CN114681403B - 一种高载药量和包封率的米诺地尔传递体和其凝胶及制备 - Google Patents

一种高载药量和包封率的米诺地尔传递体和其凝胶及制备 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种对毛发生长具有促进作用的高载药量和包封率的米诺地尔传递体和其凝胶及制备，包括磷脂、胆固醇、边缘活化剂、米诺地尔以及水。为了使水难溶性米诺地尔在水中均匀分散，本发明将边缘活化剂溶解在水相，而非传统方法中溶于脂质。在水合过程中药物以与边缘活化剂间形成的复合物的形式转移至脂质囊泡，从而实现提高米诺地尔载药量和包封率的目标。本发明的米诺地尔传递体凝胶制备工艺简单，对皮肤无刺激性；有效解决了米诺地尔酊剂药物作用时间短、药物在皮肤表面易结晶、给药不便、患者顺应性低以及治疗效果差的问题；同时改善了米诺地尔传递体皮肤附着性差，药物在皮肤滞留量低的问题，进一步促进了毛发的生长。

Description

一种高载药量和包封率的米诺地尔传递体和其凝胶及制备
技术领域
本发明属于米诺地尔药物制剂领域，具体是一种对毛发生长具有促进作用的高载药量和包封率的米诺地尔传递体和其凝胶及制备。
背景技术
脱发的特点是毛囊的生长期缩短，休止期延长，是一种临床上常见的医学问题。其中，雄性激素性脱发是人类最常见的脱发形式，影响了大量的男性和女性，已经发展成为全球皮肤科医生最常见的慢性疾病之一，虽然没有生命危险，但常会给患者带来严重的社会和心理问题，因此，对其治疗的需求越来越大。
米诺地尔由于能够加强毛囊的血液供应，从而增加细胞的氧气和营养输送，缩短休止期和延长生长期，现在已被确立为世界范围内雄激素性脱发的一线治疗药物。米诺地尔水溶性差，传统的外用制剂通常以乙醇和丙二醇为溶媒制成酊剂和搽剂，以确保达到有效的治疗浓度。然而，这些制剂不利于米诺地尔的经皮渗透，且随着乙醇的蒸发，会有大量药物晶体滞留在皮肤表面，引起包括瘙痒、皮疹、头皮屑和过敏性接触性皮炎等不良反应，影响患者的依从性和治疗效果。
为克服传统外用制剂的不足，许多纳米制剂如固体脂质纳米粒、纳米结构脂质载体、脂质体、传递体、聚合物纳米粒以及囊泡等被用于经皮递送米诺地尔。这些制剂不仅可以避免有机溶剂的使用，还可以促进药物经皮渗透，其中最有效的为传递体。传递体是在脂质体中加入边缘活化剂，降低囊泡的刚性，使其容易发生弹性形变，从而能够穿过比自身小数倍的皮肤孔道，进入皮肤深层，达到其它纳米制剂不能达到的皮肤渗透深度，提高药物的经皮治疗效果，甚至达到与输注相同的治疗效果。
尽管传递体是最有效的药物经皮纳米递送载体，但它的缺点为对难溶性药物的载药量和包封效率较低。米诺地尔的治疗效果具有浓度依赖性，因此提高载药量和包封率是给药系统设计需要解决的关键问题。本发明的目标是利用药物和辅料的溶解特性以及它们之间的相互作用，改变传统传递体的制备方法，提高制剂对米诺地尔的载入量和包封率，从而提高米诺地尔的育发效果，降低不良反应。
发明内容
本发明针对目前米诺地尔传递体的药物载药量和包封效率较低的问题，提供了一种高载药量和包封率的米诺地尔传递体和其凝胶及制备，以改善毛发生长效果并减少皮肤刺激。
本发明是通过以下技术方案实现的：一种米诺地尔传递体，包括下列原料组分，磷脂、胆固醇、边缘活化剂、米诺地尔以及水。
其中，所述磷脂0.58-5.6wt％，胆固醇0.14-1.16wt％，边缘活化剂0-0.8wt％，米诺地尔0.14-1.16wt％；其中边缘活化剂不为0。
本发明进一步提供了一种米诺地尔传递体，是由下列重量百分比的原料组分组成的，磷脂0.58-5.6wt％，胆固醇0.14-1.16wt％，边缘活化剂0-0.8wt％，米诺地尔0.14-1.16wt％，余量为水；其中边缘活化剂不为0。
作为本发明技术方案的进一步改进，所述米诺地尔传递体是由下列重量百分比的原料组分组成的，磷脂1-4.5wt％，胆固醇0.2-1wt％，边缘活化剂0.1-0.6wt％，米诺地尔0.2-1wt％，余量为水。
作为本发明技术方案的进一步改进，所述磷脂选自大豆卵磷脂或蛋黄卵磷脂。
作为本发明技术方案的进一步改进，所述边缘活化剂选自吐温80、司盘80或十二烷基硫酸钠。
作为本发明技术方案的进一步改进，所述磷脂与胆固醇的质量比为5:1。
本发明进一步提供了一种米诺地尔传递体的制备方法，包括如下步骤：
(1)磷脂和胆固醇混合后溶解于有机溶剂，减压蒸发有机溶剂，在容器壁上形成均匀的脂质层后，在真空下干燥，使有机溶剂完全挥干，形成沉积薄膜；
(2)米诺地尔和边缘活化剂在水中搅拌溶解形成混合液，加入至盛有沉积薄膜的容器内，水化；
(3)水化获得的脂质囊泡充分溶胀，并降温进行超声处理；
(4)获得的脂质囊泡通过微孔滤膜，获得米诺地尔传递体。
作为上述制备方法技术方案的进一步改进，所述米诺地尔和边缘活化剂是在60-65℃的水中搅拌溶解的。
本发明进一步提供了一种米诺地尔传递体凝胶，含有所述的米诺地尔传递体、卡波姆和药学可接受的溶剂。
本发明与现有技术相比具有下列优点和有益效果：
(1)由于米诺地尔在氯仿中溶解度差，本发明将其分散于水相，而非传统制备方法中将水难溶性药物与脂质共溶，从而提高了传递体对药物的载入量和包封率，如附表1所示。
(2)为了使水难溶性米诺地尔在水中均匀分散，本发明将边缘活化剂溶解在水相，而非传统方法中溶于脂质。在水合过程中药物以与边缘活化剂间形成的复合物的形式转移至脂质囊泡，从而实现提高米诺地尔载药量和包封率的目标(比较表1中的实施例5和6)。
(3)为了减少边缘活化剂用量，从而降低由它产生的皮肤刺激性，在不发生相转变的前提下，水相的温度选择为60-65℃，以提高米诺地尔在水相的溶解度和边缘活化剂对它的增溶作用，以保证水难溶性米诺地尔在水相的均匀分散。
(4)本发明的米诺地尔传递体凝胶制备工艺简单，对皮肤无刺激性如附图5；有效解决了米诺地尔酊剂药物作用时间短、药物在皮肤表面易结晶、给药不便、患者顺应性低以及治疗效果差的问题；同时改善了米诺地尔传递体皮肤附着性差，药物在皮肤滞留量低的问题，并且对于脱发诱导的C57/BL6小鼠的促毛发生长作用，如附图3、4和5，以及表2。
附图说明
为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为为实施例8所述的米诺地尔传递体的外观示意图(a)以及微观形态示意图(b)。
图2为实施例13所述的米诺地尔传递体凝胶的外观示意图(a)以及微观形态示意图(b)。
图3为C57BL/6小鼠背部脱毛区域涂抹生理盐水(Control)、市售制剂(CT)、米诺地尔传递体(MT)和米诺地尔传递体凝胶(MTgel)后0、5、10、15、21天的毛发生长照片。
图4为C57BL/6小鼠背部脱毛区域涂抹生理盐水(Control)、市售制剂(CT)和、米诺地尔传递体(MT)、米诺地尔传递体凝胶(MTgel)对小鼠毛发长度的影响，结果表示为平均值±标准差，a代表与Control组相比，p＜0.05；b代表与CT组相比，p＜0.05，n＝10。
图5为背部脱毛区域涂抹生理盐水(Control)、市售制剂(CT)和米诺地尔传递体凝胶(MTgel)21天后用H&E染色的背部皮肤纵切面的组织学图像，比例尺为500μm。
图6为豚鼠皮肤和真皮组织切片的显微照片，(A)正常皮肤；(B)给药米诺地尔传递体凝胶；(C)给药空白米诺地尔传递体凝胶，比例尺为200μm。
具体实施方式
下面对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明提供了一个米诺地尔传递体的具体实施例，包括下列原料组分，磷脂、胆固醇、边缘活化剂、米诺地尔以及水。
本发明还提供了另外一个米诺地尔传递体的具体实施例，是由下列重量百分比的原料组分组成的，磷脂0.58-5.6wt％，胆固醇0.14-1.16wt％，边缘活化剂0-0.8wt％，米诺地尔0.14-1.16wt％，余量为水；其中边缘活化剂不为0。
在本发明提供的一个实施例中，米诺地尔传递体是由下列重量百分比的原料组分组成的，磷脂1-4.5wt％，胆固醇0.2-1wt％，边缘活化剂0.1-0.6wt％，米诺地尔0.2-1wt％，余量为水。
作为一种优选方案，所述磷脂选自大豆卵磷脂或蛋黄卵磷脂。
作为一种优选方案，所述边缘活化剂选自吐温80、司盘80或十二烷基硫酸钠。
作为一种优选方案，所述磷脂与胆固醇的质量比为5:1。
本发明所述米诺地尔传递体可采用薄膜分散法进行制备。
具体的，本发明提供了米诺地尔传递体的制备方法的其中一个实施例，包括以下步骤：
(1)磷脂、胆固醇、米诺地尔和边缘活化剂溶解于有机溶剂，减压蒸发有机溶剂，在容器壁上形成均匀的脂质层后，在真空下干燥，使有机溶剂完全挥干，形成沉积薄膜；加入去离子水水化；
(2)水化获得的脂质囊泡充分溶胀，并降温进行超声处理；
(3)获得的脂质囊泡通过微孔滤膜，获得米诺地尔传递体。
本发明还提供了米诺地尔传递体的制备方法的另外一个实施例，包括以下步骤：
(1)磷脂、胆固醇和米诺地尔溶解于有机溶剂，减压蒸发有机溶剂，在容器壁上形成均匀的脂质层后，在真空下干燥，使有机溶剂完全挥干，形成沉积薄膜；边缘活化剂在水中搅拌溶解，加入至盛有沉积薄膜的容器内，水化；
(2)水化获得的脂质囊泡充分溶胀，并降温进行超声处理；
(3)获得的脂质囊泡通过微孔滤膜，获得米诺地尔传递体。
本发明进一步提供了米诺地尔传递体的制备方法的另外一个实施例，包括以下步骤：
(1)磷脂、胆固醇和边缘活化剂溶解于有机溶剂，减压蒸发有机溶剂，在容器壁上形成均匀的脂质层后，在真空下干燥，使有机溶剂完全挥干，形成沉积薄膜；米诺地尔在水中搅拌溶解，加入至盛有沉积薄膜的容器内，水化；
(2)水化获得的脂质囊泡充分溶胀，并降温进行超声处理；
(3)获得的脂质囊泡通过微孔滤膜，获得米诺地尔传递体。
本发明更进一步提供了米诺地尔传递体的制备方法的另外一个实施例，包括以下步骤：
(1)磷脂和胆固醇混合后溶解于有机溶剂，减压蒸发有机溶剂，在容器壁上形成均匀的脂质层后，在真空下干燥，使有机溶剂完全挥干，形成沉积薄膜；米诺地尔和边缘活化剂在水中搅拌溶解形成混合液，加入至盛有沉积薄膜的容器内，水化；
(2)水化获得的脂质囊泡充分溶胀，并降温进行超声处理；
(3)获得的脂质囊泡通过微孔滤膜，获得米诺地尔传递体。
在本发明制备方法的一个实施例中，所述有机溶剂用于促进磷脂和胆固醇的均匀混合，且本实施例所采用的有机溶剂能够在真空干燥环境下挥发干。具体的，在本实施例中，所述有机溶剂可采用氯仿、甲醇或氯仿与甲醇的混合溶剂。当采用氯仿和甲醇的混合溶剂时，氯仿和甲醇的体积比为3:1。
在本发明制备方法的另一个实施例中，所述减压蒸发的操作是在旋转蒸发仪中实现的，具体减压蒸发的温度可采用不高于60℃的温度，优选的减压蒸发的温度为45℃。
在本发明制备方法的一个实施例中，所述米诺地尔和边缘活化剂是在60-65℃的水中搅拌溶解的。采用此温度范围内进行溶解，能够提高米诺地尔在水相的溶解度和边缘活化剂对它的增溶作用，以保证水难溶性米诺地尔在水相的均匀分散。更重要的是，能够减少边缘活化剂用量，从而降低由它产生的皮肤刺激性。
在本发明制备方法的一个实施例中，水化温度高于磷脂的相转变温度，优选的水化温度为55℃。为了加快水化处理，优选的，在水化过程中采用60-75rpm的搅拌速度。
在本发明制备方法的另外一个实施例中，所述溶胀是在不高于50℃的温度下进行的，具体的可直接在室温下进行(22-25℃)。具体的，溶胀时间可根据脂质囊泡的具体情况选择，当直接在室温下进行溶胀时，溶胀时间为2h。
在本发明制备方法的一个实施例中，超声处理的时间为20min。本实施例所采用的超声处理的设备为JY92-IIN型超声波细胞粉碎机，购自宁波新芝生物科技股份有限公司。在启用超声处理时，以3s“开”、3s“关”的模式进行。
在本发明制备方法的一个另外实施例中，所采用的微孔滤膜可采用0.80μm、0.45μm和0.22μm孔径的滤膜。为了提升脂质囊泡的均一性，优选的将脂质囊泡依次通过0.80μm、0.45μm和0.22μm孔径的微孔滤膜。
为了增加米诺地尔的经皮吸收，提高制剂稳定性，提高制剂与皮肤间的附着力，进而方便给药，本发明将米诺地尔传递体与卡波姆凝胶混合制备获得米诺地尔传递体凝胶。
具体的，所述米诺地尔传递体凝胶，含有上述米诺地尔传递体、卡波姆和药学可接受的溶剂。
在上述米诺地尔传递体凝胶中，卡波姆可采用卡波姆980、940或910。所述药学可接受的溶剂可采用水或PBS溶液，优选的采用水作为凝胶溶剂。
本发明还提供了米诺地尔传递体凝胶的制备方法，具体为：
0.6-1.6％的卡波姆980用蒸馏水完全溶胀后，滴加三乙醇胺将其pH值调节至7.0-7.5。然后在轻轻搅拌下以1:1和3:2的质量比与传递体缓慢混合，得到传递体凝胶。
本发明实施例中所述的米诺地尔传递体的粒径、Zeta电位、形态、包封率和载药量等指标的评价方法如下：
1.粒径及Zeta电位评价方法
取米诺地尔传递体溶液(或其凝胶)用去离子水稀释适当倍数，用激光粒度分析仪测定传递体(或其凝胶)的粒径和Zeta电位。
2.形态评价方法
取米诺地尔传递体溶液(或其凝胶)适量，用水稀释，滴到铜网上，用1％磷钨酸溶液负染，滤纸吸去多余染色液，干燥后用透射电子显微镜观察。
3.载药量和包封率的测定
精密量取传递体溶液，加入甲醇超声5min以破坏囊泡，在HPLC上检测，分析计算药物总量(W总)。另取MXD传递体400μL置于超滤离心管中，3500r/min离心45min后取上层包封液，在HPLC上检测，分析计算包封于传递体中的药物量(W包)。包封率和载药量的计算公式为：
其中W为称量时添加的米诺地尔的质量。
下面通过具体实施例来对本发明的技术方案进行详细的说明。
实施例1
称取3g大豆卵磷脂、0.3g胆固醇、0.3g米诺地尔和0.3g吐温80于干燥的圆底烧瓶中，并加入少量的氯仿使其溶解，用旋转蒸发仪在45℃减压蒸发溶剂。在烧瓶壁上形成均匀的脂质层后，在真空下干燥一夜，使其完全挥干有机溶剂。第二天，在45℃，转速为75rpm的条件下，将沉积的薄膜加50g去离子水水化1h。得到的脂质囊泡在室温下(22-25℃)充分膨胀2h，然后，在冰浴中超声处理20min，3s“开”，3s“关”。最后，进一步将获得的囊泡系统依次挤压通过0.80μm、0.45μm和0.22μm的微孔滤膜，即得米诺地尔传递体。
实施例2
称取0.3g大豆卵磷脂、0.5胆固醇、0.5米诺地尔和0.3g吐温80于干燥的圆底烧瓶中，并加入少量的氯仿使其溶解，用旋转蒸发仪在45℃减压蒸发溶剂，直到烧瓶壁上形成均匀的脂质层后，在真空下干燥一夜，使其完全挥干有机溶剂。第二天，在45℃，转速为75rpm的条件下，将沉积的薄膜加50g去离子水水化1h。得到的脂质囊泡在室温下(22-25℃)充分膨胀2h，然后，在冰浴中超声处理20min，3s“开”，3s“关”。最后，进一步将获得的囊泡系统依次挤压通过0.80μm、0.45μm和0.22μm的微孔滤膜，即得米诺地尔传递体。
实施例3
称取1.5g大豆卵磷脂、0.3g胆固醇、0.3g米诺地尔和0.3g吐温80于干燥的圆底烧瓶中，并加入少量的氯仿使其溶解，用旋转蒸发仪在45℃减压蒸发溶剂，直到烧瓶壁上形成均匀的脂质层后，在真空下干燥一夜，使其完全挥干有机溶剂。第二天，在45℃，转速为75rpm的条件下，将沉积的薄膜加50g去离子水水化1h。得到的脂质囊泡在室温下(22-25℃)充分膨胀2h，然后，在冰浴中超声处理20min，3s“开”，3s“关”。最后，进一步将获得的囊泡系统依次挤压通过0.80μm、0.45μm和0.22μm的微孔滤膜，即得米诺地尔传递体。
实施例4
称取1.5g大豆卵磷脂、0.3g胆固醇、0.3g米诺地尔于干燥的圆底烧瓶中，并加入少量的氯仿使其溶解，用旋转蒸发仪在45℃减压蒸发溶剂，直到烧瓶壁上形成均匀的脂质层后，在真空下干燥一夜，使其完全挥干有机溶剂。将0.3g吐温80在60℃下溶于50g去离子水中，在45℃，转速为75rpm的条件下，将沉积的薄膜加上述溶液水化1h。得到的脂质囊泡在室温下(22-25℃)充分膨胀2h，然后，在冰浴中超声处理20min，3s“开”，3s“关”。最后，进一步将获得的囊泡系统依次挤压通过0.80μm、0.45μm和0.22μm的微孔滤膜，即得米诺地尔传递体。
实施例5
称取1.5g大豆卵磷脂、0.3g胆固醇、0.3g吐温80于干燥的圆底烧瓶中，并加入少量的氯仿使其溶解，用旋转蒸发仪在45℃减压蒸发溶剂，直到烧瓶壁上形成均匀的脂质层后，在真空下干燥一夜，使其完全挥干有机溶剂。将0.3g米诺地尔在60℃下溶于50g去离子水中，在45℃，转速为75rpm的条件下，将沉积的薄膜加上述溶液水化1h。得到的脂质囊泡在室温下(22-25℃)充分膨胀2h，然后，在冰浴中超声处理20min，3s“开”，3s“关”。最后，进一步将获得的囊泡系统依次挤压通过0.80μm、0.45μm和0.22μm的微孔滤膜，即得米诺地尔传递体。
实施例6
称取1.5g大豆卵磷脂和0.3g胆固醇于干燥的圆底烧瓶中，并加入少量的氯仿使其溶解，用旋转蒸发仪在45℃减压蒸发溶剂，直到烧瓶壁上形成均匀的脂质层后，在真空下干燥一夜，使其完全挥干有机溶剂。将0.3g米诺地尔和0.3g吐温80在60℃下溶于50g去离子水中，在45℃，转速为75rpm的条件下，将沉积的薄膜加上述溶液水化1h。得到的脂质囊泡在室温下(22-25℃)充分膨胀2h，然后，在冰浴中超声处理20min，3s“开”，3s“关”。最后，进一步将获得的囊泡系统依次挤压通过0.80μm、0.45μm和0.22μm的微孔滤膜，即得米诺地尔传递体。
实施例7
称取1.5g大豆卵磷脂和0.3g胆固醇于干燥的圆底烧瓶中，并加入少量的氯仿使其溶解，用旋转蒸发仪在45℃减压蒸发溶剂，直到烧瓶壁上形成均匀的脂质层后，在真空下干燥一夜，使其完全挥干有机溶剂。将0.3g米诺地尔在60℃下溶于50g去离子水中，在45℃，转速为75rpm的条件下，将沉积的薄膜加上述溶液水化1h。得到的脂质囊泡在室温下(22-25℃)充分膨胀2h，然后，在冰浴中超声处理20min，3s“开”，3s“关”。最后，进一步将获得的囊泡系统依次挤压通过0.80μm、0.45μm和0.22μm的微孔滤膜，即得米诺地尔脂质体。
实施例8
称取1.5g大豆卵磷脂和0.3g胆固醇于干燥的圆底烧瓶中，并加入少量的氯仿使其溶解，用旋转蒸发仪在45℃减压蒸发溶剂，直到烧瓶壁上形成均匀的脂质层后，在真空下干燥一夜，使其完全挥干有机溶剂。将0.3g米诺地尔和0.1g吐温80在60℃下溶于50g去离子水中，在45℃，转速为75rpm的条件下，将沉积的薄膜加上述溶液水化1h。得到的脂质囊泡在室温下(22-25℃)充分膨胀2h，然后，在冰浴中超声处理20min，3s“开”，3s“关”。最后，进一步将获得的囊泡系统依次挤压通过0.80μm、0.45μm和0.22μm的微孔滤膜，即得米诺地尔传递体。
实施例9
称取1.5g大豆卵磷脂和0.3g胆固醇于干燥的圆底烧瓶中，并加入少量的氯仿使其溶解，用旋转蒸发仪在45℃减压蒸发溶剂，直到烧瓶壁上形成均匀的脂质层后，在真空下干燥一夜，使其完全挥干有机溶剂。将0.3g米诺地尔和0.2g吐温80在60℃下溶于50g去离子水中，在45℃，转速为75rpm的条件下，将沉积的薄膜加上述溶液水化1h。得到的脂质囊泡在室温下(22-25℃)充分膨胀2h，然后，在冰浴中超声处理20min，3s“开”，3s“关”。最后，进一步将获得的囊泡系统依次挤压通过0.80μm、0.45μm和0.22μm的微孔滤膜，即得米诺地尔传递体。
实施例10
称取1.5g大豆卵磷脂和0.3g胆固醇于干燥的圆底烧瓶中，并加入少量的氯仿使其溶解，用旋转蒸发仪在45℃减压蒸发溶剂，直到烧瓶壁上形成均匀的脂质层后，在真空下干燥一夜，使其完全挥干有机溶剂。将0.3g米诺地尔和0.4g吐温80在60℃下溶于50g去离子水中，在45℃，转速为75rpm的条件下，将沉积的薄膜加上述溶液水化1h。得到的脂质囊泡在室温下(22-25℃)充分膨胀2h，然后，在冰浴中超声处理20min，3s“开”，3s“关”。最后，进一步将获得的囊泡系统依次挤压通过0.80μm、0.45μm和0.22μm的微孔滤膜，即得米诺地尔传递体。
实施例11
称取0.75g大豆卵磷脂和0.15g胆固醇于干燥的圆底烧瓶中，并加入少量的氯仿使其溶解，用旋转蒸发仪在45℃减压蒸发溶剂，直到烧瓶壁上形成均匀的脂质层后，在真空下干燥一夜，使其完全挥干有机溶剂。将0.15g米诺地尔和0.05g吐温80在60℃下溶于50g去离子水中，在45℃，转速为75rpm的条件下，将沉积的薄膜加上述溶液水化1h。得到的脂质囊泡在室温下(22-25℃)充分膨胀2h，然后，在冰浴中超声处理20min，3s“开”，3s“关”。最后，进一步将获得的囊泡系统依次挤压通过0.80μm、0.45μm和0.22μm的微孔滤膜，即得米诺地尔传递体。
实施例12
称取0.375g大豆卵磷脂和0.075g胆固醇于干燥的圆底烧瓶中，并加入少量的氯仿使其溶解，用旋转蒸发仪在45℃减压蒸发溶剂，直到烧瓶壁上形成均匀的脂质层后，在真空下干燥一夜，使其完全挥干有机溶剂。将0.075g米诺地尔和0.025g吐温80在60℃下溶于50g去离子水中，在45℃，转速为75rpm的条件下，将沉积的薄膜加上述溶液水化1h。得到的脂质囊泡在室温下(22-25℃)充分膨胀2h，然后，在冰浴中超声处理20min，3s“开”，3s“关”。最后，进一步将获得的囊泡系统依次挤压通过0.80μm、0.45μm和0.22μm的微孔滤膜，即得米诺地尔传递体。
实施例13
1％卡波姆980用蒸馏水完全溶胀后，滴加三乙醇胺将其pH值调节至7.0-7.5。然后在轻轻搅拌下以1:1的质量比与实施例8的传递体缓慢混合，得到传递体凝胶。
实施例14
1％卡波姆980用蒸馏水完全溶胀后，滴加三乙醇胺将其pH值调节至7.0-7.5。然后在轻轻搅拌下以1:1的质量比与实施例11的传递体缓慢混合，得到传递体凝胶。
实施例15
1％卡波姆980用蒸馏水完全溶胀后，滴加三乙醇胺将其pH值调节至7.0-7.5。然后在轻轻搅拌下以1:1的质量比与实施例12的传递体缓慢混合，得到传递体凝胶。
实施例16
1％卡波姆980用蒸馏水完全溶胀后，滴加三乙醇胺将其pH值调节至7.0-7.5。然后在轻轻搅拌下以1:1的质量比与市售米诺地尔酊剂缓慢混合，得到市售凝胶。
实验例1
评价实施例1-10的粒径、Zeta电位、包封率和载药量。
表1实施例1-10的粒径、Zeta电位、包封率和载药量
注：a代表与实施例6相比，p<0.05，b代表与实施例7相比，p<0.05，c代表与实施例8相比，p<0.05。
其中，方法Ⅰ：将边缘激活剂和药物与脂质共同溶解在有机溶剂中的方法制备传递体；Ⅱ：将边缘激活剂溶解在去离子水中，然后与含有药物的脂质薄膜水合；Ⅲ：将药物溶解在去离子水中，然后与含有边缘活化剂的空白脂质薄膜水合。Ⅳ：将边缘激活剂和药物都溶解在去离子水中，然后与脂质薄膜水合。
如表1所示，对于实施例1、2、3和4，在有机溶剂蒸发后，烧瓶底部有药物析出，方法I的最大载药量为83.03±0.79％，方法II为84.24±1.10％，表明有一些药物不能载入传递体。通过方法III和方法Ⅳ(实施例5和6)，米诺地尔分散在水相中形成的脂质膜是均匀的，水合后得到透明的浅黄色溶液，肉眼观察无颗粒沉淀，载药量分别增加到95.59±0.87％和95.86±0.82％，且方法Ⅳ(实施例6)的包封率显著高于方法III。该制备方法可以获得高载药量和包封率的米诺地尔传递体。
对于实施例7-10，对吐温80的浓度进一步优选，结果显示实施例8的包封率和载药量显著高于其它实施例。
实验例2
评价实施例8和实施例13的粒径、Zeta电位和形态。
实施例8制备获得的米诺地尔传递体的平均(76.72±1.19)nm，平均Zeta电位为(-50.60±0.44)mV，外观为浅黄色的半透明溶液，外观清澈、无沉淀及絮状物，如图1(a)所示。透射电镜下观察得到传递体的形态图如图1(b)所示，从图中可以看出传递体呈球形、近球形囊泡状，无聚集现象，均匀分散在溶液中。
实施例13是在实施例8的基础上制备的传递体凝胶，其平均粒径为(88.57±0.45)nm，平均Zeta电位为(-46.70±0.72)mV，外观呈淡黄色凝胶状，无肉眼可见的颗粒或块状物，较易挑起，黏度适中，质地细腻均匀如图2(a)所示。透射电镜下察得到传递体凝胶的形态如附图2(b)所示，传递体凝胶呈近球形囊泡状，无聚集现象，均匀分散，所呈现的粒径与粒度仪测定结果基本一致。
实验例3
采用离体豚鼠皮肤渗透试验，评价实施例8、11、12、市售米诺地尔酊剂、实施例13、14、15和16的透皮效果。
将离体豚鼠皮肤固定在Franz静态垂直扩散室(有效扩散面积1.789cm2)，角质层面朝向供给池，真皮朝向接收池，以30％乙醇-生理盐水为接受介质，37±0.1℃恒温水浴，350rpm恒速搅拌，稳定1h后，分别加入1.0g实施例8、11、12、市售米诺地尔酊剂、实施例13、14、15和16，每个实验准备6个皮肤样品，分别在24h取1.0mL的透皮接受液，然后补充等体积的新鲜接收液，分别测定各组的累积渗透量Qn和稳态渗透速率Jss。取下皮肤，用新鲜接收液反复清洗皮肤样品，并用滤纸吸干皮肤的水分。将切好的皮肤有效表面积在甲醇中浸泡24h，以充分提取皮肤中残留的药物，分别测定各组的药物滞留量，见表2。
表2实施例8、11、12、市售米诺地尔酊剂、实施例13、14、15和16的透皮结果
由表2可知，(1)传递体制剂的稳态渗透速率和累积渗透量明显高于市售制剂，表明传递体作为透皮递送载体可以显着提高米诺地尔的经皮渗透。(2)随着米诺地尔浓度的增加，米诺地尔通过传递体制剂的稳态渗透速率和累积渗透量逐渐增加，这意味着米诺地尔传递体及其传递体凝胶的透皮渗透能力与剂量有关。(3)传递体制剂24h的皮肤药物滞留量明显高于市售制剂，其中传递体凝胶的药物滞留量高于传递体，说明通过该方法制备的米诺地尔传递体凝胶较市售制剂的皮肤渗透效果好，皮肤药物滞留量明显提高，具有更好的皮肤药物贮藏能力。
实验例4
以实施例8、13和市售米诺地尔酊剂为样本进行毛发生长评估。
(1)建立脱发模型：在实验开始前一周，15只6周龄健康雄性C57BL/6小鼠按照《实验动物护理和使用指南》正常饲养，使其适应实验环境，7周龄时，所有毛囊处于休止期，用剪刀去除矩形区域的背部毛发，并使用脱毛膏去除剩余毛发以诱导毛发周期进入生长期。小鼠被随机分成组，每组5只动物(n＝5)，在脱毛的第二天，四组分别应用生理盐水(对照组)、市售米诺地尔酊剂、实施例8、实施例13，每个样品(1g)每天一次应用于背部皮肤长达21天。
(2)毛发生长评估：从给药时起，定期拍照，在第12天、第15天、第18天和第21天从剃光的背部区域随机拔毛，手动测量每组的平均毛发长度。
(3)组织学观察：给药第21天，处死小鼠，采集背部皮肤并去除毛发，进行H&E染色，在光学显微镜下观察小鼠毛囊的组织学变化。
由附图3可见，局部给药后第5天，对照组的皮肤颜色保持淡粉色，市售制剂组的皮肤颜色为白色和略带灰色，而传递体和传递体凝胶组的颜色为深灰色，表明米诺地尔制剂可以诱导毛囊从休止期早期过渡到生长期，并且传递体和传递体凝胶组比市售制剂组更早进入生长期。给药10天三组均长出新毛，直至21天，新毛均完全覆盖脱毛部位。
附图4显示市售制剂组、传递体和传递体凝胶组测量的平均毛发长度均显著长于对照组，表明米诺地尔制剂可以促进小鼠的毛发生长，其中传递体和传递体凝胶组的头发长度显著长于市售制剂组，这表明该方法制备的传递体和传递体凝胶比市售制剂具有更好的促毛发生长能力。
由附图5可见，小鼠的毛囊在给药前处于休止期，稀疏分布局限于表皮近端，几乎没有黑色素。与它相比，对照组的毛囊没有明显变化，而市售制剂、传递体和传递体凝胶组的毛囊数量更多，黑色素更多，表皮厚度略有增加。且毛囊长度显著长于对照组，其顺序为：传递体凝胶>传递体>市售制剂。
综上，传递体和传递体凝胶对脱发诱导的C57/BL6小鼠具有比市售制剂更好的促进头发生长的效果，其中传递体凝胶由于具有更好的皮肤药物储藏潜力，显示出比传递体更好的作用效果。
实验例5
采用豚鼠皮肤刺激性实验和组织病理学研究，评价实施例13的安全性。
实验前24h将每只豚鼠两侧的背毛剃掉，并确保皮肤完好无损。分别在豚鼠背部的两侧应用0.5g实施例13和空白实施例13(不含米诺地尔)作为自我控制，给药后1、24、48、72小时观察有无刺激和红斑。应用Draize量表评估皮肤刺激，并使用0到4之间的刺激分数来评估刺激强度，范围从无反应到严重反应，在皮肤刺激试验后，观察皮肤的组织病理学变化。
表4中的皮肤刺激试验结果表明，实施例13在1、24、48和72h内对豚鼠无刺激性。由附图6可见，正常皮肤显示完整的角质层、表皮、真皮和毛囊结构。与正常皮肤相比(图6A)，空白实施例13和实施例13处理的皮肤无显著变化。可以看到皮脂腺结构完整，没有真皮水肿，也没有明显的中性粒细胞或炎症细胞浸润，表明所发明的米诺地尔传递体凝胶对豚鼠背部皮肤没有刺激作用，可以安全地用于透皮给药系统。
表3凝胶对豚鼠皮肤的刺激性分数
最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。

Claims (6)

1.一种米诺地尔传递体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
（1）磷脂和胆固醇混合后溶解于有机溶剂，减压蒸发有机溶剂，在容器壁上形成均匀的脂质层后，在真空下干燥，使有机溶剂完全挥干，形成沉积薄膜；
（2）米诺地尔和边缘活化剂在60-65℃的水中搅拌溶解形成混合液，加入至盛有沉积薄膜的容器内，水化；
（3）水化获得的脂质囊泡充分溶胀，并降温进行超声处理；
（4）获得的脂质囊泡通过微孔滤膜，获得米诺地尔传递体；
所述米诺地尔传递体的磷脂0.58-5.6wt%，胆固醇0.14-1.16wt %，边缘活化剂 0-0.8wt %，米诺地尔0.14-1.16wt %，余量为水；其中边缘活化剂不为0。
2.根据权利要求1所述的一种米诺地尔传递体的制备方法，其特征在于，是由下列重量百分比的原料组分组成的，磷脂1-4.5wt %，胆固醇0.2-1wt %，边缘活化剂 0.1-0.6wt %，米诺地尔0.2-1wt %，余量为水。
3.根据权利要求1所述的一种米诺地尔传递体的制备方法，其特征在于，所述磷脂选自大豆卵磷脂或蛋黄卵磷脂。
4.根据权利要求1所述的一种米诺地尔传递体的制备方法，其特征在于，所述边缘活化剂选自吐温80、司盘80或十二烷基硫酸钠。
5.根据权利要求1所述的一种米诺地尔传递体的制备方法，其特征在于，所述磷脂与胆固醇的质量比为5:1。
6.一种米诺地尔传递体凝胶，其特征在于，含有权利要求1至5任一权利要求所述的米诺地尔传递体的制备方法制备获得的米诺地尔传递体、卡波姆和药学可接受的溶剂。
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