CN111387496A - 一种提升结肠癌患者免疫能力的保健食品 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种提升结肠癌患者免疫能力的保健食品，涉及保健食品领域。具体公开了一种提升结肠癌患者免疫能力的保健食品，包括金针菇0~0.9份、香菇、驴奶粉、青豆、燕麦、黄瓜等。能够通过常见食品的混合粉剂实现对结肠癌患者进行免疫力的提升，减少由于结肠癌的原因导致的免疫力下降的症状。
Description
技术领域
本发明涉及保健食品领域，尤其涉及一种提升结肠癌患者免疫能力的保健食品。
背景技术
结肠癌是最常见的消化系统恶性肿瘤之一。近年来，结肠癌的发病率及死亡率持续升高，已成为世界第三大高发肿瘤，我国结肠癌致死率已达第四位。结肠炎相关结肠癌（Colitis Associated Cancer, CAC）是临床最为常见的结直肠肿瘤，手术结合化疗是治疗结肠癌最主要的手段，然而，大多数化疗药物毒副作用大，且肿瘤易产生耐受性。因此，寻找抗肿瘤疗效显著及副作用小的治疗或辅助性治疗结肠癌药物具有重要意义。 越来越多的研究显示，肠道菌群在结肠癌发生、发展过程中起重要作用。在正常状态下，
结肠癌动物模型在临床前研究工作中发挥着重要的作用。其中，氧化偶氮甲烷(azoxymethane，AOM)/葡聚糖硫酸钠(dextran sodium sulfate，DSS)结肠癌小鼠模型是一种在致癌剂 AOM 和致炎剂 DSS 协同作用的基础上，由炎症性肠病(inflammatory boweldisease，IBD) 逐步发展为结直肠癌的炎症相关性癌症的研究模型。AOM／DSS 模型能很好地模拟慢性肠道炎症诱发癌症的生理病理过程，近年来被广泛用于炎症相关性癌症形成机制的研究。
发明内容
本发明的目的是提供一种提升结肠癌患者免疫能力的保健食品，能够通过常见食品的混合粉剂实现对结肠癌患者进行免疫力的提升，减少由于结肠癌的原因导致的免疫力下降的症状。
为解决上述问题，本发明公开了一种提升结肠癌患者免疫能力的保健食品，其特征在于包括如下质量分数的原料组成：金针菇0~0.9份、香菇0~0.7份、驴奶粉0~0.4份、青豆0~1.9份、燕麦0~1.3份、黄瓜0~2.7份。
进一步的，其中所述各原料均为粉末状态。
进一步的，其中所述燕麦和所述黄花混合后制粉。
本发明还公开了一种改善结肠癌生存状况的保健食品的制作方法，包括如下步骤：
（1）称料；按照比例称金针菇、香菇、驴奶粉、青豆、燕麦、黄瓜作为原料备用；
（2）将金针菇原料进行清洗，熟制，熟制后的金针菇原料进行真空干燥后破碎，即获得金针菇粉；
（3）将蘑菇原料进行清洗，熟制，熟制后的蘑菇原料进行真空干燥后破碎，即获得蘑菇粉；
（4）将驴奶原料进行熟制，熟制后的驴奶原料进行真空干燥后破碎，即获得驴奶粉；
（5）将青豆原料进行清洗，烘干，破碎后进行高温膨化，膨化后的青豆原料进行真空干燥后破碎，即获得青豆粉；
（6）将燕麦和黄瓜原料进行清洗，熟制，熟制后的混合原料进行真空干燥后破碎，即获得燕麦黄瓜粉；
（7）混合成品，将步骤（2）~（6）获得的各组合物按照比例进行混合，混合均匀后，即制得成品；
（8）包装，将成品进行分料包装，最终得到产品。
进一步的，其中所述燕麦和黄瓜熟制之前还包括混合步骤。
进一步的，其中混合步骤包括如下步骤：
（1）烘干/冷却：烘干用热风气流干燥机，将燕麦烘干后水分控制在5%~6%，然后迅速用冷空气把燕麦温度降至40℃以下，
（2）破碎：破碎机破碎，目的是把外皮扒掉，破碎后用风力风选器或吸风平筛将外皮吸出，
（3）细磨，将粗破碎的燕麦进行细磨获得细磨粉；
（4）黄瓜破壁破碎，使用破壁机进行破壁打浆；
（5）混合，将黄瓜与燕麦混合，制成燕麦团。
进一步的，其中所述熟制过程为蒸制。
进一步的，其中所述蒸制后将熟化的燕麦团缓慢干燥后进行破碎。
本发明的有益效果在于：
通过使用常见的食品材料中选用特定的种类按照一定的比例混合，实现针对结肠癌患者提升免疫力的作用，另外通过对燕麦和黄瓜特定的炒熟制作方法，能够提升对结肠癌患者提升生活质量的效果。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。显而易见，下面描述中的附图是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1是各组小鼠血清细胞因子水平。
图2是小鼠脾脏中免疫细胞比例。
图3是肿瘤中免疫细胞比例。
图4是对肠道屏障功能的影响。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例一：
一种提升结肠癌患者免疫能力的保健食品，其特征在于包括如下质量分数的原料组成：金针菇0.6份、香菇0.6份、驴奶粉0.3份、青豆1.2份、燕麦1.2份、黄瓜0.4份。
进一步的，其中所述各原料均为粉末状态。
进一步的，其中所述燕麦和所述黄花混合后制粉。
本发明还公开了一种改善结肠癌生存状况的保健食品的制作方法，包括如下步骤：
（1）称料；按照比例称金针菇、香菇、驴奶粉、青豆、燕麦、黄瓜作为原料备用；
（2）将金针菇原料进行清洗，熟制，熟制后的金针菇原料进行真空干燥后破碎，即获得金针菇粉；
（3）将蘑菇原料进行清洗，熟制，熟制后的蘑菇原料进行真空干燥后破碎，即获得蘑菇粉；
（4）将驴奶原料进行熟制，熟制后的驴奶原料进行真空干燥后破碎，即获得驴奶粉；
（5）将青豆原料进行清洗，烘干，破碎后进行高温膨化，膨化后的青豆原料进行真空干燥后破碎，即获得青豆粉；
（6）将燕麦和黄瓜原料进行清洗，熟制，熟制后的混合原料进行真空干燥后破碎，即获得燕麦黄瓜粉；
（7）混合成品，将步骤（2）~（6）获得的各组合物按照比例进行混合，混合均匀后，即制得成品；
（8）包装，将成品进行分料包装，最终得到产品。
进一步的，其中所述燕麦和黄瓜熟制之前还包括混合步骤。
进一步的，其中混合步骤包括如下步骤：
（1）烘干/冷却：烘干用热风气流干燥机，将燕麦烘干后水分控制在5%~6%，然后迅速用冷空气把燕麦温度降至40℃以下，
（2）破碎：破碎机破碎，目的是把外皮扒掉，破碎后用风力风选器或吸风平筛将外皮吸出，
（3）细磨，将粗破碎的燕麦进行细磨获得细磨粉；
（4）黄瓜破壁破碎，使用破壁机进行破壁打浆；
（5）混合，将黄瓜与燕麦混合，制成燕麦团；
进一步的，其中所述熟制过程为蒸制。
进一步的，其中所述蒸制后将熟化的燕麦团缓慢干燥后进行破碎。
实验方法
1 AOM/DSS 结肠癌小鼠模型
DSS 是人工合成的一种硫酸多糖，将 DSS 溶解于水给敏感种系的小鼠或大鼠饮用，可引起以血便、溃疡和粒细胞浸润为特征的结肠炎症，其病理改变接近人类溃疡性结肠炎。研究发现，DSS 所导致的炎症以 Th1/Th2 细胞功能失调为特征，造成急性肠炎，经过多个循环喂养动物也可产生慢性肠炎，并伴有一定的肠癌发生率。加之 AOM 自身对肠道的影响，两者联合可以诱发稳定的炎症性肠癌。 4-5 周龄 Balb/c 雄性小鼠购自常州卡文斯实验动物有限公司。选用相对分子质量为 40, 000 的 DSS（sigma）。第 1 天小鼠腹腔注射 10mg/ kg AOM（sigma），1 周后饲喂 2.5% DSS 1 周，之后改为正常饮水，14 天为一个循环，本次实验共进行 4 个循环。
实验分组及干预
实验分为三组，每组 20 只小鼠，即对照组（Control）、模型组（Model）和五神组
（WS）， 模型组及五神组按 AOM/DSS 按上述流程构建结肠癌模型小鼠，同时 WS 组于第 1天开始喂养五神饲料，对照组小鼠正常饮食，第 1 天腹腔注射等体积生理盐水。
另取 60 只小鼠，其中 40 只按上述流程建立模型，模型建立成功后开始实验干预，实验同样分三组：即对照组（Control）、模型组（Model）和五神组（WS）组，每组取 15 只记录小鼠死亡情况，作生存分析。
3 观察及检测指标
活动、毛发、食量、体重、大便性状等常规指标
机体其他指标（一般营养状况）：白蛋白、后肢肌围 体成分分析
实验终点时每组随机取 5 只进行体成分分析
实验仪器
MesoQMR23-060H 清醒小动物体成分分析仪，纽迈电子科技有限公司生产，共振频率
21 MHz，磁体强度 0.5T，线圈直径为 60 mm，磁体温度为 32±0.01℃。
MesoMR23-060H-I 核磁共振成像分析仪，纽迈电子科技有限公司生产，共振频率23
MHz，磁体强度 0.5T，线圈直径为 60 mm，磁体温度为 32±0.01℃。
免疫细胞功能检测
取材：脾脏、结肠癌组织等。
方法：流式细胞仪（荧光多色标记）；多色标记组织原位分析（TSA）， ELISA，Q-PCR。
检测指标： 淋巴细胞、B 细胞、NK 细胞和 T 细胞，以及辅助性 T 细胞（CD3+CD4+T 细胞）、细胞毒性T 细胞（CD3+CD8+T 细胞）和调节性 T 细胞（Treg T 细胞）。
炎症指标
检测方法：生化分析仪及 Elisa 试剂盒等。
检测指标：IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF-α 和 IFN-γ 水平。
肠道肿瘤单细胞悬液制备：
1、 小鼠脱颈致死，在超净台中剖腹暴露肠道，找到盲肠癌，取 1-2cm 肿瘤周围的肠道组织（要将肠道里的粪便弄干净，将肠道纵向剪开），置于 10ml 含 10%FBS1640 中（6 孔板），置于冰上；
2、 将肠道重新放于含 PBS 的 15mL 离心管中，摇晃清洗肠道，取出放于新的含 10%FBS的 1640 中（6 孔板），准备 50ml 离心管，加入 A 液（50mL PBS+3mL 0.5mM EDTA+500ul 1M HEPES+25ul 2M DTT），将肠道放入 A 液，用力摇晃，置 37℃摇床，摇 10min，去除肠上皮细胞；
3、 转移至新的 50mL 离心管装有 10mL B 液（50mL PBS+3mL 0.5mM EDTA+500ul 1M
HEPES）用力摇晃，置 37℃摇床，摇 10min；
4、 取肠道，置于新的含 10% FBS 1640 中（6 孔板）；
5、 将肠道转移至消化液（在 10% FBS 的 1640 中加入 200 U/ml+1 mg/ml VIII 型胶原酶）中剪碎，消化液补加至 5mL，置于 37℃摇床中消化 1-1.5h；
6、 过滤：将消化后的肠道组织置于 100um cell strainer 过滤至 15mL 离心管，2000RPM 离心 7min；
7、 配置 80% percoll 和 40% percoll；
8、 用 4mL 40%的 percoll 溶液重悬细胞沉淀，转移至 15ml 离心管，将 2.5mL 80%的 percoll溶液用巴氏滴管从底部缓慢加入。
9、 室温 2500 RPM 离心 20min，升 6 降 2，取出分好的 PBMC 层放入新的 15mL离心管中，加入 PBS 润洗，1800RPM 离心 7min；
10、弃上清，200ul PBS 重悬细胞，洗涤一次得到单细胞悬液。
脾脏单细胞悬液制备：
1、 取小鼠脾脏放入小皿中，加入适量在 PBS 缓冲液中；
2、 用注射器钝头研磨脾脏，用滴管吸取细胞悬液经 100um 滤器过滤至 50mL 离心管中；
3、 400g 离心 5min，去上请；
4、 加入 2mL 红细胞裂解液，室温 2min；
5、 加入 2mL PBS 溶液，400g 离心 5min，去上请；
6、重复步骤 5 得到脾脏单细胞悬液。
实验结果
血清细胞因子
如图1所示，通过 Elisa 试剂盒检测小鼠血清 IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF-α 和IFN-γ 水平，结果表明：与对照组相比，模型组小鼠上述各细胞因子均不同程度升高；与模型组小鼠相比，五神小鼠血清 IL-6 和 TNF-α 明显降低（P<0.01 or P<0.001）。
肿瘤及脾脏免疫细胞功能
脾脏中免疫细胞
脾脏中的免疫细胞我们检测了淋巴细胞（包括 B 细胞、NK 细胞和 T 细胞） ，T 细胞包
括辅助性 T 细胞（CD3+CD4+T 细胞）、细胞毒性 T 细胞（CD3+CD8+T 细胞）和调节性 T细胞（Treg T 细胞）及辅助性 T 细胞 Th1（CD4+IFN+ T 细胞）、Th2（CD4+IL-4+ T 细胞）和Th17（CD4+IL-17+ T 细胞） 。
结果表明：如图2所示与模型组相比，五神组小鼠脾脏中淋巴细胞、总 T 细胞、CD3+CD4+T 细胞及 CD3+CD8+T 细胞比例明显升高，辅助性 T 细胞 Th1（CD4+IFN-γ T 细胞）比例显著升高（P<0.01）。两组 NK 细胞、B 细胞、调节性 T 细胞 Treg，辅助性 T 细胞 Th2和 Th17 无明显差别。
肿瘤中免疫细胞
肿瘤中的免疫细胞我们检测了淋巴细胞（包括 B 细胞、NK 细胞和 T 细胞），T 细胞包括辅助性 T 细胞（CD3+CD4+T 细胞）、细胞毒性 T 细胞（CD3+CD8+T 细胞）和调节性 T细胞（Treg T 细胞）及辅助性 T 细胞 Th1（CD4+IFN+ T 细胞）、Th2（CD4+IL-4+ T 细胞）和Th17（CD4+IL-17+ T 细胞）。
结果表明：如图3所示，五神组小鼠结肠癌组织中 T 细胞、CD4+T 细胞、CD8+ T 细胞和辅助性 T细胞 Th1、Th17 比例明显高于模型组。两组淋巴细胞、NK 细胞、B 细胞、Treg及 Th2 比例无差别。
肠道屏障功能检测
D-乳酸（D-lactate）主要由胃肠细菌发酵产生，，当动物肠黏膜屏障受损时，肠道菌群产生的 D-乳酸可通过受损肠黏膜经循环入血。二胺氧化酶（DAO） 同样可通过受损的肠黏膜上皮细胞进入肠细胞间隙、淋巴管和血流，使血 DAO 升高。在正常情况下，外周血中 DAO活性稳定，是反映黏膜上皮细胞成熟度和完整性的血浆标志物。内毒素（Endotoxin）是革兰氏阴性菌过度繁殖和死亡后裂解释放的有毒物质，正常情况下，机体含有大量的细菌和内毒素，但因有完整的肠黏膜屏障功能而不能进入血液循环。当肠黏膜屏障受损时，内毒素将进入血液循环并导致内毒素血症。因此，血液中的 D-乳酸、DAO 和内毒素含量变化可以及时反应肠道内细菌增生、肠黏膜受损程度和通透性变化。
本研究发现，如图4所示五神组和模型组小鼠血清 DAO、D-乳酸和内毒素水平明显高于对照组，差别有统计学意义；五神组小鼠血清 DAO 和内毒素明显低于模型组，但两组D-乳酸差别无统计学意义。
Claims (8)
1.一种提升结肠癌患者免疫能力的保健食品，其特征在于包括如下质量分数的原料组成：金针菇0~0.9份、香菇0~0.7份、驴奶粉0~0.4份、青豆0~1.9份、燕麦0~1.3份、黄瓜0~2.7份。
2.根据权利要求1所述的一种提升结肠癌患者免疫能力的保健食品，其特征在于：所述各原料均为粉末状态。
3.根据权利要求1所述的一种提升结肠癌患者免疫能力的保健食品，其特征在于：所述燕麦和所述黄花混合后制粉。
4.根据权利要求1所述的一种提升结肠癌患者免疫能力的保健食品的制作方法，其特征包括包括如下步骤：
（1）称料；按照比例称金针菇、香菇、驴奶粉、青豆、燕麦、黄瓜作为原料备用；
（2）将金针菇原料进行清洗，熟制，熟制后的金针菇原料进行真空干燥后破碎，即获得金针菇粉；
（3）将蘑菇原料进行清洗，熟制，熟制后的蘑菇原料进行真空干燥后破碎，即获得蘑菇粉；
（4）将驴奶原料进行熟制，熟制后的驴奶原料进行真空干燥后破碎，即获得驴奶粉；
（5）将青豆原料进行清洗，烘干，破碎后进行高温膨化，膨化后的青豆原料进行真空干燥后破碎，即获得青豆粉；
（6）将燕麦和黄瓜原料进行清洗，熟制，熟制后的混合原料进行真空干燥后破碎，即获得燕麦黄瓜粉；
（7）混合成品，将步骤（2）~（6）获得的各组合物按照比例进行混合，混合均匀后，即制得成品；
（8）包装，将成品进行分料包装，最终得到产品。
5.根据权利要求4所述的一种提升结肠癌患者免疫能力的保健食品的制作方法，其特征在于：所述燕麦和黄瓜熟制之前还包括混合步骤。
6.根据权利要求5所述的一种提升结肠癌患者免疫能力的保健食品的制作方法，其特征在于混合步骤包括如下步骤：
（1）烘干/冷却：烘干用热风气流干燥机，将燕麦烘干后水分控制在5%~6%，然后迅速用冷空气把燕麦温度降至40℃以下，
（2）破碎：破碎机破碎，目的是把外皮扒掉，破碎后用风力风选器或吸风平筛将外皮吸出，
（3）细磨，将粗破碎的燕麦进行细磨获得细磨粉；
（4）黄瓜破壁破碎，使用破壁机进行破壁打浆；
（5）混合，将黄瓜与燕麦混合，制成燕麦团。
7.根据权利要求4所述的一种提升结肠癌患者免疫能力的保健食品的制作方法，其特征在于：所述熟制过程为蒸制。
8.根据权利要求7所述的一种提升结肠癌患者免疫能力的保健食品的制作方法，其特征在于：所述蒸制后将熟化的燕麦团缓慢干燥后进行破碎。
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