵对照品、橙皮苷对照品、桔梗皂苷D对照品适量，精密称定，加入50％甲醇分别制成每l mL各含50μg、50μg、20μg的混合溶液，即得。
(c)分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各1μL，注入超高效液相色谱仪，测定，即得小儿止咳糖浆指纹图谱，超高效液相色谱分析条件为：
流动相A为0.1％w/v磷酸溶液，0～4min由95％v/v降至80％v/v；4～14min由80％v/v降至50％v/v；14～15min由50％v/v降至5％v/v。
流动相B为乙腈，0～4min由5％v/v升至20％v/v；4～14min由20％v/v升至50％v/v；14～15min由50％v/v升至95％v/v。
流动相流速为0.4mL/min；0～12min的检测波长为210nm，12～15min的检测波长为237nm。
色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，柱长为150mm，柱内径为2.1mm，粒径为1.8μm，柱温为30℃，理论塔板数按照甘草酸铵峰计算不低于200000。
在一些可选的实施方式中，所述构建方法还包括获取不同批次的小儿止咳糖浆的指纹图谱，获取共有特征峰合成对照指纹图谱。对照指纹图谱含有小儿止咳糖浆指纹图谱中的共有特征峰，可以作为单个样品指纹图谱的比较标准，以用于评价待测小儿止咳糖浆样品中的化学成分的组成和含量。获取不同批次小儿止咳糖浆的指纹图谱中共有特征峰可采用本领域的常规方法，比如常规的算法或软件实现，本发明对此不作限制。在一些具体的实施例中，采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统将不同批次的小儿止咳糖浆的指纹图谱合成对照指纹图谱，在一些具体的实施方式中，采用的是中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2.0版)。
在一些优选的实施方式中，小儿止咳糖浆的对照指纹图谱包括12个共有特征峰，以甘草酸铵为参照峰，12个特征峰的相对保留时间分别为：峰1：0.265～0.293、峰2：0.336～0.371、峰3：0.429～0.474、峰4：0.458～0.506、峰5：0.469～0.518、峰6：0.479～0.530、峰7：0.563～0.622、峰8：0.629～0.695、峰9：0.685～0.757、峰10：0.703～0.777、峰11：1.000、峰12：1.013～1.119；其中峰7为橙皮苷对照峰，峰10为桔梗皂苷D对照峰，峰11为甘草酸铵对照峰，这些共有特征峰共同构成了小儿止咳糖浆主要成分的对照指纹特征。
根据本发明的另一个方面，本发明还提供了采用上述构建方法构建得到的小儿止咳糖浆指纹图谱。采用上述构建方法可以获取小儿止咳糖浆的指纹图谱，参照品的指纹图谱以及小儿止咳糖浆的对照指纹图谱。
在一些可选的实施方式中，采用上述构建方法构建得到的指纹图谱为小儿止咳糖浆的对照指纹图谱，所述对照指纹图谱包含12个共有特征峰，以甘草酸铵为参照峰，12个特征峰的相对保留时间分别为：峰1：0.265～0.293、峰2：0.336～0.371、峰3：0.429～0.474、峰4：0.458～0.506、峰5：0.469～0.518、峰6：0.479～0.530、峰7：0.563～0.622、峰8：0.629～0.695、峰9：0.685～0.757、峰10：0.703～0.777、峰11：1.000、峰12：1.013～1.119；其中峰7为橙皮苷对照峰，峰10为桔梗皂苷D对照峰，峰11为甘草酸铵对照峰。
在一些优选的实施方式中，小儿止咳糖浆的对照指纹图谱的相对峰面积分别为：以甘草酸铵为参照峰，峰1：0.142～0.157、峰2：0.366～0.404、峰3：0.421～0.465、峰4：0.541～0.598、峰5：0.991～1.095、峰6：0.496～0.548、峰7：1.366～1.510、峰8：0.449～0.497、峰9：0.354～0.391、峰10：0.167～0.184、峰11：1.000、峰12：0.273～0.301。
根据本发明的另一个方面，本发明还提供了上述小儿止咳糖浆的指纹图谱的构建方法或小儿止咳糖浆指纹图谱在小儿止咳糖浆检测中的应用。上述指纹图谱的构建方法可以用于构建待测小儿止咳糖浆的指纹图谱，以用于和参照品溶液的指纹图谱或对照指纹图谱比较，检测待测样品中化学成分的组成和分布是否符合质量要求；采用上述构建方法构建得到的指纹图谱，尤其是对照指纹图可以用于作为质量检测中的对照标准，以检测不同批次间小儿止咳糖浆的有效成分的差异；上述构建方法或指纹图谱还可以用于分析小儿止咳糖浆的原料批次、产地和质量等因素对小儿止咳糖浆成分的影响等。
根据本发明的另一个方面，本发明还提供了一种小儿止咳糖浆质量检测的方法，包括采用上述指纹图谱的构建方法得到待测样品的指纹图谱，通过分析待测样品指纹图谱中色谱峰的分布，分析待测样品中化学成分的组成，以判别小儿止咳糖浆的质量。
在一些优选的实施方式中，所述检测方法包括将待检测小儿止咳糖浆样品的指纹图谱与对照指纹图谱进行比对，依据相似度大小进行小儿止咳糖浆质量判断。通过指纹图谱控制方法，建立了小儿止咳糖浆中主要成分对照指纹图谱；通过待测样品指纹图谱与对照指纹图谱比对，可以判断待测小儿止咳糖浆的质量及真伪，为完整、准确评价小儿止咳糖浆的质量提供了新的方法和手段。待检测小儿止咳糖浆的指纹图谱与小儿止咳糖浆对照指纹图谱比较，优选质量判断的标准为全峰匹配后相似度应≥0.9，相似度优选按照中药色谱指纹图谱相似度评价系统计算。
下面结合优选实施例进一步说明本发明的技术方案和有益效果。
实施例1
(a)提供供试品溶液：取小儿止咳糖浆，精密量取1mL至10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，过滤，收集续滤液作为供试品溶液。
(b)提供参照物溶液：取甘草酸铵对照品、橙皮苷对照品、桔梗皂苷D对照品适量，精密称定，加入50％甲醇分别制成每lmL各含50μg、50μg、20μg的混合溶液，即得。
(c)分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各1μL，注入超高效液相色谱仪，进行超高效液相色谱分析，得到参照物和小儿止咳糖浆的指纹图谱，超高效液相色谱分析条件为：
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(柱长为150mm，柱内径为2.1mm，粒径为1.8μm)；以0.1％w/v磷酸溶液为流动相A，以乙腈为流动相B进行梯度洗脱；柱温：30℃；检测波长：0～12min为210nm，12～15min为237nm；流速：0.4mL/min，理论塔板数按照甘草酸铵峰计算不低于200000。
(d)流动相梯度洗脱的程序如下述体积比：
0min时，流动相A：流动相B＝95:5；
4min时，流动相A：流动相B＝80:20；
14min时，流动相A：流动相B＝50:50；
15min时，流动相A：流动相B＝5:95。
(e)，所述对照指纹图谱的建立包括随机抽取2018年-2019年不同时间生产的120ml规格(批号为：1801001、1802001、1803001、1804001、1807001、1809001、1811001、1812001、1901001、1903001、1904001、1905001、1906001、1908001、1909001)和150ml规格(批号为：1804001、1807001、1811001、1904001、1908001)共20批次的小儿止咳糖浆，按上述色谱条件检测后，使用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2.0版)软件将不同批次的小儿止咳糖浆的指纹图谱合成对照指纹图谱，如图1所示。
图1对照指纹图谱中包含12个特征峰，以11号峰甘草酸铵为参照峰，12个特征峰的相对保留时间分别为：峰1：0.265～0.293、峰2：0.336～0.371、峰3：0.429～0.474、峰4：0.458～0.506、峰5：0.469～0.518、峰6：0.479～0.530、峰7：0.563～0.622、峰8：0.629～0.695、峰9：0.685～0.757、峰10：0.703～0.777、峰11：1.000、峰12：1.013～1.119；其中有3个特征峰指认如下：峰7为橙皮苷对照峰，峰10为桔梗皂苷D对照峰，峰11为甘草酸铵对照峰。
以11号峰甘草酸铵为参照峰，相对峰面积分别为：峰1：0.142～0.157、峰2：0.366～0.404、峰3：0.421～0.465、峰4：0.541～0.598、峰5：0.991～1.095、峰6：0.496～0.548、峰7：1.366～1.510、峰8：0.449～0.497、峰9：0.354～0.391、峰10：0.167～0.184、峰11：1.000、峰12：0.273～0.301。
实施例2
另取2019年生产的10批不同规格的999牌小儿止咳糖浆，按上述色谱条件测定后与对照指纹图谱比较并计算相似度，结果见表1，相似度均在0.91～0.96之间，说明本发明构建的指纹图谱测定方法可用于小儿止咳糖浆的质量控制。
表1：小儿止咳糖浆指纹图谱相似度检测结果
小儿止咳糖浆批号 规格ml/瓶 相似度
1804005 150 0.93
1807002 150 0.95
1811002 150 0.91
1901002 120 0.93
1903002 120 0.93
1904002 120 0.92
1904003 150 0.93
1905002 120 0.94
1906002 120 0.96
1908003 150 0.93
最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。

Claims (27)

1.一种小儿止咳糖浆指纹图谱的构建方法，包括采用超高效液相色谱分析待测样品，获取0~15min的色谱峰，得到小儿止咳糖浆指纹图谱；其中超高效液相色谱的分析条件为：
固定相为十八烷基硅烷键合硅胶；
流动相A为洗脱缓冲液，所述洗脱缓冲液为磷酸溶液；
流动相B为乙腈；
供试品溶液的溶剂为甲醇，参照物溶液的溶剂为甲醇水溶液；
检测波长：0~12min为208~212nm；12~15min为235~239nm；
超高效液相色谱的浓度梯度洗脱程序为：
流动相A：0~4min由95%v/v降至80%v/v；4~14min由80%v/v降至50%v/v；14~15min由50%v/v降至5%v/v；
流动相B：0~4min由5%v/v升至20%v/v；4~14min由20%v/v升至50%v/v；14~15min由50%v/v升至95%v/v。
2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述磷酸溶液的浓度为0.09~0.11%w/v。
3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述磷酸溶液的浓度为0.1%w/v。
4.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，流动相速度为0.3~0.5mL/min。
5.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，流动相速度为0.35~0.45mL/min。
6.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，流动相速度为0.4 mL/min。
7.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，0~12min的检测波长为210nm。
8.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，12~15min的检测波长为237nm。
9.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，柱温为25~35℃。
10.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，柱温为28~32℃。
11.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，柱温为30℃。
12.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，理论塔板数按照甘草酸铵峰计算不低于200000。
13.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述待测样品包括供试品溶液，所述供试品溶液为浓度为9~11% v/v的小儿止咳糖浆溶液的续滤液。
14.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述供试品溶液为10% v/v小儿止咳糖浆溶液的续滤液。
15.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述待测样品还包括参照物溶液，所述参照物溶液中包括甘草酸铵对照品、橙皮苷对照品和桔梗皂苷D对照品。
16.根据权利要求15所述的构建方法，其特征在于，所述参照物溶液中甘草酸铵对照品的浓度和橙皮苷对照品的浓度分别独立的为45~55μg/mL。
17.根据权利要求15所述的构建方法，其特征在于，所述参照物溶液中甘草酸铵对照品的浓度和橙皮苷对照品的浓度均为50μg/mL。
18.根据权利要求15所述的构建方法，其特征在于，所述参照物溶液中桔梗皂苷D对照品的浓度为19~21μg/mL。
19.根据权利要求15所述的构建方法，其特征在于，所述参照物溶液中桔梗皂苷D对照品的浓度为20μg/mL。
20.根据权利要求15所述的构建方法，其特征在于，所述参照物溶液的溶剂为45~55%v/v甲醇水溶液。
21.根据权利要求15所述的构建方法，其特征在于，所述参照物溶液的溶剂为50% v/v甲醇水溶液。
22.根据权利要求1-21任一项所述的构建方法，其特征在于，所述构建方法还包括获取不同批次的小儿止咳糖浆的指纹图谱，获取共有特征峰合成对照指纹图谱。
23.根据权利要求1-21任一项所述的构建方法，其特征在于，采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统合成对照指纹图谱。
24.根据权利要求23所述的构建方法，其特征在于，所述对照指纹图谱包括12个共有特征峰，以甘草酸铵为参照峰，12个特征峰的相对保留时间分别为：峰1：0.265～0.293、峰2：0.336～0.371、峰3：0.429～0.474、峰4：0.458～0.506、峰5：0.469～0.518、峰6：0.479～0.530、峰7：0.563～0.622、峰8：0.629～0.695、峰9：0.685～0.757、峰10：0.703～0.777、峰11：1.000、峰12：1.013～1.119；其中峰7为橙皮苷对照峰，峰10为桔梗皂苷D对照峰，峰11为甘草酸铵对照峰。
25.权利要求1-24任一项所述构建方法在小儿止咳糖浆检测中的应用。
26.一种小儿止咳糖浆的检测方法，其特征在于，采用权利要求1-24任一项所述构建方法构建小儿止咳糖浆的指纹图谱，依据指纹图谱判别小儿止咳糖浆的质量。
27.根据权利要求26所述的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括将待检测小儿止咳糖浆样品的指纹图谱与对照指纹图谱进行比对，依据相似度大小进行小儿止咳糖浆质量判断。
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