CN111388765A - 一种治疗动脉瘤和血管畸形的高分子材料与干细胞复合支架及其制法 - Google Patents

一种治疗动脉瘤和血管畸形的高分子材料与干细胞复合支架及其制法 Download PDF

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CN111388765A CN202010261358.5A CN202010261358A CN111388765A CN 111388765 A CN111388765 A CN 111388765A CN 202010261358 A CN202010261358 A CN 202010261358A CN 111388765 A CN111388765 A CN 111388765A
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Abstract

本发明提供了一种治疗动脉瘤和血管畸形的高分子材料与细胞复合支架生物支架，该支架的制备方法包括以下步骤：1)称取海藻酸钠溶于蒸馏水中，制成1％‑4％的海藻酸钠溶液；2)将海藻酸钠溶液冻干得到多孔状海藻酸钠海绵；3)将多孔状海藻酸钠海绵浸泡入混合溶液中搅拌反应20‑40min；4)将多孔海藻酸钙海绵用蒸馏水冲洗；5)将多孔海藻酸钙海绵冻干得到高分子材料支架；6)将所述高分子材料支架放置于间充质干细胞的单细胞悬液中处理至间充质干细胞附着于支架上，即得；本发明提供的高分子材料与细胞复合支架生物支架对间充质干细胞的负载率高，方便将相应的间充质干细胞定植到动脉瘤患处。

Description

一种治疗动脉瘤和血管畸形的高分子材料与干细胞复合支架 及其制法
技术领域
本发明属于生物材料技术领域，特别涉及一种治疗动脉瘤和血管畸形的高分子材料与干细胞复合支架及其制法。
背景技术
动脉瘤性蛛网膜下腔出血(aSAH)是一种高发病率﹑高致死率疾病，近年来，细胞治疗已成为治疗各种疾病的新策略，目的是替代和恢复受损细胞的结构及功能。干细胞治疗有望成为该类急性aSAH患者的一种辅助治疗方法，以减轻患者脑出血后的继发性损伤，同时降低患者短时间内动脉瘤再出血的风险。但是细胞很难定植到动脉瘤患处，因此急需一种能够帮助干细胞固定在动脉瘤处的载体材料，且该载体同时具有生物相容性和可生物降解性。
发明内容
为了解决以上技术问题，本发明提供了一种治疗动脉瘤和血管畸形的高分子材料与细胞复合支架，该支架的制备方法包括以下步骤：
1)称取海藻酸钠溶于蒸馏水中，制成1％-4％的海藻酸钠溶液；
2)将海藻酸钠溶液冻干得到多孔状海藻酸钠海绵；
3)将多孔状海藻酸钠海绵浸泡入混合溶液中搅拌反应20-40min，所述混合溶液是用纯水溶解CaCl2和NaCl至CaCl2的浓度为40-60mM、 NaCl的浓度为180-220mM；
4)将多孔海藻酸钙海绵用蒸馏水冲洗；
5)将多孔海藻酸钙海绵冻干得到高分子材料支架；
6)将所述高分子材料支架放置于间充质干细胞的单细胞悬液中处理至间充质干细胞附着于支架上，即得治疗动脉瘤和血管畸形的高分子材料与细胞复合支架。
进一步地，步骤(2)的冻干是将海藻酸钠溶液放置在-20℃条件下冷冻12-24h，再放置于-50℃条件下真空冷冻干燥6-10h。
进一步地，步骤(4)用蒸馏水冲洗的次数为2-4次，每次冲洗 2-4min。
进一步地，步骤(5)的冻干是将其放置于-20℃条件下冷冻24h，再放置于-50℃条件下真空冷冻干燥6-10h。
进一步地，步骤6)将所述高分子材料支架放置于间充质干细胞的单细胞悬液中处理至间充质干细胞附着于支架上的具体方法为：将高分子材料支架材料放置于间充质干细胞的单细胞悬液中在37℃条件下搅拌培养30min，所述间充质干细胞的细胞密度为5x105个/ml，移除多余的单细胞悬液，补充等量的无血清培养基，将表面附着有间充质干细胞的高分子材料支架放置于培养反应器内贴壁培养30min，再更换无血清培养基培养1天，培养条件如下：温度为37.0±0.5℃、CO2浓度为5.0±0.2％，湿度为饱和湿度，搅拌速度为20-40r/min，即得基于合金内核的治疗动脉瘤用高分子材料与细胞复合支架。
进一步地，无血清培养基包括基础培养基和添加剂，所述基础培养基为DMEM/F12培养基；所述添加剂为浓度为20-30μg/ml的入纤连蛋白、浓度为5-15ng/ml的碱性成纤维细胞生长因子、浓度10-20ng/ml 的人表皮细胞生长因子、浓度为0.5-1.5％的ITS、浓度为4-6％的人血白蛋白；浓度为0.5-1.5％的NEAA、浓度为0.05-0.15μmol/L的氢化考的松、浓度为0.05-0.15％的β-巯基乙醇。
进一步地，步骤6)冻干后还进行辐照灭菌。
本发明还提供了一种治疗动脉瘤和血管畸形的高分子材料与细胞复合支架的制备方法，所述方法包括以下步骤：
A.称取海藻酸钠溶于蒸馏水中，制成1％-4％的海藻酸钠溶液；
B.将海藻酸钠溶液冻干得到多孔状海藻酸钠海绵；
C.将多孔状海藻酸钠海绵用蒸馏水冲洗；
D.将脱模后的多孔状海藻酸钠海绵浸泡入混合溶液中搅拌反应 20-40min，所述混合溶液是用纯水溶解CaCl2和NaCl至CaCl2的浓度为 40-60mM、NaCl的浓度为180-220mM；
E.将多孔海藻酸钙海绵用蒸馏水冲洗；
F.将多孔海藻酸钙海绵冻干得到高分子材料支架；
G.将所述高分子材料支架放置于间充质干细胞的单细胞悬液中处理至间充质干细胞附着于支架上，即得治疗动脉瘤和血管畸形的高分子材料与细胞复合支架。
本发明还提供了一种高分子材料支架，该支架的制备方法包括以下步骤；
S1：称取海藻酸钠溶于蒸馏水中，制成1％-4％的海藻酸钠溶液；
S2：将海藻酸钠溶液冻干得到多孔状海藻酸钠海绵；
S3：将多孔状海藻酸钠海绵用蒸馏水冲洗；
S4：将脱模后的多孔状海藻酸钠海绵浸泡入混合溶液中搅拌反应 20-40min，所述混合溶液是用纯水溶解CaCl2和NaCl至CaCl2的浓度为 40-60mM、NaCl的浓度为180-220mM；
S5：将多孔海藻酸钙海绵用蒸馏水冲洗；
S6：将多孔海藻酸钙海绵冻干得到高分子材料支架。
本发明还提供了治疗动脉瘤和血管畸形的高分子材料与细胞复合支架在制备提高细胞负载率的高分子材料与细胞复合支架中的应用。
本发明的复合支架的使用方法：局部或全身麻醉后，在患者腹股沟韧带下斜切口显露股动脉，或直接穿刺插入大动脉鞘，引入导丝及造影导管，进行血管造影并根据造影结果选择介入治疗的方式，在微导丝引导下,将支架输送导管送至动脉瘤颈,通过输送导管将支架引至动脉瘤处释放支架覆盖动脉瘤颈,行弹簧圈栓塞术，介入治疗结束，修补股动脉切口。
本发明提供的基于高分子材料内核的治疗动脉瘤用多孔纤维网状复合支架对间充质干细胞的负载率高，且支架材料本身可以生物降解，支架上附着的间充质干细胞定植到动脉瘤患处，逐渐长实血管瘤腔体，让血流无法进入，从而起到更好的治疗效果，减少复发的可能性。
附图说明
图1.基于高分子材料内核的治疗动脉瘤用多孔纤维网状复合支架接种间充质干细胞流程图；
图2.血管造影观察细胞治疗组的血管影像；
图3.血管造影观察细胞试验1组的血管影像；
图4.血管造影观察细胞试验2组的血管影像；
图5.血管造影观察细胞试验3组的血管影像；
图6.血管造影观察对照1组的血管影像。
具体实施方式
实施例1
本实施例提供了一种高分子材料支架，该高分子材料支架通过以下步骤处理制得：
S1：称取海藻酸钠溶于蒸馏水中，制成1％的海藻酸钠溶液；
S2：将海藻酸钠溶液置于长条形模具中冻干得到多孔状海藻酸钠海绵；
S3：用尖嘴镊直接将将多孔状海藻酸钠海绵从长条模具中取出脱模，用蒸馏水冲洗2次，每次冲洗2min；
S4：将脱模后的多孔状海藻酸钠海绵浸泡入混合溶液中搅拌反应， 20min，所述混合溶液是用纯水溶解CaCl2和NaCl至CaCl2的浓度为 40mM、NaCl的浓度为180mM；
S5：将多孔海藻酸钙海绵用蒸馏水冲洗；
S6：将多孔海藻酸钙海绵冻干得到高分子材料支架。
实施例2
本实施例提供了一种高分子材料支架，该高分子材料支架通过以下步骤处理制得：
S1：称取海藻酸钠溶于蒸馏水中，制成2％的海藻酸钠溶液；
S2：将海藻酸钠溶液置于长条形模具中冻干得到多孔状海藻酸钠海绵；
S3：用尖嘴镊直接将将多孔状海藻酸钠海绵从长条模具中取出脱模，用蒸馏水冲洗；
S4：将脱模后的多孔状海藻酸钠海绵浸泡入混合溶液中搅拌反应 30min，所述混合溶液是用纯水溶解CaCl2和NaCl至CaCl2的浓度为 50mM、NaCl的浓度为200mM；
S5：将多孔海藻酸钙海绵用蒸馏水冲洗；
S6：将多孔海藻酸钙海绵冻干得到高分子材料支架。
实施例3
本实施例提供了一种高分子材料支架，该高分子材料支架通过以下步骤处理制得：
S1：称取海藻酸钠溶于蒸馏水中，制成4％的海藻酸钠溶液；
S2：将海藻酸钠溶液置于长条形模具中冻干得到多孔状海藻酸钠海绵；
S3：用尖嘴镊直接将将多孔状海藻酸钠海绵从长条模具中取出脱模，用蒸馏水冲洗；
S4：将脱模后的多孔状海藻酸钠海绵浸泡入混合溶液中搅拌反应 40min，所述混合溶液是用纯水溶解CaCl2和NaCl至CaCl2的浓度为 60mM、NaCl的浓度为220mM；
S5：将多孔海藻酸钙海绵用蒸馏水冲洗；
S6：将多孔海藻酸钙海绵冻干得到高分子材料支架。
实施例4
本实施例提供一种治疗动脉瘤和血管畸形的高分子材料与细胞复合支架，该复合支架由高分子材料支架和骨髓间充质干细胞制成，制备方法包括以下步骤：
使用实施例1的方法制备高分子材料支架；
将高分子材料支架放置于骨髓间充质干细胞的单细胞悬液中处理至间充质干细胞附着于支架上，即得治疗动脉瘤和血管畸形的高分子材料与细胞复合支架；
附着的具体包括以下步骤：
将高分子材料支架材料放置于间充质干细胞的单细胞悬液中在 37℃条件下搅拌培养30min，所述间充质干细胞的细胞密度为5x105个/ml，移除多余的单细胞悬液，补充等量的无血清培养基，将表面附着有间充质干细胞的高分子材料支架放置于培养反应器中继续培养，即得治疗动脉瘤和血管畸形的高分子材料与细胞复合支架；
将表面附着有间充质干细胞的高分子材料支架放置于培养反应器中继续培养具体操作方法如下：将表面附着有间充质干细胞的高分子材料支架放置于培养反应器内贴壁培养30min，再更换无血清培养基培养1天，培养条件如下：温度为36.5℃、CO2浓度为5.0％，湿度为饱和湿度，搅拌速度为20r/min；
无血清培养基包括基础培养基和添加剂，所述基础培养基为 DMEM/F12培养基；所述添加剂为浓度为20μg/ml的入纤连蛋白、浓度为5ng/ml的碱性成纤维细胞生长因子、浓度10ng/ml的人表皮细胞生长因子、浓度为0.5％的ITS、浓度为4％的人血白蛋白；浓度为0.5％的NEAA、浓度为0.05μmol/L的氢化考的松、浓度为0.05％的β-巯基乙醇；
间充质干细胞的单细胞悬液通过以下方法制得：将间充质干细胞使用原代培养基培养1周，对原代培养后的细胞进行传代培养至细胞 70％汇合，使用0.25％胰酶-EDTA消化，即得间充质干细胞的单细胞悬液，所述原代培养基是以DMEM/F12培养基为基础培养基，再加入浓度为8％的胎牛血清、浓度为8ng/ml的EGF细胞因子，培养条件为：温度为36.5℃、CO2浓度为5.0％、湿度为饱和湿度，每隔三天更换一次培养基。
实施例5
本实施例提供一种治疗动脉瘤和血管畸形的高分子材料与细胞复合支架，该复合支架由高分子材料支架和骨髓间充质干细胞制成，制备方法包括以下步骤：
使用实施例2的方法制备高分子材料支架；
将高分子材料支架放置于骨髓间充质干细胞的单细胞悬液中处理至间充质干细胞附着于支架上，即得治疗动脉瘤和血管畸形的高分子材料与细胞复合支架；
附着的具体包括以下步骤：
将高分子材料支架材料放置于间充质干细胞的单细胞悬液中在 37℃条件下搅拌培养30min，所述间充质干细胞的细胞密度为5x105个/ml，移除多余的单细胞悬液，补充等量的无血清培养基，将表面附着有间充质干细胞的高分子材料支架放置于培养反应器中继续培养，即得治疗动脉瘤和血管畸形的高分子材料与细胞复合支架；
将表面附着有间充质干细胞的高分子材料支架放置于培养反应器中继续培养具体操作方法如下：将表面附着有间充质干细胞的高分子材料支架放置于培养反应器内贴壁培养30min，再更换无血清培养基培养1天，培养条件如下：温度为37.0℃、CO2浓度为5.0％，湿度为饱和湿度，搅拌速度为30r/min；
无血清培养基包括基础培养基和添加剂，所述基础培养基为 DMEM/F12培养基；所述添加剂为浓度为25μg/ml的入纤连蛋白、浓度为10ng/ml的碱性成纤维细胞生长因子、浓度15ng/ml的人表皮细胞生长因子、浓度为1％的ITS、浓度为5％的人血白蛋白；浓度为1％的 NEAA、浓度为0.1μmol/L的氢化考的松、浓度为1％的β-巯基乙醇；
间充质干细胞的单细胞悬液通过以下方法制得：将间充质干细胞使用原代培养基培养10天，对原代培养后的细胞进行传代培养至细胞 70％汇合，使用0.25％胰酶-EDTA消化，即得间充质干细胞的单细胞悬液，所述原代培养基是以DMEM/F12培养基为基础培养基，再加入浓度为10％的胎牛血清、浓度为10ng/ml的EGF细胞因子，培养条件为：温度为37.0℃、CO2浓度为5.0％、湿度为饱和湿度，每隔三天更换一次培养基。
实施例6
本实施例提供一种治疗动脉瘤和血管畸形的高分子材料与细胞复合支架，该复合支架由高分子材料支架和骨髓间充质干细胞制成，制备方法包括以下步骤：
使用实施例3的方法制备高分子材料支架；
将高分子材料支架放置于骨髓间充质干细胞的单细胞悬液中处理至间充质干细胞附着于支架上，即得治疗动脉瘤和血管畸形的高分子材料与细胞复合支架；
附着的具体包括以下步骤：
将高分子材料支架材料放置于间充质干细胞的单细胞悬液中在 37℃条件下搅拌培养30min，所述间充质干细胞的细胞密度为5x105个/ml，移除多余的单细胞悬液，补充等量的无血清培养基，将表面附着有间充质干细胞的高分子材料支架放置于培养反应器中继续培养，即得治疗动脉瘤和血管畸形的高分子材料与细胞复合支架；
将表面附着有间充质干细胞的高分子材料支架放置于培养反应器中继续培养具体操作方法如下：将表面附着有间充质干细胞的高分子材料支架放置于培养反应器内贴壁培养30min，再更换无血清培养基培养1天，培养条件如下：温度为37.5℃、CO2浓度为5.0％，湿度为饱和湿度，搅拌速度为40r/min；
无血清培养基包括基础培养基和添加剂，所述基础培养基为 DMEM/F12培养基；所述添加剂为浓度为30μg/ml的入纤连蛋白、浓度为15ng/ml的碱性成纤维细胞生长因子、浓度20ng/ml的人表皮细胞生长因子、浓度为1.5％的ITS、浓度为6％的人血白蛋白；浓度为1.5％的NEAA、浓度为0.15μmol/L的氢化考的松、浓度为0.15％的β-巯基乙醇；
间充质干细胞的单细胞悬液通过以下方法制得：将间充质干细胞使用原代培养基培养2周，对原代培养后的细胞进行传代培养至细胞 70％汇合，使用0.25％胰酶-EDTA消化，即得间充质干细胞的单细胞悬液，所述原代培养基是以DMEM/F12培养基为基础培养基，再加入浓度为12％的胎牛血清、浓度为12ng/ml的EGF细胞因子，培养条件为：温度为37.5℃、CO2浓度为5.0％、湿度为饱和湿度，每隔三天更换一次培养基。
对照例1
本对照例提供一种复合支架，该复合支架由生物支架和骨髓间充质干细胞制成，制备方法包括以下步骤：
使用以下方法制备生物支架：剪裁制作聚碳酸酯管，用聚乙烯封口膜密封管两端，然后将聚碳酸酯管进入30mg/ml海藻酸钠水溶液中 5min，聚碳酸酯管表面吸附海藻酸钠后取出进入4mol/l的GaCl2水溶液中10min使其完全交联，而后置于纯水中清洗10min，即得生物支架；
将生物支架放置于骨髓间充质干细胞的单细胞悬液中处理至间充质干细胞附着于支架上，即得复合支架；
附着的具体包括以下步骤：
将生物支架放置于间充质干细胞的单细胞悬液中在37℃条件下搅拌培养30min，所述间充质干细胞的细胞密度为5x105个/ml，移除多余的单细胞悬液，补充等量的无血清培养基，将表面附着有间充质干细胞的生物支架放置于培养反应器中继续培养，即得治疗动脉瘤和血管畸形的高分子材料与细胞复合支架；
将表面附着有间充质干细胞的生物支架放置于培养反应器中继续培养具体操作方法如下：将表面附着有间充质干细胞的生物支架放置于培养反应器内贴壁培养30min，再更换无血清培养基培养1天，培养条件如下：温度为37.0℃、CO2浓度为5.0％，湿度为饱和湿度，搅拌速度为30r/min；
无血清培养基包括基础培养基和添加剂，所述基础培养基为 DMEM/F12培养基；所述添加剂为浓度为25μg/ml的入纤连蛋白、浓度为10ng/ml的碱性成纤维细胞生长因子、浓度15ng/ml的人表皮细胞生长因子、浓度为1％的ITS、浓度为5％的人血白蛋白；浓度为1％的 NEAA、浓度为0.1μmol/L的氢化考的松、浓度为1％的β-巯基乙醇；间充质干细胞的单细胞悬液通过以下方法制得：将间充质干细胞使用原代培养基培养10天，对原代培养后的细胞进行传代培养至细胞70％汇合，使用0.25％胰酶-EDTA消化，即得间充质干细胞的单细胞悬液，所述原代培养基是以DMEM/F12培养基为基础培养基，再加入浓度为 10％的胎牛血清、浓度为10ng/ml的EGF细胞因子，培养条件为：温度为37.0℃、CO2浓度为5.0％、湿度为饱和湿度，每隔三天更换一次培养基。
试验例1治疗动脉瘤和血管畸形的高分子材料与细胞复合支架治疗能力试验
支架的制备：取实施例4-6和对照例1制备的支架，将制备好的细胞支架浸泡于DMEM/F12培养基中，用无菌的冻存管封装完毕后备用。
动物模型：实验使用外科缝合法兔动脉瘤模型，兔的麻醉和结扎法相同，游离双侧颈总动脉，用5—0线在合适位置双重结扎左颈总动脉近端及远端，用动脉夹夹闭右颈总动脉近端及远端，从左颈总动脉结扎段剪出长1cm小动脉段，浸泡于弹性蛋白酶溶液(5u/μl，E1250， Sigma)中20min，显微镜下分离右侧颈总动脉使之表面光滑，用显微剪刀于右颈总动脉纵行切开长约2mm小口，取出小动脉段，用生理盐水冲洗干净后在显微镜下用9—0无创缝合针线将其一端缝合在右侧颈总动脉之切口处，用小夹夹闭小动脉段另一端，取下原夹闭左颈总动脉远端及近端之动脉夹，见右颈总动脉及缝合之小动脉段充盈良好，载瘤动脉通畅，结扎小动脉段末端，此小动脉段即为该实验所要制作的右颈总动脉侧方动脉瘤，动脉模型建立1周后行动脉瘤模型造影，选出25只造模成功的动物用于实验。
实验方案：将造模动物随机分为5个实验组，细胞治疗组(n＝5)、试验1-3组(n＝5)、对照1组(n＝5)，麻醉后，在腹股沟韧带下斜切口显露股动脉，直接穿刺插入大动脉鞘，引入导丝及造影导管，进行血管造影并根据造影结果选择介入治疗的方式，在微导丝引导下,将支架输送导管送至动脉瘤颈,通过输送导管将支架引至动脉瘤处释放支架覆盖动脉瘤颈,行弹簧圈栓塞术，介入治疗结束，修补股动脉切口。
细胞治疗组通过导管在瘤腔内注射5x105个MSC细胞，试验1组每只兔子植入1个实施例4的复合支架，试验2组每只兔子植入1个实施例5的复合支架，试验3组每只兔子植入1个实施例6的复合支架，对照1组每只兔子植入1个对照例1的复合支架，术后1个月，血管造影观察细胞治疗组、试验1-3组的血管影像，试验结果见图2-6。
由图2-6可知，与细胞治疗组和对照1组相比，实施例4-6的复合支架均对兔动脉瘤具有良好的治疗效果，而细胞治疗组的细胞无法定植生长在病灶处，因此治疗效果有限，对照例1制备的生物支架所用成分与实施例4-6所用的成分相似，但对照例1用的是交联法，由图6可知，使用交联法制备的生物支架附着骨髓间充质干细胞后，对兔动脉瘤的治疗效果很差。
最后应说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。

Claims (10)

1.一种治疗动脉瘤和血管畸形的高分子材料与细胞复合支架，其特征在于，所述生物支架的制备方法包括以下步骤：
1)称取海藻酸钠溶于蒸馏水中，制成1％-4％的海藻酸钠溶液；
2)将海藻酸钠溶液冻干得到多孔状海藻酸钠海绵；
3)将多孔状海藻酸钠海绵浸泡入混合溶液中搅拌反应20-40min，所述混合溶液是用纯水溶解CaCl2和NaCl至CaCl2的浓度为40-60mM、NaCl的浓度为180-220mM；
4)将多孔海藻酸钙海绵用蒸馏水冲洗；
5)将多孔海藻酸钙海绵冻干得到高分子材料支架；
6)将所述高分子材料支架放置于间充质干细胞的单细胞悬液中处理至间充质干细胞附着于支架上，即得治疗动脉瘤和血管畸形的高分子材料与细胞复合支架。
2.如权利要求1所述的治疗动脉瘤和血管畸形的高分子材料与细胞复合支架，其特征在于，步骤(2)的冻干是将海藻酸钠溶液放置在-20℃条件下冷冻12-24h，再放置于-50℃条件下真空冷冻干燥6-10h。
3.如权利要求1所述的治疗动脉瘤和血管畸形的高分子材料与细胞复合支架，其特征在于，步骤(4)用蒸馏水冲洗的次数为2-4次，每次冲洗2-4min。
4.如权利要求1所述的治疗动脉瘤和血管畸形的高分子材料与细胞复合支架，其特征在于，步骤(5)的冻干是将其放置于-20℃条件下冷冻24h，再放置于-50℃条件下真空冷冻干燥6-10h。
5.如权利要求1所述的治疗动脉瘤和血管畸形的高分子材料与细胞复合支架，其特征在于，步骤6)将所述高分子材料支架放置于间充质干细胞的单细胞悬液中处理至间充质干细胞附着于支架上的具体方法为：将高分子材料支架材料放置于间充质干细胞的单细胞悬液中在37℃条件下搅拌培养30min，所述间充质干细胞的细胞密度为5x105个/ml，移除多余的单细胞悬液，补充等量的无血清培养基，将表面附着有间充质干细胞的高分子材料支架放置于培养反应器内贴壁培养30min，再更换无血清培养基培养1天，培养条件如下：温度为37.0±0.5℃、CO2浓度为5.0±0.2％，湿度为饱和湿度，搅拌速度为20-40r/min，即得基于合金内核的治疗动脉瘤用多孔纤维网状生物支架。
6.如权利要求5所述的治疗动脉瘤和血管畸形的高分子材料与细胞复合支架，其特征在于，无血清培养基包括基础培养基和添加剂，所述基础培养基为DMEM/F12培养基；所述添加剂为浓度为20-30μg/ml的入纤连蛋白、浓度为5-15ng/ml的碱性成纤维细胞生长因子、浓度10-20ng/ml的人表皮细胞生长因子、浓度为0.5-1.5％的ITS、浓度为4-6％的人血白蛋白；浓度为0.5-1.5％的NEAA、浓度为0.05-0.15μmol/L的氢化考的松、浓度为0.05-0.15％的β-巯基乙醇。
7.如权利要求1所述的治疗动脉瘤和血管畸形的高分子材料与细胞复合支架，其特征在于，步骤6)冻干后还进行辐照灭菌。
8.一种治疗动脉瘤和血管畸形的高分子材料与细胞复合支架的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
A.称取海藻酸钠溶于蒸馏水中，制成1％-4％的海藻酸钠溶液；
B.将海藻酸钠溶液冻干得到多孔状海藻酸钠海绵；
C.将多孔状海藻酸钠海绵用蒸馏水冲洗；
D.将多孔状海藻酸钠海绵浸泡入混合溶液中搅拌反应,20-40min，所述混合溶液是用纯水溶解CaCl2和NaCl至CaCl2的浓度为40-60mM、NaCl的浓度为180-220mM；
E.将多孔海藻酸钙海绵用蒸馏水冲洗；
F.将多孔海藻酸钙海绵冻干得到高分子材料支架；
G.将所述高分子材料支架放置于间充质干细胞的单细胞悬液中处理至间充质干细胞附着于支架上，即得治疗动脉瘤和血管畸形的高分子材料与细胞复合支架。
9.一种高分子材料支架，其特征在于，所述支架的制备方法包括以下步骤；
S1：称取海藻酸钠溶于蒸馏水中，制成1％-4％的海藻酸钠溶液；
S2：将海藻酸钠溶液冻干得到多孔状海藻酸钠海绵；
S3：将多孔状海藻酸钠海绵用蒸馏水冲洗；
S4：将多孔状海藻酸钠海绵浸泡入混合溶液中搅拌反应20-40min，所述混合溶液是用纯水溶解CaCl2和NaCl至CaCl2的浓度为40-60mM、NaCl的浓度为180-220mM；
S5：将多孔海藻酸钙海绵用蒸馏水冲洗；
S6：将多孔海藻酸钙海绵冻干得到高分子材料支架。
10.权利要求9所述的治疗动脉瘤和血管畸形的高分子材料与细胞复合支架在制备提高细胞负载率的多孔纤维网状生物支架中的应用。
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