CN111363721B

CN111363721B - 一种多西他赛诱导建立的luminal型乳腺癌多药耐药细胞株及其构建方法和应用

Info

Publication number: CN111363721B
Application number: CN202010162883.1A
Authority: CN
Inventors: 唐鹏; 吴瑾
Original assignee: First Affiliated Hospital of Army Medical University
Current assignee: First Affiliated Hospital of Army Medical University
Priority date: 2020-03-10
Filing date: 2020-03-10
Publication date: 2021-12-21
Anticipated expiration: 2040-03-10
Also published as: CN111363721A

Abstract

本发明涉及一种多西他赛诱导建立的luminal型乳腺癌多药耐药细胞株及其构建方法和应用，属于肿瘤生物学技术领域。在构建过程中利用模拟临床化疗方式的间歇刺激法诱导耐药细胞株，使最终获得的耐药细胞株更能反映临床实况，更好地用于研究临床耐药的机制。由该方法构建的多西他赛诱导建立的luminal型乳腺癌多药耐药细胞株能为研究耐药肿瘤细胞形态学及生物学特点、分析化疗药物敏感性、研究雌激素和/或孕激素阳性的非浸润性乳腺癌的耐药机制、肿瘤细胞的耐药性逆转、筛选化疗药物、开发肿瘤耐药逆转药物、开发及评价新的抗癌方法等提供最接近临床病发特点的细胞模型，该多药耐药细胞株具有广阔的基础科研价值和临床转化价值。

Description

一种多西他赛诱导建立的luminal型乳腺癌多药耐药细胞株及其构建方法和应用

技术领域

本发明属于肿瘤生物学技术领域，具体涉及一种多西他赛诱导建立的luminal型乳腺癌多药耐药细胞株及其构建方法和应用。

背景技术

乳腺癌是全世界女性最常见和最高致死率的恶性肿瘤，其中luminal型乳腺癌，即激素受体阳性乳腺癌约占所有类型乳腺癌的75-80％。国际临床实践权威指南——肿瘤学临床实践指南(NCCN)中指出，雌激素和/或孕激素阳性的非浸润性乳腺癌肿瘤组织大于1cm时，考虑进行全身辅助内分泌治疗和辅助化疗，以期达到杀灭亚临床病灶的目的。但在大量临床实践中有部分luminal型乳腺癌病人在辅助化疗时出现耐药，肿瘤组织体积在化疗中不变甚至增大，导致治疗失败并为后期肿瘤的复发和转移留下隐患，严重降低患者的无病生存率(DFS)和总体生存率(OS)。更糟糕的是这种耐药往往表现为多药耐药性，即同时对多种结构和作用机制的化疗药物产生交叉耐药现象，成为整体化疗失败的主要原因。目前，国内外关于建立三阴性乳腺癌耐药细胞株的研究已经比较常见，但对乳腺癌临床发病最多的lunimal型乳腺癌耐药株的研究却较为较少见。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的之一在于提供一种多西他赛诱导建立的luminal型乳腺癌多药耐药细胞株；目的之二在于提供一种多西他赛诱导建立的luminal型乳腺癌多药耐药细胞株的构建方法；目的之三在于提供一种多西他赛诱导建立的luminal型乳腺癌多药耐药细胞株在作为接近临床病发特点的细胞模型的应用。

为达到上述目的，本发明提供如下技术方案：

1、一种多西他赛诱导建立的luminal型乳腺癌多药耐药细胞株，所述多药耐药细胞株为T47D/DOC，保藏编号为CCTCC NO：C202038；或为MCF-7/DOC，保藏编号为CCTCC NO：C202039，均由中国典型培养物保藏中心保藏。

优选地，所述多药耐药细胞株对多西他赛、表柔比星、环磷酰胺或吉西他滨中的一种或多种具有耐药性。

2、所述的一种多西他赛诱导建立的luminal型乳腺癌多药耐药细胞株的构建方法，所述方法如下：

(1)将人luminal型乳腺癌细胞株常规培养于培养液中，置于培养箱中维持培养；

(2)培养至细胞饱和密度为70-90％时，换入新鲜培养液，并加入多西他赛至所述多西他赛的终浓度为所述人luminal型乳腺癌细胞株在所述多西他赛中的IC50浓度，继续培养4-12h后再次换入新鲜培养液，接着继续培养3-4d后再次换入新鲜培养液，再继续培养至细胞饱和密度为90％以上，传代1次；

(3)重复步骤(2)的操作，直至获得在所述多西他赛中的IC50浓度为亲本人luminal型乳腺癌细胞株在所述多西他赛中的IC50浓度10倍以上的人luminal型乳腺癌细胞株，即获得多西他赛诱导建立的luminal型乳腺癌多药耐药细胞株。

优选地，所述方法如下：

(1)将人luminal型乳腺癌T47D细胞株常规培养于含有100U/mL青霉素，100μg/mL链霉素，0.2Units/mL牛胰岛素和10％胎牛血清的RPMI-1640培养液中，置于37℃、5％CO₂、95％湿度培养箱中维持培养；

(2)培养至细胞饱和密度为70-90％时，换入新鲜所述RPMI-1640培养液，并加入多西他赛至所述多西他赛的终浓度为所述人luminal型乳腺癌T47D细胞株在所述多西他赛中的IC50浓度，继续培养4-12h后再次换入新鲜所述RPMI-1640培养液，接着继续培养3-4d后再次换入新鲜所述RPMI-1640培养液，再继续培养至细胞饱和密度为90％以上，传代1次；

(3)重复步骤(2)的操作，直至获得在所述多西他赛中的IC50浓度为亲本人luminal型乳腺癌T47D细胞株在所述多西他赛中的IC50浓度10倍以上的人luminal型乳腺癌T47D细胞株，即获得多西他赛诱导建立的luminal型乳腺癌多药耐药细胞株。

优选地，所述方法如下：

(1)将人luminal型乳腺癌MCF-7细胞株常规培养于含有100U/mL青霉素，100μg/mL链霉素，0.01mg/mL重组人胰岛素和10％胎牛血清的EMEM培养液中，置于37℃、5％CO₂、95％湿度培养箱中维持培养；

(2)培养至细胞饱和密度为70-90％时，换入新鲜所述EMEM培养液，并加入多西他赛至所述多西他赛的终浓度为所述人luminal型乳腺癌MCF-7细胞株在所述多西他赛中的IC50浓度，继续培养4-12h后再次换入新鲜所述EMEM培养液，接着继续培养3-4d后再次换入新鲜所述EMEM培养液，再继续培养至细胞饱和密度为90％以上，传代1次；

(3)重复步骤(2)的操作，直至获得在所述多西他赛中的IC50浓度为亲本人luminal型乳腺癌MCF-7细胞株在所述多西他赛中的IC50浓度10倍以上的人luminal型乳腺癌MCF-7细胞株，即获得多西他赛诱导建立的luminal型乳腺癌多药耐药细胞株。

3、所述的一种多西他赛诱导建立的luminal型乳腺癌多药耐药细胞株在作为接近临床病发特点的细胞模型的应用。

本发明的有益效果在于：本发明提供了一种多西他赛诱导建立的luminal型乳腺癌多药耐药细胞株及其构建方法和应用，在构建过程中利用模拟临床化疗方式的间歇刺激法诱导耐药细胞株，使最终获得的耐药细胞株更能反映临床实况，更好地用于研究临床耐药的机制。由该方法构建的多西他赛诱导建立的luminal型乳腺癌多药耐药细胞株能为研究耐药肿瘤细胞形态学及生物学特点、分析化疗药物敏感性、研究雌激素和/或孕激素阳性的非浸润性乳腺癌的耐药机制、肿瘤细胞的耐药性逆转、筛选化疗药物、开发肿瘤耐药逆转药物、开发及评价新的抗癌方法等提供最接近临床病发特点的细胞模型，该多药耐药细胞株具有广阔的基础科研价值和临床转化价值。其中，T47D/DOC多药耐药细胞株耐多西他赛的指数为16.89、耐表柔比星的指数为13.12、耐环磷酰胺的指数为3.16、耐吉西他滨的指数为1.87；MCF-7/DOC多药耐药细胞株耐多西他赛的指数为15.23、耐表柔比星的指数为6.97、耐环磷酰胺的指数为2.68、耐吉西他滨的指数为1.99。

本发明的其他优点、目标和特征在某种程度上将在随后的说明书中进行阐述，并且在某种程度上，基于对下文的考察研究对本领域技术人员而言将是显而易见的，或者可以从本发明的实践中得到教导。本发明的目标和其他优点可以通过下面的说明书来实现和获得。

生物材料保藏

多西他赛诱导建立的luminal型乳腺癌多药耐药细胞株T47D/DOC于2020年3月6日保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC，地址：中国武汉市武汉大学)，保藏编号为CCTCC NO：C202038；

多西他赛诱导建立的luminal型乳腺癌多药耐药细胞株MCF-7/DOC于2020年3月6日保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC，地址：中国武汉市武汉大学)，保藏编号为CCTCC NO：C202039。

附图说明

为了使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合附图对本发明作优选的详细描述，其中：

图1为对数生长期MCF-7/DOC及其亲本细胞的形貌图；

图2为对数生长期T47D/DOC及其亲本细胞的形貌图；

图3为对数生长期MCF-7/DOC及其亲本细胞染色后的形貌图及两种细胞核/浆比例测试结果图；(图3中A为对数生长期MCF-7/DOC及其亲本细胞经染色后的形貌图，图3中B为对数生长期MCF-7/DOC及其亲本细胞核/浆比例测试结果图)

图4为对数生长期T47D/DOC及其亲本细胞染色后的形貌图及两种细胞核/浆比例测试结果图；(图4中A为对数生长期T47D/DOC及其亲本细胞经染色后的形貌图，图4中B为对数生长期T47D/DOC及其亲本细胞核/浆比例测试结果图)；

图5为MCF-7/DOC和MCF-7的细胞生长曲线图；

图6为T47D/DOC和T47D的细胞生长曲线图；

图7为PI法检测对数生长期MCF-7/DOC及其亲本细胞的细胞周期测试结果图；(图7中A为对数生长期MCF-7/DOC及其亲本细胞的细胞周期曲线拟合图；图7中B为对数生长期MCF-7/DOC及其亲本细胞的细胞周期各阶段细胞比例测试结果图)

图8为PI法检测对数生长期T47D/DOC及其亲本细胞的细胞周期测试结果图；(图8中A为对数生长期T47D/DOC及其亲本细胞的细胞周期曲线拟合图；图8中B为对数生长期T47D/DOC及其亲本细胞的细胞周期各阶段细胞比例测试结果图)

图9为对数生长期MCF-7/DOC及其亲本细胞多耐药相关蛋白MDR1的表达测试结果图；(图9中A为对数生长期MCF-7/DOC及其亲本细胞流式细胞仪检测结果图，图9中B对数生长期MCF-7/DOC及其亲本细胞MDR1+细胞比例测试结果图)

图10为对数生长期T47D/DOC及其亲本细胞多耐药相关蛋白MDR1的表达测试结果图；(图10中A为对数生长期T47D/DOC及其亲本细胞流式细胞仪检测结果图，图10中B对数生长期T47D/DOC及其亲本细胞MDR1+细胞比例测试结果图)

图11为对数生长期MCF-7/DOC及其亲本细胞耐药基因MPRI表达测试结果图；

图12为对数生长期T47D/DOC及其亲本细胞耐药基因MPRI表达测试结果图；

图13为对数生长期的MCF-7/DOC细胞及其亲本细胞的多西他赛浓度-活细胞数曲线图；

图14为对数生长期的T47D/DOC细胞及其亲本细胞的多西他赛浓度-活细胞数曲线图。

具体实施方式

以下通过特定的具体实例说明本发明的实施方式，本领域技术人员可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点与功效。本发明还可以通过另外不同的具体实施方式加以实施或应用，本说明书中的各项细节也可以基于不同观点与应用，在没有背离本发明的精神下进行各种修饰或改变。

实施例1

构建多西他赛诱导建立的luminal型乳腺癌多药耐药细胞株MCF-7/DOC

(2)培养至细胞饱和密度为80％时，换入步骤(1)中新鲜EMEM培养液，并加入多西他赛至多西他赛的终浓度为0.187μg/mL(即人luminal型乳腺癌MCF-7细胞株在多西他赛中的IC50浓度)，继续培养4h后再次换入步骤(1)中新鲜EMEM培养液，接着继续培养3d后再次换入步骤(1)中新鲜EMEM培养液，再继续培养至细胞饱和密度为90％以上，传代1次；

(3)将步骤(2)中获得的细胞重复步骤(2)的操作，且后续将每次重复操作获得的细胞均重复步骤(2)中的操作，直至获得在多西他赛中的IC50浓度为亲本人luminal型乳腺癌MCF-7细胞株在多西他赛中的IC50浓度的15.23倍的人luminal型乳腺癌MCF-7细胞株，即获得多西他赛诱导建立的luminal型乳腺癌多药耐药细胞株MCF-7/DOC。

实施例2

构建多西他赛诱导建立的luminal型乳腺癌多药耐药细胞株T47D/DOC

(2)培养至细胞饱和密度为80％时，换入步骤(1)中新鲜RPMI-1640培养液，并加入多西他赛至多西他赛的终浓度为0.218μg/mL(即人luminal型乳腺癌T47D细胞株在多西他赛中的IC50浓度)，继续培养4h后再次换入步骤(1)中新鲜RPMI-1640培养液，接着继续培养3d后再次换入步骤(1)中新鲜RPMI-1640培养液，再继续培养至细胞饱和密度为90％以上，传代1次；

(3)将步骤(2)中获得的细胞重复步骤(2)的操作，且后续将每次重复操作获得的细胞均重复步骤(2)中的操作，直至获得在多西他赛中的IC50浓度为亲本人luminal型乳腺癌T47D细胞株在多西他赛中的IC50浓度的16.89倍的人luminal型乳腺癌T47D细胞株，即获得多西他赛诱导建立的luminal型乳腺癌多药耐药细胞株T47D/DOC。

实施例3

实施例1和实施例2构建的获得多西他赛诱导建立的luminal型乳腺癌多药耐药细胞株形态学观察：

(1)倒置相差显微镜观察细胞形态：取对数生长期MCF-7/DOC和T47D/DOC细胞及各自亲本细胞各一瓶，在倒置显微镜下观察并照像，结果如图1和图2所示，其中，图1为对数生长期MCF-7/DOC及其亲本细胞的形貌图，图2为对数生长期T47D/DOC及其亲本细胞的形貌图，由图1和图2可知，各亲本细胞形态舒展，大小一致，胞内结构均匀，而MCF-7/DOC和T47D/DOC细胞形态均出现变圆且成团成簇生长，细胞较大、形态不一，细胞核、细胞质增大，多核仁现象增多，细胞内尤其是近细胞膜处有较多深色物质聚集。

(2)HE染色观察细胞形态：取对数生长期MCF-7/DOC和T47D/DOC细胞及各自亲本细胞，用0.25％胰酶消化制成单细胞悬液，调整密度约1×10⁵/mL，接种于铺玻片的培养皿，置二氧化碳培养箱常规培养，待细胞基本长成单层，取出玻片，弃培养液，0.01M PBS浸洗3次，常规HE染色，于光学显微镜下观察，结果如图3和图4所示，其中图3中A为对数生长期MCF-7/DOC及其亲本细胞经染色后的形貌图，图3中B为对数生长期MCF-7/DOC及其亲本细胞核/浆比例测试结果图，图4中A为对数生长期T47D/DOC及其亲本细胞经染色后的形貌图，图4中B为对数生长期T47D/DOC及其亲本细胞核/浆比例测试结果图，由图3和图4可知，两种多药耐药细胞株与各自亲本细胞相比较，细胞形态和体积都有所变化，细胞成团生长，细胞体积明显变小，胞核变大变圆(如图3中A，图4中A所示)，核/浆比例明显增大(如图3中B，图4中B所示)，与各自亲本细胞不同，两种多药耐药细胞株胞核均未发现有较成熟的类似分叶核或者杆状核细胞，说明两种多药耐药细胞株在成熟度和分化程度上较其亲本细胞更为幼稚。

实施例4

实施例1和实施例2构建的获得多西他赛诱导建立的luminal型乳腺癌多药耐药细胞株生物学特性鉴定：

(1)CCK8法测定细胞生长曲线：细胞消化、计数、配制成浓度为1×10⁴/mL的细胞悬液，96孔细胞培养板中每孔加入100μL细胞悬液(每孔500个细胞)；96孔细胞培养板置于37℃，5％CO₂培养箱中分别培养1、2、3、4、5、6和7天后，将96孔板进行CCK8染色，每孔加入20uLCCK8(5mg/mL)，在培养箱继续培养3小时，在酶标仪读出每孔的OD值，以时间为横坐标、OD值为纵坐标，绘制细胞生长曲线，如图5和图6所示，其中，图5为MCF-7/DOC和MCF-7的细胞生长曲线图，图6为T47D/DOC和T47D的细胞生长曲线图。由图5和图6可知，各细胞接种后，前2天各多药耐药细胞株和各自亲本细胞生长无明显差异，从第3天开始各多药耐药细胞株的生长速度显著低于各自亲本细胞。多西他赛诱导建立的luminal型乳腺癌多药耐药细胞株MCF-7/DOC和T47D/DOC在培养过程中可以正常生长及传代，冻存、复苏后不影响其生长。

(2)PI法检测细胞周期：收集对数生长期MCF-7/DOC和T47D/DOC细胞及各自亲本细胞1×10⁶个，用4℃保存的PBS洗涤细胞3次，弃上清，加入预冷的70％乙醇1mL并快速轻柔吹打细胞后置入-20℃冰箱1小时以上，充分固定细胞并破膜便于PI染料进入细胞核。850g，4℃离心5min，弃上清，加入PI染液500μL，并充分吹打均匀，4℃染色1h，染色结束后用PBS洗涤细胞，850g，4℃离心5min，用PBS重悬细胞后用流式细胞仪检测，检测时激发波长为488nm，发射波长为575nm。流式细胞仪结果通过Modfit软件进行细胞周期曲线拟合，结果如图7中A，图8中A所示，统计细胞周期各阶段细胞比例，结果如图7中B，图8中B所示，两种多药耐药细胞株G2/M期细胞显著低于各自亲本细胞(****P<0.0001)。由此说明MCF-7/DOC和T47D/DOC细胞在建模过程中经多西他赛诱导获得耐药性，将细胞阻滞在G0/G1期，处于慢周期甚至静息状态。

(3)流式细胞仪检测多耐药相关蛋白MDR1的表达：取对数生长期MCF-7/DOC和T47D/DOC细胞及各自亲本细胞1×10⁶个，用4℃保存的PBS洗涤细胞3次，弃上清，将流式抗体APC human anti-MDR1按照1:200用1％FBS缓冲液稀释，100μL/样加入各组细胞，4℃孵育20min，流式细胞仪检测。结果如图9中A，图10中A所示，两种多药耐药细胞株MDR1+细胞比例达到60％以上，而各自亲本细胞几乎不表达MDR1蛋白。统计各组MDR1+细胞比例，如图9中B，图10中B所示，两种多药耐药细胞株多药耐药相关蛋白MDR1+比例显著性(***P<0.001)高于各自亲本细胞，由此说明本发明建立的多药耐药细胞株诱导方法能够有效诱导细胞表达耐药相关蛋白。

(4)QPCR检测耐药基因MPRI表达：将对数生长期MCF-7/DOC和T47D/DOC细胞及各自亲本细胞1×10⁶个收集于无酶EP管内，用4℃保存的PBS洗涤细胞3次，加入trizol 200μL,并立即吹散细胞，使所有细胞充分被trizol裂解，置于-20℃冰箱备用。提取RNA，反转录CDNA，用QPCR检测各组细胞MRPI的表达情况，结果如图11和图12所示，其中，图11为对数生长期MCF-7/DOC及其亲本细胞耐药基因MPRI表达测试结果图，图12为对数生长期T47D/DOC及其亲本细胞耐药基因MPRI表达测试结果图。由图11和图12可知，两种多药耐药细胞株的MRPI表达是各自亲本细胞的30倍以上，差异显著(***P<0.001)，可见两种多药耐药细胞株在分子特性上已经较各自亲本细胞具有更高的耐药能力。

实施例5

实施例1和实施例2构建的获得多西他赛诱导建立的luminal型乳腺癌多药耐药细胞株耐药指数的测定：

(1)MCF-7/DOC耐药指数的测定：收集对数生长期的MCF-7/DOC细胞及其亲本细胞，用含有100U/mL青霉素，100μg/mL链霉素，0.01mg/mL重组人胰岛素和10％胎牛血清的EMEM培养液中重悬，按照2.5×10⁵个/孔重新接种于24孔细胞培养板至于37℃，5％CO₂培养，待细胞完全贴壁后加入不同浓度的多西他赛培养基稀释液(200，100，20，10，2，1，0.2，0.1，0.05，0.01μg/mL)，每个浓度设置3个平行孔，继续培养72小时。培养结束后收集各孔细胞，并用细胞计数仪对各孔细胞进行计数，收集数据制作多西他赛浓度-活细胞数曲线，如图13所示，通过曲线拟合得到MCF-7/DOC的IC50为2.848μg/mL较其亲本细胞提高了15.23倍。

(2)T47D/DOC耐药指数的测定：收集对数生长期的T47D/DOC细胞及其亲本细胞用含有100U/mL青霉素，100μg/mL链霉素，0.2Units/mL牛胰岛素和10％胎牛血清的RPMI-1640培养液中重悬，按照2.5×10⁵个/孔重新接种于24孔细胞培养板至于37℃，5％CO₂培养，待细胞完全贴壁后加入不同浓度的多西他赛培养基稀释液(200，100，20，10，2，1，0.2，0.1，0.05，0.01μg/mL)，每个浓度设置3个平行孔，继续培养72小时。培养结束后收集各孔细胞，并用细胞计数仪对各孔细胞进行计数，收集数据制作多西他赛浓度-活细胞数曲线，如图14所示，通过曲线拟合得到T47D/DOC的IC50为3.514μg/mL较其亲本细胞提高了16.12倍。

实施例6

实施例1和实施例2构建的获得多西他赛诱导建立的luminal型乳腺癌多药耐药细胞株交叉耐药水平测定

(1)MCF-7/DOC交叉耐药水平的测定：收集对数生长期的MCF-7/DOC细胞及其亲本细胞，用含有100U/mL青霉素，100μg/mL链霉素，0.01mg/mL重组人胰岛素和10％胎牛血清的EMEM培养液中重悬，按照2.5×10⁵个/孔重新接种于24孔细胞培养板至于37℃，5％CO₂培养，待细胞完全贴壁后加入不同浓度梯度的表柔比星，环磷酰胺，吉西他滨培养基稀释液(200，100，20，10，2，1，0.2，0.1，0.05，0.01μg/mL)，每个浓度设置3个平行孔，继续培养72小时。培养结束后收集各孔细胞，并用细胞计数仪对各孔细胞进行计数，计算IC50结果如表1所示。

表1

*P<0.05，**P<0.01

由表1可知，MCF-7/DOC细胞对表柔比星、环磷酰胺和吉西他滨出现了不同程度耐药。

(2)T47D/DOC交叉耐药水平的测定：收集对数生长期的T47D/DOC细胞及其亲本细胞，含有100U/mL青霉素，100μg/mL链霉素，0.2Units/mL牛胰岛素和10％胎牛血清的RPMI-1640培养液中重悬，按照2.5×10⁵个/孔重新接种于24孔细胞培养板至于37℃，5％CO₂培养，待细胞完全贴壁后加入不同浓度梯度的表柔比星，环磷酰胺，吉西他滨培养基稀释液(200，100，20，10，2，1，0.2，0.1，0.05，0.01μg/mL)，每个浓度设置3个平行孔，继续培养72小时。培养结束后收集各孔细胞，并用细胞计数仪对各孔细胞进行计数，计算IC50结果如表2所示。

表2

*P<0.05，**P<0.01

由表2可知，T47D/DOC细胞对表柔比星、环磷酰胺和吉西他滨出现了不同程度耐药。

最后说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本技术方案的宗旨和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。

Claims

1.一种多西他赛诱导建立的luminal型乳腺癌多药耐药细胞株，其特征在于，所述多药耐药细胞株为T47D/DOC，保藏编号为CCTCC NO：C202038；或为MCF-7/DOC，保藏编号为CCTCCNO：C202039，均由中国典型培养物保藏中心保藏。

2.如权利要求1所述的一种多西他赛诱导建立的luminal型乳腺癌多药耐药细胞株，其特征在于，所述多药耐药细胞株对多西他赛、表柔比星、环磷酰胺或吉西他滨中的一种或多种具有耐药性。

3.权利要求1或2所述的一种多西他赛诱导建立的luminal型乳腺癌多药耐药细胞株在作为接近临床病发特点的细胞模型的应用。