CN111323574A - 一种基于等离子光学纳米孔增强免疫比浊的含量测定方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种基于等离子光学纳米孔增强免疫比浊的含量测定方法，包括：第一步骤：将第一试剂与待测样品混合，加入多孔微孔板中，其中多孔微孔板中配置有纳米光学传感器芯片；第二步骤：利用酶标仪在预定波长范围内测定多孔微孔板中的混合物反应体系的第一浊度变化曲线；第三步骤：将第二试剂加入多孔微孔板内的溶液中；第四步骤：利用酶标仪在所述预定波长范围内测定第三步骤的混合物反应体系的第二浊度变化曲线；第五步骤：获取表示在第一试剂和第二试剂中待测物标准品的含量与浊度变化之间的关系的标准曲线；第六步骤：将第二步骤所获得的第一浊度变化曲线和第四步骤所获得的第二浊度变化曲线，与标准曲线进行比较，以获得待测物的含量。
Description
技术领域
本发明涉及属于生物技术领域，具体涉及一种基于等离子光学纳米孔增强免疫比浊的含量测定方法。
背景技术
在生物和化学领域，经常需要测定诸如C反应蛋白(CRP)、免疫球蛋白(IgG/IgA/IgM)、载脂蛋白、铁蛋白、纤维蛋白原、癌胚胎抗原、补体C4\D-二聚体之类的物质的含量测定。
然而，现有的含量测定方法要么成本较高，要么精度不够高，或者测定操作复杂。
由此，希望能够提供一种操作简单且精度高的低成本方案。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是针对现有技术中存在上述缺陷，提供一种操作简单且精度高的低成本的基于等离子光学纳米孔增强免疫比浊的含量测定方法。
根据本发明，提供了一种基于等离子光学纳米孔增强免疫比浊的含量测定方法，包括：
第一步骤：将第一试剂与待测样品混合，加入多孔微孔板中，其中多孔微孔板中配置有纳米光学传感器芯片；
第二步骤：利用酶标仪在预定波长范围内测定多孔微孔板中的混合物反应体系的第一浊度变化曲线；
第三步骤：将第二试剂加入多孔微孔板内的溶液中；
第四步骤：利用酶标仪在所述预定波长范围内测定第三步骤的混合物反应体系的第二浊度变化曲线；
第五步骤：获取表示在第一试剂和第二试剂中待测物标准品的含量与浊度变化之间的关系的标准曲线；
第六步骤：将第二步骤所获得的第一浊度变化曲线和第四步骤所获得的第二浊度变化曲线，与标准曲线进行比较，以获得待测物的含量。
根据本发明，还提供了一种基于等离子光学纳米孔增强免疫比浊的含量测定方法，包括：
第一步骤：将第一试剂与待测样品混合，加入多孔微孔板中，其中多孔微孔板中配置有纳米光学传感器芯片；
第二步骤：将第二试剂加入多孔微孔板内的溶液中；
第三步骤：：利用酶标仪在预定波长范围内测定第二步骤的混合物反应体系的浊度变化速率曲线；
第四步骤：获取表示在第一试剂和第二试剂中待测物标准品的含量与浊度变化速率之间的关系的标准曲线；
第五步骤：将第三步骤所获得的浊度变化速率曲线与标准曲线进行比较，以获得待测物的含量。
优选地，第一试剂是反应缓冲液20-100mM、反应促聚集剂、防腐剂和表面活性剂的混合剂，且第一试剂R1的PH值介于7.0-8.0之间。
优选地，第一试剂的反应缓冲液是PBS Tris-HCl缓冲溶液、MES缓冲溶液、HEPES缓冲溶液、甘氨酸缓冲溶液、醋酸缓冲溶液以及DIPSO缓冲溶液中的一种或者其中多种的混合物。
优选地，第一试剂的反应促聚集剂是PEG5000、PEG6000、PEG8000以及PEG12000中的一种或者其中多种的混合物，含量优选为0.5％-5％(w/v)。
优选地，第一试剂的防腐剂是Proclin-300、庆大霉素或者是NaN3中的一种或者其中多种的混合物，含量优选为0.1％-0.5％(w/v)。
优选地，第一试剂的表面活性剂是Tween20、TritonX-100以及Tergitol NP9中的一种或者其中多种的混合物，含量优选为0.1％-2％(w/v)。
优选地，第二试剂的原料配方如下：羊抗人CRP多克隆抗体、缓冲液、防腐剂和表面活性剂的混合剂，而且第二试剂R2的PH值介于7.0-8.0之间。
优选地，第二试剂的反应缓冲液具体为PBS缓冲溶液、Tris-HCl缓冲溶液、MES缓冲溶液、HEPES缓冲溶液、甘氨酸缓冲溶液、醋酸缓冲溶液以及DIPSO缓冲溶液中的一种或者其中多种的混合物，含量为20-100mM；第二试剂的防腐剂具体为Proclin-300、庆大霉素或者是NaN3，含量为0.1％-0.5％(w/v)；第二试剂的表面活性剂具体为Tween20、TritonX-100以及Tergitol NP9中的一种或者其中多种的混合物，含量为0.1％-2％(w/v)。
优选地，预定波长范围是560-600nm。
根据本发明的等离子光学纳米孔增强免疫比浊的含量测定方法利用纳米等离子光学共振作用对光学信号放大，从而使该含量测定方法更灵敏，更稳定，可改善重复性和降低最低检测限至1ng/ml以下；且通过改变第一试剂R1和第二试剂R2的处方比例，可提高线性范围。本发明的等离子光学纳米孔增强免疫比浊的含量测定方法具有灵敏度高、检测上线宽、检测速度快、操作简单，稳定性好，可循环利用，生产成本低，可在普通酶标仪上进行测定等优点。
附图说明
结合附图，并通过参考下面的详细描述，将会更容易地对本发明有更完整的理解并且更容易地理解其伴随的优点和特征，其中：
图1示意性地示出了根据本发明优选实施例的基于等离子光学纳米孔增强免疫比浊的含量测定方法的示意图。
需要说明的是，附图用于说明本发明，而非限制本发明。注意，表示结构的附图可能并非按比例绘制。并且，附图中，相同或者类似的元件标有相同或者类似的标号。
具体实施方式
为了使本发明的内容更加清楚和易懂，下面结合具体实施例和附图对本发明的内容进行详细描述。
图1示意性地示出了根据本发明优选实施例的基于等离子光学纳米孔增强免疫比浊的含量测定方法的示意图。如图1所示，根据本发明的等离子光学纳米孔增强免疫比浊的含量测定方法采用搭载有新型纳米光学传感器芯片的多孔微孔板(例如，96孔微孔板)，等离子光学纳米孔增强免疫比浊的测定试剂包括第一试剂R1以及第二试剂R2，该等离子光学纳米孔增强免疫比浊的含量测定方法可用于多种蛋白、抗原等检测，而且尤其有利于C反应蛋白的测定试剂。根据本发明的等离子光学纳米孔增强免疫比浊的含量测定方法利用纳米等离子光学共振作用对光学信号放大，从而使该含量测定方法更灵敏，更稳定，可改善重复性和降低最低检测限至1ng/ml以下；且通过改变第一试剂R1和第二试剂R2的处方比例，可提高线性范围。本发明的等离子光学纳米孔增强免疫比浊的含量测定方法具有灵敏度高、检测上线宽、检测速度快、操作简单，稳定性好，可循环利用，生产成本低，可在普通酶标仪上进行测定等优点。
下面参考图1来描述本发明的第一优选实施例和第二优选实施例。
<第一实施例>
根据本发明第一优选实施例的基于等离子光学纳米孔增强免疫比浊的含量测定方法采用终点法。
具体地说，根据本发明第一优选实施例的基于等离子光学纳米孔增强免疫比浊的含量测定方法包括：
第一步骤：将第一试剂R1与待测样品混合，加入多孔微孔板(例如，96孔微孔板)中，其中多孔微孔板中配置有纳米光学传感器芯片；例如，在容器中将第一试剂R1与待测样品的混合液在37摄氏度下摇晃或静置5分钟以进行混合。
第二步骤：利用酶标仪在预定波长范围(例如560-600nm，优选565nm和580nm波长处)内测定多孔微孔板中的混合物反应体系的第一浊度变化曲线；
第三步骤：将第二试剂R2加入多孔微孔板内的溶液中；例如，在37摄氏度下使得第二试剂R2与多孔微孔板内的溶液摇晃或静置5分钟；
第四步骤：利用酶标仪在所述预定波长范围(例如560-600nm，优选565nm和580nm波长处)内测定第三步骤的混合物反应体系的第二浊度变化曲线；
第五步骤：获取表示在第一试剂R1和第二试剂R2中待测物标准品的含量(浓度)与浊度变化之间的关系的标准曲线；在此，可以通过实验或者查找现有资料的方式获取标准曲线；
第六步骤：将第二步骤所获得的第一浊度变化曲线和第四步骤所获得的第二浊度变化曲线，与标准曲线进行比较，以获得待测物的含量。
<第二实施例>
根据本发明第二优选实施例的基于等离子光学纳米孔增强免疫比浊的含量测定方法采用速率法。
具体地说，根据本发明第二优选实施例的基于等离子光学纳米孔增强免疫比浊的含量测定方法包括：
第一步骤：将第一试剂R1与待测样品混合，加入多孔微孔板(例如，96孔微孔板)中，其中多孔微孔板中配置有纳米光学传感器芯片；例如，在容器中将第一试剂R1与待测样品的混合液在37摄氏度下摇晃或静置5分钟以进行混合。
第二步骤：将第二试剂R2加入多孔微孔板内的溶液中；
第三步骤：：利用酶标仪在预定波长范围(例如560-600nm，优选565nm和580nm波长处)内测定第二步骤的混合物反应体系的浊度变化速率曲线；
第四步骤：获取表示在第一试剂R1和第二试剂R2中待测物标准品的含量(浓度)与浊度变化速率之间的关系的标准曲线；在此，可以通过实验或者查找现有资料的方式获取标准曲线；
第五步骤：将第三步骤所获得的浊度变化速率曲线与标准曲线进行比较，以获得待测物的含量。
<第一试剂R1的具体示例>
在优选示例中，第一试剂R1的处方组成如下：反应缓冲液20-100mM、反应促聚集剂、防腐剂和表面活性剂的混合剂，且第一试剂R1的PH值介于7.0-8.0之间。
例如，第一试剂的反应缓冲液是PBS Tris-HCl缓冲溶液、MES缓冲溶液、HEPES缓冲溶液、甘氨酸缓冲溶液、醋酸缓冲溶液以及DIPSO缓冲溶液中的一种或者其中多种的混合物。
例如，第一试剂的反应促聚集剂是PEG5000、PEG6000、PEG8000以及PEG12000中的一种或者其中多种的混合物，含量优选为0.5％-5％(w/v)。
例如，第一试剂的防腐剂是Proclin-300、庆大霉素或者是NaN3中的一种或者其中多种的混合物，含量优选为0.1％-0.5％(w/v)。
例如，第一试剂的表面活性剂是Tween20、TritonX-100以及Tergitol NP9中的一种或者其中多种的混合物，含量优选为0.1％-2％(w/v)。
该类型的第一试剂尤其有利于C反应蛋白的测定。
<第二试剂R2的具体示例>
在优选示例中，第二试剂R2的原料配方如下：羊抗人CRP多克隆抗体、缓冲液、防腐剂和表面活性剂的混合剂，而且第二试剂R2的PH值介于7.0-8.0之间。
例如，第二试剂R2的缓冲液的含量为20-100mM。
例如，第二试剂R2的防腐剂的含量为0.1％-0.5％(w/v)。
例如，第二试剂R2的表面活性剂的含量为0.1％-2％(w/v)。
例如，第二试剂R2的反应缓冲液具体为PBS缓冲溶液、Tris-HCl缓冲溶液、MES缓冲溶液、HEPES缓冲溶液、甘氨酸缓冲溶液、醋酸缓冲溶液以及DIPSO缓冲溶液中的一种或者其中多种的混合物。
例如，第二试剂R2的防腐剂具体为Proclin-300、庆大霉素或者是NaN3。
例如，第二试剂R2的表面活性剂具体为Tween20、TritonX-100以及Tergitol NP9中的一种或者其中多种的混合物。
该类型的第二试剂尤其有利于C反应蛋白的测定。
<具体应用示例>
例如，根据本发明优选实施例的基于等离子光学纳米孔增强免疫比浊的含量测定方法可以用于C反应蛋白(CRP)、免疫球蛋白(IgG/IgA/IgM)、载脂蛋白、铁蛋白、纤维蛋白原、癌胚胎抗原、补体C4\D-二聚体等的测定。
此外，需要说明的是，除非特别指出，否则说明书中的术语“第一”、“第二”、“第三”等描述仅仅用于区分说明书中的各个组件、元素、步骤等，而不是用于表示各个组件、元素、步骤之间的逻辑关系或者顺序关系等。
可以理解的是，虽然本发明已以较佳实施例披露如上，然而上述实施例并非用以限定本发明。对于任何熟悉本领域的技术人员而言，在不脱离本发明技术方案范围情况下，都可利用上述揭示的技术内容对本发明技术方案作出许多可能的变动和修饰，或修改为等同变化的等效实施例。因此，凡是未脱离本发明技术方案的内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所做的任何简单修改、等同变化及修饰，均仍属于本发明技术方案保护的范围内。
Claims (10)
1.一种基于等离子光学纳米孔增强免疫比浊的含量测定方法，其特征在于包括：
第一步骤：将第一试剂与待测样品混合，加入多孔微孔板中，其中多孔微孔板中配置有纳米光学传感器芯片；
第二步骤：利用酶标仪在预定波长范围内测定多孔微孔板中的混合物反应体系的第一浊度变化曲线；
第三步骤：将第二试剂加入多孔微孔板内的溶液中；
第四步骤：利用酶标仪在所述预定波长范围内测定第三步骤的混合物反应体系的第二浊度变化曲线；
第五步骤：获取表示在第一试剂和第二试剂中待测物标准品的含量与浊度变化之间的关系的标准曲线；
第六步骤：将第二步骤所获得的第一浊度变化曲线和第四步骤所获得的第二浊度变化曲线，与标准曲线进行比较，以获得待测物的含量。
2.一种基于等离子光学纳米孔增强免疫比浊的含量测定方法，其特征在于包括：
第一步骤：将第一试剂与待测样品混合，加入多孔微孔板中，其中多孔微孔板中配置有纳米光学传感器芯片；
第二步骤：将第二试剂加入多孔微孔板内的溶液中；
第三步骤：：利用酶标仪在预定波长范围内测定第二步骤的混合物反应体系的浊度变化速率曲线；
第四步骤：获取表示在第一试剂和第二试剂中待测物标准品的含量与浊度变化速率之间的关系的标准曲线；
第五步骤：将第三步骤所获得的浊度变化速率曲线与标准曲线进行比较，以获得待测物的含量。
3.根据权利要求1或2所述的基于等离子光学纳米孔增强免疫比浊的含量测定方法，其特征在于，第一试剂是反应缓冲液20-100mM、反应促聚集剂、防腐剂和表面活性剂的混合剂，且第一试剂R1的PH值介于7.0-8.0之间。
4.根据权利要求3所述的基于等离子光学纳米孔增强免疫比浊的含量测定方法，其特征在于，第一试剂的反应缓冲液是PBS Tris-HCl缓冲溶液、MES缓冲溶液、HEPES缓冲溶液、甘氨酸缓冲溶液、醋酸缓冲溶液以及DIPSO缓冲溶液中的一种或者其中多种的混合物。
5.根据权利要求3所述的基于等离子光学纳米孔增强免疫比浊的含量测定方法，其特征在于，第一试剂的反应促聚集剂是PEG5000、PEG6000、PEG8000以及PEG12000中的一种或者其中多种的混合物，含量优选为0.5％-5％(w/v)。
6.根据权利要求3所述的基于等离子光学纳米孔增强免疫比浊的含量测定方法，其特征在于，第一试剂的防腐剂是Proclin-300、庆大霉素或者是NaN3中的一种或者其中多种的混合物，含量优选为0.1％-0.5％(w/v)。
7.根据权利要求3所述的基于等离子光学纳米孔增强免疫比浊的含量测定方法，其特征在于，第一试剂的表面活性剂是Tween20、TritonX-100以及Tergitol NP9中的一种或者其中多种的混合物，含量优选为0.1％-2％(w/v)。
8.根据权利要求1或2所述的基于等离子光学纳米孔增强免疫比浊的含量测定方法，其特征在于，第二试剂的原料配方如下：羊抗人CRP多克隆抗体、缓冲液、防腐剂和表面活性剂的混合剂，而且第二试剂R2的PH值介于7.0-8.0之间。
9.根据权利要求8所述的基于等离子光学纳米孔增强免疫比浊的含量测定方法，其特征在于，第二试剂的反应缓冲液具体为PBS缓冲溶液、Tris-HCl缓冲溶液、MES缓冲溶液、HEPES缓冲溶液、甘氨酸缓冲溶液、醋酸缓冲溶液以及DIPSO缓冲溶液中的一种或者其中多种的混合物，含量为20-100mM；第二试剂的防腐剂具体为Proclin-300、庆大霉素或者是NaN3，含量为0.1％-0.5％(w/v)；第二试剂的表面活性剂具体为Tween20、TritonX-100以及Tergitol NP9中的一种或者其中多种的混合物，含量为0.1％-2％(w/v)。
10.根据权利要求1或2所述的基于等离子光学纳米孔增强免疫比浊的含量测定方法，其特征在于，预定波长范围是560-600nm。
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Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2021169343A1 (zh) * | 2020-02-26 | 2021-09-02 | 量准（上海）医疗器械有限公司 | 一种基于等离子光学纳米孔增强免疫比浊的含量测定方法 |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104360056A (zh) * | 2014-12-05 | 2015-02-18 | 重庆中元生物技术有限公司 | 一种提升胶乳增强免疫比浊法灵敏度的方法 |
| CN206387808U (zh) * | 2016-11-16 | 2017-08-08 | 深圳无微华斯生物科技有限公司 | 检测样品中crp的芯片和试剂盒 |
| CN108776231A (zh) * | 2018-09-06 | 2018-11-09 | 长沙文瀚生物技术有限责任公司 | 一种人尿白蛋白胶乳增强二抗竞争免疫比浊检测试剂盒及其制作和使用方法 |
| WO2018206737A1 (en) * | 2017-05-09 | 2018-11-15 | Immundiagnostik Ag | Method for determination of members of the s100 family of calcium binding proteins by immunoturbidimetry |
| CN109061141A (zh) * | 2018-06-15 | 2018-12-21 | 光景生物科技(苏州)有限公司 | 一种胶乳增强免疫透射比浊检测方法 |
| CN110286104A (zh) * | 2019-06-28 | 2019-09-27 | 量准（上海）医疗器械有限公司 | 局域表面等离子体共振纳米传感器及其蛋白质定量方法 |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1072887B1 (en) * | 1999-07-30 | 2005-11-16 | Mitsubishi Chemical Corporation | Immunoassay |
| CN1247996C (zh) * | 2001-12-27 | 2006-03-29 | 松下电器产业株式会社 | 免疫反应测定方法以及方法中使用的免疫反应测定用试剂盒 |
| EP2546635A1 (en) * | 2011-07-14 | 2013-01-16 | The European Union, represented by the European Commission | SPR sensor device with nanostructure |
| WO2013089996A1 (en) * | 2011-12-13 | 2013-06-20 | Konica Minolta Laboratory U.S.A., Inc. | Nanohole sensor chip with reference sections |
| CN108982424A (zh) * | 2018-07-23 | 2018-12-11 | 量准（上海）医疗器械有限公司 | 一种基于等离光子谐振技术的crp浓度检测装置及检测方法 |
| CN111323574A (zh) * | 2020-02-26 | 2020-06-23 | 量准（上海）医疗器械有限公司 | 一种基于等离子光学纳米孔增强免疫比浊的含量测定方法 |
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Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104360056A (zh) * | 2014-12-05 | 2015-02-18 | 重庆中元生物技术有限公司 | 一种提升胶乳增强免疫比浊法灵敏度的方法 |
| CN206387808U (zh) * | 2016-11-16 | 2017-08-08 | 深圳无微华斯生物科技有限公司 | 检测样品中crp的芯片和试剂盒 |
| WO2018206737A1 (en) * | 2017-05-09 | 2018-11-15 | Immundiagnostik Ag | Method for determination of members of the s100 family of calcium binding proteins by immunoturbidimetry |
| CN109061141A (zh) * | 2018-06-15 | 2018-12-21 | 光景生物科技(苏州)有限公司 | 一种胶乳增强免疫透射比浊检测方法 |
| CN108776231A (zh) * | 2018-09-06 | 2018-11-09 | 长沙文瀚生物技术有限责任公司 | 一种人尿白蛋白胶乳增强二抗竞争免疫比浊检测试剂盒及其制作和使用方法 |
| CN110286104A (zh) * | 2019-06-28 | 2019-09-27 | 量准（上海）医疗器械有限公司 | 局域表面等离子体共振纳米传感器及其蛋白质定量方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 吕世静 等: "《临床免疫学检验》", 31 January 2010, 北京：中国医药科技出版社 * |
| 张汉园: "透射免疫比浊法和速率散射免疫比浊法测定C反应蛋白的比较", 《江苏大学学报(医学版)》 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2021169343A1 (zh) * | 2020-02-26 | 2021-09-02 | 量准（上海）医疗器械有限公司 | 一种基于等离子光学纳米孔增强免疫比浊的含量测定方法 |
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