CN111378712A - 可食用酵母多肽及其制备方法和应用 - Google Patents

可食用酵母多肽及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及酵母多肽领域,具体涉及一种可食用酵母多肽及其制备方法和应用。所述酵母多肽的制备方法,包括如下步骤:(1)酵母破壁:将原料酶解破壁,提取酵母蛋白;(2)酶解:向步骤(1)得到的酵母蛋白中加入蛋白酶进行酶解,收集第一上清液得到酶解产物;(3)分离:对酶解产物进一步分离,收集第二上清液,得到酵母多肽。采用本发明的制备方法得到的酵母多肽产品呈淡黄色、特殊香味,多肽含量40%以上,且60%以上的多肽分子量在180‑1000D之间,不具有一般大豆肽、核桃肽等肽产品具有的苦味,可用于各类食品中,能起到改善食品风味、补充人体必需氨基酸、帮助运动后恢复体力等功效。

Description

可食用酵母多肽及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及蛋白质多肽领域,具体涉及一种可食用酵母多肽及其制备方法和应用。
背景技术
肽的分子量一般在180-5000D之间。其中分子量在180-1000D之间的肽称为小肽或寡肽或低聚肽,也称小分子活性多肽。多肽具有某些生理活性作用,包括免疫调节、抗菌、抗肿瘤及提高机体免疫力等。过去认为蛋白质进入人体只有被消化分解成氨基酸才能被人体吸收利用,但随着蛋白质理论和蛋白质技术的不断发展,蛋白质吸收理论依然有诸多问题存在。1975年,Mathews等用甘氨酰肌及肌肽在离体的肠运转实验中表明,肽的吸收多以二肽,三肽的形式吸收。尽管上世纪60年代就提出了多肽吸收的理论和事实,但肽类转运的生理意义并没有得到普遍接受,直到上世纪80年代,直接和间接的证据不断积累,肽类能够被完整吸收的观点才为人们所重视。最近三十多年的研究表明多肽吸收不仅仅是以二肽、三肽吸收,而且也可以更大的多肽而吸收。
目前对多肽的研究主要是基于植物来源和动物来源的多肽,比如大豆肽、玉米肽、小牛肝肽等等。实践证明,添加多肽可以改变食品的品质、风味,也能增加功能性。如大豆肽可以抑制胆固醇生成,增加脂质代谢;豌豆肽是很好的牛奶变态反应抵抗剂。除这些植物源多肽和动物源多肽外,还有微生物多肽,如酵母多肽。与前二者相比,酵母来源的蛋白或多肽还有更多的优势:不存在农药污染,不受天气与季节变化的影响,不会存在可能对人体有影响的激素、抗生素及人工色素等,不存在转基因问题,也不存在禽流感病毒、疯牛病病毒、乙肝病毒等污染途径。酵母多肽不仅可用于饲料、食品,应用于化妆品领域也具有很好的功效。小分子多肽可被皮肤直接吸收,补充皮肤所需营养,提高皮肤细胞免疫力,减少外界环境对肌肤的伤害。除此外,还可应用于发用产品,添加多肽于洗发水或护发素中,可以滋养修复受损发质,减少干枯分叉。
目前市售的酵母多肽粉主要是酵母抽提物,一般的酵母抽提物是利用酵母生物自溶,再经酶解、喷雾干燥而成,呈淡黄色至黄色的粉末状。除了多肽外,还有大量未分解的蛋白质,酵母多糖,氨基酸、核苷酸及维生素等物质。多肽在其中的含量至多为50%左右,这种多肽粉主要用于动物饲料。高纯度的植物多肽广泛用于食品及保健品而酵母多肽用于人类食品的基本未见。其原因是由于酵母多肽这种产品多用于调味、直接食用口感较差,难以大量添加到蛋白粉等一些营养健康食品中。
关于制备高纯度的酵母多肽这方面的文献和专利均发表很少,中国专利CN102550802 A公开了一种从啤酒废酵母中提取多肽和氨基酸的方法,采用高压均质后抽提酶解的方案,最后得到多肽和氨基酸成品,但其存在抽提时间较长的问题。吴鑫颖等采用自溶法从啤酒酵母中酶解提取酵母多肽产品,得到了优化的酶解工艺。
发明内容
本发明所解决的现有技术的问题是:现有的从酵母中制备较高纯度的多肽的工艺为:酵母酶解、抽提、离心、纯化得到多肽,涉及酶解、离心、精制纯化、脱色等工艺。提取得到的多肽产品纯度较低,核酸、多糖及盐分等杂质较多,且多肽的分子量范围不明确,颜色、气味和口感等感官性状较差。并且,提取得到的多肽产品涉及高浓度碱提取工艺,反应条件剧烈,此条件下酵母蛋白容易变性,或者可能生成有害物质,用作食品原料有风险,过程较复杂,还须脱色。
针对这些问题,本发明的目的在于改进可食用酵母多肽的生产工艺,使其更温和安全,尽可能降低多肽的分子量,提高酵母多肽的得率和纯度。
具体来说,本发明提出了如下技术方案:
一种酵母多肽的制备方法,包括如下步骤:
(1)酵母破壁:将原料破壁,提取酵母蛋白;
(2)酶解:向步骤(1)得到的酵母蛋白中加入蛋白酶进行酶解,收集第一上清液得到酶解产物;和
(3)分离:对酶解产物进一步分离,收集第二上清液,得到酵母多肽;
其中,步骤(1)中,所述原料破壁通过酶解破壁。
优选的,其中步骤(1)中的原料为含有酵母的原料,优选选自酿酒酵母乳(Saccharomyces cerevisiae FX-2)、酿酒酵母乳(Saccharomyces cerevisiae HansenZ2.4)、酿酒酵母乳(Saccharomyces cerevisiae FX-2)失去活性的菌体和酿酒酵母乳(Saccharomyces cerevisiae Hansen Z2.4)失去活性的菌体中的一种或两种以上,更优选为酿酒酵母乳(Saccharomyces cerevisiae FX-2)及其失去活性的菌体。
优选的,步骤(1)将原料配制成溶液,其溶液的质量浓度为0.5%-30%,优选质量浓度为5%-20%,再进行酶解破壁。
优选的,对所述溶液调节温度至20-80℃,优选温度为30-70℃。
优选的,以原料的质量计,步骤(1)中加入酶的质量分数占原料的0.05%-5%,优选质量分数为0.5%-3%。
优选的,步骤(1)中酶解加入的酶选自β-葡聚糖酶、α-葡聚糖酶、α-甘露聚糖酶和纤维素酶中的一种或两种以上,优选为β-葡聚糖酶或纤维素酶。
优选的,步骤(1)中酶解时间为1-16h,优选为4-12h。
优选的,步骤(1)中还包括对酶解完成后的溶液进行离心的步骤,离心后得到酵母蛋白。
优选的,步骤(2)中将步骤(1)得到的酵母蛋白溶解,配制成浓度为1%-30%的溶液,优选为5%-20%的溶液。
优选的,步骤(2)中,加入蛋白酶酶解前调节pH为5-10,优选pH为6-9。
优选的,步骤(2)中,加入蛋白酶酶解前调节温度到20-70℃,优选温度为30-60℃。
优选的,步骤(2)中,以步骤(1)中提取得到的酵母蛋白的质量计,加入蛋白酶占酵母蛋白的0.05%-3%,优选质量分数为0.5%-2%。
优选的,步骤(2)中,加入的蛋白酶选自碱性蛋白酶、中性蛋白酶、大豆多肽水解酶、木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶中的一种或两种以上,优选为碱性蛋白酶,大豆多肽水解酶和木瓜蛋白酶中的一种或两种以上,更优选为碱性蛋白酶。
优选的,步骤(2)中,酶解时间为1-16h,优选4-12h。
优选的,步骤(2)中酶解完成后还包括升温使酶失活的步骤,优选温度为70-90℃,优选时间为20-30分钟。
优选的,步骤(2)中还包括酶解完成后的溶液进行离心的步骤,离心后收集第一上清液得到酶解产物。
优选的,步骤(3)中,对得到的第一上清液采用离心、膜分离和/或过滤进行分离,分离后收集第二上清液,得到酵母多肽;优选的是,所述过滤选自采用切向流过滤系统和/或硅藻土过滤。
优选的,步骤(3)中,优选采用切向流过滤系统进行分离;优选的是,采用截留分子量1000-20000D膜,优选1000-5000D膜。
优选的,将步骤(3)得到酵母多肽进一步浓缩、干燥处理,得到酵母多肽产品。
优选的,所述干燥选用喷雾干燥或冷冻干燥。
优选的,步骤(3)中干燥处理前还包括对第二上清液进行灭菌的过程,优选采用超高温瞬时灭菌,优选灭菌温度为121℃,优选灭菌时间为5s。
优选的,分子量在180-1000D的多肽的含量在总多肽中占到80%以上。
优选的,所述的酵母多肽在食品、化妆品和日用品领域中的应用,优选为食品领域的应用。
本发明的有益效果是:本方法得到的酵母多肽产品呈淡黄色、特殊香味,多肽含量40%以上,且60%以上多肽分子量在180-1000D之间。且不具有一般大豆肽、核桃肽等肽产品具有的苦味。可用于各类食品中,能起到改善食品风味、补充人体必需氨基酸、帮助运动后恢复体力等功效。
本发明较优选的方案得到的有益效果是:本方法得到的酵母多肽产品呈淡黄色、特殊香味,多肽含量60%以上,且80%以上多肽分子量在180-1000D之间,几乎均为二肽、三肽、四肽或五肽。且不具有一般大豆肽、核桃肽等肽产品具有的苦味。可用于各类食品中,能起到改善食品风味、补充人体必需氨基酸、帮助运动后恢复体力等功效。
菌种保藏信息
本发明所用的酿酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae FX-2)于2016年08月01日保藏在中国典型培养物保藏中心(CCTCC),保藏编号为CCTCCNO:M 2016418,保藏地址:中国.武汉.武汉大学,邮政编码:430072;电话:(027)-68754052。
本发明所用的酿酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae HansenZ2.4)于2005年10月25日保藏在中国典型培养物保藏中心(CCTCC),保藏编号为CCTCCNO:M 205130,保藏地址:中国.武汉.武汉大学,邮政编码:430072;电话:(027)-68752319。
具体实施方式
如上所述,本发明的目的在于:提供一种生产分子量在180-1000D的高纯度酵母多肽产品的方法及其得到的酵母多肽和应用。
其中,在本发明的一种具体实施方式中,提供了一种酵母多肽的制备方法,包括如下步骤:
(1)酵母破壁:将酵母粉配制成0.5%-30%(优选5%-20%)的溶液,调节温度至20-80℃(优选30-70℃),加入0.05%~5%(优选0.5-3%)的纤维素酶、β-葡聚糖酶,α-葡聚糖酶,α-甘露聚糖酶和/或纤维素酶酶解1-16h(优选4-12h),在离心机中以5000rpm的转速离心5min,将上层液去除,取重相即可得到酵母蛋白。
(2)酶解:向步骤(1)得到的酵母蛋白中配制成质量分数为1%-30%(优选5%-20%)的溶液,调节pH=5-10(优选pH=6-9),调节温度至20-70℃(优选30-60℃),加入占第一步中得到的酵母蛋白质量分数为0.05%-3%(优选0.5%-2%)的蛋白酶(包括但不限于碱性蛋白酶、中性蛋白酶、大豆多肽水解酶、木瓜蛋白酶和/或菠萝蛋白酶的一种或多种),酶解1-16h(优选4-12h),升温至70-90℃,加热20-30min使酶灭活,在离心机中以5000rpm的转速离心5min,收集第一上清液,得到酶解产物。
(3)分离:将第一上清液通过离心、切向流过滤系统或硅藻土过滤等分离手段对酶解液进行分离,收集第二上清液。优选采用切向流过滤系统进行分离,采用截留分子量1000-20000D(优选1000-5000D)膜对酶解液进行分离,收集第二上清液,得到酵母多肽。
将得到的酵母多肽采用超高温瞬时灭菌机进行灭菌,灭菌温度为121℃,加热时间为5s。在旋转蒸发仪中减压蒸发1.5小时,然后冷却至室温,冷冻和/或喷雾干燥。
步骤(2)为粗分离,去掉未酶解的酵母蛋白和酵母细胞壁,步骤(3)更进一步分离,去除离心不能去掉的一些大分子物质,使得最终产品更加澄清。
本发明的原料为含有酵母的原料,包括但不限于酿酒酵母乳(Saccharomycescerevisiae FX-2)、酿酒酵母乳(Saccharomyces cerevisiae Hansen Z2.4)、酿酒酵母乳(Saccharomyces cerevisiae FX-2)失去活性的菌体和酿酒酵母乳(Saccharomycescerevisiae HansenZ2.4)失去活性的菌体。
本发明实施例和对比例中采用的酿酒酵母粉(Saccharomyces cerevisiae FX-2)为酿酒酵母乳(Saccharomyces cerevisiaeFX-2)失去活性的菌体,采用的酿酒酵母粉(Saccharomyces cerevisiae Hansen Z2.4)为酿酒酵母乳(Saccharomyces cerevisiaeHansen Z2.4)失去活性的菌体。上述酿酒酵母粉通过以下方法制备得到:
1)菌种活化:挑取菌落一环放入YPD液体培养基中,放入摇床中将菌种活化。
2)菌种纯化:将上一步活化后的菌液梯度稀释铺平板,以获取单个菌落。
3)菌种扩大培养:挑取上一步平板中单个菌落接种至200mLYPD液体培养基,在30℃下,220rpm转速下培养18h;二级种子培养,按照二级培养基体积的10%将一级培养的种子接入1L二级培养基,28℃下,200rpm转速下培养18h;其pH控制在5.5。
4)种子富集:5000rpm离心,用钙离子和镁离子含量低的去离子水洗涤3次,富集得到酿酒酵母种子,至酵母湿重为220g/L。
5)酵母乳高温干燥成粉:对以上得到的酵母乳升温至90℃,保持1h,使其失活,然后进行离心,离心速度为5000rpm,5min。得到的重相经喷雾干燥塔干燥成酵母粉。
本发明第二步酶解采用的蛋白酶选自碱性蛋白酶、中性蛋白酶、大豆多肽水解酶、木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶,其中实施例中采用的Alcalase 2.4L、Protamex、Thermoase C100、Protin SD NY100Protamex是碱性蛋白酶。
本发明的又一种具体实施方式中,提供了一种采用本发明的制备方法得到的酵母多肽。
下面结合具体实施方式对本发明作进一步详细的说明。
本发明实施例中所用的实验材料和仪器信息如表1、2所示:
表1实验材料及生产厂商
Figure BDA0001931843940000071
表2实验设备型号及生产厂商
实验设备 型号 厂家
超高温瞬时灭菌机 RSCG01-1 温州市长宏轻工机械有限公司
高效液相色谱仪 ProminenceLC-20A 日本岛津公司
水分测定仪 ZS-201 深圳市速赛电子科技有限公司
离心机 3-15 德国SIGMA公司
旋转蒸发器 RE-3000A 西安安泰仪器科技有限公司
切向流过滤系统 SartoconSlice200 德国Sartorius(中国)有限公司
休止角测定仪 FT-104B 东莞市日成精密仪器有限公司
其中,本发明中酵母多肽中多肽含量测定参照中华人民共和国轻工行业标准QB/T2653-2004大豆肽粉中关于大豆肽的测定。即高分子蛋白质在酸性条件下易被沉淀,较低分子量的蛋白质水解物即酸溶蛋白质,可溶于酸性溶液(其中包含肽及游离氨基酸)。样品经酸化后,滤液中的酸溶蛋白质含量减去游离氨基酸含量即为肽的含量。其中,上清液中可溶蛋白质的含量测定按照GB/T22492-2008附录B肽含量的测定方法进行测定,游离氨基酸含量测定参照GB/T 5009.124-2003标准测定。采用如下公式(Ⅰ)计算得到多肽含量。
多肽含量=酸溶蛋白质的含量-游离氨基酸的含量(Ⅰ)
进一步采用如下公式(Ⅱ)计算多肽纯度:
多肽纯度(%)=(酸溶蛋白质的含量-游离氨基酸的含量)÷干物质含量×100% (Ⅱ)
其中,式(Ⅱ)中干物质含量即为脱色液干燥后换算为干基的量。
进一步采用如下公式(Ⅲ)计算多肽得率:
多肽得率(%)=(酸溶蛋白质的含量-游离氨基酸的含量)÷原始酵母粉含量×100% (III)
其中,肽分子量分布的测定方法采用中华人民共和国轻工行业标准QB/T2653-2004附录A中高效凝胶过滤色谱法,即以多孔性填料为固定相,依据样品组分分子体积大小的差别进行分离,在肽键的紫外吸收波长220nm条件下检测,使用凝胶色谱测定分子量分布的专用数据处理软件(即GPC软件),对色谱图及其数据进行处理,计算得到多肽的相对分子量大小及分布范围。并统计分子量在180-1000D之间的多肽含量在总的多肽含量中的百分比。
实施例1
1)酵母破壁:将原料酿酒酵母粉(Saccharomyces cerevisiaeFX-2)10Kg加纯净水配制成2000Kg的溶液,调节温度至20℃,加入5gβ-葡聚糖酶,对原料进行酶解破壁,酶解16h,在离心机中以5000rpm的转速离心5min,将上层液去除,得到5kg酵母蛋白。
2)酶解:将步骤1)中得到的酵母蛋白沉淀加水分散配制成500Kg的溶液,用盐酸调节pH至5.0,调节温度至20℃后,加入Alcalase2.4L 5g,大豆多肽水解酶25g,中性蛋白酶120g,对步骤1)得到的酵母蛋白进行酶解,酶解16h,加热至70℃保持20min使酶灭活,在离心机中以5000rpm的转速离心5min,收集第一上清液,得到酶解产物。
3)分离:将第一上清液经过硅藻土过滤后,经5000D切向流过滤系统的膜分离,得到第二上清液即酵母多肽。
将得到的酵母多肽采用超高温瞬时灭菌机进行灭菌,灭菌温度为121℃,加热时间为5s。在旋转蒸发仪中减压蒸发1.5小时,然后冷却至室温,冷冻干燥。得1.5kg(折干)酵母多肽产品。
经检测,该产品多肽纯度为65.2%,分子量在180~1000D之间的多肽占总多肽含量的80%,多肽得率为15%。
实施例2
1)酵母破壁:将酿酒酵母粉(Saccharomyces cerevisiae FX-2)10Kg加纯净水配制成33Kg的溶液,调节温度至70℃,加入500gβ-葡聚糖酶,对原料进行酶解破壁,酶解1h,在离心机中以5000rpm的转速离心5min,将上层液去除,得到5.4kg酵母蛋白。
2)酶解:将步骤1)中得到的酵母蛋白沉淀加水分散配制成18Kg的溶液,用氢氧化钠调节pH至10.0,调节温度至70℃后,加入Alcalase 2.4L 1.2g,木瓜蛋白酶1g,中性蛋白酶0.5g,对步骤1)得到的酵母蛋白进行酶解,酶解1h,加热至90℃保持20min使酶灭活,在离心机中以5000rpm的转速离心5min,离心收集第一上清液,得到酶解产物。
3)分离:将第一上清液经过离心机离心后,经5000D陶瓷膜分离,得到第二上清液即酵母多肽。
将得到的酵母多肽采用超高温瞬时灭菌机进行灭菌,灭菌温度为121℃,加热时间为5s。在旋转蒸发仪中减压蒸发1.5小时,然后冷却至室温,冷冻干燥。得1.8kg(折干)酵母多肽产品。
经检测,该产品多肽纯度为63.3%,分子量在180~1000D之间的多肽占总多肽含量的82%。多肽得率为18%。
实施例3
1)酵母破壁:将原料酿酒酵母粉(Saccharomyces cerevisiaeFX-2)10Kg加纯净水配制成200Kg的溶液,调节温度至30℃,加入50g纤维素酶,对原料进行酶解破壁,酶解2h,在离心机中以5000rpm的转速离心5min,将上层液去除,得到5.4kg酵母蛋白。
2)酶解:将步骤1)中得到的酵母蛋白沉淀加水分散配制成100Kg的溶液,用氢氧化钠调节pH至9.0,调节温度至52℃后,加入Alcalase 2.4L25g,Protin SD NY10025g,菠萝蛋白酶58g,对步骤1)得到的酵母蛋白进行酶解,酶解4h,加热至90℃保持20min使酶灭活,在离心机中以5000rpm的转速离心5min,收集第一上清液,得到酶解产物。
3)分离:将第一上清液经过离心机离心后,经2000D切向流过滤系统的膜分离,得到第二上清液即酵母多肽。
将得到的酵母多肽采用超高温瞬时灭菌机进行灭菌,灭菌温度为121℃,加热时间为5s。在旋转蒸发仪中减压蒸发1.5小时,然后冷却至室温,冷冻干燥。得2.5kg(折干)酵母多肽产品。
经检测,该产品多肽纯度为74.5%,分子量在180~1000D之间的多肽占总多肽含量的81%。多肽得率为25%。
实施例4
1)酵母破壁:将原料酿酒酵母粉(Saccharomyces cerevisiae HansenZ2.4)10Kg加纯净水配制成50Kg的溶液,调节温度至60℃,加入100gα-葡聚糖酶,对原料进行酶解破壁,酶解4h,在离心机中以5000rpm的转速离心5min,将上层液去除,得到5.3kg酵母蛋白。
2)酶解:将步骤1)中得到的酵母蛋白沉淀加水分散配制成50Kg的溶液,用盐酸调节pH至7.0,调节温度至52℃后,加入Alcalase 2.4L 1.5g,Thermoase C 10013g,Protamex12g,对步骤1)得到的酵母蛋白进行酶解,酶解6h,加热至80℃保持30min使酶灭活,在离心机中以5000rpm的转速离心5min,收集第一上清液,得到酶解产物。
3)分离:将第一上清液经过硅藻土过滤后,经5000D切向流过滤系统的膜分离,得到第二上清液即酵母多肽。
将得到的酵母多肽采用超高温瞬时灭菌机进行灭菌,灭菌温度为121℃,加热时间为5s。在旋转蒸发仪中减压蒸发1.5小时,然后冷却至室温,冷冻干燥。得2.2kg(折干)酵母多肽产品。
经检测,该产品多肽纯度为66.2%,分子量在180~1000D之间的多肽占总多肽含量的80%。多肽得率为22%。
实施例5
1)酵母破壁:将原料酿酒酵母粉(Saccharomyces cerevisiaeFX-2)10Kg加纯净水配制成100Kg的溶液,调节温度至50℃,加入150gβ-葡聚糖酶,150gα-甘露聚糖酶对原料进行酶解破壁,酶解4h,在离心机中以5000rpm的转速离心5min,将上层液去除,得到5.5kg酵母蛋白。
2)酶解:将步骤1)中得到的酵母蛋白沉淀加水分散配制成60Kg的溶液,用盐酸调节pH至6.0,调节温度至50℃后,加入Alcalase 2.4L20g,大豆多肽水解酶80g,Protamex50g,对步骤1)得到的酵母蛋白进行酶解,酶解12h,加热至80℃保持30min使酶灭活,在离心机中以5000rpm的转速离心5min,收集第一上清液,得到酶解产物。
3)分离:将第一上清液经过硅藻土过滤后,经1000D陶瓷膜分离,得到第二上清液即酵母多肽。
将得到的酵母多肽采用超高温瞬时灭菌机进行灭菌,灭菌温度为121℃,加热时间为5s。在旋转蒸发仪中减压蒸发1.5小时,然后冷却至室温,冷冻干燥。得1.8kg(折干)酵母多肽产品。
经检测,该产品多肽纯度为73%,分子量在180~1000D之间的多肽占总多肽含量的82%。多肽得率为18%。
实施例6
1)酵母破壁:将原料酿酒酵母粉(Saccharomyces cerevisiae FX-2)12Kg加纯净水配制成100Kg的溶液,调节温度至80℃,加入100gα-葡聚糖酶,对原料进行酶解破壁,酶解3h,在离心机中以5000rpm的转速离心5min,将上层液去除,得到5.0kg酵母蛋白。
2)酶解:将步骤1)中得到的酵母蛋白沉淀加水分散配制成100Kg的溶液,用氢氧化钠调节pH至8.0,调节温度至60℃后,加入Alcalase 2.4L 10g,大豆多肽水解酶20g,木瓜蛋白酶35g,对步骤1)得到的酵母蛋白进行酶解,酶解6h,加热至80℃保持30min使酶灭活,在离心机中以5000rpm的转速离心5min,收集第一上清液得到酶解产物。
3)分离:将第一上清液经过硅藻土过滤后,经1000D陶瓷膜分离,得到第二上清液即酵母多肽。
将得到的酵母多肽采用超高温瞬时灭菌机进行灭菌,灭菌温度为121℃,加热时间为5s。在旋转蒸发仪中减压蒸发1.5小时,然后冷却至室温,冷冻干燥。得2.52kg(折干)酵母多肽产品。
经检测,该产品多肽纯度为71%,分子量在180~1000D之间的多肽占总多肽含量的81%。多肽得率为21%。
实施例7
1)酵母破壁:将原料酿酒酵母粉(Saccharomyces cerevisiae FX-2)10Kg加纯净水配制成2000Kg的溶液,调节温度至80℃,加入5gβ-葡聚糖酶,5gα-葡聚糖酶,对原料进行酶解破壁,酶解12h,在离心机中以5000rpm的转速离心5min,将上层液去除,得到5.2kg酵母蛋白。
2)酶解:将步骤1)中得到的酵母蛋白沉淀加水分散配制成26Kg的溶液,用盐酸调节pH至5.0,调节温度至30℃后,加入Protin SD NY10050g,对步骤1)得到的酵母蛋白进行酶解,酶解8h,加热至90℃保持20min使酶灭活,在离心机中以5000rpm的转速离心5min,收集第一上清液得到酶解产物。
3)分离:将第一上清液经过硅藻土过滤后,经5000D切向流过滤系统的膜分离,得到第二上清液即酵母多肽。
将得到的酵母多肽采用超高温瞬时灭菌机进行灭菌,灭菌温度为121℃,加热时间为5s。在旋转蒸发仪中减压蒸发1.5小时,然后冷却至室温,冷冻干燥。得2.0kg(折干)酵母多肽产品。
经检测,该产品多肽纯度为65.2%,分子量在180~1000D之间的多肽占总多肽含量的85%。多肽得率为20%。
实施例8
1)酵母破壁:将原料酿酒酵母粉(Saccharomyces cerevisiae HansenZ2.4)10Kg加纯净水配制成100Kg的溶液,调节温度至50℃,加入50gβ-葡聚糖酶,10gα-葡聚糖酶,对原料进行酶解破壁,酶解4h,在离心机中以5000rpm的转速离心5min,将上层液去除,得到4.2kg酵母蛋白。
2)酶解:将步骤1)中得到的酵母蛋白沉淀加水分散配制成30Kg的溶液,用氢氧化钠调节pH至8.5,调节温度至50℃后,加入Alcalase 2.4L40g,大豆多肽水解酶36g,Protamex 60g,对步骤1)得到的酵母蛋白进行酶解,酶解6h,加热至80℃保持30min使酶灭活,在离心机中以5000rpm的转速离心5min,收集第一上清液得到酶解产物。
3)分离:将第一上清液经过硅藻土过滤后,经1000D陶瓷膜分离,得到第二上清液即酵母多肽。
将得到的酵母多肽采用超高温瞬时灭菌机进行灭菌,灭菌温度为121℃,加热时间为5s。在旋转蒸发仪中减压蒸发1.5小时,然后冷却至室温,冷冻干燥。得1.8kg(折干)酵母多肽产品。
经检测,该产品多肽纯度为73%,分子量在180~1000D之间的多肽占总多肽含量的82%。多肽得率为18%。
实施例9
1)酵母破壁:将原料酿酒酵母粉(Saccharomyces cerevisiae FX-2)10Kg加纯净水配制成200Kg的溶液,调节温度至30℃,加入50g纤维素酶,对原料进行酶解破壁,酶解2h,在离心机中以5000rpm的转速离心5min,将上层液去除,得到5.4kg酵母蛋白。
2)酶解:将步骤1)中得到的酵母蛋白沉淀加水分散配制成100Kg的溶液,用氢氧化钠调节pH至9.0,调节温度至52℃后,加入Alcalase 2.4L 1g,Protin SD NY1000.2g,菠萝蛋白酶0.5g,对步骤1)得到的酵母蛋白进行酶解,酶解6h,加热至90℃保持20min使酶灭活,在离心机中以5000rpm的转速离心5min,收集第一上清液得到酶解产物。
3)分离:将第一上清液经过硅藻土过滤后,经5000D切向流过滤系统的膜分离,得到第二上清液即酵母多肽。
将得到的酵母多肽采用超高温瞬时灭菌机进行灭菌,灭菌温度为121℃,加热时间为5s。在旋转蒸发仪中减压蒸发,然后冷却至室温,冷冻干燥。得1.2kg(折干)酵母多肽产品。
经检测,该产品多肽纯度为44.1%,分子量在180~1000D之间的多肽占总多肽含量的78%。多肽得率为12%。
实施例10
1)酵母破壁:将原料酿酒酵母粉(Saccharomyces cerevisiae FX-2)10Kg加纯净水配制成200Kg的溶液,调节温度至30℃,加入600g纤维素酶,对原料进行酶解破壁,酶解2h,在离心机中以5000rpm的转速离心5min,将上层液去除,得到3.3kg酵母蛋白。
2)酶解:将步骤1)中得到的酵母蛋白沉淀加水分散配制成61Kg的溶液,用氢氧化钠调节pH至9.0,调节温度至52℃后,加入Alcalase 2.4L25g,Protin SD NY10025g,菠萝蛋白酶58g,对步骤1)得到的酵母蛋白进行酶解,酶解4h,加热至90℃保持20min使酶灭活,在离心机中以5000rpm的转速离心5min,收集第一上清液得到酶解产物。
3)分离:将第一上清液经过离心后,经2000D切向流过滤系统的膜分离,得到第二上清液即酵母多肽。
将得到的酵母多肽采用超高温瞬时灭菌机进行灭菌,灭菌温度为121℃,加热时间为5s。在旋转蒸发仪中减压蒸发1.5小时,然后冷却至室温,冷冻干燥。得0.5kg(折干)酵母多肽产品。
经检测,该产品多肽纯度为51.5%,分子量在180~1000D之间的多肽占总多肽含量的81%。多肽得率为5%。
实施例11
1)酵母破壁:将原料酿酒酵母粉(Saccharomyces cerevisiae FX-2)10Kg加纯净水配制成200Kg的溶液,调节温度至30℃,加入4g纤维素酶,对原料进行酶解破壁,酶解2h,在离心机中以5000rpm的转速离心5min,将上层液去除,得到7.4kg酵母蛋白。
2)酶解:将步骤1)中得到的酵母蛋白沉淀加水分散配制成137Kg的溶液,用氢氧化钠调节pH至9.0,调节温度至52℃后,加入Alcalase 2.4L25g,Protin SD NY10025g,菠萝蛋白酶58g,对步骤1)得到的酵母蛋白进行酶解,酶解4h,加热至90℃保持20min使酶灭活,在离心机中以5000rpm的转速离心5min,收集第一上清液得到酶解产物。
3)分离:将第一上清液经过离心后,经2000D切向流过滤系统的膜分离,得到第二上清液即酵母多肽。
将得到的酵母多肽采用超高温瞬时灭菌机进行灭菌,灭菌温度为121℃,加热时间为5s。在旋转蒸发仪中减压蒸发1.5小时,然后冷却至室温,冷冻干燥。得0.9kg(折干)酵母多肽产品。
经检测,该产品多肽纯度为48.3%,分子量在180~1000D之间的多肽占总多肽含量的69%。多肽得率为9%。
实施例12
1)酵母破壁:将原料酿酒酵母粉(Saccharomyces cerevisiae FX-2)10Kg加纯净水配制成200Kg的溶液,调节温度至30℃,加入50g纤维素酶,对原料进行酶解破壁,酶解2h,在离心机中以5000rpm的转速离心5min,将上层液去除,得到5.4kg酵母蛋白。
2)酶解:将步骤1)中得到的酵母蛋白沉淀加水分散配制成100Kg的溶液,用氢氧化钠调节pH至9.0,调节温度至52℃后,加入Alcalase 2.4L 50g,大豆多肽水解酶20g,中性蛋白酶100g,对步骤1)得到的酵母蛋白进行酶解,酶解6h,加热至90℃保持20min使酶灭活,在离心机中以5000rpm的转速离心5min,收集第一上清液得到酶解产物。
3)分离:将第一上清液经过硅藻土过滤后,经5000D切向流过滤系统的膜分离,得到第二上清液即酵母多肽。
将得到的酵母多肽采用超高温瞬时灭菌机进行灭菌,灭菌温度为121℃,加热时间为5s。在旋转蒸发仪中减压蒸发1.5小时,然后冷却至室温,冷冻干燥。得1.1kg(折干)酵母多肽产品。
经检测,该产品多肽纯度为47%,分子量在180~1000D之间的多肽占总多肽含量的78%。多肽得率为11%。
实施例13
1)酵母破壁:将原料酿酒酵母粉(Saccharomyces cerevisiae FX-2)10Kg加纯净水配制成2000Kg的溶液,调节温度至10℃,加入5gβ-葡聚糖酶,5gα-葡聚糖酶,对原料进行酶解破壁,酶解12h,在离心机中以5000rpm的转速离心5min,将上层液去除,得到6.9kg酵母蛋白。
2)酶解:将步骤1)中得到的酵母蛋白沉淀加水分散配制成34.5Kg的溶液,用盐酸调节pH至5.0,调节温度至30℃后,加入Protin SD NY10050g,对步骤1)得到的酵母蛋白进行酶解,酶解8h,加热至90℃保持20min使酶灭活,在离心机中以5000rpm的转速离心5min,收集第一上清液得到酶解产物。
3)分离:将第一上清液经过硅藻土过滤后,经5000D切向流过滤系统的膜分离,得到第二上清液即酵母多肽。
将得到的酵母多肽采用超高温瞬时灭菌机进行灭菌,灭菌温度为121℃,加热时间为5s。在旋转蒸发仪中减压蒸发,然后冷却至室温,冷冻干燥。得2.5kg(折干)酵母多肽产品。
经检测,该产品多肽纯度为51.2%,分子量在180~1000D之间的多肽占总多肽含量的69%。多肽得率为25%。
实施例14
1)酵母破壁:将原料酿酒酵母粉(Saccharomyces cerevisiae FX-2)10Kg加纯净水配制成2000Kg的溶液,调节温度至90℃,加入5gβ-葡聚糖酶,5gα-葡聚糖酶,对原料进行酶解破壁,酶解12h,在离心机中以5000rpm的转速离心5min,将上层液去除,得到4.4kg酵母蛋白。
2)酶解:将步骤1)中得到的酵母蛋白沉淀加水分散配制成22Kg的溶液,用盐酸调节pH至5.0,调节温度至30℃后,加入Protin SD NY10050g,对步骤1)得到的酵母蛋白进行酶解,酶解8h,加热至90℃保持20min使酶灭活,在离心机中以5000rpm的转速离心5min,收集第一上清液得到酶解产物。
3)分离:将第一上清液经过硅藻土过滤后,经5000D切向流过滤系统的膜分离,得到第二上清液即酵母多肽。
将得到的酵母多肽采用超高温瞬时灭菌机进行灭菌,灭菌温度为121℃,加热时间为5s。在旋转蒸发仪中减压蒸发,然后冷却至室温,冷冻干燥。得1.3kg(折干)酵母多肽产品。
经检测,该产品多肽纯度为56.5%,分子量在180~1000D之间的多肽占总多肽含量的80%。多肽得率为13%。
实施例15
1)酵母破壁:将原料酿酒酵母粉(Saccharomyces cerevisiae FX-2)10Kg加纯净水配制成2500Kg的溶液,调节温度至80℃,加入5gβ-葡聚糖酶,5gα-葡聚糖酶,对原料进行酶解破壁,酶解12h,在离心机中以5000rpm的转速离心5min,将上层液去除,得到3.9kg酵母蛋白。
2)酶解:将步骤1)中得到的酵母蛋白沉淀加水分散配制成19.5Kg的溶液,用盐酸调节pH至5.0,调节温度至30℃后,加入Protin SD NY10050g,对步骤1)得到的酵母蛋白进行酶解,酶解8h,加热至90℃保持20min使酶灭活,在离心机中以5000rpm的转速离心5min,收集第一上清液得到酶解产物。
3)分离:将第一上清液经过硅藻土过滤后,经5000D切向流过滤系统的膜分离,得到第二上清液即酵母多肽。
将得到的酵母多肽采用超高温瞬时灭菌机进行灭菌,灭菌温度为121℃,加热时间为5s。在旋转蒸发仪中减压蒸发1.5小时,然后冷却至室温,冷冻干燥。得1.0kg(折干)酵母多肽产品。
经检测,该产品多肽纯度为54%,分子量在180~1000D之间的多肽占总多肽含量的80%。多肽得率为10%。
实施例16
1)酵母破壁:将原料酿酒酵母粉(Saccharomyces cerevisiae FX-2)10Kg加纯净水配制成30Kg的溶液,调节温度至80℃,加入5gβ-葡聚糖酶,5gα-葡聚糖酶,对原料进行酶解破壁,酶解12h,在离心机中以5000rpm的转速离心5min,将上层液去除,得到3.8kg酵母蛋白。
2)酶解:将步骤1)中得到的酵母蛋白沉淀加水分散配制成19Kg的溶液,用盐酸调节pH至5.0,调节温度至30℃后,加入Protin SD NY10050g,对步骤1)得到的酵母蛋白进行酶解,酶解8h,加热至90℃保持20min使酶灭活,在离心机中以5000rpm的转速离心5min,收集第一上清液得到酶解产物。
3)分离:将第一上清液经过硅藻土过滤后,经5000D切向流过滤系统的膜分离,得到第二上清液即酵母多肽。
将得到的酵母多肽采用超高温瞬时灭菌机进行灭菌,灭菌温度为121℃,加热时间为5s。在旋转蒸发仪中减压蒸发1.5小时,然后冷却至室温,冷冻干燥。得1.0kg(折干)酵母多肽产品。
经检测,该产品多肽纯度为54%,分子量在180~1000D之间的多肽占总多肽含量的80%。多肽得率为11%。
实施例17
1)酵母破壁:将原料酿酒酵母粉(Saccharomyces cerevisiae FX-2)10Kg加纯净水配制成2000Kg的溶液,调节温度至80℃,加入5gβ-葡聚糖酶,5gα-葡聚糖酶,对原料进行酶解破壁,酶解12h,在离心机中以5000rpm的转速离心5min,将上层液去除,得到5.2kg酵母蛋白。
2)酶解:将步骤1)中得到的酵母蛋白沉淀加水分散配制成26Kg的溶液,用盐酸调节pH至3.0,调节温度至30℃后,加入Protin SD NY10050g,对步骤1)得到的酵母蛋白进行酶解,酶解8h,加热至90℃保持20min使酶灭活,离心收集第一上清液得到酶解产物。
3)分离:将第一上清液经过硅藻土过滤后,经5000D切向流过滤系统的膜分离,得到第二上清液即酵母多肽。
将得到的酵母多肽采用超高温瞬时灭菌机进行灭菌,灭菌温度为121℃,加热时间为5s。在旋转蒸发仪中减压蒸发1.5小时,然后冷却至室温,冷冻干燥。得1.4kg(折干)酵母多肽产品。
经检测,该产品多肽纯度为58.1%,分子量在180~1000D之间的多肽占总多肽含量的71.4%。多肽得率为14%。
实施例18
1)酵母破壁:将原料酿酒酵母粉(Saccharomyces cerevisiae FX-2)10Kg加纯净水配制成2000Kg的溶液,调节温度至80℃,加入5gβ-葡聚糖酶,5gα-葡聚糖酶,对原料进行酶解破壁,酶解12h,在离心机中以5000rpm的转速离心5min,将上层液去除,得到5.2kg酵母蛋白。
2)酶解:将步骤1)中得到的酵母蛋白沉淀加水分散配制成26Kg的溶液,用盐酸调节pH至12.0,调节温度至30℃后,加入Protin SD NY10050g,对步骤1)得到的酵母蛋白进行酶解,酶解8h,加热至90℃保持20min使酶灭活,在离心机中以5000rpm的转速离心5min,收集第一上清液得到酶解产物。
3)分离:将第一上清液经过硅藻土过滤后,经5000D切向流过滤系统的膜分离,得到第二上清液即酵母多肽。
将得到的酵母多肽采用超高温瞬时灭菌机进行灭菌,灭菌温度为121℃,加热时间为5s。在旋转蒸发仪中减压蒸发1.5小时,然后冷却至室温,冷冻干燥。得0.8kg(折干)酵母多肽产品。
经检测,该产品多肽纯度为55%,分子量在180~1000D之间的多肽占总多肽含量的75.5%。多肽得率为8%。
实施例19
1)酵母破壁:将原料酿酒酵母粉(Saccharomyces cerevisiaeFX-2)10Kg加纯净水配制成200Kg的溶液,调节温度至30℃,加入50g纤维素酶,对原料进行酶解破壁,酶解2h,5000rpm离心5min,将上层液去除,得到5.4kg酵母蛋白。
2)酶解:将步骤1)中得到的酵母蛋白沉淀加水分散配制成100Kg的溶液,用氢氧化钠调节pH至9.0,调节温度至52℃后,加入Alcalase 2.4L25g,Protin SD NY10025g,菠萝蛋白酶58g,对步骤1)得到的酵母蛋白进行酶解,酶解0.5h,加热至90℃保持20min使酶灭活,在离心机中以5000rpm的转速离心5min,收集第一上清液得到酶解产物。
3)分离:将第一上清液经离心后,经2000D切向流过滤系统的膜分离,得到第二上清液即酵母多肽。
将得到的酵母多肽采用超高温瞬时灭菌机进行灭菌,灭菌温度为121℃,加热时间为5s。在旋转蒸发仪中减压蒸发1.5小时,然后冷却至室温,冷冻干燥。得1.5kg(折干)酵母多肽产品。
经检测,该产品多肽纯度为59%,分子量在180~1000D之间的多肽占总多肽含量的64.8%。多肽得率为15%。
实施例20
1)酵母破壁:将原料酿酒酵母粉(Saccharomyces cerevisiaeFX-2)10Kg加纯净水配制成200Kg的溶液,调节温度至30℃,加入50g纤维素酶,对原料进行酶解破壁,酶解2h,在离心机中以5000rpm的转速离心5min,将上层液去除,得到5.4kg酵母蛋白。
2)酶解:将步骤1)中得到的酵母蛋白沉淀加水分散配制成100Kg的溶液,用氢氧化钠调节pH至9.0,调节温度至52℃后,加入Alcalase 2.4L25g,Protin SD NY10025g,菠萝蛋白酶58g,对步骤1)得到的酵母蛋白进行酶解,酶解20h,加热至90℃保持20min使酶灭活,在离心机中以5000rpm的转速离心5min,收集第一上清液得到酶解产物。
3)分离:将第一上清液经离心后,经2000D切向流过滤系统的膜分离,得到第二上清液即酵母多肽。
将得到的酵母多肽采用超高温瞬时灭菌机进行灭菌,灭菌温度为121℃,加热时间为5s。在旋转蒸发仪中减压蒸发1.5小时,然后冷却至室温,冷冻干燥。得2.5kg(折干)酵母多肽产品。
经检测,该产品多肽纯度为55%,分子量在180~1000D之间的多肽占总多肽含量的75%。多肽得率为25%。
对比例1
1)酵母溶配:将原料酿酒酵母粉(Saccharomyces cerevisiae FX-2)10Kg加纯净水配制成2500Kg的溶液,调节温度至30℃。
2)酶解:将步骤1)中得到的溶液,用盐酸调节pH至5.0,调节温度至30℃后,加入Protin SD NY10050g进行酶解,酶解8h,加热至90℃保持20min使酶灭活,在离心机中以5000rpm的转速离心5min,收集第一上清液得到酶解产物。
3)分离:将第一上清液经过硅藻土过滤后,经5000D切向流过滤系统的膜分离,得到第二上清液即酵母多肽。
将得到的酵母多肽采用超高温瞬时灭菌机进行灭菌,灭菌温度为121℃,加热时间为5s。在旋转蒸发仪中减压蒸发,然后冷却至室温,冷冻干燥。得1.5kg(折干)酵母多肽产品。
经检测,该产品多肽纯度为58%,分子量在180~1000D之间的多肽占总多肽含量的55%。多肽得率为15%。
下表3为实施例和对比例实验中多肽测量结果。
表3实施例和对比例实验中多肽测量结果
Figure BDA0001931843940000221
经测定,按照本发明的方案的制备方法制备得到的酵母多肽,其纯度均在40%以上,而且分子量在180-1000D的多肽含量占到60%以上。
按照本发明较优选的方案的制备方法制备得到的酵母多肽,其纯度均在60%以上,甚至是70%以上、多肽得率均在15%以上,而且分子量在180-1000D的多肽含量占到80%以上,甚至是85%以上。
对比例一中,没有经过第一步酶解破壁的步骤,只经过第二步蛋白酶酶解的步骤,得到的酵母多肽的纯度较低(58%),分子量在180-1000D的多肽含量较低(55%)。
应用例1
对得到的实施例1得到的酵母多肽产品与市场常见的大豆肽、核桃肽和大米肽进行感官评价测定。选取流动性、分散性、澄清度、气味和苦味这五个影响产品感官品质的主要因素,作为感官评价的评分项目。设置感官评价总分50分,流动性、分散性、澄清度、气味和苦味各占10分。
对实施例1得到的酵母多肽产品与市场常见的大豆肽、核桃肽和大米肽进行感官评价测定,是由5名具备粉状物质品鉴经验及感官评价经验的技术人员,经过相关评价标准的学习后进行并且完成感官评分,完成评分后取各项平均分作为样品最终得分。
流动性采用休止角来判断,通常是指粉体堆积层的自由斜面与水平面所形成的最大角。休止角越小,摩擦力越小,流动性越好,一般认为θ≤30°时流动性好,θ≤40°时可以满足生产过程中的流动性需求。粉体的流动性对颗粒剂、胶囊剂、片剂等制剂的重量差异及正常操作影响较大。
分散性采用加水冲调后分散的速度表示,一般认为加水冲调后10s内迅速分散,分散性较好。
澄清度采用溶于水后澄清度表示,一般认为溶于水后澄清透亮,无肉眼可见悬浮物较好。
气味采用加水冲调后有无异味表示,一般认为加水冲调后闻之无异味较好。
苦味采用食用口感表示,一般认为口感较好,没有苦味较好。
感官评价标准如表4所示,感官评价得分如下表5所示。
表4感官评价标准值
Figure BDA0001931843940000241
表5感官评价得分
项目/种类 酵母多肽 大豆肽 核桃肽 大米肽
流动性 9.3 8.9 7.95 8.4
分散性 8.1 8.15 6.4 7.4
澄清度 9.9 9.8 7.9 8.5
气味 9 9.1 6.6 8
苦味 8.25 6.1 3.6 7.3
从上表的感官评价得分的平均分可以看出,实施例1制备得到的酵母多肽在流动性、分散性、澄清度、气味尤其是苦味方面都不同程度地优于核桃肽和大米肽,而与大豆肽相比,虽然大豆肽在流动性、分散性、澄清度和气味方面表现较好,但是其具有苦味,不具有可食用的条件。
因此,本发明中较优选的方案中得到的酵母多肽产品呈淡黄色、特殊香味,多肽含量60%以上,且80%以上多肽分子量在1000以下,几乎均为二肽、三肽、四肽或五肽。且不具有一般大豆肽、核桃肽等肽产品具有的苦味。可用于各类食品中,能起到改善食品风味、补充人体必需氨基酸、帮助运动后恢复体力等功效。
以上所述仅为本发明较佳实施例,并不用于局限本发明,凡在本发明的精神和原则之内所做的修改、等同替换和改进等,均需要包含在发明的保护范围之内。

Claims (14)

1.一种可食用酵母多肽的制备方法,包括如下步骤:
(1)酵母破壁:将原料破壁,提取酵母蛋白;
(2)酶解:向步骤(1)得到的酵母蛋白中加入蛋白酶进行酶解,收集第一上清液得到酶解产物;和
(3)分离:对酶解产物进一步分离,收集第二上清液,得到酵母多肽;
其中,步骤(1)中,所述原料破壁通过酶解破壁。
2.根据权利要求1所述的制备方法,其中步骤(1)中的原料为含有酵母的原料,优选为酿酒酵母乳(SaccharomycescerevisiaeFX-2)和/或酿酒酵母乳(SaccharomycescerevisiaeHansenZ2.4);进一步优选为酿酒酵母乳(SaccharomycescerevisiaeFX-2)失去活性的菌体和/或酿酒酵母乳(SaccharomycescerevisiaeHansenZ2.4)失去活性的菌体。
3.根据权利要求1或2所述的制备方法,其中,步骤(1)将原料配制成溶液,其溶液的质量浓度为0.5%-30%,优选质量浓度为5%-20%,再进行酶解破壁;进一步优选为,对所述溶液调节温度至20-80℃,进一步优选温度为30-70℃。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的制备方法,其中,以原料的质量计,步骤(1)中加入酶的质量分数占原料的0.05%-5%,优选质量分数为0.5%-3%;
进一步优选为,步骤(1)中酶解加入的酶选自β-葡聚糖酶、α-葡聚糖酶、α-甘露聚糖酶和纤维素酶中的一种或两种以上,进一步优选为β-葡聚糖酶和/或纤维素酶。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的制备方法,其中,步骤(1)中酶解时间为1-16h,优选为4-12h。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的制备方法,其中,步骤(2)中将步骤(1)得到的酵母蛋白溶解,配制成浓度为1%-30%的溶液,优选为5%-20%的溶液;
进一步优选为,步骤(2)中,加入蛋白酶酶解前调节pH为5-10,进一步优选pH为6-9;
进一步优选为,步骤(2)中,加入蛋白酶酶解前调节温度到20-70℃,进一步优选温度为30-60℃。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的制备方法,其中,步骤(2)中,以步骤(1)中提取得到的酵母蛋白的质量计,加入蛋白酶占酵母蛋白的0.05%-3%,优选质量分数为0.5%-2%,更优选质量分数为0.9-2%;进一步优选为,酶解时间为1-16h,进一步优选为4-12h。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的制备方法,其中,步骤(2)中,加入的蛋白酶选自碱性蛋白酶、中性蛋白酶、大豆多肽水解酶、木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶中的一种或两种以上,优选为碱性蛋白酶,大豆多肽水解酶、菠萝蛋白酶和木瓜蛋白酶中的一种或两种以上,更优选为碱性蛋白酶和/或菠萝蛋白酶;进一步优选为碱性蛋白酶和/或菠萝蛋白酶的用量为0.9-2%。
9.根据权利要求1-8中任一项所述的制备方法,其中,步骤(2)中酶解完成后还包括升温使酶失活的步骤,优选温度为70-90℃,优选时间为20-30分钟。
10.根据权利要求1-9中任一项所述的制备方法,其中,步骤(3)中,对得到的第一上清液采用离心、膜分离和/或过滤进行分离;优选的是,所述过滤选自采用切向流过滤系统和/或硅藻土过滤。
11.根据权利要求1-10所述的制备方法,其中,步骤(3)中,优选采用切向流过滤系统进行分离;优选的是,采用截留分子量1000-20000D膜,优选1000-5000D膜。
12.根据权利要求1-11中任一项所述的制备方法,其中,将步骤(3)得到酵母多肽进一步浓缩、干燥处理,得到酵母多肽产品;进一步优选为,所述干燥选用喷雾干燥或冷冻干燥。
13.采用权利要求1-12中任一项所述的制备方法得到的酵母多肽,其中,总多肽中含有分子量在180-1000D的多肽80wt%以上。
14.权利要求13所述的酵母多肽在食品、化妆品和日用品领域中的应用,优选为食品领域的应用。
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