CN111344570A - 分离和检测癌症干细胞的方法 - Google Patents
分离和检测癌症干细胞的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN111344570A CN111344570A CN201880051345.6A CN201880051345A CN111344570A CN 111344570 A CN111344570 A CN 111344570A CN 201880051345 A CN201880051345 A CN 201880051345A CN 111344570 A CN111344570 A CN 111344570A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- gsl
- lectin
- stem cells
- lectins
- respiration
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 title claims abstract description 584
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 title claims abstract description 467
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 title claims abstract description 375
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 117
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 claims abstract description 625
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 claims abstract description 625
- 239000002523 lectin Substances 0.000 claims abstract description 625
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 claims abstract description 403
- 230000029058 respiratory gaseous exchange Effects 0.000 claims abstract description 395
- 240000000716 Durio zibethinus Species 0.000 claims abstract description 236
- 235000006025 Durio zibethinus Nutrition 0.000 claims abstract description 236
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 122
- PNNNRSAQSRJVSB-SLPGGIOYSA-N Fucose Natural products C[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-SLPGGIOYSA-N 0.000 claims abstract description 122
- SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N L-fucopyranose Chemical compound C[C@@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N 0.000 claims abstract description 122
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims abstract description 113
- 238000002372 labelling Methods 0.000 claims abstract description 111
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 claims abstract description 105
- 239000000910 agglutinin Substances 0.000 claims abstract description 42
- 101710186708 Agglutinin Proteins 0.000 claims abstract description 38
- 101710146024 Horcolin Proteins 0.000 claims abstract description 38
- 101710189395 Lectin Proteins 0.000 claims abstract description 38
- 101710179758 Mannose-specific lectin Proteins 0.000 claims abstract description 38
- 101710150763 Mannose-specific lectin 1 Proteins 0.000 claims abstract description 38
- 101710150745 Mannose-specific lectin 2 Proteins 0.000 claims abstract description 38
- 210000003079 salivary gland Anatomy 0.000 claims abstract description 11
- 101710105077 Agglutinin-1 Proteins 0.000 claims abstract description 5
- 240000001592 Amaranthus caudatus Species 0.000 claims abstract description 4
- 235000009328 Amaranthus caudatus Nutrition 0.000 claims abstract description 4
- 240000006023 Trichosanthes kirilowii Species 0.000 claims abstract description 4
- 235000009818 Trichosanthes kirilowii Nutrition 0.000 claims abstract description 4
- 101000783817 Agaricus bisporus lectin Proteins 0.000 claims description 235
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 167
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 claims description 132
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 88
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 claims description 70
- 239000011616 biotin Substances 0.000 claims description 70
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 claims description 66
- 239000011324 bead Substances 0.000 claims description 62
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 59
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 54
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 54
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 claims description 54
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 claims description 52
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 46
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 claims description 46
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 claims description 43
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 claims description 40
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 claims description 38
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 claims description 38
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 35
- 239000010931 gold Substances 0.000 claims description 35
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 claims description 35
- 210000003800 pharynx Anatomy 0.000 claims description 28
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 28
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims description 22
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 claims description 21
- 238000011002 quantification Methods 0.000 claims description 19
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 19
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 claims description 17
- 239000003593 chromogenic compound Substances 0.000 claims description 16
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 claims description 15
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 claims description 13
- 210000002105 tongue Anatomy 0.000 claims description 13
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 claims description 12
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 claims description 12
- 210000001331 nose Anatomy 0.000 claims description 12
- 210000000214 mouth Anatomy 0.000 claims description 11
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims description 11
- 210000002741 palatine tonsil Anatomy 0.000 claims description 10
- 210000003437 trachea Anatomy 0.000 claims description 10
- 210000003681 parotid gland Anatomy 0.000 claims description 9
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 claims description 6
- 208000004337 Salivary Gland Neoplasms Diseases 0.000 claims description 6
- 206010061934 Salivary gland cancer Diseases 0.000 claims description 6
- 238000001493 electron microscopy Methods 0.000 claims description 6
- 238000000799 fluorescence microscopy Methods 0.000 claims description 6
- 210000000867 larynx Anatomy 0.000 claims description 6
- 208000009565 Pharyngeal Neoplasms Diseases 0.000 claims description 5
- 206010062129 Tongue neoplasm Diseases 0.000 claims description 5
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims description 5
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 claims description 4
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 claims description 4
- 101001089087 Cladrastis kentukea Agglutinin-2 Proteins 0.000 claims description 4
- 208000010505 Nose Neoplasms Diseases 0.000 claims description 4
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 claims description 4
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000012099 Alexa Fluor family Substances 0.000 claims description 3
- 108010015776 Glucose oxidase Proteins 0.000 claims description 3
- 239000004366 Glucose oxidase Substances 0.000 claims description 3
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 claims description 3
- 229940116332 glucose oxidase Drugs 0.000 claims description 3
- 235000019420 glucose oxidase Nutrition 0.000 claims description 3
- 238000007898 magnetic cell sorting Methods 0.000 claims description 3
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- YZCKVEUIGOORGS-NJFSPNSNSA-N Tritium Chemical compound [3H] YZCKVEUIGOORGS-NJFSPNSNSA-N 0.000 claims description 2
- ZCYVEMRRCGMTRW-YPZZEJLDSA-N iodine-125 Chemical compound [125I] ZCYVEMRRCGMTRW-YPZZEJLDSA-N 0.000 claims description 2
- 229940044173 iodine-125 Drugs 0.000 claims description 2
- 229910052713 technetium Inorganic materials 0.000 claims description 2
- GKLVYJBZJHMRIY-UHFFFAOYSA-N technetium atom Chemical compound [Tc] GKLVYJBZJHMRIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229910052722 tritium Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 244000046052 Phaseolus vulgaris Species 0.000 claims 1
- 235000010627 Phaseolus vulgaris Nutrition 0.000 claims 1
- 244000063464 Vitex agnus-castus Species 0.000 claims 1
- 102000005936 beta-Galactosidase Human genes 0.000 claims 1
- 208000025188 carcinoma of pharynx Diseases 0.000 claims 1
- 235000009347 chasteberry Nutrition 0.000 claims 1
- 201000007363 trachea carcinoma Diseases 0.000 claims 1
- 101001089022 Axinella polypoides Lectin-2 Proteins 0.000 abstract description 2
- 101710197072 Lectin 1 Proteins 0.000 abstract description 2
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 abstract 3
- 244000251953 Agaricus brunnescens Species 0.000 abstract 2
- 235000001674 Agaricus brunnescens Nutrition 0.000 abstract 2
- 241000219726 Griffonia simplicifolia Species 0.000 abstract 1
- 244000184734 Pyrus japonica Species 0.000 abstract 1
- 208000002474 Tinea Diseases 0.000 abstract 1
- 244000248021 Vitex negundo Species 0.000 abstract 1
- 235000010363 Vitex negundo Nutrition 0.000 abstract 1
- 108010016101 Griffonia simplicifolia lectins Proteins 0.000 description 497
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 54
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 45
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 32
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 32
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 15
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 15
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 14
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 12
- -1 i.e. Proteins 0.000 description 12
- 239000000047 product Substances 0.000 description 12
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 12
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 11
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 10
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 9
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 9
- 238000002626 targeted therapy Methods 0.000 description 9
- 230000003021 clonogenic effect Effects 0.000 description 8
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 8
- 210000003484 anatomy Anatomy 0.000 description 7
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 7
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 7
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 6
- 101150084967 EPCAM gene Proteins 0.000 description 6
- 229960004316 cisplatin Drugs 0.000 description 6
- DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L cisplatin Chemical compound N[Pt](N)(Cl)Cl DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 6
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 6
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 6
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 6
- 206010043515 Throat cancer Diseases 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 5
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 5
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 5
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 5
- 238000012552 review Methods 0.000 description 5
- 190000008236 Carboplatin Chemical compound 0.000 description 4
- 208000003445 Mouth Neoplasms Diseases 0.000 description 4
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 4
- 229960004562 carboplatin Drugs 0.000 description 4
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 4
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- SDUQYLNIPVEERB-QPPQHZFASA-N gemcitabine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1C(F)(F)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 SDUQYLNIPVEERB-QPPQHZFASA-N 0.000 description 4
- 229940020967 gemzar Drugs 0.000 description 4
- 208000012987 lip and oral cavity carcinoma Diseases 0.000 description 4
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 4
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 4
- 208000037968 sinus cancer Diseases 0.000 description 4
- 201000006134 tongue cancer Diseases 0.000 description 4
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000006842 Tonsillar Neoplasms Diseases 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- HWYHZTIRURJOHG-UHFFFAOYSA-N luminol Chemical group O=C1NNC(=O)C2=C1C(N)=CC=C2 HWYHZTIRURJOHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- ZDZOTLJHXYCWBA-BSEPLHNVSA-N molport-006-823-826 Chemical compound O([C@H]1[C@H]2[C@@](C([C@H](O)C3=C(C)[C@@H](OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C=4C=CC=CC=4)C[C@@]1(O)C3(C)C)=O)(C)[C@@H](O)C[C@H]1OC[C@]12OC(=O)C)C(=O)C1=CC=CC=C1 ZDZOTLJHXYCWBA-BSEPLHNVSA-N 0.000 description 3
- 201000001219 parotid gland cancer Diseases 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N taxol Chemical compound O([C@@H]1[C@@]2(C[C@@H](C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]3OC[C@]3([C@H]21)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N 0.000 description 3
- 206010044285 tracheal cancer Diseases 0.000 description 3
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ZTOJFFHGPLIVKC-YAFCTCPESA-N (2e)-3-ethyl-2-[(z)-(3-ethyl-6-sulfo-1,3-benzothiazol-2-ylidene)hydrazinylidene]-1,3-benzothiazole-6-sulfonic acid Chemical compound S\1C2=CC(S(O)(=O)=O)=CC=C2N(CC)C/1=N/N=C1/SC2=CC(S(O)(=O)=O)=CC=C2N1CC ZTOJFFHGPLIVKC-YAFCTCPESA-N 0.000 description 2
- HSTOKWSFWGCZMH-UHFFFAOYSA-N 3,3'-diaminobenzidine Chemical group C1=C(N)C(N)=CC=C1C1=CC=C(N)C(N)=C1 HSTOKWSFWGCZMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100033793 ALK tyrosine kinase receptor Human genes 0.000 description 2
- IKYJCHYORFJFRR-UHFFFAOYSA-N Alexa Fluor 350 Chemical compound O=C1OC=2C=C(N)C(S(O)(=O)=O)=CC=2C(C)=C1CC(=O)ON1C(=O)CCC1=O IKYJCHYORFJFRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012103 Alexa Fluor 488 Substances 0.000 description 2
- 239000012110 Alexa Fluor 594 Substances 0.000 description 2
- 239000012112 Alexa Fluor 633 Substances 0.000 description 2
- 102100026189 Beta-galactosidase Human genes 0.000 description 2
- 108010022366 Carcinoembryonic Antigen Proteins 0.000 description 2
- 102100025475 Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 5 Human genes 0.000 description 2
- 229920000089 Cyclic olefin copolymer Polymers 0.000 description 2
- 239000004713 Cyclic olefin copolymer Substances 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000206672 Gelidium Species 0.000 description 2
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010034811 Pharyngeal cancer Diseases 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010004729 Phycoerythrin Proteins 0.000 description 2
- RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N Progesterone Chemical compound C1CC2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H](C(=O)C)[C@@]1(C)CC2 RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N 0.000 description 2
- 206010044002 Tonsil cancer Diseases 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- ZTOJFFHGPLIVKC-CLFAGFIQSA-N abts Chemical compound S/1C2=CC(S(O)(=O)=O)=CC=C2N(CC)C\1=N\N=C1/SC2=CC(S(O)(=O)=O)=CC=C2N1CC ZTOJFFHGPLIVKC-CLFAGFIQSA-N 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 2
- 108010004469 allophycocyanin Proteins 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000004205 dimethyl polysiloxane Substances 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 2
- 238000013399 early diagnosis Methods 0.000 description 2
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 201000004959 laryngeal benign neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 201000005264 laryngeal carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 206010023841 laryngeal neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 2
- 208000037830 nasal cancer Diseases 0.000 description 2
- 229940086322 navelbine Drugs 0.000 description 2
- JPXMTWWFLBLUCD-UHFFFAOYSA-N nitro blue tetrazolium(2+) Chemical compound COC1=CC(C=2C=C(OC)C(=CC=2)[N+]=2N(N=C(N=2)C=2C=CC=CC=2)C=2C=CC(=CC=2)[N+]([O-])=O)=CC=C1[N+]1=NC(C=2C=CC=CC=2)=NN1C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 JPXMTWWFLBLUCD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960003301 nivolumab Drugs 0.000 description 2
- NYDXNILOWQXUOF-GXKRWWSZSA-L pemetrexed disodium Chemical compound [Na+].[Na+].C=1NC=2NC(N)=NC(=O)C=2C=1CCC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC([O-])=O)C([O-])=O)C=C1 NYDXNILOWQXUOF-GXKRWWSZSA-L 0.000 description 2
- 201000008006 pharynx cancer Diseases 0.000 description 2
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 2
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 2
- 229920000435 poly(dimethylsiloxane) Polymers 0.000 description 2
- 229920003229 poly(methyl methacrylate) Polymers 0.000 description 2
- 239000004926 polymethyl methacrylate Substances 0.000 description 2
- KIDHWZJUCRJVML-UHFFFAOYSA-N putrescine Chemical compound NCCCCN KIDHWZJUCRJVML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 230000001173 tumoral effect Effects 0.000 description 2
- GBABOYUKABKIAF-IELIFDKJSA-N vinorelbine Chemical compound C1N(CC=2C3=CC=CC=C3NC=22)CC(CC)=C[C@H]1C[C@]2(C(=O)OC)C1=CC([C@]23[C@H]([C@@]([C@H](OC(C)=O)[C@]4(CC)C=CCN([C@H]34)CC2)(O)C(=O)OC)N2C)=C2C=C1OC GBABOYUKABKIAF-IELIFDKJSA-N 0.000 description 2
- 229960002066 vinorelbine Drugs 0.000 description 2
- CILBMBUYJCWATM-PYGJLNRPSA-N vinorelbine ditartrate Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O.OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O.C1N(CC=2C3=CC=CC=C3NC=22)CC(CC)=C[C@H]1C[C@]2(C(=O)OC)C1=CC([C@]23[C@H]([C@@]([C@H](OC(C)=O)[C@]4(CC)C=CCN([C@H]34)CC2)(O)C(=O)OC)N2C)=C2C=C1OC CILBMBUYJCWATM-PYGJLNRPSA-N 0.000 description 2
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QRXMUCSWCMTJGU-UHFFFAOYSA-N 5-bromo-4-chloro-3-indolyl phosphate Chemical compound C1=C(Br)C(Cl)=C2C(OP(O)(=O)O)=CNC2=C1 QRXMUCSWCMTJGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710168331 ALK tyrosine kinase receptor Proteins 0.000 description 1
- 108010019883 Agaricus lectins Proteins 0.000 description 1
- JLDSMZIBHYTPPR-UHFFFAOYSA-N Alexa Fluor 405 Substances CC[NH+](CC)CC.CC[NH+](CC)CC.CC[NH+](CC)CC.C12=C3C=4C=CC2=C(S([O-])(=O)=O)C=C(S([O-])(=O)=O)C1=CC=C3C(S(=O)(=O)[O-])=CC=4OCC(=O)N(CC1)CCC1C(=O)ON1C(=O)CCC1=O JLDSMZIBHYTPPR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WEJVZSAYICGDCK-UHFFFAOYSA-N Alexa Fluor 430 Substances CC[NH+](CC)CC.CC1(C)C=C(CS([O-])(=O)=O)C2=CC=3C(C(F)(F)F)=CC(=O)OC=3C=C2N1CCCCCC(=O)ON1C(=O)CCC1=O WEJVZSAYICGDCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012104 Alexa Fluor 500 Substances 0.000 description 1
- 239000012105 Alexa Fluor 514 Substances 0.000 description 1
- WHVNXSBKJGAXKU-UHFFFAOYSA-N Alexa Fluor 532 Substances [H+].[H+].CC1(C)C(C)NC(C(=C2OC3=C(C=4C(C(C(C)N=4)(C)C)=CC3=3)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)=C1C=C2C=3C(C=C1)=CC=C1C(=O)ON1C(=O)CCC1=O WHVNXSBKJGAXKU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZAINTDRBUHCDPZ-UHFFFAOYSA-M Alexa Fluor 546 Substances [H+].[Na+].CC1CC(C)(C)NC(C(=C2OC3=C(C4=NC(C)(C)CC(C)C4=CC3=3)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)=C1C=C2C=3C(C(=C(Cl)C=1Cl)C(O)=O)=C(Cl)C=1SCC(=O)NCCCCCC(=O)ON1C(=O)CCC1=O ZAINTDRBUHCDPZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- IGAZHQIYONOHQN-UHFFFAOYSA-N Alexa Fluor 555 Substances C=12C=CC(=N)C(S(O)(=O)=O)=C2OC2=C(S(O)(=O)=O)C(N)=CC=C2C=1C1=CC=C(C(O)=O)C=C1C(O)=O IGAZHQIYONOHQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012109 Alexa Fluor 568 Substances 0.000 description 1
- 239000012111 Alexa Fluor 610 Substances 0.000 description 1
- 239000012114 Alexa Fluor 647 Substances 0.000 description 1
- 239000012115 Alexa Fluor 660 Substances 0.000 description 1
- 239000012116 Alexa Fluor 680 Substances 0.000 description 1
- 239000012117 Alexa Fluor 700 Substances 0.000 description 1
- 239000012118 Alexa Fluor 750 Substances 0.000 description 1
- 239000012119 Alexa Fluor 790 Substances 0.000 description 1
- 108010005231 Amaranthus caudatus lectin Proteins 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 102000007260 Deoxyribonuclease I Human genes 0.000 description 1
- 108010008532 Deoxyribonuclease I Proteins 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 102000009024 Epidermal Growth Factor Human genes 0.000 description 1
- 101800003838 Epidermal growth factor Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 101710135898 Myc proto-oncogene protein Proteins 0.000 description 1
- 102100038895 Myc proto-oncogene protein Human genes 0.000 description 1
- 206010061309 Neoplasm progression Diseases 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 239000005700 Putrescine Substances 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 1
- UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M Sodium bicarbonate-14C Chemical compound [Na+].O[14C]([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 101710150448 Transcriptional regulator Myc Proteins 0.000 description 1
- 206010066901 Treatment failure Diseases 0.000 description 1
- 241000218989 Trichosanthes Species 0.000 description 1
- 240000003864 Ulex europaeus Species 0.000 description 1
- 235000010730 Ulex europaeus Nutrition 0.000 description 1
- 108010073929 Vascular Endothelial Growth Factor A Proteins 0.000 description 1
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 229940120638 avastin Drugs 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 229960000397 bevacizumab Drugs 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- XJMXIWNOKIEIMX-UHFFFAOYSA-N bromo chloro 1h-indol-2-yl phosphate Chemical compound C1=CC=C2NC(OP(=O)(OBr)OCl)=CC2=C1 XJMXIWNOKIEIMX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 230000000973 chemotherapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 238000009643 clonogenic assay Methods 0.000 description 1
- 231100000096 clonogenic assay Toxicity 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 239000000039 congener Substances 0.000 description 1
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 230000000779 depleting effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 229940116977 epidermal growth factor Drugs 0.000 description 1
- AAKJLRGGTJKAMG-UHFFFAOYSA-N erlotinib Chemical compound C=12C=C(OCCOC)C(OCCOC)=CC2=NC=NC=1NC1=CC=CC(C#C)=C1 AAKJLRGGTJKAMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000005713 exacerbation Effects 0.000 description 1
- 230000001815 facial effect Effects 0.000 description 1
- 239000000834 fixative Substances 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 238000007306 functionalization reaction Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 229940076085 gold Drugs 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 230000002055 immunohistochemical effect Effects 0.000 description 1
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 208000037841 lung tumor Diseases 0.000 description 1
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L magnesium chloride Substances [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 1
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 1
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000008722 morphological abnormality Effects 0.000 description 1
- 239000012120 mounting media Substances 0.000 description 1
- 230000001613 neoplastic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 229920001296 polysiloxane Polymers 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 229960003387 progesterone Drugs 0.000 description 1
- 239000000186 progesterone Substances 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 230000003439 radiotherapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 230000008261 resistance mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000004248 saffron Substances 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 238000009094 second-line therapy Methods 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000011781 sodium selenite Substances 0.000 description 1
- 229960001471 sodium selenite Drugs 0.000 description 1
- 238000011895 specific detection Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 238000009095 third-line therapy Methods 0.000 description 1
- 208000023959 tonsil neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000024363 trachea neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000000439 tumor marker Substances 0.000 description 1
- 230000005751 tumor progression Effects 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N uroanthelone Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(C)C)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N 0.000 description 1
- 238000003260 vortexing Methods 0.000 description 1
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
- G01N33/57407—Specifically defined cancers
- G01N33/57423—Specifically defined cancers of lung
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0688—Cells from the lungs or the respiratory tract
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0693—Tumour cells; Cancer cells
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56966—Animal cells
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
- G01N33/57469—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving tumor associated glycolinkage, i.e. TAG
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/415—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from plants
- G01N2333/42—Lectins, e.g. concanavalin, phytohaemagglutinin
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/54—Determining the risk of relapse
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Oncology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明涉及至少一种识别岩藻糖α1‑2半乳糖基元的凝集素用于在生物学样品中对牵涉呼吸的器官的癌症干细胞进行标记以获得经标记的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的体外用途。在一个特别的实施方案中,所述至少一种凝集素选自下列凝集素:荆豆(Ulex europaeus)凝集素1(UEA‑1)或其同源物日本栝楼(Trichosanthes japonica)凝集素II(TJA‑II)、双孢蘑菇(Agaricus bisporus)凝集素(ABA)、尾穗苋(Amaranthus caudatus)凝集素(ACA)、榴莲凝素、单叶格里丰木(Griffonia simplicifolia)凝集素I(GSL‑I)和单叶格里丰木凝集素II(GSL‑II)。在一个特别的实施方案中,所述牵涉呼吸的器官选自肺、喉、咽、口、鼻、喉咙、舌、窦、气管和唾液腺,所述唾液腺包括扁桃体和腮腺。
Description
本发明涉及分离和检测牵涉呼吸的器官的癌症干细胞(Cancer Stem Cell;CSC)的方法。
在法国,肺癌在男性中是由癌症引起的死亡的第一原因和在女性中是第二原因,第一原因是乳腺癌。它每年触及37000人。5年存活率是非常低的,因此在该病理学状况中所介入的早期诊断的概念正是本发明具有其全部意义所在。
与其他类型的癌症一样,肺癌具有多种在所涉及的人群中导致高死亡率的因素,其中尤其是迟的诊断,由此同时带来所谓的转移性的更加晚期的癌症以及高的复发率。这是因为,该比率直接取决于检出该癌症时所处于的阶段。然而,应当知道即使检测阶段是早期,复发率仍然是高的,因为某些参数目前未被考虑到。
这是因为,该复发现象可以部分地用迄今未加考虑的肿瘤进展以及抗性机制(其基于癌症干细胞或肿瘤起始细胞或癌前细胞的存在)来进行解释。肿瘤对于放射治疗性处理和化学治疗性处理的治疗逃逸取决于在肿瘤内部这些细胞的存在。因此,在肿瘤组织中这些细胞的检测是用于确定肿瘤的侵袭性水平的一种手段。因此,对于癌症干细胞来说特异性的生物标志物的表征在肿瘤治疗中具有巨大的诊断和预后利益。但是,当前不存在允许确信地将癌症干细胞与其他肿瘤细胞相区别的对于癌症干细胞(CSC)来说特异性的标志物。
对于分离和表征CSC来说的主要困难在于其群体的有限的大小(肿瘤群体的3-4%)和特异性标志物的缺乏。
因此,存在重大的对于早期诊断癌症干细胞和开发新的用于检测和/或分离癌症干细胞的方法的需求。
癌症干细胞的存在的早期鉴定使得能够为临床医生提供该疾病的预测性因素。
此外,它还将会提供在癌症危险性的诊断中的新前景。这是因为,对于临床医生来说可得的补充信息应当允许通过治疗的适应调整来限制该疾病的复发或恶化的风险。
除了肺之外的牵涉呼吸的器官的癌症在法国是常见的癌症:其是在男性中第4的癌症类型,占癌症的10%。另外,观察到在法国的北部和南部地区之间的巨大的不均等,其中相对于全国平均值而言,在北部发病率高出20%多。还存在死亡率的巨大的社会不平等。
在2012年,除了肺癌之外的牵涉呼吸的器官的癌症的发病率据估计为11320个新病例,其中71%的病例影响男性。
按频率递减的顺序,其为:
·咽癌:47%
·口腔癌,包括舌癌:25%
·喉癌:25%
·唾液腺癌:6%
·面部的窦癌:<1%。
这些是主要触及男性(1名女性:7名男性)和尤其是吸烟者的疾患。
本发明涉及特异性的检测方法,因为它仅识别牵涉呼吸的器官的癌症干细胞并因此比传统方法更有效。此外,它的实施相对于现有的方法而言更快速,因为现有的方法由于其不可再现性而是不可普及的并且同时集中了癌症干细胞和癌症非干细胞。
“牵涉呼吸的器官”是指主动参与呼吸,即主动参与吸气和呼气的器官,和位于所呼吸的空气的通道上的器官。
因此,在本发明的范围内,“牵涉呼吸的器官”为肺、喉、咽、口、鼻、喉咙、舌、窦、气管和唾液腺(扁桃体和腮腺)。
在第一个方面,本发明涉及凝集素作为标记工具用于检测和/或分离牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的用途。
在第二个方面,本发明涉及分离和检测牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的方法,所述方法包括用至少一种凝集素对牵涉呼吸的器官的癌症干细胞进行标记。
在第三个方面,本发明涉及诊断牵涉呼吸的器官的癌症的侵袭性和/或复发风险以确定用于牵涉呼吸的器官的癌症的治疗适应调整的预后值的方法,所述方法包括分离和/或检测牵涉呼吸的器官的癌细胞的步骤。
在第四个方面,本发明涉及试剂盒,其包含用于检测或分离牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的凝集素。
本发明基于由发明人阐明了岩藻糖α1-2半乳糖基元,和更特别地岩藻糖α1-2半乳糖β1-4N-乙酰葡糖胺基元在牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的表面上的存在以及其被凝集素识别的可能性,从而使得能够检测和分离这些细胞。
在本发明的范围内,“对牵涉呼吸的器官的癌症干细胞进行标记的工具”是指这样的物质,其能够特异性地结合至在牵涉呼吸的器官的癌症干细胞表面上的基元。
根据一个总的方面,本发明涉及至少一种识别岩藻糖α1-2半乳糖基元的凝集素用于在生物学样品中对牵涉呼吸的器官的癌症干细胞进行标记以获得经标记的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的体外用途。
在一个特别的实施方案中,所述岩藻糖α1-2半乳糖基元更特别地为岩藻糖α1-2半乳糖β1-4N-乙酰葡糖胺基元。
因此,本发明还涉及至少一种识别岩藻糖α1-2半乳糖β1-4N-乙酰葡糖胺基元的凝集素用于在生物学样品中对牵涉呼吸的器官的癌症干细胞进行标记以获得经标记的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的体外用途。
在一个特别的实施方案中,根据本发明的凝集素选自下列凝集素:荆豆(Ulexeuropaeus)凝集素1(UEA-1)、双孢蘑菇(Agaricus bisporus)凝集素(ABA)、尾穗苋(Amaranthus caudatus)凝集素(ACA)、榴莲凝素、GSL-I和GSL-II即单叶格里丰木(Griffonia simplicifolia)凝集素I(GSL-I)和单叶格里丰木凝集素II(GSL-II)以及其同源物。
例如,日本栝楼(Trichosanthes japonica)凝集素II(TJA-II)这种凝集素为凝集素UEA-1的同源物。
因此,本发明还涉及至少一种从下列凝集素中选择的凝集素用于在生物学样品中获得经标记的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的体外用途:荆豆凝集素1(UEA-1)或其同源物日本栝楼凝集素II(TJA-II)、双孢蘑菇凝集素(ABA)、尾穗苋凝集素(ACA)、榴莲凝素、GSL-I和GSL-II即单叶格里丰木凝集素I(GSL-I)和单叶格里丰木凝集素II(GSL-II)。
这些凝集素是专业人员熟知的并且是商购可得的(尤其是通过VectorLaboratories公司)。一些综述列出了其结构(Lectin Structure,Rini JM,Annu RevBiophys Biomol Struct,1995,24:551-77),而更近期的其他综述描述了其整个历史(Insight of Lectins-A review,Singh等人,International Journal of Scientificand Engineering Research,第3卷,第4期,2012年4月)和在其用途(尤其是在免疫组织化学中)方面的进展(Lectin Histochemistry:Historical Perspectives,State of theArt,and the Future,Brooks SA,Methods Mol Biol,2017,1560:93-107)。
在一个特别的实施方案中,本发明涉及凝集素UEA-1或其同源物TJA-II用于在生物学样品中获得经标记的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的体外用途。
在本发明的范围内,所述生物学样品为在具有牵涉呼吸的器官的癌症或者可能具有牵涉呼吸的器官的癌症的患者上取得的样品。
在本发明的范围内,“牵涉呼吸的器官的癌症”可以为肺癌、喉癌、咽癌、口腔癌、鼻癌、喉咙癌、舌癌、窦癌、气管癌或唾液腺癌(即扁桃体癌和/或腮腺癌)。
在本发明中,术语“肺癌”和“肺部癌症”可以不加区别地进行使用。
该样品可能包含癌症干细胞。
与通常的以病理解剖学进行的分析相反地或作为其补充地,根据本发明的凝集素的用途使得能够最终在早期阶段将所述样品表征为肿瘤前的或肿瘤性的。
术语“肿瘤前的(pre-tumoral)”是指处于肿瘤上游,其具有可能或不会给样品带来肿瘤特征的潜力。
这是因为,病理解剖学通过活组织检查、涂片或即时活组织检查来研究在患病的或死亡的生物体上取得的组织的肉眼可见和显微的损伤。因此,该医学分支致力于所取得的生物学组织和病理学细胞的肉眼可见和显微的异常的形态学研究,而不致力于癌症干细胞的研究和因此不致力于细胞的自我复制特性。
病理解剖学不允许从形态学研究开始来建立样品的早期表征,因为所观察到的异常出现在癌细胞的自我复制特征已经表现出来的阶段。
相反地,本发明直接致力于检测癌症干细胞的存在,这使得能够表征处于比病理解剖学更早的阶段,即甚至在癌症干细胞已可以表现出它们的导致在组织水平上的形态学异常的自我复制特征之前的样品。
根据本发明的方法可以在病理解剖学分析的下游来进行实施。在该情况下,在病理解剖学研究之后将样品表征为肿瘤性的、可能是肿瘤性的或不被怀疑是肿瘤性的。由于根据本发明的方法特别关系到癌症干细胞,因此在该情况下,它使得能够确认以病理解剖学获得的诊断,或者撤销该诊断。
这是因为,在样品以病理解剖学方式不被怀疑是肿瘤性的情况下,本发明可以使得能够通过揭示所述样品的肿瘤性或肿瘤前特征而撤销该诊断,因为它基于不同于病理解剖学的参数(在这种情况下,癌症干细胞的存在和任选地定量)。
根据一个实施方案,本发明涉及至少两种选自UEA-1或其同源物TJA-II、ABA、ACA、榴莲凝素、GSL-I和GSL-II的凝集素的混合物的体外用途。
因此,在一个实施方案中,本发明涉及从下列混合物中选择的两种凝集素的混合物的体外用途:(UEA-1、ABA)、(UEA-1、ACA)、(UEA-1、榴莲凝素)、(UEA-1、GSL-I)、(UEA-1、GSL-II)、(ABA、ACA)、(ABA、榴莲凝素)、(ABA、GSL-I)、(ABA、GSL-II)、(ACA、榴莲凝素)、(ACA、GSL-I)、(ACA、GSL-II)、(榴莲凝素、GSL-I)、(榴莲凝素、GSL-II)、(GSL-I、GSL-II)、(TJA-II、ABA)、(TJA-II、ACA)、(TJA-II、榴莲凝素)、(TJA-II、GSL-I)、(TJA-II、GSL-II)。
在一个特别的实施方案中,本发明涉及两种凝集素GSL-I和GSL-II的混合物的体外用途。
在一个特别的实施方案中,本发明涉及两种凝集素GSL-I和UEA-1或其同源物TJA-II的混合物的体外用途。
根据一个实施方案,本发明涉及至少三种选自UEA-1或其同源物TJA-II、ABA、ACA、榴莲凝素、GSL-I和GSL-II的凝集素的混合物,特别地,UEA-1或其同源物TJA-II、榴莲凝素和ABA的混合物,或者UEA-1或其同源物TJA-II、榴莲凝素和ACA的混合物的体外用途。
因此,在一个特别的实施方案中,本发明涉及从下列混合物中选择的三种凝集素的混合物的体外用途:(UEA-1、ABA、ACA)、(UEA-1、ABA、榴莲凝素)、(UEA-1、ABA、GSL-I)、(UEA-1、ABA、GSL-II)、(UEA-1、ACA、榴莲凝素)、(UEA-1、ACA、GSL-I)、(UEA-1、ACA、GSL-II)、(UEA-1、榴莲凝素、GSL-I)、(UEA-1、榴莲凝素、GSL-II)、(UEA-1、GSL-I、GSL-II)、(ABA、ACA、榴莲凝素)、(ABA、ACA、GSL-I)、(ABA、ACA、GSL-II)、(ABA、榴莲凝素、GSL-I)、(ABA、榴莲凝素、GSL-II)、(ABA、GSL-I、GSL-II)、(ACA、榴莲凝素、GSL-I)、(ACA、榴莲凝素、GSL-II)、(ACA、GSL-I、GSL-II)、(榴莲凝素、GSL-I、GSL-II)、(TJA-II、ABA、ACA)、(TJA-II、ABA、榴莲凝素)、(TJA-II、ABA、GSL-I)、(TJA-II、ABA、GSL-II)、(TJA-II、ACA、榴莲凝素)、(TJA-II、ACA、GSL-I)、(TJA-II、ACA、GSL-II)、(TJA-II、榴莲凝素、GSL-I)、(TJA-II、榴莲凝素、GSL-II)、(TJA-II、GSL-I、GSL-II)。
在一个实施方案中,本发明涉及三种凝集素(UEA-1、榴莲凝素、ABA)的混合物,或者(UEA-1、榴莲凝素、ACA)的混合物的体外用途。
两种或三种凝集素的使用在某些情况下允许更好的对癌症干细胞进行标记的特异性。
在检测和分离CSC中,两种GSL或者UEA-1和GSL-I或者TJA-II和GSL-I的组合是有利的实施方案。
在一个特别的实施方案中,本发明涉及至少一种从下列凝集素中选择的识别岩藻糖α1-2半乳糖基元的凝集素用于在生物学样品中对肺癌症干细胞进行标记以获得经标记的肺癌症干细胞的体外用途:UEA-1或其同源物TJA-II、ABA、ACA、榴莲凝素、GSL-I和GSL-II,
尤其是至少两种选自UEA-1、ABA、ACA、榴莲凝素、GSL-I和GSL-II的凝集素,特别是GSL-I和GSL-II的混合物,或者UEA-1和GSL-I的混合物,
尤其是至少三种选自UEA-1、ABA、ACA、榴莲凝素、GSL-I和GSL-II的凝集素,特别是UEA-1、榴莲凝素和ABA的混合物,或者UEA-1、榴莲凝素和ACA的混合物。
在本发明的情景下所使用的凝集素可以是经缀合的。
在本发明的范围内,术语“经缀合的”是指凝集素以共价方式连接至另一个分子。
根据一个实施方案,本发明涉及至少一种识别岩藻糖α1-2半乳糖基元的凝集素用于对牵涉呼吸的器官的癌症干细胞进行标记的体外用途,其中所述对牵涉呼吸的器官的癌症干细胞进行标记用与选自荧光团、放射性同位素、酶、金珠粒或生物素的标记物相缀合的凝集素来施行。
根据一个实施方案,本发明涉及至少一种识别岩藻糖α1-2半乳糖β1-4N-乙酰葡糖胺基元的凝集素用于对牵涉呼吸的器官的癌症干细胞进行标记的体外用途,其中所述对牵涉呼吸的器官的癌症干细胞进行标记用与选自荧光团、放射性同位素、酶、金珠粒或生物素的标记物相缀合的凝集素来施行。
根据一个实施方案,所述凝集素选自下列凝集素:UEA-1或其同源物TJA-II、ABA、ACA、榴莲凝素、GSL-I和GSL-II。
因此,在一个特别的实施方案中,所述凝集素与荧光团相缀合。
在本发明的范围内,荧光团可以为任何能够用于流式细胞术的荧光团。此类荧光团是商购可得的。它为例如Alexa fluor,特别地Alexa fluor 350、405、430、488、500、514、532、546、555、568、594、610、633、647、660、680、700、750或790,异硫氰酸荧光素(FITC),罗丹明,别藻蓝蛋白(APC),和藻红蛋白(PE)。
有利地,所述荧光团选自罗丹明、FITC或Alexa fluor,特别地Alexa fluor 488、Alexa fluor 594或Alexa fluor 633。
在本发明的范围内,荧光团的该表征适用于涉及荧光团的本发明的任何实施方案。
在另一个特别的实施方案中,所述凝集素与放射性同位素相缀合。
在本发明的范围内,放射性同位素选自碘125、氚或锝。
在另一个特别的实施方案中,所述凝集素与酶相缀合。
在本发明的范围内,所述酶为催化有色产物形成的酶,即使用生色底物的酶,或者催化发光产物形成的酶,即使用化学发光底物的酶。
在本发明的范围内,“生色底物”意指在由酶进行转化后提供有色产物的底物。
在本发明的范围内,“化学发光底物”意指在由酶进行转化后提供发光产物的底物。
在本发明的一个特别的情况下,所述催化有色产物形成的酶选自辣根过氧化物酶(HRP)、碱性磷酸酶、葡萄糖氧化酶或β-半乳糖苷酶。
在HRP的特别的情况下,所述生色底物选自3,3’-二氨基联苯胺(DAB)、3,3’,5,5’-四甲基联苯胺(TMB)或2,2’-连氮基-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)(ABTS)。
在碱性磷酸酶的特别的情况下,所述生色底物为NBT(氮蓝四唑)和BCIP(溴氯吲哚基磷酸盐)。
在本发明的一个特别的情况下,所述催化发光产物形成的酶为HRP并且所述发光底物为鲁米诺。
在另一个特别的实施方案中,所述凝集素与金珠粒相缀合。
在另一个特别的实施方案中,所述凝集素与生物素相缀合。
还由发明人阐明了,牵涉呼吸的器官的癌症干细胞可以通过使用识别岩藻糖α1-2半乳糖基元的凝集素以对所述牵涉呼吸的器官的癌症干细胞进行标记来进行检测。
在一个特别的实施方案中,所述岩藻糖α1-2半乳糖基元为岩藻糖α1-2半乳糖β1-4N-乙酰葡糖胺基元。因此,牵涉呼吸的器官的癌症干细胞可以通过使用识别岩藻糖α1-2半乳糖β1-4N-乙酰葡糖胺基元的凝集素以对所述牵涉呼吸的器官的癌症干细胞进行标记来进行检测。
在本发明的范围内,“检测”是指通过UV/可见光、发光、荧光、放射性、酶学的方法来鉴别在生物学样品内牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的存在这一事件。
因此,本发明还涉及至少一种识别岩藻糖α1-2半乳糖基元,更特别地岩藻糖α1-2半乳糖β1-4N-乙酰葡糖胺基元的凝集素用于在生物学样品中对牵涉呼吸的器官的癌症干细胞进行标记和随后通过检测所述经缀合的凝集素来检测癌症干细胞的用途。
在一个实施方案中,所述凝集素可以以共价方式与荧光团相缀合。
因此,根据一个实施方案,本发明涉及至少一种识别岩藻糖α1-2半乳糖基元,更特别地岩藻糖α1-2半乳糖β1-4N-乙酰葡糖胺基元的凝集素用于对牵涉呼吸的器官的癌症干细胞进行标记的体外用途,其中所述对牵涉呼吸的器官的癌症干细胞进行标记用与荧光团相缀合的凝集素来施行,并且随后为通过荧光显微术或通过荧光阅读器来检测所述牵涉呼吸的器官的癌症干细胞。
在一个实施方案中,所述凝集素可以与放射性同位素相缀合。
因此,根据一个实施方案,本发明涉及至少一种识别岩藻糖α1-2半乳糖基元,更特别地岩藻糖α1-2半乳糖β1-4N-乙酰葡糖胺基元的凝集素用于对牵涉呼吸的器官的癌症干细胞进行标记的体外用途,其中所述对牵涉呼吸的器官的癌症干细胞进行标记用与放射性同位素相缀合的凝集素来施行,并且随后为通过γ照相机来检测所述经标记的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞。
在一个实施方案中,所述凝集素可以与使用生色底物或化学发光底物的酶相缀合。
因此,根据一个实施方案,本发明涉及至少一种识别岩藻糖α1-2半乳糖基元,更特别地岩藻糖α1-2半乳糖β1-4N-乙酰葡糖胺基元的凝集素用于对牵涉呼吸的器官的癌症干细胞进行标记的体外用途,其中所述对牵涉呼吸的器官的癌症干细胞进行标记用与辣根过氧化物酶相缀合的凝集素来施行,并且随后为经由添加化学发光底物(例如,鲁米诺)通过发光显微术或通过发光阅读器来检测所述经标记的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞。
在另一个实施方案中,本发明涉及至少一种识别岩藻糖α1-2半乳糖基元,更特别地岩藻糖α1-2半乳糖β1-4N-乙酰葡糖胺基元的凝集素用于对牵涉呼吸的器官的癌症干细胞进行标记的体外用途,其中所述对牵涉呼吸的器官的癌症干细胞进行标记用与辣根过氧化物酶相缀合的凝集素来施行,并且随后为经由添加选自3,3’-二氨基联苯胺(DAB)、3,3’,5,5’-四甲基联苯胺(TMB)或2,2’-连氮基-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)(ABTS)的生色底物通过UV/可见光显微术或通过吸光阅读器来检测所述经标记的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞。
在一个实施方案中,所述凝集素可以与金珠粒相缀合。
因此,根据一个实施方案,本发明涉及至少一种识别岩藻糖α1-2半乳糖基元,更特别地岩藻糖α1-2半乳糖β1-4N-乙酰葡糖胺基元的凝集素用于对牵涉呼吸的器官的癌症干细胞进行标记的体外用途,其中所述对牵涉呼吸的器官的癌症干细胞进行标记用与金珠粒相缀合的凝集素来施行,并且随后为通过电子显微术来检测所述经标记的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞。
在一个实施方案中,所述凝集素可以与生物素相缀合,以提供经生物素化的凝集素。
因此,根据一个实施方案,本发明涉及至少一种识别岩藻糖α1-2半乳糖基元,更特别地岩藻糖α1-2半乳糖β1-4N-乙酰葡糖胺基元的凝集素用于对牵涉呼吸的器官的癌症干细胞进行标记的体外用途,其中所述对牵涉呼吸的器官的癌症干细胞进行标记用与生物素相缀合的凝集素来施行,并且随后为通过前面所描述的方式之一来检测所述被与生物素相缀合的凝集素标记的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞,其中所述标记物,荧光团、放射性同位素、酶、金珠粒,本身与链霉抗生物素蛋白或抗生物素蛋白进行缀合。
当对牵涉呼吸的器官的癌症干细胞进行标记用与生物素相缀合的凝集素来施行并且随后为检测所述被与生物素相缀合的凝集素标记的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞时,所述检测通过下列方式来进行:
о通过荧光显微术,当采用与链霉抗生物素蛋白或与抗生物素蛋白相缀合的荧光团时,
о通过发光阅读器,当采用与链霉抗生物素蛋白或与抗生物素蛋白相缀合的使用化学发光底物的酶时,
о通过γ照相机,当采用与链霉抗生物素蛋白或与抗生物素蛋白相缀合的放射性同位素时,
о通过电子显微术,当采用与链霉抗生物素蛋白或与抗生物素蛋白相缀合的金珠粒时,
о通过UV/可见光显微术,当采用与链霉抗生物素蛋白或与抗生物素蛋白相缀合的使用生色底物的酶时。
还已由发明人阐明了,牵涉呼吸的器官的癌症干细胞可以通过使用识别岩藻糖α1-2半乳糖基元的凝集素以对所述牵涉呼吸的器官的癌症干细胞进行标记来进行分离。
在一个特别的实施方案中,所述岩藻糖α1-2半乳糖基元为岩藻糖α1-2半乳糖β1-4N-乙酰葡糖胺基元。因此,牵涉呼吸的器官的癌症干细胞可以通过使用识别岩藻糖α1-2半乳糖β1-4N-乙酰葡糖胺基元的凝集素以对所述牵涉呼吸的器官的癌症干细胞进行标记来进行分离。
“分离牵涉呼吸的器官的癌症干细胞”是指从生物学样品中提取牵涉呼吸的器官的癌症干细胞,其不含任何其他细胞类型。
因此,本发明还涉及至少一种识别岩藻糖α1-2半乳糖基元,更特别地岩藻糖α1-2半乳糖β1-4N-乙酰葡糖胺基元的凝集素用于在生物学样品中对牵涉呼吸的器官的癌症干细胞进行标记和随后分离癌症干细胞的用途,所述凝集素是经缀合的。
该分离允许使样品富集牵涉呼吸的器官的癌症干细胞。
术语“富集”是指相对于在样品中所包含的总细胞而言牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的比例由于样品耗损了癌症非干细胞而增加。
那么,用富含牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的样品这个词。
因此,在本发明的情景下,表述“分离牵涉呼吸的器官的癌症干细胞”是指“使样品富集牵涉呼吸的器官的癌症干细胞”。
因此,在本发明的范围内,“分离”也指从生物学样品开始获得富含牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的细胞群体这一事件。在本发明的范围内,术语“经富集的(富含...的)”意指这样的细胞群体,其中癌症干细胞数目/总细胞数目这一比例为至少8,如通过流式细胞术经由Epcam high+细胞/Epcam high-细胞这一比例所测定的。
使样品富集癌症干细胞允许癌症干细胞的更可靠且更容易的检测和定量,这是由于所研究的细胞群体那么会以更大的比例存在于样品中。
因此,已由发明人阐明了,可以通过使用识别岩藻糖α1-2半乳糖基元的凝集素以特别有效的方式来使生物学样品富集癌症干细胞。
在一个特别的实施方案中,所述岩藻糖α1-2半乳糖基元为岩藻糖α1-2半乳糖β1-4N-乙酰葡糖胺基元。因此,已由发明人阐明了,可以通过使用识别岩藻糖α1-2半乳糖β1-4N-乙酰葡糖胺基元的凝集素以特别有效的方式来使生物学样品富集癌症干细胞。
在一个特别的实施方案中,在分离被至少一种识别岩藻糖α1-2半乳糖基元,更特别地岩藻糖α1-2半乳糖β1-4N-乙酰葡糖胺基元的凝集素标记的癌症干细胞随后可以为细胞扩增的步骤。因此,在分离细胞后,可以将它们在培养基中进行培养,从而使得能够增加牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的数量。
在一个实施方案中,本发明涉及至少一种识别岩藻糖α1-2半乳糖基元,更特别地岩藻糖α1-2半乳糖β1-4N-乙酰葡糖胺基元的凝集素用于对牵涉呼吸的器官的癌症干细胞进行标记的体外用途,其中所述对牵涉呼吸的器官的癌症干细胞进行标记用经缀合的凝集素来施行,并且随后为分离所述经标记的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞。
在一个特别的实施方案中,所述凝集素与生物素相缀合,并且经标记的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的分离通过用链霉抗生物素蛋白或抗生物素蛋白进行官能化的支持物来施行。
在该实施方案中,将用与生物素相缀合的凝集素进行标记的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞通过生物素-链霉抗生物素蛋白或生物素-抗生物素蛋白亲和力固定在用链霉抗生物素蛋白或抗生物素蛋白进行官能化的支持物上。
所述支持物也可以是由下列制成的:玻璃,聚二甲基硅氧烷(PDMS),有机硅,或者塑料例如聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)、聚苯乙烯(PS)或环烯烃共聚物(COC)。
合适的支持物的例子提供在Kim等人的综述(Protein immobilizationtechniques for microfluidics assays,Kim等人,Biomicrofluidics,7,041501,2013)中。
术语“官能化”是指以化学方法对支持物进行修饰以使其被经固定化的链霉抗生物素蛋白或抗生物素蛋白覆盖。
前面所引用的Kim等人的综述提供了支持物官能化的实例。
在一个更特别的实施方案中,所述支持物由磁性珠粒构成。
因此,根据本发明的一个特别的实施方案,所述支持物由磁性珠粒构成,并且所述经标记的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的分离通过在磁铁存在下的磁力分选来施行。
在该实施方案中,将具有与生物素相缀合的凝集素的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞通过生物素-链霉抗生物素蛋白或生物素-抗生物素蛋白亲和力固定在用链霉抗生物素蛋白或抗生物素蛋白进行官能化的磁性珠粒上。
在磁铁的作用下,在样品内固定在磁性珠粒上的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞被分离。
在该分离随后可以为通过去除上清液,然后通过洗脱与所述支持物相连接的癌症干细胞来回收富含癌症干细胞的样品。
所述洗脱可以在酸性条件下进行以打断链霉抗生物素蛋白-生物素或抗生物素蛋白-生物素键。
在所述支持物由磁性珠粒构成并且链霉抗生物素蛋白或抗生物素蛋白通过DNA键连接至磁性珠粒的特殊情况下,所述洗脱通过用DNA酶进行处理来施行。
根据另一个实施方案,用于进行标记的凝集素为与荧光团相缀合的凝集素,并且所述分离通过以流式细胞术的细胞分选来施行。
因此,通过流式细胞术的细胞分选使得能够获得富含牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的样品的级分。
流式细胞术是一种专业人员熟知的技术,其尤其使得能够根据其荧光标记将细胞分选为不同的级分。
因此,在本发明的情景下,通过流式细胞术的细胞分选使得能够获得:
-一方面,包含被与荧光团相缀合的凝集素标记的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的样品的级分,和
-另一方面,包含在起始样品中所包含的其他细胞类型的样品的级分。
本发明还使得能够通过使用至少一种经缀合的凝集素来对牵涉呼吸的器官的癌症干细胞进行标记、分离和然后检测。
在另一个实施方案中,本发明涉及至少一种识别岩藻糖α1-2半乳糖基元的凝集素用于对牵涉呼吸的器官的癌症干细胞进行标记的体外用途,其中在所述用经缀合的凝集素对牵涉呼吸的器官的癌症干细胞进行标记随后为分离所述经标记的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞,然后通过用与选自荧光团、放射性同位素、酶、金珠粒或生物素的标记物相缀合的凝集素对所述经分离的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞进行再次标记来检测所述经分离的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞。
在一个特别的实施方案中,本发明涉及至少一种识别岩藻糖α1-2半乳糖β1-4N-乙酰葡糖胺基元的凝集素用于对牵涉呼吸的器官的癌症干细胞进行标记的体外用途,其中在所述用经缀合的凝集素对牵涉呼吸的器官的癌症干细胞进行标记随后为分离所述经标记的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞,然后通过用与选自荧光团、放射性同位素、酶、金珠粒或生物素的标记物相缀合的凝集素对所述经分离的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞进行再次标记来检测所述经分离的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞。
因此,在另一个实施方案中,本发明涉及至少一种识别岩藻糖α1-2半乳糖基元,更特别地岩藻糖α1-2半乳糖β1-4N-乙酰葡糖胺基元的凝集素用于对牵涉呼吸的器官的癌症干细胞进行标记的体外用途,其中所述对牵涉呼吸的器官的癌症干细胞进行标记用与生物素或与荧光团相缀合的凝集素来施行,并且随后为
-分离所述经标记的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞,
通过用链霉抗生物素蛋白或抗生物素蛋白进行官能化的支持物,在与生物素相缀合的凝集素的情况下,如在本发明中所描述的那样,或者
通过流式细胞术,在与荧光团进行缀合的凝集素的情况下,如在本发明中所描述的那样,
以获得经标记和经分离的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞,
-然后用根据本发明的经缀合的凝集素对所述经标记和经分离的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞进行再次标记,随后为根据在本申请中所描述的检测方式来检测所述细胞。
根据本发明的一个实施方案,从其开始分离或检测癌症干细胞的所述生物学样品为牵涉呼吸的器官的生物学样品。
所述牵涉呼吸的器官的生物学样品可以尤其为在罹患牵涉呼吸的器官的癌症的患者中取得的肿瘤活组织检查物或者在被怀疑具有此类癌症的患者中取得的活组织检查物。
所述牵涉呼吸的器官的生物学样品还可以为牵涉呼吸的器官的癌细胞系,或者通过注射癌细胞系在动物中(例如在小鼠或大鼠中)诱导出的肿瘤。所述细胞系优选地为牵涉呼吸的器官的癌细胞系。根据该实施方案,所诱导出的肿瘤包含牵涉呼吸的器官的癌症干细胞,其有利地与肿瘤的其他细胞相分离以便进行研究。
根据一个实施方案,本发明涉及至少一种识别岩藻糖α1-2半乳糖基元的凝集素用于在生物学样品中对牵涉呼吸的器官的癌症干细胞进行标记以获得经标记的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的体外用途,其中所述生物学样品由悬浮细胞构成。
在一个特别的实施方案中,本发明还涉及至少一种识别岩藻糖α1-2半乳糖β1-4N-乙酰葡糖胺基元的凝集素用于在生物学样品中对牵涉呼吸的器官的癌症干细胞进行标记以获得经标记的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的体外用途,其中所述生物学样品由悬浮细胞构成。
在一个特别的实施方案中,所述至少一种凝集素选自下列凝集素:UEA-1或其同源物TJA-II、ABA、ACA、榴莲凝素、GSL-I和GSL-II。
因此,本发明涉及至少一种从UEA-1或其同源物TJA-II、ABA、ACA、榴莲凝素、GSL-I和GSL-II这些凝集素中选择的凝集素用于在生物学样品中对牵涉呼吸的器官的癌症干细胞进行标记以获得经标记的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的体外用途,其中所述生物学样品由悬浮细胞构成。
根据另一个实施方案,本发明涉及至少一种识别岩藻糖α1-2半乳糖基元的凝集素用于在生物学样品中对牵涉呼吸的器官的癌症干细胞进行标记以获得经标记的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的体外用途,其中所述生物学样品由细胞组织构成。
在一个特别的实施方案中,本发明还涉及至少一种识别岩藻糖α1-2半乳糖β1-4N-乙酰葡糖胺基元的凝集素用于在生物学样品中对牵涉呼吸的器官的癌症干细胞进行标记以获得经标记的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的体外用途,其中所述生物学样品由细胞组织构成。
在一个特别的实施方案中,所述至少一种凝集素选自下列凝集素:UEA-1或其同源物TJA-II、ABA、ACA、榴莲凝素、GSL-I和GSL-II。
因此,本发明涉及至少一种从UEA-1或其同源物TJA-II、ABA、ACA、榴莲凝素、GSL-I和GSL-II这些凝集素中选择的凝集素用于在生物学样品中对牵涉呼吸的器官的癌症干细胞进行标记以获得经标记的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的体外用途,其中所述生物学样品由细胞组织构成。
根据一个实施方案,本发明涉及至少两种凝集素的上面所描述的体外用途,所述至少两种凝集素处于等摩尔量。
根据一个实施方案,本发明涉及至少两种从UEA-1或其同源物TJA-II、ABA、ACA、榴莲凝素、GSL-I和GSL-II这些凝集素中选择的凝集素的体外用途,所述至少两种凝集素处于等摩尔量。
根据一个实施方案,本发明涉及两种从UEA-1或其同源物TJA-II、ABA、ACA、榴莲凝素、GSL-I和GSL-II这些凝集素中选择的凝集素的混合物的体外用途,所述两种凝集素在所述混合物中处于等摩尔量。
“等摩尔量”是指所述两种凝集素中的每一种以相对于另一种而言相同的量进行使用。其为在所述两种凝集素之间1:1的重量比。
因此,在一个实施方案中,本发明涉及从下列混合物中选择的两种凝集素的混合物的体外用途:(UEA-1、ABA)、(UEA-1、ACA)、(UEA-1、榴莲凝素)、(UEA-1、GSL-I)、(UEA-1、GSL-II)、(ABA、ACA)、(ABA、榴莲凝素)、(ABA、GSL-I)、(ABA、GSL-II)、(ACA、榴莲凝素)、(ACA、GSL-I)、(ACA、GSL-II)、(榴莲凝素、GSL-I)、(榴莲凝素、GSL-II)、(GSL-I、GSL-II)、(TJA-II、ABA)、(TJA-II、ACA)、(TJA-II、榴莲凝素)、(TJA-II、GSL-I)、(TJA-II、GSL-II),所述两种凝集素在所述混合物中处于等摩尔量。
根据一个实施方案,本发明涉及两种凝集素的体外用途,所述两种凝集素为混合物(GSL-I、GSL-II),其中所述凝集素中的每一种处于等摩尔量。
根据一个实施方案,本发明涉及两种凝集素的体外用途,所述两种凝集素为混合物(UEA-1、GSL-I),其中所述凝集素中的每一种处于等摩尔量。
根据一个实施方案,本发明涉及至少两种凝集素的上面所描述的体外用途,所述至少两种凝集素处于非等摩尔量。
根据一个实施方案,本发明涉及至少两种从UEA-1或其同源物TJA-II、ABA、ACA、榴莲凝素、GSL-I和GSL-II这些凝集素中选择的凝集素的体外用途,所述至少两种凝集素处于非等摩尔量。
根据一个实施方案,本发明涉及两种从UEA-1或其同源物TJA-II、ABA、ACA、榴莲凝素、GSL-I和GSL-II这些凝集素中选择的凝集素的混合物的体外用途,所述两种凝集素在所述混合物中处于非等摩尔量。
“非等摩尔量”是指所述凝集素中的每一种以相对于另一种而言不同的量存在。特别地,其为在所述两种凝集素之间2:1、3:1或4:1的重量比。
因此,在一个实施方案中,本发明涉及从下列混合物中选择的两种凝集素的混合物的体外用途:(UEA-1、ABA)、(ABA、UEA-1)、(UEA-1、ACA)、(ACA、UEA-1)、(UEA-1、榴莲凝素)、(榴莲凝素、UEA-1)、(UEA-1、GSL-I)、(GSL-I、UEA-1)、(UEA-1、GSL-II)、(GSL-II、UEA-1)、(ABA、ACA)、(ACA、ABA)、(ABA、榴莲凝素)、(榴莲凝素、ABA)、(ABA、GSL-I)、(GSL-I、ABA)、(ABA、GSL-II)、(GSL-II、ABA)、(ACA、榴莲凝素)、(榴莲凝素、ABA)、(ACA、GSL-I)、(GSL-I、ACA)、(ACA、GSL-II)、(GSL-II、ACA)、(榴莲凝素、GSL-I)、(GSL-I、榴莲凝素)、(榴莲凝素、GSL-II)、(GSL-II、榴莲凝素)、(GSL-I、GSL-II)、(GSL-II、GSL-I)、(TJA-II、ABA)、(ABA、TJA-II)、(TJA-II、ACA)、(ACA、TJA-II)、(TJA-II、榴莲凝素)、(榴莲凝素、TJA-II)、(TJA-II、GSL-I)、(GSL-I、TJA-II)、(TJA-II、GSL-II)、(GSL-II、TJA-II),所述两种凝集素在所述混合物中处于非等摩尔量,特别地以2:1、3:1或4:1,更特别地2:1的重量比。
根据一个特别的实施方案,本发明涉及两种凝集素的体外用途,所述两种凝集素为混合物(UEA-1、GSL-I),其中所述凝集素以2:1的重量比处于非等摩尔量,即2UEA-1:1GSL-I。
根据一个特别的实施方案,本发明涉及两种凝集素的体外用途,所述两种凝集素为混合物(UEA-1、GSL-I),其中所述凝集素以3:1的重量比处于非等摩尔量,即3UEA-1:1GSL-I。
根据一个特别的实施方案,本发明涉及两种凝集素的体外用途,所述两种凝集素为混合物(UEA-1、GSL-I),其中所述凝集素以4:1的重量比处于非等摩尔量,即4UEA-1:1GSL-I。
根据一个实施方案,本发明涉及至少三种从UEA-1或其同源物TJA-II、ABA、ACA、榴莲凝素、GSL-I和GSL-II这些凝集素中选择的凝集素的体外用途,所述至少三种凝集素处于等摩尔量。
根据一个实施方案,本发明涉及三种从UEA-1或其同源物TJA-II、ABA、ACA、榴莲凝素、GSL-I和GSL-II这些凝集素中选择的凝集素的混合物的体外用途,所述三种凝集素每一种在所述混合物中处于等摩尔量。
“等摩尔量”是指所述三种凝集素中的每一种以相对于其他而言相同的量进行使用。其为在所述三种凝集素之间1:1:1的重量比。
因此,根据一个实施方案,本发明涉及从下列混合物中选择的三种凝集素的混合物的体外用途:(UEA-1、ABA、ACA)、(UEA-1、ABA、榴莲凝素)、(UEA-1、ABA、GSL-I)、(UEA-1、ABA、GSL-II)、(UEA-1、ACA、榴莲凝素)、(UEA-1、ACA、GSL-I)、(UEA-1、ACA、GSL-II)、(UEA-1、榴莲凝素、GSL-I)、(UEA-1、榴莲凝素、GSL-II)、(UEA-1、GSL-I、GSL-II)、(ABA、ACA、榴莲凝素)、(ABA、ACA、GSL-I)、(ABA、ACA、GSL-II)、(ABA、榴莲凝素、GSL-I)、(ABA、榴莲凝素、GSL-II)、(ABA、GSL-I、GSL-II)、(ACA、榴莲凝素、GSL-I)、(ACA、榴莲凝素、GSL-II)、(ACA、GSL-I、GSL-II)、(榴莲凝素、GSL-I、GSL-II)、(TJA-II、ABA、ACA)、(TJA-II、ABA、榴莲凝素)、(TJA-II、ABA、GSL-I)、(TJA-II、ABA、GSL-II)、(TJA-II、ACA、榴莲凝素)、(TJA-II、ACA、GSL-I)、(TJA-II、ACA、GSL-II)、(TJA-II、榴莲凝素、GSL-I)、(TJA-II、榴莲凝素、GSL-II)、(TJA-II、GSL-I、GSL-II),所述三种凝集素在所述混合物中处于等摩尔量。
根据一个实施方案,本发明涉及三种凝集素的前面所描述的体外用途,所述三种凝集素选自UEA-1或其同源物TJA-II、榴莲凝素和ABA的混合物,或者UEA-1或其同源物TJA-II、榴莲凝素和ACA的混合物,并且所述三种凝集素每一种在所述混合物中以等摩尔量存在。
根据一个实施方案,本发明涉及至少三种从UEA-1或其同源物TJA-II、ABA、ACA、榴莲凝素、GSL-I和GSL-II这些凝集素中选择的凝集素的体外用途,所述至少三种凝集素处于非等摩尔量。
根据一个实施方案,本发明涉及三种从UEA-1或其同源物TJA-II、ABA、ACA、榴莲凝素、GSL-I和GSL-II这些凝集素中选择的凝集素的混合物的体外用途,所述三种凝集素在所述混合物中处于非等摩尔量。
在使用三种凝集素的情况下,“非等摩尔量”是指所述三种凝集素不以相对于彼此而言等摩尔的量进行使用,并且所述三种凝集素中的至少两种凝集素以不同的量进行使用。特别地,其为在所述三种凝集素之间2:1:1的重量比。
因此,根据一个特别的实施方案,本发明涉及从下列混合物中选择的三种凝集素的混合物的体外用途:(UEA-1、ABA、ACA)、(UEA-1、ABA、榴莲凝素)、(UEA-1、ABA、GSL-I)、(UEA-1、ABA、GSL-II)、(UEA-1、ACA、榴莲凝素)、(UEA-1、ACA、GSL-I)、(UEA-1、ACA、GSL-II)、(UEA-1、榴莲凝素、GSL-I)、(UEA-1、榴莲凝素、GSL-II)、(UEA-1、GSL-I、GSL-II)、(ABA、ACA、榴莲凝素)、(ABA、ACA、GSL-I)、(ABA、ACA、GSL-II)、(ABA、榴莲凝素、GSL-I)、(ABA、榴莲凝素、GSL-II)、(ABA、GSL-I、GSL-II)、(ACA、榴莲凝素、GSL-I)、(ACA、榴莲凝素、GSL-II)、(ACA、GSL-I、GSL-II)、(榴莲凝素、GSL-I、GSL-II)、(TJA-II、ABA、ACA)、(TJA-II、ABA、榴莲凝素)、(TJA-II、ABA、GSL-I)、(TJA-II、ABA、GSL-II)、(TJA-II、ACA、榴莲凝素)、(TJA-II、ACA、GSL-I)、(TJA-II、ACA、GSL-II)、(TJA-II、榴莲凝素、GSL-I)、(TJA-II、榴莲凝素、GSL-II)、(TJA-II、GSL-I、GSL-II),所述三种凝集素在所述混合物中处于非等摩尔量,特别地以2:1:1、1:2:1或1:1:2的重量比。
本发明还涉及在体外对牵涉呼吸的器官的癌症干细胞进行标记的方法,所述方法包括用至少一种识别岩藻糖α1-2半乳糖基元的凝集素在生物学样品中对牵涉呼吸的器官的癌症干细胞进行标记以获得经标记的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的步骤。
在一个特别的实施方案中,本发明还涉及在体外对牵涉呼吸的器官的癌症干细胞进行标记的方法,所述方法包括用至少一种识别岩藻糖α1-2半乳糖β1-4N-乙酰葡糖胺基元的凝集素在生物学样品中对牵涉呼吸的器官的癌症干细胞进行标记以获得经标记的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的步骤。
在一个特别的实施方案中,所述至少一种凝集素选自下列凝集素:UEA-1或其同源物TJA-II、ABA、ACA、榴莲凝素、GSL-I和GSL-II。
因此,本发明还涉及在体外对牵涉呼吸的器官的癌症干细胞进行标记的方法,所述方法包括用至少一种从UEA-1或其同源物TJA-II、ABA、ACA、榴莲凝素、GSL-I和GSL-II这些凝集素中选择的凝集素在生物学样品中对牵涉呼吸的器官的癌症干细胞进行标记以获得经标记的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的步骤。
可以将该标记方法整合到通过使用与选自荧光团、放射性同位素、酶、生物素或金珠粒的标记物相缀合的凝集素来检测牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的方法之内。
本发明还涉及在生物学样品中检测牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的体外方法,所述方法包括下列步骤:
(a)用至少一种识别岩藻糖α1-2半乳糖基元的凝集素对牵涉呼吸的器官的癌症干细胞进行标记以获得其中牵涉呼吸的器官的癌症干细胞被至少一种凝集素标记的生物学样品的步骤,所述凝集素与选自荧光团、放射性同位素、酶、金珠粒或生物素的标记物相缀合,
随后为(b)检测所述被至少一种凝集素标记的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的步骤。
在一个特别的实施方案中,所述被本发明的凝集素所识别的岩藻糖α1-2半乳糖基元更特别地为岩藻糖α1-2半乳糖β1-4N-乙酰葡糖胺基元。
在一个特别的实施方案中,所述至少一种凝集素选自下列凝集素:UEA-1或其同源物TJA-II、ABA、ACA、榴莲凝素、GSL-I和GSL-II。
因此,在一个特别的实施方案中,本发明涉及上面所描述的体外检测方法,其中所述至少一种凝集素选自下列凝集素:UEA-1或其同源物TJA-II、ABA、ACA、榴莲凝素、GSL-I和GSL-II,
尤其是至少两种选自UEA-1或其同源物TJA-II、ABA、ACA、榴莲凝素、GSL-I和GSL-II的凝集素,特别是GSL-I和GSL-II的混合物,或者UEA-1和GSL-I的混合物,
尤其是至少三种选自UEA-1或其同源物TJA-II、ABA、ACA、榴莲凝素、GSL-I和GSL-II的凝集素,特别是UEA-1、榴莲凝素和ABA的混合物,或者UEA-1、榴莲凝素和ACA的混合物。
在一个特别的实施方案中,本发明涉及上面所描述的体外检测方法,其中使用至少两种凝集素,所述至少两种凝集素处于等摩尔量。
在一个特别的实施方案中,本发明涉及上面所描述的体外检测方法,其中使用至少两种凝集素,所述至少两种凝集素处于非等摩尔量。
在一个特别的实施方案中,本发明涉及上面所描述的体外检测方法,其中使用两种凝集素,所述2种凝集素是以2:1、3:1或4:1的重量比的处于非等摩尔量的UEA-1和GSL-I。
在一个特别的实施方案中,本发明涉及上面所描述的体外检测方法,其中所述生物学样品为牵涉呼吸的器官的生物学样品。
在一个特别的实施方案中,本发明涉及上面所描述的体外检测方法,其中所述牵涉呼吸的器官选自肺、喉、咽、口、鼻、喉咙、舌、窦、气管和唾液腺(扁桃体和腮腺)。
在一个特别的实施方案中,在生物学样品中检测肺癌症干细胞的体外方法,所述方法包括下列步骤:
(a)用至少一种从UEA-1、ABA、ACA、榴莲凝素、GSL-I和GSL-II这些凝集素中选择的识别岩藻糖α1-2半乳糖基元的凝集素对肺癌症干细胞进行标记以获得其中肺癌症干细胞被至少一种凝集素标记的生物学样品的步骤,所述凝集素与选自荧光团、放射性同位素、酶、金珠粒或生物素的标记物相缀合,
随后为(b)检测所述被至少一种凝集素标记的肺癌症干细胞的步骤。
在所述方法的一个其中所述凝集素与荧光团相缀合的实施方案中,所述经标记的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞通过荧光显微术或荧光阅读器来进行检测。
在所述方法的一个其中所述凝集素与放射性同位素相缀合的实施方案中,所述经标记的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞通过γ照相机来进行检测。
在所述方法的一个其中所述凝集素与催化有色产物形成的酶(例如,辣根过氧化物酶(HRP)、碱性磷酸酶、葡萄糖氧化酶或β-半乳糖苷酶)相缀合的实施方案中,所述经标记的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞在添加生色底物后通过UV/可见光显微术或吸光阅读器来进行检测。
在所述方法的一个其中所述凝集素与催化发光产物形成的酶(例如,HRP)相缀合的实施方案中,所述经标记的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞在添加化学发光底物(例如,鲁米诺)后以发光显微术或通过发光阅读器来进行检测。
在所述方法的一个其中所述凝集素与金珠粒相缀合的实施方案中,所述经标记的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞通过电子显微术来进行检测。
在所述方法的一个其中所述凝集素与生物素进行缀合的实施方案中,所述牵涉呼吸的器官的癌症干细胞通过上面所描述的检测方式之一来进行检测,其中所述标记物与链霉抗生物素蛋白或与抗生物素蛋白相缀合。
也可以将所述标记方法整合到通过使用与选自荧光团、放射性同位素、酶、生物素或金珠粒的标记物相缀合的凝集素来分离牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的方法之内。
在一个实施方案中,根据本发明的方法使得能够分离牵涉呼吸的器官的癌症干细胞。该分离步骤特别地使得能够研究在牵涉呼吸的器官的肿瘤样品中检测出的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞,以便例如发现能够去除经常是复发和转移的起因的这些癌症干细胞的新治疗法。
“体外分离方法”是指,通过耗损牵涉呼吸的器官的癌症非干细胞(CNSC)来使生物学样品富集牵涉呼吸的器官的癌症干细胞(CSC)。
通过使用至少一种识别岩藻糖α1-2半乳糖基元的凝集素,将牵涉呼吸的器官的癌症干细胞特异性地与在样品中存在的其他细胞类型(例如任选地,牵涉呼吸的器官的癌症非干细胞(CNSC))分开。
在一个特别的实施方案中,通过使用至少一种识别岩藻糖α1-2半乳糖β1-4N-乙酰葡糖胺基元的凝集素,将牵涉呼吸的器官的癌症干细胞特异性地与在样品中存在的其他细胞类型(例如任选地,牵涉呼吸的器官的癌症非干细胞(CNSC))分开。
在一个特别的实施方案中,通过使用至少一种从UEA-1或其同源物TJA-II、ABA、ACA、榴莲凝素、GSL-I和GSL-II这些凝集素中选择的凝集素,将牵涉呼吸的器官的癌症干细胞特异性地与在样品中存在的其他细胞类型(例如任选地,牵涉呼吸的器官的癌症非干细胞(CNSC))分开。
该所述的样品富集CSC使得能够获得这样的生物学样品,其中牵涉呼吸的器官的癌症干细胞占多数,即它们以相对于其他细胞类型而言,尤其是相对于CNSC而言更高的数量存在。
因此,本发明还涉及在生物学样品中分离牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的体外方法,所述方法包括下列步骤:
(a)用至少一种识别岩藻糖α1-2半乳糖基元的凝集素对牵涉呼吸的器官的癌症干细胞进行标记以获得其中牵涉呼吸的器官的癌症干细胞被至少一种凝集素标记的生物学样品的步骤,所述凝集素与生物素或与荧光团相缀合,
随后为(b)分离所述被至少一种凝集素标记的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的步骤。
在一个特别的实施方案中,所述被本发明的凝集素所识别的岩藻糖α1-2半乳糖基元更特别地为岩藻糖α1-2半乳糖β1-4N-乙酰葡糖胺基元。
在一个特别的实施方案中,所述至少一种凝集素选自下列凝集素:UEA-1或其同源物TJA-II、ABA、ACA、榴莲凝素、GSL-I和GSL-II。
在一个特别的实施方案中,本发明涉及在样品中分离牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的体外方法,所述方法包括下列步骤:
(a)用至少一种识别岩藻糖α1-2半乳糖基元的凝集素对牵涉呼吸的器官的癌症干细胞进行标记以获得其中牵涉呼吸的器官的癌症干细胞被至少一种凝集素标记的生物学样品的步骤,所述凝集素与生物素相缀合,
随后为(b)通过用链霉抗生物素蛋白或抗生物素蛋白进行官能化的支持物来分离所述被至少一种凝集素标记的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的步骤。
在一个特别的实施方案中,所述被本发明的凝集素所识别的岩藻糖α1-2半乳糖基元更特别地为岩藻糖α1-2半乳糖β1-4N-乙酰葡糖胺基元。
在一个特别的实施方案中,所述至少一种凝集素选自下列凝集素:UEA-1或其同源物TJA-II、ABA、ACA、榴莲凝素、GSL-I和GSL-II。
在该分离随后可以为通过去除上清液,然后通过洗脱与所述支持物相连接的癌症干细胞来回收富含癌症干细胞的样品。
所述洗脱可以在酸性条件下进行以打断链霉抗生物素蛋白/抗生物素蛋白-生物素键。
根据一个实施方案,所述支持物由用链霉抗生物素蛋白或抗生物素蛋白进行官能化的磁性珠粒构成,并且所述分离步骤通过在磁铁存在下的磁力分选来施行。
在所述支持物由磁性珠粒构成并且链霉抗生物素蛋白或抗生物素蛋白通过DNA键连接至磁性珠粒的特殊情况下,所述洗脱通过用DNA酶进行处理来施行。
在一个特别的实施方案中,本发明涉及在生物学样品中分离牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的体外方法,所述方法包括下列步骤:
(a)用至少一种识别岩藻糖α1-2半乳糖基元的凝集素对牵涉呼吸的器官的癌症干细胞进行标记以获得其中牵涉呼吸的器官的癌症干细胞被至少一种凝集素标记的生物学样品的步骤,所述凝集素与荧光团相缀合,
随后为
(b)通过以流式细胞术的细胞分选来分离所述被至少一种凝集素标记的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的步骤。
在一个特别的实施方案中,所述被本发明的凝集素所识别的岩藻糖α1-2半乳糖基元更特别地为岩藻糖α1-2半乳糖β1-4N-乙酰葡糖胺基元。
在一个特别的实施方案中,所述至少一种凝集素选自下列凝集素:UEA-1或其同源物TJA-II、ABA、ACA、榴莲凝素、GSL-I和GSL-II。
在一个特别的实施方案中,本发明还涉及上面所描述的体外分离方法,其中所述至少一种凝集素选自下列凝集素:UEA-1或其同源物TJA-II、ABA、ACA、榴莲凝素、GSL-I和GSL-II,尤其是至少两种选自UEA-1或其同源物TJA-II、ABA、ACA、榴莲凝素、GSL-I和GSL-II的凝集素,特别是GSL-I和GSL-II的混合物,或者UEA-1和GSL-I的混合物,尤其是至少三种选自UEA-1或其同源物TJA-II、ABA、ACA、榴莲凝素、GSL-I和GSL-II的凝集素,特别是UEA-1、榴莲凝素和ABA的混合物,或者UEA-1、榴莲凝素和ACA的混合物。
在一个特别的实施方案中,本发明还涉及上面所描述的体外分离方法,其中使用至少两种凝集素,所述至少两种凝集素处于相等的量或不等的量。
在一个特别的实施方案中,本发明还涉及上面所描述的体外分离方法,其中使用至少两种凝集素,所述至少两种凝集素处于非等摩尔量。
在一个特别的实施方案中,本发明还涉及上面所描述的体外分离方法,其中使用两种凝集素,所述2种凝集素是以2:1、3:1或4:1的重量比的处于非等摩尔量的UEA-1和GSL-I。
在一个特别的实施方案中,本发明还涉及上面所描述的体外分离方法,其中所述生物学样品为牵涉呼吸的器官的生物学样品。
在一个特别的实施方案中,本发明还涉及上面所描述的体外分离方法,其中所述牵涉呼吸的器官选自肺、喉、咽、口、鼻、喉咙、舌、窦、气管和唾液腺(扁桃体和腮腺)。
在一个特别的实施方案中,在生物学样品中分离肺癌症干细胞的体外方法,所述方法包括下列步骤:
(a)用至少一种识别岩藻糖α1-2半乳糖基元的凝集素(UEA-1、ABA、ACA、榴莲凝素、GSL-I和GSL-II这些凝集素)对肺癌症干细胞进行标记以获得其中肺癌症干细胞被至少一种凝集素标记的生物学样品的步骤,所述凝集素与生物素或与荧光团相缀合,
随后为
(b)分离所述被至少一种凝集素标记的肺癌症干细胞的步骤,
当将所述凝集素与生物素相缀合时,所述分离步骤通过由磁性珠粒构成的用链霉抗生物素蛋白或抗生物素蛋白进行官能化的支持物并且在磁铁存在下来施行,
和当将所述凝集素与荧光团相缀合时,所述分离步骤通过以流式细胞术的细胞分选来施行。
因此,所述以流式细胞术的细胞分选使得能够获得富含癌症干细胞的样品的级分。
在步骤(a)中对牵涉呼吸的器官的癌症干细胞进行标记之前,有利地,使样品的细胞相互解离。该细胞解离可以按照常规程序来施行,例如通过使用一种或几种能够使细胞相互分开而不改变在细胞表面上所表达的聚糖,特别地岩藻糖α1-2半乳糖基元,更特别地岩藻糖α1-2半乳糖β1-4N-乙酰葡糖胺基元的酶。所述细胞解离可以例如用由RocheDiagnostic公司销售的混合物来实施。
因此,本发明还涉及根据本发明的方法,其在标记步骤之前包括使样品的细胞相互解离的预先步骤。
当今,为了研究和诊断目的而对癌症干细胞进行研究是必要的,特别地为了揭示出能够针针对这些细胞起作用的新物质。对这些细胞的研究在个体化医学的情景下也是特别有用的。
牵涉呼吸的器官的癌症干细胞是一群特殊的细胞,它们由于其对于化学疗法治疗的抵抗性而导致肿瘤重新形成和肿瘤复发。因此,本发明通过检测或分离牵涉呼吸的器官的癌症干细胞而使得能够评价牵涉呼吸的器官的癌症的复发风险。
检测牵涉呼吸的器官的癌症干细胞(其随后任选地为其定量)使得能够评价肿瘤的进展风险。
因此,本发明还涉及识别岩藻糖α1-2半乳糖基元,更特别地岩藻糖α1-2半乳糖β1-4N-乙酰葡糖胺基元的凝集素用于在体外诊断牵涉呼吸的器官的癌症的复发风险和/或侵袭性以确定用于牵涉呼吸的器官的癌症的治疗适应调整的预后值的用途。
因此,本发明还涉及在体外诊断牵涉呼吸的器官的癌症的复发风险和/或牵涉呼吸的器官的癌症的侵袭性以确定用于牵涉呼吸的器官的癌症的治疗适应调整的预后值的方法,所述方法包括用至少一种识别岩藻糖α1-2半乳糖基元的凝集素对牵涉呼吸的器官的生物学样品的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞进行标记以在所述样品中获得被至少一种凝集素标记的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的步骤。
在一个特别的实施方案中,本发明还涉及在体外诊断牵涉呼吸的器官的癌症的复发风险和/或牵涉呼吸的器官的癌症的侵袭性以确定用于牵涉呼吸的器官的癌症的治疗适应调整的预后值的方法,所述方法包括用至少一种识别岩藻糖α1-2半乳糖β1-4N-乙酰葡糖胺基元的凝集素对牵涉呼吸的器官的生物学样品的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞进行标记以在所述样品中获得被至少一种凝集素标记的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的步骤。
因此,本发明还涉及在体外诊断牵涉呼吸的器官的癌症的复发风险和/或牵涉呼吸的器官的癌症的侵袭性以确定用于牵涉呼吸的器官的癌症的治疗适应调整的预后值的方法,所述方法包括用至少一种从UEA-1或其同源物TJA-II、ABA、ACA、榴莲凝素、GSL-I和GSL-II这些凝集素中选择的凝集素对牵涉呼吸的器官的生物学样品的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞进行标记以在所述样品中获得被至少一种凝集素标记的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的步骤。
根据一个特别的实施方案,根据本发明的诊断方法包括下列步骤:
(a)用至少一种识别岩藻糖α1-2半乳糖基元的凝集素对牵涉呼吸的器官的癌症干细胞进行标记以在所述生物学样品中获得被至少一种凝集素标记的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞,所述凝集素与选自荧光团、放射性同位素、酶、金珠粒或生物素的标记物相缀合;
(b)通过下列方式来检测所述经标记的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞:
-荧光显微术或荧光阅读器,当所述凝集素与荧光团相缀合时,或者当所述凝集素与生物素相缀合并且通过与链霉抗生物素蛋白或与抗生物素蛋白相缀合的荧光团来进行检测时;
-发光显微术或发光阅读器,当所述凝集素与使用化学发光底物的酶相缀合时,或者当所述凝集素与生物素相缀合并且通过与链霉抗生物素蛋白或与抗生物素蛋白相缀合的使用化学发光底物的酶来进行检测时;
-γ照相机,当所述凝集素与放射性同位素相缀合时,或者当所述凝集素与生物素相缀合并且通过与链霉抗生物素蛋白或与抗生物素蛋白相缀合的放射性同位素来进行检测时;
-UV/可见光显微术或吸光阅读器,当所述凝集素与使用生色底物的酶相缀合时,或者当所述凝集素与生物素相缀合并且通过与链霉抗生物素蛋白或与抗生物素蛋白相缀合的使用生色底物的酶来进行检测时;
-电子显微术,当所述凝集素与金珠粒相缀合,或者当所述凝集素与生物素相缀合并且通过与链霉抗生物素蛋白或与抗生物素蛋白相缀合的金珠粒来进行检测时;
(c)任选地,定量牵涉呼吸的器官的癌症干细胞;
(d)将在所述生物学样品中的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的检测强度与在邻近所述生物学样品的健康样品中的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的检测强度进行比较,
和任选地,将在所述生物学样品中的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的定量与在邻近所述生物学样品的健康样品中的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的定量进行比较;
(e)从牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的存在和任选地数量开始来推断牵涉呼吸的器官的癌症的复发风险和/或牵涉呼吸的器官的癌症的侵袭性以确定用于牵涉呼吸的器官的癌症的治疗适应调整的预后值。
在一个特别的实施方案中,所述被凝集素所识别的岩藻糖α1-2半乳糖基元更特别地为岩藻糖α1-2半乳糖β1-4N-乙酰葡糖胺基元。
在一个特别的实施方案中,所述至少一种凝集素选自下列凝集素:UEA-1或其同源物TJA-II、ABA、ACA、榴莲凝素、GSL-I和GSL-II。
根据一个特别的实施方案中,根据本发明的诊断方法包括下列步骤:
(a)用至少一种识别岩藻糖α1-2半乳糖基元的凝集素对牵涉呼吸的器官的癌症干细胞进行标记以在所述生物学样品中获得被至少一种凝集素标记的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞,所述凝集素与选自荧光团或生物素的标记物相缀合;
(b)分离被至少一种经缀合的凝集素标记的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞:
-当用与生物素相缀合的凝集素进行标记时,所述分离通过用链霉抗生物素蛋白或抗生物素蛋白进行官能化的支持物来进行,特别地所述经官能化的支持物由用链霉抗生物素蛋白或抗生物素蛋白进行官能化的磁性珠粒构成并且所述分离通过在磁铁存在下的磁力细胞分选来进行,或者
-当用与荧光团相缀合的凝集素进行标记时,所述分离通过以流式细胞术的细胞分选来进行;
(c)用至少一种识别岩藻糖α1-2半乳糖基元的凝集素对经分离的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞进行再次标记以获得经分离和通过该再次标记而经标记的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞,所述凝集素与选自荧光团、放射性同位素、酶、金珠粒或生物素的标记物相缀合;
(d)通过下列方式来检测所述经分离和通过该再次标记而经标记的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞:
-荧光显微术或荧光阅读器,当所述凝集素与荧光团相缀合时,或者当所述凝集素与生物素相缀合并且通过与链霉抗生物素蛋白或与抗生物素蛋白相缀合的荧光团来进行检测时;
-发光显微术或发光阅读器,当所述凝集素与使用化学发光底物的酶相缀合时,或者当所述凝集素与生物素相缀合并且通过与链霉抗生物素蛋白或与抗生物素蛋白相缀合的使用化学发光底物的酶来进行检测时;
-γ照相机,当所述凝集素与放射性同位素相缀合时,或者当所述凝集素与生物素相缀合并且通过与链霉抗生物素蛋白或与抗生物素蛋白相缀合的放射性同位素来进行检测时;
-UV/可见光显微术或吸光阅读器,当所述凝集素与使用生色底物的酶相缀合时,或者当所述凝集素与生物素相缀合并且通过与链霉抗生物素蛋白或与抗生物素蛋白相缀合的使用生色底物的酶来进行检测时;
-电子显微术,当所述凝集素与金珠粒相缀合,或者当所述凝集素与生物素相缀合并且通过与链霉抗生物素蛋白或与抗生物素蛋白相缀合的金珠粒来进行检测时;
(e)任选地,定量牵涉呼吸的器官的癌症干细胞;
(f)将在所述生物学样品中的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的检测强度与在邻近所述生物学样品的健康样品中的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的检测强度进行比较,
和任选地,将在所述生物学样品中的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的定量与在邻近所述生物学样品的健康样品中的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的定量进行比较;
(g)从牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的存在和任选地数量开始来推断牵涉呼吸的器官的癌症的复发风险和/或牵涉呼吸的器官的癌症的侵袭性以确定用于牵涉呼吸的器官的癌症的治疗适应调整的预后值。
在一个特别的实施方案中,所述被凝集素所识别的岩藻糖α1-2半乳糖基元更特别地为岩藻糖α1-2半乳糖β1-4N-乙酰葡糖胺基元。
在一个特别的实施方案中,所述至少一种凝集素选自下列凝集素:UEA-1或其同源物TJA-II、ABA、ACA、榴莲凝素、GSL-I和GSL-II。
在一个特别的实施方案中,本发明涉及上面所描述的诊断方法,其中所述至少一种凝集素选自下列凝集素:UEA-1或其同源物TJA-II、ABA、ACA、榴莲凝素、GSL-I和GSL-II,
尤其是至少两种选自UEA-1或其同源物TJA-II、ABA、ACA、榴莲凝素、GSL-I和GSL-II的凝集素,特别是GSL-I和GSL-II的混合物,或者UEA-1和GSL-I的混合物,
尤其是至少三种选自UEA-1或其同源物TJA-II、ABA、ACA、榴莲凝素、GSL-I和GSL-II的凝集素,特别是UEA-1、榴莲凝素和ABA的混合物,或者UEA-1、榴莲凝素和ACA的混合物。
在一个特别的实施方案中,本发明涉及上面所描述的诊断方法,其中使用至少两种凝集素,所述至少两种凝集素处于相等的量或不等的量。
在一个特别的实施方案中,本发明涉及上面所描述的诊断方法,其中使用至少两种凝集素,所述至少两种凝集素处于非等摩尔量。
在一个特别的实施方案中,本发明涉及上面所描述的诊断方法,其中使用两种凝集素,所述2种凝集素是以2:1、3:1或4:1的重量比的处于非等摩尔量的UEA-1和GSL-I。
在一个特别的实施方案中,本发明涉及上面所描述的诊断方法,其中所述生物学样品为牵涉呼吸的器官的生物学样品。
在一个特别的实施方案中,本发明涉及上面所描述的诊断方法,其中所述牵涉呼吸的器官选自肺、喉、咽、口、鼻、喉咙、舌、窦、气管和唾液腺(扁桃体和腮腺)。
在一个特别的实施方案中,本发明涉及上面所描述的诊断方法,其中所述癌症选自肺癌、喉癌、咽癌、口腔癌、鼻癌、喉咙癌、舌癌、窦癌、气管癌和唾液腺癌(即扁桃体癌和/或腮腺癌)。
在一个特别的实施方案中,本发明涉及在体外诊断肺部癌症的复发风险和/或肺部癌症的侵袭性以确定用于肺部癌症的治疗适应调整的预后值的方法,所述方法包括用至少一种从UEA-1、ABA、ACA、榴莲凝素、GSL-I和GSL-II这些凝集素中选择的识别岩藻糖α1-2半乳糖基元的凝集素对肺生物学样品的肺癌症干细胞进行标记以在所述样品中获得被至少一种凝集素标记的肺癌症干细胞的步骤。
术语“肺部癌症”是指肺癌。
将牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的检测强度和任选地其定量结果相对于邻近所述生物学样品的健康样品而言进行比较。
将邻近所述生物学样品的健康样品用作对照。
“邻近所述生物学样品的健康样品”是指这样的样品,其是在与所述生物学样品相同的个体上取得的,但是在与所述生物学样品所取得自的组织相邻的组织中,并且在病理解剖学分析中不具有肿瘤细胞且通过根据本发明的方法不具有癌症干细胞。
因此,所述健康样品为以在通过病理解剖学进行的分析中不存在肿瘤细胞和通过根据本发明的方法不存在癌症干细胞为特征的样品。
牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的定量使得能够测定牵涉呼吸的器官的癌症的侵袭性。该定量可以通过各种不同的方法来建立,例如:流式细胞术,Western印迹,使用遗传标志物例如Oct-4、cMyc1、Gli-1或EpCam的定量PCR,或者克隆发生测试。
还可以平行地使用这些方法中的几种以便形成一系列的CSC存在并因此增加定量的可靠性。
在一个特别的实施方案中,牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的定量通过克隆发生测试来施行。
克隆发生测试在于培养生物学样品以观察细胞重新形成肿瘤球的能力。该自我更新和自我复制的特性对于癌症干细胞来说是固有的,因此唯一的癌症干细胞是所形成的肿瘤球的起因。因此,所形成的肿瘤球的记录使得能够定量在所述样品中的癌症干细胞。
这些方法(有利地,使用遗传标志物例如Oct-4、c-Myc、Gli-1或EpCam的qPCR,和克隆发生测试)还使得能够检测癌症干细胞,以便在分离癌症干细胞的步骤后测定这些细胞的存在或不存在。
因此,这些方法作为上述步骤(c)和(d)(分别相应于重新标记和检测经分离的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞)的备选方案来呈现。
该检测通过使样品富集癌症干细胞而得到促进和变得更可靠。
通过这些方法进行检测还使得能够验证通过根据本发明的方法来使样品富集牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的效能,即所述方法分离牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的效能。
在本发明的诊断方法中,在所述生物学样品中的检测强度相对于邻近所述生物学样品的健康样品而言越高,牵涉呼吸的器官的癌症的复发风险就越大并且癌症就越具有侵袭性。
以同样的方式,在所述生物学样品中的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的数量相对于邻近所述生物学样品的健康样品而言越高,牵涉呼吸的器官的癌症的复发风险就越大并且癌症就越具有侵袭性。
因此,在生物学样品中牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的检测和定量使得能够测定牵涉呼吸的器官的癌症的侵袭性和其发展的能力。
牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的检测和定量也属于个体化医学的措施。这是因为,使得能够评价治疗的预后值的在所述生物学样品中牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的检测因此使得能够对该治疗进行适应调整。
本发明还涉及用于在体外在生物学样品中检测牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的试剂盒,所述试剂盒包含至少一种识别岩藻糖α1-2半乳糖基元的凝集素,所述凝集素与选自荧光团、放射性同位素、酶、金珠粒或生物素的标记物相缀合。
在一个特别的实施方案中,所述被凝集素所识别的岩藻糖α1-2半乳糖基元更特别地为岩藻糖α1-2半乳糖β1-4N-乙酰葡糖胺基元。
在一个特别的实施方案中,所述至少一种凝集素选自下列凝集素:UEA-1或其同源物TJA-II、ABA、ACA、榴莲凝素、GSL-I和GSL-II。
本发明还涉及用于在体外在生物学样品中分离牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的试剂盒,所述试剂盒包含至少一种识别岩藻糖α1-2半乳糖基元的凝集素,所述凝集素与生物素相缀合,和用链霉抗生物素蛋白进行官能化的磁性珠粒。
在一个特别的实施方案中,所述被凝集素所识别的岩藻糖α1-2半乳糖基元更特别地为岩藻糖α1-2半乳糖β1-4N-乙酰葡糖胺基元。
在一个特别的实施方案中,所述至少一种凝集素选自下列凝集素:UEA-1或其同源物TJA-II、ABA、ACA、榴莲凝素、GSL-I和GSL-II。
本发明还涉及用于在体外在生物学样品中分离牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的试剂盒,所述试剂盒包含至少一种识别岩藻糖α1-2半乳糖基元的凝集素,所述凝集素与荧光团相缀合。
在一个特别的实施方案中,所述被凝集素所识别的岩藻糖α1-2半乳糖基元更特别地为岩藻糖α1-2半乳糖β1-4N-乙酰葡糖胺基元。
在一个特别的实施方案中,所述至少一种凝集素选自下列凝集素:UEA-1或其同源物TJA-II、ABA、ACA、榴莲凝素、GSL-I和GSL-II。
本发明还涉及用于在体外诊断牵涉呼吸的器官的癌症的复发风险和/或牵涉呼吸的器官的癌症的侵袭性以确定用于牵涉呼吸的器官的癌症的治疗适应调整的预后值的试剂盒,所述试剂盒包含:
-至少一种识别岩藻糖α1-2半乳糖基元的凝集素,所述凝集素与生物素相缀合,和用链霉抗生物素蛋白进行官能化的磁性珠粒,
-和任选地,至少一种与荧光团、放射性同位素、酶或金珠粒相缀合的凝集素。
在一个特别的实施方案中,所述被凝集素所识别的岩藻糖α1-2半乳糖基元更特别地为岩藻糖α1-2半乳糖β1-4N-乙酰葡糖胺基元。
在一个特别的实施方案中,所述至少一种凝集素选自下列凝集素:UEA-1或其同源物TJA-II、ABA、ACA、榴莲凝素、GSL-I和GSL-II。
本发明还涉及用于在体外诊断牵涉呼吸的器官的癌症的复发风险和/或牵涉呼吸的器官的癌症的侵袭性以确定用于牵涉呼吸的器官的癌症的治疗适应调整的预后值的试剂盒,所述试剂盒包含:
-至少一种识别岩藻糖α1-2半乳糖基元的凝集素,所述凝集素与荧光团相缀合,
-和任选地,至少一种与生物素、放射性同位素、酶或金珠粒相缀合的凝集素。
在一个特别的实施方案中,所述被凝集素所识别的岩藻糖α1-2半乳糖基元更特别地为岩藻糖α1-2半乳糖β1-4N-乙酰葡糖胺基元。
在一个特别的实施方案中,所述至少一种凝集素选自下列凝集素:UEA-1或其同源物TJA-II、ABA、ACA、榴莲凝素、GSL-I和GSL-II。
因此,在一个特别的实施方案中,本发明涉及上面所描述的诊断试剂盒,其中所述至少一种凝集素选自下列凝集素:UEA-1或其同源物TJA-II、ABA、ACA、榴莲凝素、GSL-I和GSL-II,尤其是至少两种选自UEA-1或其同源物TJA-II、ABA、ACA、榴莲凝素、GSL-I和GSL-II的凝集素,特别是GSL-I和GSL-II的混合物,或者UEA-1和GSL-I的混合物,尤其是至少三种选自UEA-1或其同源物TJA-II、ABA、ACA、榴莲凝素、GSL-I和GSL-II的凝集素,特别是UEA-1、榴莲凝素和ABA的混合物,或者UEA-1、榴莲凝素和ACA的混合物。
根据本发明的诊断在生物学样品(特别是牵涉呼吸的器官的样品)上施行。
在一个特别的实施方案中,本发明涉及用于在体外诊断肺部癌症的复发风险和/或肺部癌症的侵袭性以确定用于肺部癌症的治疗适应调整的预后值的试剂盒,所述试剂盒
包含至少一种从UEA-1、ABA、ACA、榴莲凝素、GSL-I和GSL-II这些凝集素中选择的识别岩藻糖α1-2半乳糖基元的凝集素,所述凝集素与生物素相缀合,和用链霉抗生物素蛋白进行官能化的磁性珠粒,和任选地,至少一种与荧光团、放射性同位素、酶或金珠粒相缀合的从UEA-1、ABA、ACA、榴莲凝素、GSL-I和GSL-II这些凝集素中选择的凝集素,或者
包含至少一种从UEA-1、ABA、ACA、榴莲凝素、GSL-I和GSL-II这些凝集素中选择的识别岩藻糖α1-2半乳糖基元的凝集素,所述凝集素与荧光团相缀合,和任选地,至少一种与生物素、放射性同位素、酶或金珠粒相缀合的从UEA-1、ABA、ACA、榴莲凝素、GSL-I和GSL-II这些凝集素中选择的凝集素。
上面所描述的根据本发明的试剂盒可以包含至少两种从UEA-1或其同源物TJA-II、ABA、ACA、榴莲凝素、GSL-I和GSL-II这些凝集素中选择的经缀合的凝集素,所述至少两种经缀合的凝集素处于等摩尔量。
根据一个实施方案,根据本发明的试剂盒可以包含两种从UEA-1或其同源物TJA-II、ABA、ACA、榴莲凝素、GSL-I和GSL-II这些凝集素中选择的凝集素,所述两种凝集素处于等摩尔量。
根据一个实施方案,根据本发明的试剂盒可以包含从下列混合物中选择的两种凝集素:(UEA-1、ABA)、(UEA-1、ACA)、(UEA-1、榴莲凝素)、(UEA-1、GSL-I)、(UEA-1、GSL-II)、(ABA、ACA)、(ABA、榴莲凝素)、(ABA、GSL-I)、(ABA、GSL-II)、(ACA、榴莲凝素)、(ACA、GSL-I)、(ACA、GSL-II)、(榴莲凝素、GSL-I)、(榴莲凝素、GSL-II)、(GSL-I、GSL-II)、(TJA-II、ABA)、(TJA-II、ACA)、(TJA-II、榴莲凝素)、(TJA-II、GSL-I)、(TJA-II、GSL-II),所述两种凝集素处于等摩尔量。
根据一个实施方案,根据本发明的试剂盒可以包含两种凝集素,所述两种凝集素为混合物(GSL-I、GSL-II),其中所述凝集素中的每一种处于等摩尔量。
根据一个实施方案,根据本发明的试剂盒可以包含两种凝集素,所述两种凝集素为混合物(UEA-1、GSL-I),所述凝集素中的每一种处于等摩尔量。
根据一个实施方案,根据本发明的试剂盒可以包含至少两种从UEA-1或其同源物TJA-II、ABA、ACA、榴莲凝素、GSL-I和GSL-II这些凝集素中选择的凝集素,所述至少两种凝集素处于非等摩尔量。
根据一个实施方案,根据本发明的试剂盒可以包含两种从UEA-1或其同源物TJA-II、ABA、ACA、榴莲凝素、GSL-I和GSL-II这些凝集素中选择的凝集素,所述两种凝集素处于非等摩尔量。
根据一个实施方案,根据本发明的试剂盒可以包含从下列混合物中选择的两种凝集素:(UEA-1、ABA)、(ABA、UEA-1)、(UEA-1、ACA)、(ACA、UEA-1)、(UEA-1、榴莲凝素)、(榴莲凝素、UEA-1)、(UEA-1、GSL-I)、(GSL-I、UEA-1)、(UEA-1、GSL-II)、(GSL-II、UEA-1)、(ABA、ACA)、(ACA、ABA)、(ABA、榴莲凝素)、(榴莲凝素、ABA)、(ABA、GSL-I)、(GSL-I、ABA)、(ABA、GSL-II)、(GSL-II、ABA)、(ACA、榴莲凝素)、(榴莲凝素、ABA)、(ACA、GSL-I)、(GSL-I、ACA)、(ACA、GSL-II)、(GSL-II、ACA)、(榴莲凝素、GSL-I)、(GSL-I、榴莲凝素)、(榴莲凝素、GSL-II)、(GSL-II、榴莲凝素)、(GSL-I、GSL-II)、(GSL-II、GSL-I)、(TJA-II、ABA)、(ABA、TJA-II)、(TJA-II、ACA)、(ACA、TJA-II)、(TJA-II、榴莲凝素)、(榴莲凝素、TJA-II)、(TJA-II、GSL-I)、(GSL-I、TJA-II)、(TJA-II、GSL-II)、(GSL-II、TJA-II),所述两种凝集素处于非等摩尔量,特别地以2:1、3:1或4:1,更特别地2:1的重量比。
根据一个实施方案,根据本发明的试剂盒可以包含两种凝集素,所述两种凝集素为混合物(UEA-1、GSL-I),其中所述凝集素以2:1的重量比处于非等摩尔量,即2UEA-1:1GSL-I。
根据一个实施方案,根据本发明的试剂盒可以包含两种凝集素,所述两种凝集素为混合物(UEA-1、GSL-I),其中所述凝集素以3:1的重量比处于非等摩尔量,即3UEA-1:1GSL-I。
根据一个实施方案,根据本发明的试剂盒可以包含两种凝集素,所述两种凝集素为混合物(UEA-1、GSL-I),其中所述凝集素以4:1的重量比处于非等摩尔量,即4UEA-1:1GSL-I。
上面所描述的根据本发明的试剂盒可以包含至少三种从UEA-1或其同源物TJA-II、ABA、ACA、榴莲凝素、GSL-I和GSL-II这些凝集素中选择的经缀合的凝集素,所述至少三种经缀合的凝集素处于等摩尔量。
根据一个实施方案,根据本发明的试剂盒可以包含三种从UEA-1或其同源物TJA-II、ABA、ACA、榴莲凝素、GSL-I和GSL-II这些凝集素中选择的凝集素,所述三种凝集素每一种处于等摩尔量。
根据一个实施方案,根据本发明的试剂盒可以包含从下列混合物中选择的三种凝集素:(UEA-1、ABA、ACA)、(UEA-1、ABA、榴莲凝素)、(UEA-1、ABA、GSL-I)、(UEA-1、ABA、GSL-II)、(UEA-1、ACA、榴莲凝素)、(UEA-1、ACA、GSL-I)、(UEA-1、ACA、GSL-II)、(UEA-1、榴莲凝素、GSL-I)、(UEA-1、榴莲凝素、GSL-II)、(UEA-1、GSL-I、GSL-II)、(ABA、ACA、榴莲凝素)、(ABA、ACA、GSL-I)、(ABA、ACA、GSL-II)、(ABA、榴莲凝素、GSL-I)、(ABA、榴莲凝素、GSL-II)、(ABA、GSL-I、GSL-II)、(ACA、榴莲凝素、GSL-I)、(ACA、榴莲凝素、GSL-II)、(ACA、GSL-I、GSL-II)、(榴莲凝素、GSL-I、GSL-II)、(TJA-II、ABA、ACA)、(TJA-II、ABA、榴莲凝素)、(TJA-II、ABA、GSL-I)、(TJA-II、ABA、GSL-II)、(TJA-II、ACA、榴莲凝素)、(TJA-II、ACA、GSL-I)、(TJA-II、ACA、GSL-II)、(TJA-II、榴莲凝素、GSL-I)、(TJA-II、榴莲凝素、GSL-II)、(TJA-II、GSL-I、GSL-II),所述三种凝集素处于等摩尔量。
根据一个实施方案,根据本发明的试剂盒可以包含三种凝集素,所述三种凝集素选自UEA-1或其同源物TJA-II、榴莲凝素和ABA的混合物,或者UEA-1或其同源物TJA-II、榴莲凝素和ACA的混合物,并且所述三种凝集素每一种在所述混合物中以等摩尔量存在。
根据一个实施方案,根据本发明的试剂盒可以包含至少三种从UEA-1或其同源物TJA-II、ABA、ACA、榴莲凝素、GSL-I和GSL-II这些凝集素中选择的凝集素,所述至少三种凝集素处于非等摩尔量。
根据一个实施方案,根据本发明的试剂盒可以包含三种从UEA-1或其同源物TJA-II、ABA、ACA、榴莲凝素、GSL-I和GSL-II这些凝集素中选择的凝集素,所述三种凝集素处于非等摩尔量。
根据一个实施方案,根据本发明的试剂盒可以包含从下列混合物中选择的三种凝集素的混合物:(UEA-1、ABA、ACA)、(UEA-1、ABA、榴莲凝素)、(UEA-1、ABA、GSL-I)、(UEA-1、ABA、GSL-II)、(UEA-1、ACA、榴莲凝素)、(UEA-1、ACA、GSL-I)、(UEA-1、ACA、GSL-II)、(UEA-1、榴莲凝素、GSL-I)、(UEA-1、榴莲凝素、GSL-II)、(UEA-1、GSL-I、GSL-II)、(ABA、ACA、榴莲凝素)、(ABA、ACA、GSL-I)、(ABA、ACA、GSL-II)、(ABA、榴莲凝素、GSL-I)、(ABA、榴莲凝素、GSL-II)、(ABA、GSL-I、GSL-II)、(ACA、榴莲凝素、GSL-I)、(ACA、榴莲凝素、GSL-II)、(ACA、GSL-I、GSL-II)、(榴莲凝素、GSL-I、GSL-II)、(TJA-II、ABA、ACA)、(TJA-II、ABA、榴莲凝素)、(TJA-II、ABA、GSL-I)、(TJA-II、ABA、GSL-II)、(TJA-II、ACA、榴莲凝素)、(TJA-II、ACA、GSL-I)、(TJA-II、ACA、GSL-II)、(TJA-II、榴莲凝素、GSL-I)、(TJA-II、榴莲凝素、GSL-II)、(TJA-II、GSL-I、GSL-II),所述三种凝集素在所述混合物中处于非等摩尔量,特别地以2:1:1、1:2:1或1:1:2的重量比。
在另一个方面,本发明涉及治疗牵涉呼吸的器官的癌症的方法,所述方法包括下列步骤:
a)检测在牵涉呼吸的器官中肿瘤损伤的存在或不存在的步骤,
b)诊断牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的存在或不存在的步骤,
所述诊断癌症干细胞的存在或不存在的步骤b)可以在检测肿瘤损伤的存在或不存在的步骤a)之前、之后或同时施行,
c)在牵涉呼吸的器官的癌症干细胞存在和肿瘤损伤存在的情况下,施用一种或多种化学治疗试剂以治疗牵涉呼吸的器官的癌症的步骤,
所述一种或多种化学治疗试剂的施用可以与放射疗法和/或定向疗法相联合。
“检测肿瘤损伤的存在或不存在”是指任何使得能够检测肿瘤损伤的存在或不存在的测试。它尤其可以为传统的病理解剖学分析,其包括:HES(苏木精-伊红-藏红花)染色,其使得能够确定器官的构造;KI-67蛋白的标记,其使得能够测定所分析的组织的细胞增殖指数;或者癌胚抗原(CEA)(其是肿瘤标志物)的标记。
“诊断牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的存在或不存在的步骤”是指施行根据本发明的和如前面所定义的诊断方法的步骤。
“定向疗法”是指通过在癌细胞中定位出准确的靶标例如受体、基因或蛋白质来攻击癌细胞的选择性疗法。定向疗法通常在治疗失败的情况下以第二或第三线治疗来进行使用。在定向疗法的情况下,所推荐的药物为属于下列类别的药物:
-抗-VEGF,即靶向血管内皮生长因子的试剂,
-抗-EGF,即靶向表皮生长因子的试剂,
-抗-ALK,即靶向激酶“ALK”(退行发育淋巴瘤激酶)的试剂。
在一个实施方案中,本发明涉及治疗牵涉呼吸的器官的癌症的方法,所述方法包括下列步骤:
a)检测在牵涉呼吸的器官中肿瘤损伤的存在或不存在的步骤,
b)诊断牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的存在或不存在的步骤,
所述诊断癌症干细胞的存在或不存在的步骤b)可以在检测肿瘤损伤的存在或不存在的步骤a)之前、之后或同时施行,
c)在牵涉呼吸的器官的癌症干细胞存在和肿瘤损伤存在的情况下,施用一种或多种化学治疗试剂以治疗牵涉呼吸的器官的癌症的步骤。
在一个实施方案中,本发明涉及治疗牵涉呼吸的器官的癌症的方法,所述方法包括下列步骤:
a)检测在牵涉呼吸的器官中肿瘤损伤的存在或不存在的步骤,
b)诊断牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的存在或不存在的步骤,
所述诊断癌症干细胞的存在或不存在的步骤b)可以在检测肿瘤损伤的存在或不存在的步骤a)之前、之后或同时施行,
c)在牵涉呼吸的器官的癌症干细胞存在和肿瘤损伤存在的情况下,施用一种或多种化学治疗试剂以治疗牵涉呼吸的器官的癌症的步骤,
所述一种或多种化学治疗试剂的施用与放射疗法相联合。
在一个实施方案中,本发明涉及治疗牵涉呼吸的器官的癌症的方法,所述方法包括下列步骤:
a)检测在牵涉呼吸的器官中肿瘤损伤的存在或不存在的步骤,
b)诊断牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的存在或不存在的步骤,
所述诊断癌症干细胞的存在或不存在的步骤b)在检测肿瘤损伤的存在或不存在的步骤a)之后施行,
c)在牵涉呼吸的器官的癌症干细胞存在和肿瘤损伤存在的情况下,施用一种或多种化学治疗试剂以治疗牵涉呼吸的器官的癌症的步骤,
所述一种或多种化学治疗试剂的施用可以与放射疗法和/或定向疗法相联合。
在一个实施方案中,本发明涉及治疗牵涉呼吸的器官的癌症的方法,所述方法包括下列步骤:
a)检测在牵涉呼吸的器官中肿瘤损伤的存在或不存在的步骤,
b)诊断牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的存在或不存在的步骤,
所述诊断癌症干细胞的存在或不存在的步骤b)在检测肿瘤损伤的存在或不存在的步骤a)之后施行,
c)在牵涉呼吸的器官的癌症干细胞存在和肿瘤损伤存在的情况下,施用一种或多种化学治疗试剂以治疗牵涉呼吸的器官的癌症的步骤。
在一个实施方案中,本发明涉及治疗牵涉呼吸的器官的癌症的方法,所述方法包括下列步骤:
a)检测在牵涉呼吸的器官中肿瘤损伤的存在或不存在的步骤,
b)诊断牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的存在或不存在的步骤,
所述诊断癌症干细胞的存在或不存在的步骤b)在检测肿瘤损伤的存在或不存在的步骤a)之后施行,
c)在牵涉呼吸的器官的癌症干细胞存在和肿瘤损伤存在的情况下,施用一种或多种化学治疗试剂以治疗牵涉呼吸的器官的癌症的步骤,
所述一种或多种化学治疗试剂的施用与放射疗法相联合。
在一个实施方案中,本发明涉及治疗牵涉呼吸的器官的癌症的方法,所述方法包括下列步骤:
a)检测在牵涉呼吸的器官中肿瘤损伤的存在或不存在的步骤,
b)诊断牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的存在或不存在的步骤,
所述诊断癌症干细胞的存在或不存在的步骤b)与检测肿瘤损伤的存在或不存在的步骤a)同时施行,
c)在牵涉呼吸的器官的癌症干细胞存在和肿瘤损伤存在的情况下,施用一种或多种化学治疗试剂以治疗牵涉呼吸的器官的癌症的步骤,
所述一种或多种化学治疗试剂的施用可以与放射疗法和/或定向疗法相联合。
在一个实施方案中,本发明涉及治疗牵涉呼吸的器官的癌症的方法,所述方法包括下列步骤:
a)检测在牵涉呼吸的器官中肿瘤损伤的存在或不存在的步骤,
b)诊断牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的存在或不存在的步骤,
所述诊断癌症干细胞的存在或不存在的步骤b)与检测肿瘤损伤的存在或不存在的步骤a)同时施行,
c)在牵涉呼吸的器官的癌症干细胞存在和肿瘤损伤存在的情况下,施用一种或多种化学治疗试剂以治疗牵涉呼吸的器官的癌症的步骤。
在一个实施方案中,本发明涉及治疗牵涉呼吸的器官的癌症的方法,所述方法包括下列步骤:
a)检测在牵涉呼吸的器官中肿瘤损伤的存在或不存在的步骤,
b)诊断牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的存在或不存在的步骤,
所述诊断癌症干细胞的存在或不存在的步骤b)与检测肿瘤损伤的存在或不存在的步骤a)同时施行,
c)在牵涉呼吸的器官的癌症干细胞存在和肿瘤损伤存在的情况下,施用一种或多种化学治疗试剂以治疗牵涉呼吸的器官的癌症的步骤,
所述一种或多种化学治疗试剂的施用与放射疗法相联合。
根据本发明,所述化学治疗试剂选自:长春瑞滨(NavelbineTM)、顺铂、吉西他滨(GemzarTM)、卡铂、紫杉醇(TaxolTM)、多西他赛(TaxotèreTM)、培美曲赛(AlimtaTM)、厄洛替尼(TarcevaTM)、纳武单抗(nivolumab)或贝伐珠单抗(Avastin),或者两两联合。
在一个特别的实施方案中,所使用的两种化学治疗试剂为:长春瑞滨(NavelbineTM)和顺铂,吉西他滨(GemzarTM)和顺铂,吉西他滨(GemzarTM)和卡铂,紫杉醇(TaxolTM)和顺铂,紫杉醇(TaxolTM)和卡铂,多西他赛(TaxotèreTM)和顺铂,多西他赛(TaxotèreTM)和卡铂,或者培美曲赛(AlimtaTM)和顺铂。
在另一个方面,本发明涉及预防牵涉呼吸的器官的癌症的方法,所述方法包括下列步骤:
a)检测在牵涉呼吸的器官中肿瘤损伤的存在或不存在的步骤,
b)诊断牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的存在或不存在的步骤,
所述诊断癌症干细胞的存在或不存在的步骤b)可以在检测肿瘤损伤的存在或不存在的步骤a)之前、之后或同时施行,
c)在牵涉呼吸的器官的癌症干细胞存在和肿瘤损伤不存在的情况下,实施监测在步骤a)中检测出的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的演变的步骤。
“监测牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的演变”是指再次施行上面的预防方法,其使得能够借助于根据本发明的特异性地识别岩藻糖α1-2半乳糖基元,更特别地岩藻糖α1-2半乳糖β1-4N-乙酰葡糖胺基元的凝集素来检测牵涉呼吸的器官的癌症干细胞或者施行伴随有牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的再次标记的新的活组织检查。该监测将在如前面所描述的用化学治疗试剂、用放射疗法和/或用定向疗法的各种不同治疗之后进行,以便观察对于侵袭性负有责任的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的存在和/或数量是否消退。该检测将会使得能够更准确地指导监测和/或待推进的治疗,并且这以对于患者来说个体化的方式。
在一个实施方案中,本发明涉及预防牵涉呼吸的器官的癌症的方法,所述方法包括下列步骤:
a)检测在牵涉呼吸的器官中肿瘤损伤的存在或不存在的步骤,
b)诊断牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的存在或不存在的步骤,
所述诊断癌症干细胞的存在或不存在的步骤b)在检测肿瘤损伤的存在或不存在的步骤a)之后施行,
c)在牵涉呼吸的器官的癌症干细胞存在和肿瘤损伤不存在的情况下,实施监测在步骤a)中检测出的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的演变的步骤。
在一个实施方案中,本发明涉及预防牵涉呼吸的器官的癌症的方法,所述方法包括下列步骤:
a)检测在牵涉呼吸的器官中肿瘤损伤的存在或不存在的步骤,
b)诊断牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的存在或不存在的步骤,
所述诊断癌症干细胞的存在或不存在的步骤b)与检测肿瘤损伤的存在或不存在的步骤a)同时施行,
c)在牵涉呼吸的器官的癌症干细胞存在和肿瘤损伤不存在的情况下,实施监测在步骤a)中检测出的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的演变的步骤。
在另一个方面,本发明涉及治疗牵涉呼吸的器官的癌症的方法,所述方法包括下列步骤:
a)检测在牵涉呼吸的器官中肿瘤损伤的存在或不存在的步骤,
b)诊断牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的存在或不存在的步骤,
所述诊断癌症干细胞的存在或不存在的步骤b)可以在检测肿瘤损伤的存在或不存在的步骤a)之前、之后或同时施行,
c)在肿瘤损伤存在的情况下,施用一种或多种化学治疗试剂以治疗牵涉呼吸的器官的癌症的步骤,
所述一种或多种化学治疗试剂的施用可以与放射疗法和/或定向疗法相联合。
在一个实施方案中,本发明涉及治疗牵涉呼吸的器官的癌症的方法,所述方法包括下列步骤:
a)检测在牵涉呼吸的器官中肿瘤损伤的存在或不存在的步骤,
b)诊断牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的存在或不存在的步骤,
所述诊断癌症干细胞的存在或不存在的步骤b)可以在检测肿瘤损伤的存在或不存在的步骤a)之前、之后或同时施行,
c)在肿瘤损伤存在的情况下,施用一种或多种化学治疗试剂以治疗牵涉呼吸的器官的癌症的步骤。
在一个实施方案中,本发明涉及治疗牵涉呼吸的器官的癌症的方法,所述方法包括下列步骤:
a)检测在牵涉呼吸的器官中肿瘤损伤的存在或不存在的步骤,
b)诊断牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的存在或不存在的步骤,
所述诊断癌症干细胞的存在或不存在的步骤b)可以在检测肿瘤损伤的存在或不存在的步骤a)之前、之后或同时施行,
c)在肿瘤损伤存在的情况下,施用一种或多种化学治疗试剂以治疗牵涉呼吸的器官的癌症的步骤,
所述一种或多种化学治疗试剂的施用与放射疗法相联合。
在一个实施方案中,本发明涉及治疗牵涉呼吸的器官的癌症的方法,所述方法包括下列步骤:
a)检测在牵涉呼吸的器官中肿瘤损伤的存在或不存在的步骤,
b)诊断牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的存在或不存在的步骤,
所述诊断癌症干细胞的存在或不存在的步骤b)在检测肿瘤损伤的存在或不存在的步骤a)之后施行,
c)在肿瘤损伤存在的情况下,施用一种或多种化学治疗试剂以治疗牵涉呼吸的器官的癌症的步骤,
所述一种或多种化学治疗试剂的施用可以与放射疗法和/或定向疗法相联合。
在一个实施方案中,本发明涉及治疗牵涉呼吸的器官的癌症的方法,所述方法包括下列步骤:
a)检测在牵涉呼吸的器官中肿瘤损伤的存在或不存在的步骤,
b)诊断牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的存在或不存在的步骤,
所述诊断癌症干细胞的存在或不存在的步骤b)在检测肿瘤损伤的存在或不存在的步骤a)之后施行,
c)在肿瘤损伤存在的情况下,施用一种或多种化学治疗试剂以治疗牵涉呼吸的器官的癌症的步骤。
在一个实施方案中,本发明涉及治疗牵涉呼吸的器官的癌症的方法,所述方法包括下列步骤:
a)检测在牵涉呼吸的器官中肿瘤损伤的存在或不存在的步骤,
b)诊断牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的存在或不存在的步骤,
所述诊断癌症干细胞的存在或不存在的步骤b)在检测肿瘤损伤的存在或不存在的步骤a)之后施行,
c)在肿瘤损伤存在的情况下,施用一种或多种化学治疗试剂以治疗牵涉呼吸的器官的癌症的步骤,
所述一种或多种化学治疗试剂的施用与放射疗法相联合。
在一个实施方案中,本发明涉及治疗牵涉呼吸的器官的癌症的方法,所述方法包括下列步骤:
a)检测在牵涉呼吸的器官中肿瘤损伤的存在或不存在的步骤,
b)诊断牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的存在或不存在的步骤,
所述诊断癌症干细胞的存在或不存在的步骤b)与检测肿瘤损伤的存在或不存在的步骤a)同时施行,
c)在肿瘤损伤存在的情况下,施用一种或多种化学治疗试剂以治疗牵涉呼吸的器官的癌症的步骤,
所述一种或多种化学治疗试剂的施用可以与放射疗法和/或定向疗法相联合。
在一个实施方案中,本发明涉及治疗牵涉呼吸的器官的癌症的方法,所述方法包括下列步骤:
a)检测在牵涉呼吸的器官中肿瘤损伤的存在或不存在的步骤,
b)诊断牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的存在或不存在的步骤,
所述诊断癌症干细胞的存在或不存在的步骤b)与检测肿瘤损伤的存在或不存在的步骤a)同时施行,
c)在肿瘤损伤存在的情况下,施用一种或多种化学治疗试剂以治疗牵涉呼吸的器官的癌症的步骤。
在一个实施方案中,本发明涉及治疗牵涉呼吸的器官的癌症的方法,所述方法包括下列步骤:
a)检测在牵涉呼吸的器官中肿瘤损伤的存在或不存在的步骤,
b)诊断牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的存在或不存在的步骤,
所述诊断癌症干细胞的存在或不存在的步骤b)与检测肿瘤损伤的存在或不存在的步骤a)同时施行,
c)在肿瘤损伤存在的情况下,施用一种或多种化学治疗试剂以治疗牵涉呼吸的器官的癌症的步骤,
所述一种或多种化学治疗试剂的施用与放射疗法相联合。
附图描述
图1显示了在使用在其上接枝有链霉抗生物素蛋白的磁性珠粒以及下列物质后,在来自A549细胞系并且借助于Epcam High+/Epcam High-这一比例鉴定出的细胞的样品上分开肺癌症干细胞(呼吸道癌症的主导式例子)的结果:经生物素化的UEA-1(凝集素UEA-1),经生物素化的ABA(凝集素ABA),经生物素化的ACA(凝集素ACA),经生物素化的榴莲凝素(凝集素榴莲凝素),经生物素化的GSL-I(凝集素GSL-I),经生物素化的GSL-II(凝集素GSL-II),经生物素化的凝集素的混合物“UEA-1/榴莲凝素/ABA”(混合物1:处于等摩尔量的UEA-1、榴莲凝素、ABA),经生物素化的凝集素的混合物“UEA-1/榴莲凝素/ACA”(混合物2:处于等摩尔量的UEA-1、榴莲凝素、ACA),经生物素化的凝集素的混合物“GSL-I/GSL-II”(混合物3:处于等摩尔量的GSL-I和GSL-II),经生物素化的凝集素的混合物“UEA-1/GSL-I”(混合物4:处于等摩尔量的UEA-1和GSL-I),经生物素化的凝集素的混合物“2UEA-1/GSL-I”(混合物5:处于非等摩尔量的UEA-1和GSL-I,UEA-1的量是GSL-I的量的2倍),经生物素化的凝集素的混合物“3UEA-1/GSL-I”(混合物6:处于非等摩尔量的UEA-1和GSL-I,UEA-1的量是GSL-I的量的3倍),和最后,经生物素化的凝集素的混合物“4UEA-1/GSL-I”(混合物7:处于非等摩尔量的UEA-1和GSL-I,UEA-1的量是GSL-I的量的4倍)。
图2显示了通过处于等摩尔量的混合物“UEA-1/GSL-I”进行标记并且来源于两位不同患者的两种具有肺起源的肿瘤组织(呼吸道癌症的主导式例子)的图像(标注为2A的上部图像相应于第一位患者,而标注为2B的下部图像相应于第二位患者)。代表了通过凝集素的混合物“UEA-1/GSL-I”简单地进行标记的肿瘤组织的图像2B呈现出重大数目的肺癌症干细胞,其通过标记出该含糖靶标的存在的栗色标记(使所述细胞轮廓突出的暗颜色,参见箭头)而突出了轮廓(2B)。相反地,图像2A呈现出完全的阴性。因此,在呈现出基本上相同的病理学状况的患者上,根据全靠凝集素的混合物“UEA-1/GSL-I”的仅仅靶向癌症干细胞的标记的特异性,来确定侵袭性标准。
图3显示了一组通过处于等摩尔量的混合物“UEA-1/GSL-I”进行标记的属于呼吸道的组织(A:舌,B:喉,C:鼻)。相应于通过凝集素的混合物“UEA-1/GSL-I”进行标记的肿瘤组织的图像呈现出重大数目的癌症干细胞,其通过标记出癌症干细胞的存在的栗色标记(使所述细胞轮廓突出的暗颜色,参见箭头)而突出了轮廓。与肺相似,因此在罹患涉及呼吸道的癌症的患者上,根据全靠处于等摩尔量的凝集素的混合物“UEA-1/GSL-I”的仅仅靶向癌症干细胞的标记的特异性,来确定侵袭性标准。
实施例
实施例1:分离肺癌症干细胞(呼吸道癌症的主导式例子)的实验方案
I.所需材料
试剂和材料
-特异性地对肺癌症干细胞进行标记的独个的经生物素化的凝集素或者经生物素化的凝集素的混合物(从独个的凝集素开始进行制备的,Vector Laboratories)
-CELLection Biotin Binder试剂盒(Invitrogen),其包含通过DNA键与链霉抗生物素蛋白相偶联的磁性珠粒
-磁铁
缓冲液
-Versene(Invitrogen),其包含磷酸缓冲盐水(PBS)和EDTA
-缓冲液1:具有0.1%BSA(牛血清白蛋白)的PBS(没有Ca2+和Mg2+的磷酸缓冲盐水),pH 7.4
-缓冲液2:具有0.1%BSA(牛血清白蛋白)和0.6%柠檬酸钠的PBS(没有Ca2+和Mg2+的磷酸缓冲盐水)
-缓冲液3:具有1%FCS(胎牛血清)、1mM CaCl2和5mM MgCl2的RPMI 1640,pH 7.0-7.4
II.实验的持续时间
-20分钟,用于制备细胞
-20分钟,用于对细胞进行标记
-20分钟,用于温育用珠粒进行标记的细胞
-10分钟,用于回收不富含CSC的悬浮液
-15分钟,用于打断CSC/珠粒连接
-5分钟,用于回收富含目的CSC的悬浮液
-总共:1小时30分钟
III.通过磁力分选的操作方式:
1.制备细胞。在37℃下用Versene使A549细胞系(来源于罹患肺癌的患者的取样物的肺癌永生化细胞系)的细胞从其支持物上脱落10分钟。
2.对细胞进行计数并且在样品中将细胞数目调整至1×107。
3.将细胞悬浮液以300g离心10分钟,然后去除上清液。
4.封闭非特异性位点。添加1mL的缓冲液2。
5.对细胞进行标记。添加10μg的总的凝集素量,以便在多种凝集素之时,每一种的量是相同的。
因此,添加:
-10μg的选自UEA-1、ABA、ACA、榴莲凝素、GSL-I和GSL-II的经生物素化的独个凝集素,或者
-3.33μg的每种凝集素,对于混合物1(UEA-1/ABA/榴莲凝素),或者
-3.33μg的每种凝集素,对于混合物2(UEA-1/ACA/榴莲凝素),或者
-5μg的每种凝集素,对于混合物3(GSL-I/GSL-II),或者
-5μg的每种凝集素,对于混合物4(UEA-1/GSL-I),或者
-6.66μg的UEA-1和3.33μg的GSL-I,对于混合物5,或者
-7.5μg的UEA-1和2.5μg的GSL-I,对于混合物6,或者
-8μg的UEA-1和2μg的GSL-I,对于混合物7。
将在该情况下获得的混合物在4℃下温育10分钟。
6.添加500μL的缓冲液2以便洗涤细胞,并且将悬浮液以300g离心10分钟并去除上清液。
7.添加珠粒。将细胞重悬浮在1mL的缓冲液2中,然后添加25μL的事先经洗涤的与链霉抗生物素蛋白相偶联的磁性珠粒并且借助于缓冲液1进行重悬浮。将混合物在4℃下在轻柔摇动下温育20分钟。
8.回收不富含CSC的悬浮液。在该情况下,将管放置在磁铁上2分钟。被经生物素化的凝集素标记并连接至与链霉抗生物素蛋白相偶联的磁性珠粒的细胞朝磁铁方向沉淀(磁力细胞分选),并且那么与未经标记的细胞分开。然后,通过将管保持放置在磁铁上来取出包含未经标记的细胞的上清液,并且将其保存在Falcon管中。
9.从磁铁上取回在该情况下包含经标记的癌症干细胞的管,添加1mL的缓冲液1,将管通过涡旋振荡进行摇动并且重新放置在磁铁上2分钟,然后再次将上清液保存在与在步骤8中相同的falcon中。重复该步骤两次。
10.借助于200μl的预热至37℃的缓冲液3来重悬浮仍连接至磁性珠粒的经标记的癌症干细胞。添加4μL的由DNA酶I组成的细胞/珠粒连接的切割缓冲液。将该混合物在环境温度下在轻柔摇动下温育15分钟。
11.用移液管剧烈搅动悬浮液5至10次以便促进细胞的释放。
12.回收富含CSC的悬浮液。将管放置在磁铁上2分钟。在该情况下,将磁性珠粒与经标记的癌症干细胞分开,并且将包含经标记的癌症干细胞的上清液转移到包含200μL的预热至37℃的缓冲液3的管中。步骤11和12可以重复再一次以便丰富产量。
这些实验在相似的条件下用下列中的每一种来进行:独个地经生物素化的凝集素(UEA-1、ABA、ACA、榴莲凝素、GSL-I、GSL-II)、两种经生物素化的凝集素的混合物(GSL-I/GSL-II=混合物3;UEA-1/GSL-I=混合物4;2UEA-1/GSL-I=混合物5;3UEA-1/GSL-I=混合物6;4UEA-1/GSL-I=混合物7)或三种经生物素化的凝集素的混合物(UEA-1/ABA/榴莲凝素=混合物1;UEA-1/ACA/榴莲凝素=混合物2)。
这些各种不同试验的结果呈现在图1中。需注意的是,采取了肺的例子来表征属于呼吸道的癌症干细胞。正如这些试验的结果所显示的,使用处于等摩尔量的混合物“UEA1/GSL-I”使得能够分离肺的和更广泛地呼吸道的癌症干细胞,并且这以占优势的方式。
用单独的凝集素GSL-II和单独的凝集素UEA-1以及用混合物3(由处于等摩尔量的凝集素的混合物“GSL-I/GSL-II”组成)、混合物5(由处于2:1的非等摩尔量的凝集素UEA-1和GSL-I的混合物组成)和混合物6(由处于3:1的非等摩尔量的凝集素UEA-1和GSL-I的混合物组成)也获得了良好的结果。
还按照在实施例1中所描述的实验方案进行了喉、咽、口、鼻、喉咙、舌、窦、气管和唾液腺(扁桃体和/或腮腺)的癌症干细胞的分离。所获得的结果与在分离肺癌症干细胞后获得的那些结果相一致。
实施例2:克隆发生测试
克隆发生测试的目标是观察细胞重新形成球的能力(在患者中相应于肿瘤块的重新形成)和因此其增殖能力。
克隆发生测试在本实施例中用于在样品中确认肺癌症干细胞的存在和定量所述细胞,在通过在本发明中所描述的分离方法来分离肺癌症干细胞后。因此,这使得能够证明根据本发明的分离方法的效能,相对于未经历该方法的对照样品(未经分选的细胞)而言。
在6-孔平板中,在补充有50单位/mL的青霉素、50单位/mL的链霉素(Gibco)和2.4g/L的碳酸氢钠、1M的HEPES缓冲液(Sigma Aldrich,Saint-Quentin-Fallavier,France)、1X孕酮(Sigma Aldrich)、1X腐胺(Sigma)、0.025g/mL肝素(Sigma Aldrich)、30%(m/v)葡萄糖(Sigma Aldrich,)、1X生长补充物B27(Invitrogen,Carlsbad,CA)、20ng/mLEGF(Sigma Aldrich)、20ng/mL碱性人FGF(Sigma Aldrich)、1X胰岛素-运铁蛋白-亚硒酸钠补充物(Roche diagnostics,Meylan,France)的复合培养基DMEM(Gibco)中,以500个细胞/cm2的密度进行克隆发生测试。
与对照相反,从在本发明中所描述的富集方法开始分离出的来自牵涉呼吸的器官的癌症的癌症干细胞导致形成球。这是这样的克隆发生测试,其用未经分选的细胞(T-)作为对照,针对通过下列物质进行正分选的细胞:经生物素化的UEA-1(凝集素UEA-1),经生物素化的ABA(凝集素ABA),经生物素化的ACA(凝集素ACA),经生物素化的榴莲凝素(凝集素榴莲凝素),经生物素化的GSL-I(凝集素GSL-I),经生物素化的GSL-II(凝集素GSL-II),经生物素化的凝集素的混合物“UEA-1/榴莲凝素/ABA”(混合物1:处于等摩尔量的UEA-1、榴莲凝素、ABA),经生物素化的凝集素的混合物“UEA-1/榴莲凝素/ACA”(混合物2:处于等摩尔量的UEA-1、榴莲凝素、ACA),和经生物素化的凝集素的混合物“GSL-I/GSL-II”(混合物3:处于等摩尔量的GSL-I和GSL-II),经生物素化的凝集素的混合物“UEA-1/GSL-I”(混合物4:处于等摩尔量的UEA-1和GSL-I),经生物素化的凝集素的混合物“2UEA-1/GSL-I”(混合物5:处于非等摩尔量的UEA-1和GSL-I,UEA-1的量是GSL-I的量的2倍),经生物素化的凝集素的混合物“3UEA-1/GSL-I”(混合物6:处于非等摩尔量的UEA-1和GSL-I,UEA-1的量是GSL-I的量的3倍),和最后,经生物素化的凝集素的混合物“4UEA-1/GSL-I”(混合物7:处于非等摩尔量的UEA-1和GSL-I,UEA-1的量是GSL-I的量的4倍)。因此,根据本发明的方法使得能够获得能够重新形成肿瘤的干细胞(结果未呈现)。
实施例3:在用石蜡处理的组织学切片上凝集素的可见标记:肺部癌症的例子
所使用的材料:石蜡块、冰、切片机、载玻片、具有计算机的BondMax自动机(Leica Microsystems)、Leica消耗品(酒精、洗涤缓冲液、ER1缓冲液、脱蜡缓冲液、标签、盖玻片、管)、PBS-BSA 5%缓冲液、经生物素化的凝集素(UEA-1、榴莲凝素、ABA、ACA、GSL-I和GSL-II)(Vector Lab)、Bond Intense R detection试剂盒(Leica)、Leica封固剂、盖玻片和显微镜。
将包含来源于通过其编号(由病理解剖学部门来给出)来进行辨别的患者中的每一位的肺部癌症取样物的石蜡块放置在冰中大约1小时以便进行冷却,这是为了便于用切片机将其切成5μm的厚度。
所谓的“Superfrost”载玻片(这是为了所切出的组织的最大粘附)通过与存在于石蜡块上的那些相同的编号来进行辨别。将一滴水放置在这些载玻片中的每一个的中央。
用切片机制作切片并放置在预先放下的水滴上。然后,将载玻片安放在处于37℃的加热板上以便促进其粘附,并且撤除过量的水。将所制作的所有载玻片放置在处于37℃的烘箱中以便使其干燥。
操作的后续部分涉及使用与具有操控自动机的软件的计算机相连的Leica的BondMax自动机。
在载玻片在烘箱中时的时间期间,准备整个的免疫组织化学标记操作,其中以检验对于施行该操作来说必需的产品中的每一个在自动机上的水平开始,然后用其相同的编码来辨别载玻片(这在操控自动机的软件上)。产生了允许标准化实验方案的标签。计算了凝集素的稀释度和其量,并且准备了必需的试剂盒。需要注意的是,所使用的产品中的每一个都应当进行扫描,并且在进行每一个实验之前将水平重置为零。
然后,在烘箱的出口处将标签贴在其相应的载玻片上,并且将盖玻片(放置在切片上的塑料部件,其允许全靠接触特性来使所述产品在操作过程中均匀分布在载玻片的整个表面上)放置在每个载玻片上。
将载玻片支架放置在自动机中,并且在由阅读器识别每个部件和通过存在于标签上的其条形码来辨别的载玻片后,开始进行操作。
操作以全靠Leica的Dewax产品的热脱石蜡开始,其然后允许抗体可接近。该步骤以及所有其他步骤随后为洗涤(全靠预先经稀释的Bond Wash 10X),这重复三次。
该步骤随后为用pH=6的柠檬酸盐缓冲液(Leica的ER1缓冲液)预处理5分钟,这使得能够在该简单标记的范围内暴露待到达的抗原,即使得所述抗原可接近。
借助于稀释剂PBS-BSA 5%,将以1/80的经生物素化的凝集素UEA-1和以1/200000的经生物素化的凝集素GSL-I同时放置在切片上20分钟。
全靠起着二抗作用的链霉抗生物素蛋白-HRP的介入的Bond Intense Rdetection试剂盒(Leica)通过其特性而使得能够全靠DAB(酶HRP(辣根过氧化物酶)的底物)的特性来以栗色揭示这些经生物素化的凝集素,从而使得能够揭示生物素/链霉抗生物素蛋白-HRP复合物。
然后,进行全靠苏木精存在的微蓝的对比染色的步骤7分钟,以便使整个取样物可辨别。
将载玻片从自动机上取回。然后,通过以手动方式将载玻片浸入酒精浴中两次(持续5分钟)来使切片再水化。该再水化步骤之后接着还有5分钟的甲苯浴。
此后,可以通过放上一滴封固剂(Leica)来安装载玻片。
最后,用显微镜观察载玻片并且以20的放大倍数拍摄照片。
结果呈现在图2A和2B中。
所获得的结果阐明了本发明的凝集素选择性地对具有肺起源的肿瘤组织的癌症干细胞进行标记的能力。
用处于等摩尔量的经生物素化的凝集素的混合物“UEA-1/GSL-I”对两种肺肿瘤组织进行简单标记使得能够观察到,组织尽管具有相同的病理学状况,但是可以呈现出非常不同的侵袭性标准。
实际上,靶向癌症干细胞的根据本发明的标记物的特异性在此很好地得到了利用,因为在观察第一位患者的具有肺起源的肿瘤组织的情景下,它显示出完全的阴性(在所述细胞周围不存在暗颜色)(显示在图2A中),而在当观察第二位患者的具有肺起源的肿瘤组织时,注意到非常强的阳性(使所述细胞轮廓突出的暗颜色,参见箭头)(图2B)。在救助患者中应当考虑增加的侵袭性(由于存在癌症干细胞)。
实施例4:在用石蜡处理的组织学切片上凝集素的可见标记:喉癌的例子
该实施例显示了用处于等摩尔量的混合物“UEA-1/GSL-I”来对喉肿瘤组织进行标记。所述标记按照在实施例3中所描述的实验方案来施行。
所获得的结果阐明了本发明的凝集素选择性地对喉肿瘤组织的癌症干细胞进行标记的能力。
实际上,图3B显示出非常强的阳性(使所述细胞轮廓突出的暗颜色,参见箭头),在当观察喉肿瘤组织时。在救助患者中应当考虑增加的侵袭性(由于存在癌症干细胞)。
实施例5:在用石蜡处理的组织学切片上凝集素的可见标记:鼻癌的例子
该实施例显示了用处于等摩尔量的混合物“UEA-1/GSL-I”来对来源于鼻的肿瘤组织进行标记。所述标记按照在实施例3中所描述的实验方案来施行。
所获得的结果阐明了本发明的凝集素选择性地对来源于鼻的肿瘤组织的癌症干细胞进行标记的能力。
实际上,图3C显示出非常强的阳性(使所述细胞轮廓突出的暗颜色,参见箭头),在当观察来源于鼻的肿瘤组织时。在救助患者中应当考虑增加的侵袭性(由于存在癌症干细胞)。
实施例6:在用石蜡处理的组织学切片上凝集素的可见标记:舌癌的例子
该实施例显示了用处于等摩尔量的混合物“UEA-1/GSL-I”来对来源于舌的肿瘤组织进行标记。所述标记按照在实施例3中所描述的实验方案来施行。
所获得的结果阐明了本发明的凝集素选择性地对来源于舌的肿瘤组织的癌症干细胞进行标记的能力。
实际上,图3A显示出非常强的阳性(使所述细胞轮廓突出的暗颜色,参见箭头),在当观察来源于舌的肿瘤组织时。在救助患者中应当考虑增加的侵袭性(由于存在癌症干细胞)。
实施例7:在用石蜡处理的组织学切片上凝集素的可见标记:咽癌的例子
该实施例显示了用处于等摩尔量的混合物“UEA-1/GSL-I”来对来源于咽的肿瘤组织进行标记。所述标记按照在实施例3中所描述的实验方案来施行。
所获得的结果阐明了本发明的凝集素选择性地对来源于咽的肿瘤组织的癌症干细胞进行标记的能力。
实施例8:在用石蜡处理的组织学切片上凝集素的可见标记:口腔癌的例子
该实施例显示了用处于等摩尔量的混合物“UEA-1/GSL-I”来对来源于口的肿瘤组织进行标记。所述标记按照在实施例3中所描述的实验方案来施行。
所获得的结果阐明了本发明的凝集素选择性地对来源于口的肿瘤组织的癌症干细胞进行标记的能力。
实施例9:在用石蜡处理的组织学切片上凝集素的可见标记:喉咙癌的例子
该实施例显示了用处于等摩尔量的混合物“UEA-1/GSL-I”来对来源于喉咙的肿瘤组织进行标记。所述标记按照在实施例3中所描述的实验方案来施行。
所获得的结果阐明了本发明的凝集素选择性地对来源于喉咙的肿瘤组织的癌症干细胞进行标记的能力。
实施例10:在用石蜡处理的组织学切片上凝集素的可见标记:气管癌的例子
该实施例显示了用处于等摩尔量的混合物“UEA-1/GSL-I”来对来源于气管的肿瘤组织进行标记。所述标记按照在实施例3中所描述的实验方案来施行。
所获得的结果阐明了本发明的凝集素选择性地对来源于气管的肿瘤组织的癌症干细胞进行标记的能力。
实施例11:在用石蜡处理的组织学切片上凝集素的可见标记:窦癌的例子
该实施例显示了用处于等摩尔量的混合物“UEA-1/GSL-I”来对来源于窦的肿瘤组织进行标记。所述标记按照在实施例3中所描述的实验方案来施行。
所获得的结果阐明了本发明的凝集素选择性地对来源于窦的肿瘤组织的癌症干细胞进行标记的能力。
实施例12:在用石蜡处理的组织学切片上凝集素的可见标记:扁桃体癌(唾液腺癌的例子)的例子
该实施例显示了用处于等摩尔量的混合物“UEA-1/GSL-I”来对来源于扁桃体的肿瘤组织进行标记。所述标记按照在实施例3中所描述的实验方案来施行。
所获得的结果阐明了本发明的凝集素选择性地对来源于扁桃体的肿瘤组织的癌症干细胞进行标记的能力。
实施例13:在用石蜡处理的组织学切片上凝集素的可见标记:腮腺癌(唾液腺癌的例子)的例子
该实施例显示了用处于等摩尔量的混合物“UEA-1/GSL-I”来对来源于腮腺的肿瘤组织进行标记。所述标记按照在实施例3中所描述的实验方案来施行。
所获得的结果阐明了本发明的凝集素选择性地对来源于腮腺的肿瘤组织的癌症干细胞进行标记的能力。
实施例3至13显示,用处于等摩尔量的经生物素化的凝集素的混合物“UEA-1/GSL-I”对属于呼吸道的肿瘤组织进行简单标记使得能够观察到,组织尽管具有相同的病理学状况,但是可以呈现出非常不同的侵袭性标准。在救助患者中应当考虑增加的侵袭性,在呈现出各种各样的癌症病理学状况但均属于呼吸道的这些情况下。
Claims (44)
1.至少一种识别岩藻糖α1-2半乳糖基元的凝集素用于在生物学样品中对牵涉呼吸的器官的癌症干细胞进行标记以获得经标记的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的体外用途。
2.根据权利要求1的体外用途,其中所述岩藻糖α1-2半乳糖基元为岩藻糖α1-2半乳糖β1-4N-乙酰葡糖胺基元。
3.根据权利要求1或2中任一项的体外用途,其中所述至少一种凝集素选自下列凝集素:荆豆凝集素1(UEA-1)或其同源物日本栝楼凝集素II(TJA-II)、双孢蘑菇凝集素(ABA)、尾穗苋凝集素(ACA)、榴莲凝素、GSL-I和GSL-II即单叶格里丰木凝集素I(GSL-I)和单叶格里丰木凝集素II(GSL-II),
尤其是至少两种选自UEA-1或其同源物TJA-II、ABA、ACA、榴莲凝素、GSL-I和GSL-II的凝集素,特别是GSL-I和GSL-II的混合物,或者UEA-1和GSL-I的混合物,
尤其是至少三种选自UEA-1或其同源物TJA-II、ABA、ACA、榴莲凝素、GSL-I和GSL-II的凝集素,特别是UEA-1、榴莲凝素和ABA的混合物,或者UEA-1、榴莲凝素和ACA的混合物。
4.根据权利要求1至3之一的体外用途,其中使用至少两种凝集素,所述至少两种凝集素处于等摩尔量。
5.根据权利要求1至3之一的体外用途,其中使用至少两种凝集素,所述至少两种凝集素处于非等摩尔量。
6.根据权利要求5的体外用途,其中使用两种凝集素,所述2种凝集素是以2:1、3:1或4:1的重量比的处于非等摩尔量的UEA-1和GSL-I。
7.权利要求1至6中任一项的体外用途,其中所述对牵涉呼吸的器官的癌症干细胞进行标记用与选自下列各项的标记物相缀合的凝集素来施行:
-荧光团,其特别地选自罗丹明、FITC或Alexa Fluor,
-放射性同位素,其特别地选自碘125、氚或锝,
-使用生色或发光底物的酶,所述酶特别地选自辣根过氧化物酶(HRP)、碱性磷酸酶、葡萄糖氧化酶或β-半乳糖苷酶,
-金珠粒,或
-生物素。
8.根据权利要求1至7中任一项的体外用途,其中所述对牵涉呼吸的器官的癌症干细胞进行标记用经缀合的凝集素来施行,并且随后为通过检测所述经缀合的凝集素来检测所述经标记的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞。
9.根据权利要求1至8中任一项的体外用途,其中所述用与标记物相缀合的凝集素对牵涉呼吸的器官的癌症干细胞进行标记随后为分离所述经标记的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞,
其中所述标记物为生物素,并且所述分离通过由磁性珠粒构成的用链霉抗生物素蛋白或抗生物素蛋白进行官能化的支持物并且在磁铁存在下来施行,或者
其中所述标记物为荧光团,并且所述分离以流式细胞术来施行。
10.根据权利要求1至9中任一项的体外用途,其中所述生物学样品为牵涉呼吸的器官的生物学样品。
11.根据权利要求1至10中任一项的体外用途,其中所述牵涉呼吸的器官选自肺、喉、咽、口、鼻、喉咙、舌、窦、气管和唾液腺,所述唾液腺包括扁桃体和腮腺。
12.在生物学样品中检测牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的体外方法,所述方法包括下列步骤:
(a)用至少一种识别岩藻糖α1-2半乳糖基元的凝集素对牵涉呼吸的器官的癌症干细胞进行标记以获得其中牵涉呼吸的器官的癌症干细胞被至少一种凝集素标记的生物学样品的步骤,所述凝集素与选自荧光团、放射性同位素、酶、金珠粒或生物素的标记物相缀合,
随后为
(b)检测所述被至少一种凝集素标记的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的步骤。
13.根据权利要求12的体外检测方法,其中所述岩藻糖α1-2半乳糖基元为岩藻糖α1-2半乳糖β1-4N-乙酰葡糖胺基元。
14.根据权利要求12或13中任一项的体外检测方法,其中所述至少一种凝集素选自下列凝集素:UEA-1或其同源物TJA-II、ABA、ACA、榴莲凝素、GSL-I和GSL-II,
尤其是至少两种选自UEA-1或其同源物TJA-II、ABA、ACA、榴莲凝素、GSL-I和GSL-II的凝集素,特别是GSL-I和GSL-II的混合物,或者UEA-1和GSL-I的混合物,
尤其是至少三种选自UEA-1或其同源物TJA-II、ABA、ACA、榴莲凝素、GSL-I和GSL-II的凝集素,特别是UEA-1、榴莲凝素和ABA的混合物,或者UEA-1、榴莲凝素和ACA的混合物。
15.根据权利要求12至14之一的体外检测方法,其中使用至少两种凝集素,所述至少两种凝集素处于等摩尔量。
16.根据权利要求12至14之一的体外检测方法,其中使用至少两种凝集素,所述至少两种凝集素处于非等摩尔量。
17.根据权利要求16的体外检测方法,其中使用两种凝集素,所述2种凝集素是以2:1、3:1或4:1的重量比的处于非等摩尔量的UEA-1和GSL-I。
18.根据权利要求12至17中任一项的体外检测方法,其中所述生物学样品为牵涉呼吸的器官的生物学样品。
19.根据权利要求12至18中任一项的体外检测方法,其中所述牵涉呼吸的器官选自肺、喉、咽、口、鼻、喉咙、舌、窦、气管和唾液腺,所述唾液腺包括扁桃体和腮腺。
20.在生物学样品中分离牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的体外方法,所述方法包括下列步骤:
(a)用至少一种识别岩藻糖α1-2半乳糖基元的凝集素对牵涉呼吸的器官的癌症干细胞进行标记以获得其中牵涉呼吸的器官的癌症干细胞被至少一种凝集素标记的生物学样品的步骤,所述凝集素与生物素或与荧光团相缀合,
随后为
(b)分离所述被至少一种凝集素标记的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的步骤,
当将所述凝集素与生物素相缀合时,所述分离步骤通过由磁性珠粒构成的用链霉抗生物素蛋白或抗生物素蛋白进行官能化的支持物并且在磁铁存在下来施行,
和当将所述凝集素与荧光团相缀合时,所述分离步骤通过以流式细胞术的细胞分选来施行。
21.根据权利要求20的体外分离方法,其中所述岩藻糖α1-2半乳糖基元为岩藻糖α1-2半乳糖β1-4N-乙酰葡糖胺基元。
22.根据权利要求20或21中任一项的体外分离方法,其中所述至少一种凝集素选自下列凝集素:UEA-1或其同源物TJA-II、ABA、ACA、榴莲凝素、GSL-I和GSL-II,
尤其是至少两种选自UEA-1或其同源物TJA-II、ABA、ACA、榴莲凝素、GSL-I和GSL-II的凝集素,特别是GSL-I和GSL-II的混合物,或者UEA-1和GSL-I的混合物,
尤其是至少三种选自UEA-1或其同源物TJA-II、ABA、ACA、榴莲凝素、GSL-I和GSL-II的凝集素,特别是UEA-1、榴莲凝素和ABA的混合物,或者UEA-1、榴莲凝素和ACA的混合物。
23.根据权利要求20至22之一的体外分离方法,其中使用至少两种凝集素,所述至少两种凝集素处于相等的量或不等的量。
24.根据权利要求20至22之一的体外分离方法,其中使用至少两种凝集素,所述至少两种凝集素处于非等摩尔量。
25.根据权利要求24的体外分离方法,其中使用两种凝集素,所述2种凝集素是以2:1、3:1或4:1的重量比的处于非等摩尔量的UEA-1和GSL-I。
26.根据权利要求20至25中任一项的体外分离方法,其中所述生物学样品为牵涉呼吸的器官的生物学样品。
27.根据权利要求20至26中任一项的体外分离方法,其中所述牵涉呼吸的器官选自肺、喉、咽、口、鼻、喉咙、舌、窦、气管和唾液腺,所述唾液腺包括扁桃体和腮腺。
28.在体外诊断牵涉呼吸的器官的癌症的复发风险和/或牵涉呼吸的器官的癌症的侵袭性以确定用于牵涉呼吸的器官的癌症的治疗适应调整的预后值的方法,所述方法包括用至少一种识别岩藻糖α1-2半乳糖基元的凝集素对牵涉呼吸的器官的生物学样品的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞进行标记以在所述样品中获得被至少一种凝集素标记的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的步骤。
29.根据权利要求28的诊断方法,所述方法包括下列步骤:
(a)用至少一种识别岩藻糖α1-2半乳糖基元的凝集素对牵涉呼吸的器官的癌症干细胞进行标记以在所述生物学样品中获得被至少一种凝集素标记的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞,所述凝集素与选自荧光团或生物素的标记物相缀合;
(b)分离被所述至少一种经缀合的凝集素标记的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞:
-当用与生物素相缀合的凝集素进行标记时,所述分离通过用链霉抗生物素蛋白或抗生物素蛋白进行官能化的支持物来进行,特别地所述经官能化的支持物由用链霉抗生物素蛋白或抗生物素蛋白进行官能化的磁性珠粒构成并且所述分离通过在磁铁存在下的磁力细胞分选来进行,或者
-当用与荧光团相缀合的凝集素进行标记时,所述分离通过以流式细胞术的细胞分选来进行;
(c)用至少一种识别岩藻糖α1-2半乳糖基元的凝集素对经分离的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞进行再次标记以获得经分离和经标记的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞,所述凝集素与选自荧光团、放射性同位素、酶、金珠粒或生物素的标记物相缀合;
(d)通过下列方式来检测所述经分离和经标记的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞:
-荧光显微术或荧光阅读器,当所述凝集素与荧光团相缀合时,或者当所述凝集素与生物素相缀合并且通过与链霉抗生物素蛋白或与抗生物素蛋白相缀合的荧光团来进行检测时;
-发光显微术或发光阅读器,当所述凝集素与使用化学发光底物的酶相缀合时,或者当所述凝集素与生物素相缀合并且通过与链霉抗生物素蛋白或与抗生物素蛋白相缀合的使用化学发光底物的酶来进行检测时;
-γ照相机,当所述凝集素与放射性同位素相缀合时,或者当所述凝集素与生物素相缀合并且通过与链霉抗生物素蛋白或与抗生物素蛋白相缀合的放射性同位素来进行检测时;
-UV/可见光显微术或吸光阅读器,当所述凝集素与使用生色底物的酶相缀合时,或者当所述凝集素与生物素相缀合并且通过与链霉抗生物素蛋白或与抗生物素蛋白相缀合的使用生色底物的酶来进行检测时;
-电子显微术,当所述凝集素与金珠粒相缀合,或者当所述凝集素与生物素相缀合并且通过与链霉抗生物素蛋白或与抗生物素蛋白相缀合的金珠粒来进行检测时;
(e)任选地,定量牵涉呼吸的器官的癌症干细胞;
(f)将在所述生物学样品中的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的检测强度与在邻近所述生物学样品的健康样品中的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的检测强度进行比较,
和任选地,将在所述生物学样品中的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的定量与在邻近所述生物学样品的健康样品中的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的定量进行比较;
(g)从牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的存在和任选地数量开始来推断牵涉呼吸的器官的癌症的复发风险和/或牵涉呼吸的器官的癌症的侵袭性以确定用于牵涉呼吸的器官的癌症的治疗适应调整的预后值。
30.根据权利要求28的诊断方法,所述方法包括下列步骤:
(a)用至少一种识别岩藻糖α1-2半乳糖基元的凝集素对牵涉呼吸的器官的癌症干细胞进行标记以在所述生物学样品中获得被至少一种凝集素标记的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞,所述凝集素与选自荧光团、放射性同位素、酶、金珠粒或生物素的标记物相缀合;
(b)通过下列方式来检测所述经标记的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞:
-荧光显微术或荧光阅读器,当所述凝集素与荧光团相缀合时,或者当所述凝集素与生物素相缀合并且通过与链霉抗生物素蛋白或与抗生物素蛋白相缀合的荧光团来进行检测时;
-发光显微术或发光阅读器,当所述凝集素与使用化学发光底物的酶相缀合时,或者当所述凝集素与生物素相缀合并且通过与链霉抗生物素蛋白或与抗生物素蛋白相缀合的使用化学发光底物的酶来进行检测时;
-γ照相机,当所述凝集素与放射性同位素相缀合时,或者当所述凝集素与生物素相缀合并且通过与链霉抗生物素蛋白或与抗生物素蛋白相缀合的放射性同位素来进行检测时;
-UV/可见光显微术或吸光阅读器,当所述凝集素与使用生色底物的酶相缀合时,或者当所述凝集素与生物素相缀合并且通过与链霉抗生物素蛋白或与抗生物素蛋白相缀合的使用生色底物的酶来进行检测时;
-电子显微术,当所述凝集素与金珠粒相缀合,或者当所述凝集素与生物素相缀合并且通过与链霉抗生物素蛋白或与抗生物素蛋白相缀合的金珠粒来进行检测时;
(c)任选地,定量牵涉呼吸的器官的癌症干细胞;
(d)将在所述生物学样品中的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的检测强度与在邻近所述生物学样品的健康样品中的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的检测强度进行比较,
和任选地,将在所述生物学样品中的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的定量与在邻近所述生物学样品的健康样品中的牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的定量进行比较;
(e)从牵涉呼吸的器官的癌症干细胞的存在和任选地数量开始来推断牵涉呼吸的器官的癌症的复发风险和/或牵涉呼吸的器官的癌症的侵袭性以确定用于牵涉呼吸的器官的癌症的治疗适应调整的预后值。
31.根据权利要求28至30中任一项的诊断方法,其中所述岩藻糖α1-2半乳糖基元为岩藻糖α1-2半乳糖β1-4N-乙酰葡糖胺基元。
32.根据权利要求28至31中任一项的诊断方法,其中所述至少一种凝集素选自下列凝集素:UEA-1或其同源物TJA-II、ABA、ACA、榴莲凝素、GSL-I和GSL-II,
尤其是至少两种选自UEA-1或其同源物TJA-II、ABA、ACA、榴莲凝素、GSL-I和GSL-II的凝集素,特别是GSL-I和GSL-II的混合物,或者UEA-1和GSL-I的混合物,
尤其是至少三种选自UEA-1或其同源物TJA-II、ABA、ACA、榴莲凝素、GSL-I和GSL-II的凝集素,特别是UEA-1、榴莲凝素和ABA的混合物,或者UEA-1、榴莲凝素和ACA的混合物。
33.根据权利要求28至32之一的诊断方法,其中使用至少两种凝集素,所述至少两种凝集素处于相等的量或不等的量。
34.根据权利要求28至32之一的诊断方法,其中使用至少两种凝集素,所述至少两种凝集素处于非等摩尔量。
35.根据权利要求34的诊断方法,其中使用两种凝集素,所述2种凝集素是以2:1、3:1或4:1的重量比的处于非等摩尔量的UEA-1和GSL-I。
36.根据权利要求28至35中任一项的诊断方法,其中所述生物学样品为牵涉呼吸的器官的生物学样品。
37.根据权利要求28至36中任一项的诊断方法,其中所述牵涉呼吸的器官选自肺、喉、咽、口、鼻、喉咙、舌、窦、气管和唾液腺,所述唾液腺包括扁桃体和腮腺。
38.根据权利要求28至36中任一项的诊断方法,其中所述癌症选自肺癌、喉癌、咽癌、口腔癌、鼻癌、喉咙癌、舌癌、窦癌、气管癌和唾液腺癌例如扁桃体癌和/或腮腺癌。
39.用于在体外诊断牵涉呼吸的器官的癌症的复发风险和/或牵涉呼吸的器官的癌症的侵袭性以确定用于牵涉呼吸的器官的癌症的治疗适应调整的预后值的试剂盒,所述试剂盒
包含至少一种识别岩藻糖α1-2半乳糖基元的凝集素,所述凝集素与生物素相缀合,和用链霉抗生物素蛋白进行官能化的磁性珠粒,和任选地,至少一种与荧光团、放射性同位素、酶或金珠粒相缀合的识别岩藻糖α1-2半乳糖基元的凝集素,或者
包含至少一种识别岩藻糖α1-2半乳糖基元的凝集素,所述凝集素与荧光团相缀合,和任选地,至少一种与生物素、放射性同位素、酶或金珠粒相缀合的识别岩藻糖α1-2半乳糖基元的凝集素。
40.根据权利要求39的诊断试剂盒,其中所述岩藻糖α1-2半乳糖基元为岩藻糖α1-2半乳糖β1-4N-乙酰葡糖胺基元。
41.根据权利要求39或40中任一项的诊断试剂盒,其中所述至少一种凝集素选自下列凝集素:UEA-1或其同源物TJA-II、ABA、ACA、榴莲凝素、GSL-I和GSL-II,
尤其是至少两种选自UEA-1或其同源物TJA-II、ABA、ACA、榴莲凝素、GSL-I和GSL-II的凝集素,特别是GSL-I和GSL-II的混合物,或者UEA-1和GSL-I的混合物,
尤其是至少三种选自UEA-1或其同源物TJA-II、ABA、ACA、榴莲凝素、GSL-I和GSL-II的凝集素,特别是UEA-1、榴莲凝素和ABA的混合物,或者UEA-1、榴莲凝素和ACA的混合物。
42.根据权利要求40至41之一的诊断试剂盒,其中使用至少两种凝集素,所述至少两种凝集素处于相等的量或不等的量。
43.根据权利要求40至41之一的诊断试剂盒,其中使用至少两种凝集素,所述至少两种凝集素处于非等摩尔量。
44.根据权利要求43的诊断试剂盒,其中使用两种凝集素,所述2种凝集素是以2:1、3:1或4:1的重量比的处于非等摩尔量的UEA-1和GSL-I。
Applications Claiming Priority (5)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
FR17/55137 | 2017-06-08 | ||
FR1755137 | 2017-06-08 | ||
FR17/55139 | 2017-06-08 | ||
FR1755139A FR3067466B1 (fr) | 2017-06-08 | 2017-06-08 | Methode d'isolement et de detection de cellules souches cancereuses |
PCT/FR2018/051280 WO2018224761A1 (fr) | 2017-06-08 | 2018-06-01 | Methode d'isolement et de detection de cellules souches cancereuses |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN111344570A true CN111344570A (zh) | 2020-06-26 |
Family
ID=62791767
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201880051345.6A Pending CN111344570A (zh) | 2017-06-08 | 2018-06-01 | 分离和检测癌症干细胞的方法 |
Country Status (6)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20210080463A1 (zh) |
EP (1) | EP3635399A1 (zh) |
JP (1) | JP2020523612A (zh) |
CN (1) | CN111344570A (zh) |
CA (1) | CA3066507A1 (zh) |
WO (1) | WO2018224761A1 (zh) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN113288052A (zh) * | 2021-05-09 | 2021-08-24 | 华中科技大学同济医学院附属协和医院 | 一种通过fitc-uea1标记探查消化道肿瘤的方法 |
Families Citing this family (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
FR3078781B1 (fr) * | 2018-03-08 | 2021-01-08 | Carcidiag Biotechnologies | Methode d'isolement et de detection de cellules souches cancereuses |
WO2023107830A1 (en) * | 2021-12-06 | 2023-06-15 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Amyloid oligomer compositions |
Citations (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1554021A (zh) * | 2001-08-03 | 2004-12-08 | 新的癌标记物及其在癌症诊断中的用途 | |
CN1926242A (zh) * | 2004-02-13 | 2007-03-07 | 格莱克托普有限公司 | 高活性糖蛋白加工条件及其有效生产方法 |
US20090035792A1 (en) * | 2006-09-21 | 2009-02-05 | Prometheus Laboratories Inc. | Drug selection for lung cancer therapy using antibody-based arrays |
CN102175879A (zh) * | 2011-01-19 | 2011-09-07 | 西北大学 | 一种在唾液、血清和尿液中检测肝肿瘤的替代生物标志物的方法 |
CN102317785A (zh) * | 2009-02-04 | 2012-01-11 | 国立大学法人东京工业大学 | Psa的分析方法、以及使用上述分析方法的前列腺癌和前列腺肥大症的鉴别方法 |
US20120282612A1 (en) * | 2009-10-30 | 2012-11-08 | Konica Minolta Holdings, Inc. | Method for analyzing psa, and a method for distinguishing prostate cancer from prostatic hypertrophy using that method for analyzing psa |
CN103087979A (zh) * | 2011-10-28 | 2013-05-08 | 李福生 | 用于富集、提纯干细胞的方法、试剂盒及其应用方法 |
US20140010886A1 (en) * | 2011-04-07 | 2014-01-09 | Georgia Tech Research Corporation | Compositions comprising saccharide binding moieties and methods for targeted therapy |
US20150147765A1 (en) * | 2013-11-28 | 2015-05-28 | Korea Basic Science Institute | Serological markers for cancer diagnosis using blood sample |
Family Cites Families (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1999041613A1 (en) * | 1998-02-12 | 1999-08-19 | Immunivest | Methods and reagents for the rapid and efficient isolation of circulating cancer cells |
CA2447400A1 (en) * | 2003-09-12 | 2005-03-12 | The Hospital For Sick Children | Brain tumor stem cells |
FR2896881B1 (fr) * | 2006-01-31 | 2008-04-18 | Biomerieux Sa | Procede de dosage du prongf pour le diagnostic in vitro du cancer du sein et utilisation du prongf en therapie |
US20100104572A1 (en) * | 2006-11-02 | 2010-04-29 | Sylvie Luria | Methods for screening for therapeutic molecules and use of the molecules therefrom |
US20100234762A1 (en) * | 2009-02-27 | 2010-09-16 | Gary Pond | Compositions and methods for detecting oral neoplasm |
SG168430A1 (en) * | 2009-07-22 | 2011-02-28 | Agency Science Tech & Res | Molecular signature of human lung cancer initiating cells |
-
2018
- 2018-06-01 EP EP18735659.7A patent/EP3635399A1/fr active Pending
- 2018-06-01 US US16/620,235 patent/US20210080463A1/en active Pending
- 2018-06-01 CN CN201880051345.6A patent/CN111344570A/zh active Pending
- 2018-06-01 CA CA3066507A patent/CA3066507A1/fr active Pending
- 2018-06-01 JP JP2020518583A patent/JP2020523612A/ja active Pending
- 2018-06-01 WO PCT/FR2018/051280 patent/WO2018224761A1/fr unknown
Patent Citations (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1554021A (zh) * | 2001-08-03 | 2004-12-08 | 新的癌标记物及其在癌症诊断中的用途 | |
CN1926242A (zh) * | 2004-02-13 | 2007-03-07 | 格莱克托普有限公司 | 高活性糖蛋白加工条件及其有效生产方法 |
US20090035792A1 (en) * | 2006-09-21 | 2009-02-05 | Prometheus Laboratories Inc. | Drug selection for lung cancer therapy using antibody-based arrays |
CN102317785A (zh) * | 2009-02-04 | 2012-01-11 | 国立大学法人东京工业大学 | Psa的分析方法、以及使用上述分析方法的前列腺癌和前列腺肥大症的鉴别方法 |
US20120282612A1 (en) * | 2009-10-30 | 2012-11-08 | Konica Minolta Holdings, Inc. | Method for analyzing psa, and a method for distinguishing prostate cancer from prostatic hypertrophy using that method for analyzing psa |
CN102175879A (zh) * | 2011-01-19 | 2011-09-07 | 西北大学 | 一种在唾液、血清和尿液中检测肝肿瘤的替代生物标志物的方法 |
US20140010886A1 (en) * | 2011-04-07 | 2014-01-09 | Georgia Tech Research Corporation | Compositions comprising saccharide binding moieties and methods for targeted therapy |
CN103087979A (zh) * | 2011-10-28 | 2013-05-08 | 李福生 | 用于富集、提纯干细胞的方法、试剂盒及其应用方法 |
US20150147765A1 (en) * | 2013-11-28 | 2015-05-28 | Korea Basic Science Institute | Serological markers for cancer diagnosis using blood sample |
Non-Patent Citations (4)
Title |
---|
CAROL TUCKER-BURDEN等: "Lectins Identify Glycan Biomarkers on Glioblastoma-Derived Cancer Stem Cells" * |
KAZUHIKO SHINAGAWA等: "Rapid isolation of homogeneous murine bronchoalveolar lavage fluid eosinophils by differential lectin affinity interaction and negative selection" * |
STEFAN GAUNITZ等: "Mucin-type proteins produced in the Trichoplusia ni and Spodoptera frugiperda insect cell lines carry novel O-glycans with phosphocholine and sulfate substitutions" * |
TATIANA POCHECHUEVA等: "Tumor-Associated Glycans and Their Role in Gynecological Cancers: Accelerating Translational Research by Novel High- Throughput Approaches" * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN113288052A (zh) * | 2021-05-09 | 2021-08-24 | 华中科技大学同济医学院附属协和医院 | 一种通过fitc-uea1标记探查消化道肿瘤的方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
WO2018224761A1 (fr) | 2018-12-13 |
US20210080463A1 (en) | 2021-03-18 |
CA3066507A1 (fr) | 2018-12-13 |
EP3635399A1 (fr) | 2020-04-15 |
JP2020523612A (ja) | 2020-08-06 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
KR101604649B1 (ko) | 혈액 내 순환 흑색종 세포의 자동화된 계산 및 특징화 | |
Wu et al. | Nanosphere-based one-step strategy for efficient and nondestructive detection of circulating tumor cells | |
CN104094116B (zh) | 在哺乳动物个体中检测5t4阳性循环肿瘤细胞的方法和诊断5t4阳性癌症的方法 | |
CN111344570A (zh) | 分离和检测癌症干细胞的方法 | |
KR0141608B1 (ko) | 폐암의 조기 검출 방법 및 키트 | |
US10267802B2 (en) | Methods of prognosis and diagnosis of ovarian cancer | |
US20200278347A1 (en) | Isolation of cells of epithelial origin circulating in peripheral blood | |
CN108179134A (zh) | 基于EpCAM/PSMA双抗体功能化微流控芯片及其制备方法和应用 | |
CN105899673A (zh) | 作为子宫颈癌和存活期的生物标记物的角蛋白 | |
CN105925719A (zh) | 与肝癌分化相关的基因及其应用 | |
CN108727495A (zh) | 前列腺癌干细胞标志物、抗体ov6在制备前列腺癌干细胞标记材料中的应用及标记方法 | |
CN110846414A (zh) | 一种卵巢癌的预后诊断标志物组合及其应用 | |
Innaro et al. | Minimal residual disease assessment of papillary thyroid carcinoma through circulating tumor cell‐based cytology | |
Lim et al. | Expression of cancer stem cell marker during 4-nitroquinoline 1-oxide-induced rat tongue carcinogenesis | |
JP2013535688A (ja) | 肝移植における寛容性の診断及び/又は予後のための方法およびキット | |
JP2018538550A (ja) | 癌幹細胞を検出する方法 | |
Alqualo et al. | Molecular biomarkers in prostate cancer tumorigenesis and clinical relevance | |
Balan et al. | Immunohistochemical significance of ER alpha, inhibin A, calretinin, and Ki67 expression in granulosa cell ovarian tumors | |
US20170029898A1 (en) | Novel method for screening for prostate cancer | |
US20210052697A1 (en) | Method for isolating and detecting cancer stem cells | |
US20140275292A1 (en) | Systems and methods employing human stem cell markers for detection, diagnosis and treatment of circulating tumor cells | |
CN104740649B (zh) | Plekha5在制备肿瘤诊断试剂中的应用 | |
CN108732352A (zh) | 一种联合检测五种生物标志物抗体用于检测乳腺癌的方法 | |
JPWO2018101328A1 (ja) | 診療補助情報の取得方法 | |
WO2024098369A1 (zh) | 一种基于dna六面体的帕金森病体外诊断试剂盒及其应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20200626 |