CN111297806A - 一种基于囊泡载体的红景天苷经皮美白制剂及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种基于囊泡载体的红景天苷经皮制剂及其制备方法和应用，具体公开一种红景天苷醇传递体，包括：红景天苷、磷脂、表面活性剂、乙醇和水；其采用硫酸铵梯度法主动载药后制得，得到的红景天苷醇传递体在水中的分散稳定性好，提高了红景天苷体外经皮渗透实验在大鼠皮肤基底层的滞留量5‑20倍。另外，本发明还公开了一种红景天苷脂质体微针，包括微针形状的基质和包埋于基质中的红景天苷脂质体，所述红景天苷脂质体包括红景天苷、透明质酸、大豆卵磷脂和胆固醇。该红景天苷微针形状规整，可直接将红景天苷脂质体扎入皮内发挥作用，进一步发挥了脂质体的皮肤内贮留和缓释作用，更好地发挥了红景天苷的美白功效。

Description

一种基于囊泡载体的红景天苷经皮美白制剂及其制备方法和 应用

技术领域

本发明属于纳米载体透皮吸收及化妆品领域，具体涉及一种基于囊泡载体的红景天苷经皮美白制剂及其制备方法和应用。

背景技术

透皮给药系统(Transdermal drug delivery system，TDDS)是指以皮肤为给药途径，将药物转运至局部组织或全身血液循环而发生局部或全身作用的制剂。与常用的普通剂型相比，可避免口服给药时肝脏的首过效应及胃肠道对药物的破坏、透皮给药应用安全和方便、延长有效作用时间、能维持恒定的血药浓度等，但角质层的屏障作用严重影响药物的透皮吸收。

随着纳米载体技术的发展，有多种纳米载体用于递送药物分子并增加药物的经皮渗透，如脂质纳米粒、聚合物胶束和囊泡载体等，其中囊泡载体包括经典脂质体、传递体、醇质体、醇传递体、类脂囊泡和前体囊泡。在这些载体中，醇传递体由磷脂、乙醇、水和表面活性剂或渗透增强剂组成，具有亲脂和亲水两个区域，能容纳具有广泛溶解度的药物分子，其良好的变形性可使其轻易地渗透进入皮肤，在透皮领域具有广阔的应用前景。

另一方面，考虑到醇传递体中乙醇可能对皮肤的刺激性及乙醇挥发所导致的醇传递体稳定性等问题，进一步基于脂质体技术，开发了药物脂质体的透皮微针。微针给药是一种结合皮肤贴片与皮下注射双重优点的经皮给药方式，它可以刺穿皮肤表皮的角质层，将药物递送进入皮肤，能够提高药物的渗透率及在特定部位的浓集。另外，微针的长度通常不触及真皮层，因此不触及痛觉神经，从而不会引起疼痛，患者顺应性较好。其中，可溶性微针由可溶性高分子材料与药物制成，不仅制备简单，而且条件温和，对药物的理化性质影响较小、生物相容性好、载药效率高，在透皮领域应用前景广阔。

红景天苷是红景天的主要成分，有较强的抑制酪氨酸酶活性的能力，具有美白效果，且无任何毒副作用，因此红景天苷在化妆品市场受到越来越多的关注。但红景天苷是亲水性药物，极易溶于水，不易透过皮肤。目前市售的红景天系列化妆品如红景天美白保湿霜、红景天补水保湿面膜、红景天提取液美白淡斑乳、红景天美容润肤霜、红景天保湿调理精华液等，涂抹之后大多数滞留在角质层，有效成分红景天苷不能穿透角质层到达皮肤基底层，不能真正的达到美白效果。

本发明为了解决上述问题，基于囊泡载体技术，分别制备了红景天苷醇传递体和脂质体微针，从而提供透皮能力强且生物相容性好的红景天苷经皮制剂。

发明内容

本发明的目的在于提供了一种利用主动载药法制备红景天苷醇传递体的方法及其产品和在美白化妆品中的应用，该方法较好的提高了药物的包封率和稳定性。

本发明的另一目的在于提供了一种红景天苷微针及其制备方法，将红景天苷脂质体与微针结合，减小了对皮肤的刺激性，提高了生物相容性，还能更好的发挥脂质体在皮肤内的贮留和缓释作用，进一步提高了美白功效。

本发明采用的技术方案如下：

第一方面，本发明公开的基于囊泡载体的红景天苷经皮美白制剂为一种红景天苷醇传递体，采用硫酸铵梯度法主动载药后制得，具体包括以下重量百分比的原料：

所述磷脂包括二硬脂酰基磷脂酰胆碱(DSPC)、二油酰基卵磷脂(DOPC)、二棕榈酰基磷脂酰丝氨酸(DPPS)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺 (DSPE)、二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺(DPPE)中的任意一种。

所述的表面活性剂包括吐温-80、普朗尼克、聚氧乙烯氢化蓖麻油以及水溶性维生素E中的任意一种。优选为吐温-80，这是由于实验表明：当表明活性剂选用吐温-80时制得的红景天苷醇传递体较稳定、载药量大、且透皮转运速率更高。

本发明还公开了上述红景天苷醇传递体的制备方法，包括如下步骤：

(1)将磷脂和表面活性剂溶于乙醇，35～45℃减压旋转蒸发得到均匀薄膜，加入0.15～0.25mol/L硫酸铵溶液，经过旋转水化和超声后得到空白醇传递体；

(2)空白醇传递体透析后加入红景天苷乙醇溶液，置于45～55℃水浴中孵育20～40min，冷却至室温即得。

步骤(2)中，所述透析的具体方法为：将空白醇传递体装入分子量为8-14K道尔顿的透析袋中，再利用pH＝7.3～7.5的PBS溶液透析3～5h。

本发明另外还公开了上述的红景天苷醇传递体在美白化妆品中的应用。将醇传递体作为红景天苷的经皮给药载体，与水溶液相比，本发明的醇传递体可提高体外经皮渗透实验红景天苷在大鼠皮肤基底层的滞留量 5-20倍，较好的提高了药物的包封率和稳定性。

第二方面，本发明公开的基于囊泡载体的红景天苷经皮美白制剂为一种红景天苷脂质体微针，包括微针形状的基质和包埋于基质中的红景天苷母液，所述红景天苷母液包括以下重量百分比的原料：

优选地，所述红景天苷母液包括以下重量百分比的原料：

本发明还另外提供了上述红景天苷脂质体微针的制备方法，具体包括以下步骤：

(1)将大豆卵磷脂和胆固醇溶于有机溶剂，35～45℃减压旋转蒸发后加入0.15～0.25mol/L硫酸铵溶液，经过旋转水化、超声、透析后得到空白纳米脂质体，再加入红景天苷水溶液，水浴搅拌后得到红景天苷脂质体；

(2)将红景天苷脂质体和透明质酸混合溶解后得到红景天苷母液，干燥至粘稠后置于微针模具，离心后取出模具，再经过干燥、脱模即得所述红景天苷脂质体微针。

步骤(1)中，所述的有机溶剂为氯仿、二氯甲烷或乙醇，优选为氯仿，这是由于以氯仿为有机溶剂，成膜性好。

步骤(2)中，所述的离心转速为3000～4000rpm/min，离心时间为 4～6min。

步骤(2)中，所述干燥时间为45～55h，干燥后待微针四周边缘翘起，自动脱模后得到红景天苷脂质体微针。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

(1)本发明针对醇传递体中的乙醇可能会导致药物的包封率降低或药物泄漏的问题，利用药物红景天苷的自身结构特点，将醇传递体与主动载药法相结合，较好的提高了药物的包封率和稳定性。且上述红景天苷醇传递体的制备工艺简单、条件温和，得到的红景天苷醇传递体平均粒径为 50-300nm，分布窄，在水介质中的分散稳定性好。通过本发明红景天苷醇传递体制备的药物，可提高红景天苷体外经皮渗透实验在大鼠皮肤基底层的滞留量5-20倍。

(2)本发明针对醇传递体中的乙醇可能造成的皮肤刺激性及乙醇挥发所导致的醇传递体稳定性的问题，将微针与脂质体技术相结合制得的红景天苷微针平均长度为500μm左右，微针间距为200μm左右，形状规整，外观整齐，可直接将红景天苷脂质体扎入皮内发挥作用，进一步发挥了脂质体的皮肤内贮留和缓释作用，更好地发挥红景天苷的美白功效。另外，微针中含有的透明质酸是一类广泛应用的医美材料，其生物相容性较好，也进一步提高了微针的生物相容性。

附图说明

图1A为实施例2制得的红景天苷醇传递体的透射电子显微镜(TEM) 图，图1B为粒径图；

图2为实施例2制得的红景天苷醇传递体和对照组的体外累积经皮渗透量与时间的关系图；

图3为实施例2制得的红景天苷醇传递体与对照组的皮肤内滞留量柱状图；

图4为实施例2制得的红景天苷醇传递体溶液与对照组溶液在豚鼠黑化模型上的美白功效照片；

图5为实施例2制得的红景天苷醇传递体溶液与对照组溶液皮肤HE 染色图片；

图6为实施例3制得的红景天苷脂质体微针扫描电镜图；

图7为实施例3制得的红景天苷脂质体微针的体外经乳猪皮肤的经皮渗透曲线；

图8A为未经微针处理的大鼠皮肤照片，图8B为经DOX微针处理后的大鼠皮肤照片。

具体实施方式

本发明结合附图和实施例做进一步的说明。这些实施例的目的只是为了解释而不是以任何方式限制本发明。

实施例1：

称取卵磷脂300mg和吐温-80 20mg于茄形瓶中，加入10mL乙醇使其溶解，40℃减压旋转蒸发得到均匀薄膜；再加入0.2mol/L硫酸铵溶液9 mL旋转水化1h，探头超声5min，得到空白醇传递体。将空白醇传递体装入分子量为8-14K道尔顿的透析袋中，用pH＝7.4的PBS溶液透析4h，向透析后的空白醇传递体中加入红景天苷乙醇溶液1mL，置于50℃水浴中孵育30min，冷却至室温，即得红景天苷醇传递体。

经测定醇传递体(10％乙醇)的粒径为135.2nm，载药量为8.8％。

实施例2：

称取卵磷脂300mg和吐温-80 20mg于茄形瓶中，加入10mL乙醇使其溶解，40℃减压旋转蒸发得到均匀薄膜，加入0.2mol/L硫酸铵溶液7mL 旋转水化1h，探头超声5min，得到空白醇传递体。将空白醇传递体装入分子量为8-14K道尔顿的透析袋中，用pH＝7.4的PBS溶液透析4h。向透析后的空白醇传递体中加入红景天苷乙醇溶液3mL，置于50℃水浴中孵育30min，冷却至室温，即得红景天苷醇传递体。

经测定醇传递体(30％乙醇)的粒径为101.8nm，粒径体如图1B所示，红景天苷醇传递体的形态图如图1A所示，载药量为6.9％。

试验例1：

将预先处理好的离体鼠皮置于Franz扩散池上(角质层朝上，真皮层朝下)，实验分为4组，分别为红景天苷醇传递体(30％乙醇)、红景天苷药物水溶液、红景天苷普通脂质体和空白对照组，接收介质为pH＝7.4的 PBS溶液，转速300rpm/min，接收液温度为(37±0.5)℃。在2、4、6、8、 10、12、24h取2mL接收液，将取得的液体利用10000rpm/min的转速离心15min，过膜，上清液HPLC测定，计算各组的药物累积透过量与时间的关系，制得折线图如图2所示。

考虑到红景天苷的美白药效作用部位处于皮肤组织内，因此在上述透皮转运研究的基础上，进一步考察了红景天苷在皮肤内的滞留量，由图3 可知，与红景天苷其他对照组相比，实施例2制得的30％醇传递体的皮肤摄取量最高。由图3可知，在分离皮肤角质层和皮肤活性表皮/真皮层后，定量分析发现30％醇传递体在皮肤防御屏障(角质层)含量较低，而大部分位于药效发挥作用靶点，即活性表皮层/真皮层，这对于该产品的后续药效作用发挥，具有重要的意义。

试验例2：

采用紫外线B(UVB)照射处理，诱导三色雌性豚鼠(体重350～400g) 棕黄色皮肤色素沉着，建立豚鼠黑化模型。取豚鼠10只，将背部分为四块，每一块大小为2.5cm×3cm(标记为A、B、C、D)，脱毛。使用紫外辐照仪，UVB 500mJ/cm²的剂量对豚鼠皮肤进行照射处理后，四块区域分别涂抹不同制剂1mL，每日两次。其中，A区域涂抹pH＝7.4的PBS溶液，B区域涂抹空白醇传递体，C区域涂抹红景天苷水溶液，D区域涂抹红景天苷醇传递体。剪取实验后豚鼠背部各区域皮肤，用4％多聚甲醛常温固定， 24h后将组织从固定液取出，用手术刀将目的组织修平整，将修切好的组织和对应的标签放于脱水盒内脱水，石蜡包埋，切片(片厚4μm)，60℃条件下烤片4h，结果如图4和图5所示。图4结果说明涂抹pH 7.4PBS和空白醇传递体不能降低UVB照射所诱导的豚鼠皮肤的色素沉着；区域C和D 要比区域A和B的皮肤颜色浅，说明涂抹红景天苷醇传递体和红景天苷水溶液均能抑制紫外线B照射所诱导的豚鼠皮肤的色素沉着；区域D比区域C 皮肤颜色更浅，说明红景天苷醇传递体抑制色素沉着的效果显著强于红景天苷水溶液组，提示红景天苷醇传递体具有显著的皮肤美白作用。比空白对照组的豚鼠皮肤图5A，经空白醇传递体、红景天苷水溶液、红景天苷醇传递体处理过的豚鼠皮肤都不存在炎性细胞，说明空白醇传递体、红景天苷水溶液、红景天苷醇传递体对皮肤没有刺激性，显示红景天苷醇传递体安全性较高。

实施例3：

(1)称取大豆卵磷脂1g，胆固醇0.25g于150mL梨形瓶中，加25mL 氯仿超声溶解，40℃水浴条件下真空旋蒸除去氯仿，加入0.2mol/L硫酸铵溶液25mL，在无真空条件下继续旋转水化1h，探头超声10min(功率400 W，工作3s，间歇3s)，pH＝7.4的PBS溶液透析4h得到空白柔性纳米脂质体。加入2mL红景天苷水溶液，50℃水浴条件下搅拌后得到红景天苷脂质体。

(2)称取透明质酸60mg和红景天苷脂质体40mg于5mL茄型瓶中，加入1mL超纯水和1～2滴乙醇使其溶解，再将得到的溶液置于干燥器中干燥 24h，待溶液粘稠时进行微针的制备。

(3)移液器取约100μL步骤(2)制得的溶液于PDMS微针模具中，使液体均匀铺满模具，再将模具置于50mL离心管(离心管中需放置一平面)中，于离心机中以3500rpm/min的转速离心5min，取出模具，收集多余的液体。

(4)将模具置于干燥器中干燥48h，待微针四周边缘翘起，自动脱模后取下，即得所述红景天苷脂质体微针。

将得到的红景天苷脂质体微针喷金后通过扫描电镜观察，得到的扫描电镜图如图6所示，由图6可知，上述方法制得的红景天苷脂质体微针平均长度在500μm左右，微针间距为200μm左右，形状规整，外观整齐。

实施例4

(1)称取大豆卵磷脂1g、胆固醇0.25g于150mL梨形瓶中，加25mL 氯仿超声溶解，40℃水浴条件下真空旋蒸除去氯仿，加入0.2mol/L硫酸铵溶液25mL，在无真空条件下继续旋转水化1h，探头超声10min(功率400 W，工作3s，间歇3s)，pH＝7.4的PBS溶液透析4h得到空白柔性纳米脂质体。加入2mL红景天苷水溶液，50℃水浴条件下搅拌后得到红景天苷脂质体。

(2)称取透明质酸50mg和红景天苷脂质体40mg于5mL茄型瓶中，加入1mL超纯水和1～2滴乙醇使其溶解，再将得到的溶液置于干燥器中干燥 24h，待溶液粘稠时进行微针的制备。

(3)移液器取约100μL步骤(2)制得的溶液于PDMS微针模具中，使液体均匀铺满模具，再将模具置于50mL离心管(离心管中需放置一平面)中，于离心机中以4000rpm/min的转速离心4min，取出模具，收集多余的液体。

(4)将模具置于干燥器中干燥48h，待微针四周边缘翘起，自动脱模后取下，即得所述红景天苷脂质体微针。

试验例3：

取红景天苷脂质体微针处理5min后的离体猪皮以及涂抹4mg/mL的红景天苷溶液的离体猪皮，置于Franz扩散池上，实验分为3组，分别为红景天苷脂质体微针、红景天苷水溶液和空白对照组，接收介质为pH＝7.4 的PBS溶液，转速300rpm/min，接收液温度为(37±0.5)℃。在2、4、6、 8、10、12、24h取2mL接收液，将取得的液体10000rpm/min，离心15 min，过膜，上清液HPLC测定，计算药物累积透过量与时间的关系如图 7所示，由图7可知，与溶液组相比，微针处理组的红景天苷的透皮量大大增加。

同时，取-80℃冰箱中1cm²的未处理的离体鼠皮，PBS中浸泡10min 解冻。开启488nm激光，于共聚焦显微镜下观察并拍摄。然后用含有绿色荧光染料的微针处理该皮肤，1min后将微针取下，用PBS擦去皮肤表面的DOX，并在相同的条件下观察经微针处理(图8A)和未经微针处理的大鼠皮肤(图8B)。

由图8可知，未经微针处理的大鼠皮肤存在非常微弱的自体荧光，而用微针处理后的大鼠皮肤，荧光强度大大增强，说明该微针具有较好的透皮效果，可以有效地将药物递送进入皮肤。

Claims (10)

1.一种红景天苷醇传递体，其特征在于，所述红景天苷醇传递体采用硫酸铵梯度法主动载药后制得，包括以下重量百分比的原料：

2.根据权利要求1所述的红景天苷醇传递体，其特征在于，所述的磷脂包括二硬脂酰基磷脂酰胆碱、二油酰基卵磷脂、二棕榈酰基磷脂酰丝氨酸、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺以及二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺中的任意一种；所述的表面活性剂包括吐温-80、普朗尼克、聚氧乙烯氢化蓖麻油以及水溶性维生素E中的任意一种。

3.根据权利要求1或2所述的红景天苷醇传递体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)将磷脂和表面活性剂溶于乙醇，35～45℃减压旋转蒸发得到均匀薄膜，加入0.15～0.25mol/L硫酸铵溶液，经过旋转水化和超声后得到空白醇传递体；

(2)空白醇传递体透析后加入红景天苷乙醇溶液，置于45～55℃水浴中孵育20～40min，冷却至室温即得。

4.根据权利要求3所述的红景天苷醇传递体的制备方法，其特征在于，所述透析的具体方法为：将空白醇传递体装入分子量为8-14K道尔顿的透析袋中，再利用pH＝7.3～7.5的PBS溶液透析3～5h。

5.一种根据权利要求1或2所述的红景天苷醇传递体在美白化妆品中的应用。

6.一种红景天苷脂质体微针，其特征在于，包括微针形状的基质和包埋于基质中的红景天苷母液，所述红景天苷母液包括以下重量百分比的原料：

7.根据权利要求6所述的红景天苷脂质体微针的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)将大豆卵磷脂和胆固醇溶于有机溶剂，35～45℃减压旋转蒸发后加入0.15～0.25mol/L硫酸铵溶液，经过旋转水化、超声、透析后得到空白纳米脂质体，再加入红景天苷水溶液，水浴搅拌后得到红景天苷脂质体；

(2)将红景天苷脂质体和透明质酸混合溶解后得到红景天苷母液，干燥至粘稠后置于微针模具，离心后取出模具，再经过干燥、脱模即得所述红景天苷脂质体微针。

8.根据权利要求7所述的红景天苷脂质体微针的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述的有机溶剂为氯仿、二氯甲烷或乙醇。

9.根据权利要求7所述的红景天苷脂质体微针的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述离心转速为3000～4000rpm/min，离心时间为4～6min。

10.根据权利要求7所述的红景天苷脂质体微针的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述干燥时间为45～55h，干燥后待微针四周边缘翘起，自动脱模后得到红景天苷脂质体微针。

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