CN111285758A - 化合物trieffusols C-E制备方法及其在制备抗炎药物中的应用 - Google Patents

化合物trieffusols C-E制备方法及其在制备抗炎药物中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了化合物trieffusols C‑E及其制备方法和在制备抗炎药物中的应用。本发明所述的化合物trieffusols C‑E是从海洋真菌Trichobotrys effuse FS524的发酵培养物中分离制备得到的。经试验证明，化合物trieffusols C‑E对脂多糖LPS诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7炎症模型抑制一氧化氮NO的产生IC50值为51.9±1.4,54.3±2.2,55.9±1.6,65.5±1.3μM，显示出比较显著的抗炎活性，可以用于制备抗炎药物。

Description

化合物trieffusols C-E制备方法及其在制备抗炎药物中的 应用
技术领域
本发明属于医药生物技术领域，具体涉及化合物trieffusols C-E及其制备方法和在制备抗炎药物中的应用。
背景技术
炎症是动物机体局部或全身针对各类内源性或外源性损伤因子所作出的一系列复杂的防御反应。炎症反应参与机体众多疾病，其益处和有害作用之间的复杂性可能是许多疾病缺乏有效治疗的原因。目前市场上主要有糖皮质激素和非甾体2类抗炎药物；糖皮质激素类高剂量或长时间使用后副作用严重，非甾体抗炎药中非选择性的环氧合酶-2(COX-2)抑制剂由于抑制了保护胃肠道的COX-1而造成严重的胃溃疡并发症，而选择性的COX-2抑制剂也会增加心血管疾病恶化的风险。总之，现阶段炎症的治疗药物还是相对单一，有待于对炎症相关机制和药物的深入研究。当前，抗炎药物在医药市场的份额不断扩大。然而，目前市场上相当多的抗炎药物其临床疗效远未达到理想水平，部分药物副作用大。随着对炎症机制的不断深入研究，大量化学合成药物不断涌现，但此类药物均有诸多不良反应。因此，开发更加安全、有效的新型抗炎药物将具有广阔的临床应用前景。抗炎药物的主要来源是天然产物及其衍生物。海洋微生物由于代谢产物丰富、生长迅速、需求简单、可再生以及目的化合物产量高等优点，正成为新颖天然药物发现的重要源泉。
发明内容：
本发明的第一个目的是提供具有抗炎活性的化合物trieffusols C-E。
本发明的化合物trieffusols C-E，其结构如式(I)所示：
Figure BDA0002387236260000021
本发明的第二个目的是提供一种化合物trieffusols C-E的制备方法，该制备方法中所述的化合物trieffusols C-E是从海洋真菌Trichobotrys effuse FS524的发酵培养物中分离制备得到的，具体包括以下步骤：
(1)制备海洋真菌Trichobotrys effuse FS524的固体发酵培养物，用乙酸乙酯萃取该固体发酵培养物，将乙酸乙酯萃取液经浓缩后得浸膏；
(2)浸膏经过硅胶柱层析，用石油醚-乙酸乙酯以体积比为30:1，20:1，10:1，5:1，2:1，1:1和二氯甲烷-甲醇10:1，5:1，1:1分别作为洗脱剂，梯度洗脱；收集石油醚-乙酸乙酯体积比20:1洗脱获得的且经TLC薄层层析以正己烷：乙酸乙酯＝10:1v/v展开得Rf＝0.5-0.6的组分Fr.3；收集石油醚-乙酸乙酯体积比10:1洗脱的且经TLC薄层层析以正己烷:乙酸乙酯＝8:1v/v展开得Rf＝0.5-0.6的组分Fr.4；收集石油醚-乙酸乙酯体积比5:1洗脱获得的且经TLC薄层层析以正己烷:乙酸乙酯＝5:1v/v展开的Rf＝0.5-0.6的组分Fr.5；
将组分Fr.3经正相柱色谱，用石油醚-乙酸乙酯30:1，20:1，10:1，5:1，2:1，1:1v/v梯度洗脱，收集石油醚-乙酸乙酯5:1洗脱的组分Fr.3.4，经纯化得到化合物trieffusol E；
将组分Fr.4经Sephadex LH-20 CC凝胶柱色谱以二氯甲烷-甲醇＝1:1v/v洗脱，收集石油醚：乙酸乙酯＝5:1v/v展开得Rf＝0.65的组分Fr.4.5，经纯化得到消旋化合物trieffusol D，经进一步的手性拆分得到化合物(+)-trieffusol D和(-)-trieffusol D；
将组分Fr.5经反相C18色谱柱，用MeOH-H2O 30:70→100:0，v/v梯度洗脱，收集MeOH-H2O 30：70，v/v洗脱下来的组分Fr.5.1，再经正相柱色谱，用石油醚-乙酸乙酯8:1，5:1，2:1，1:1v/v梯度洗脱，收集石油醚-乙酸乙酯2:1v/v洗脱下来的亚组分Fr.5.1.4，经纯化得到化合物trieffusol C。
所述的将组分Fr.3.4纯化具体为：将组分Fr.3.4经半制备HPLC在Chiralpak IC柱，流动相为体积比50:50的异丙醇-正己烷，流速为2mL/min，收集保留时间为21.9min的洗脱组分，得到化合物trieffusol E；所述的将组分Fr.4.5纯化具体为：将组分Fr.4.5经半制备HPLC使用YMC-ODS-A/AQ柱，流动相为体积比80:20的乙腈/水，流速为2mL/min，收集保留时间为9.2min的洗脱组分，得到化合物trieffusol D，Trieffusol D的手性拆分具体条件为：半制备HPLC使用Chiralpak IC柱，流动相为体积比20:80的异丙醇-正己烷，流速为2mL/min，收集保留时间为12min的洗脱组分，得到化合物(-)-trieffusol D，收集保留时间为14.5min的洗脱组分，得到化合物(+)-trieffusol D，所述的将组分Fr.5.1.4纯化具体为：将组分Fr.5.1.4经半制备HPLC使用YMC-ODS-A/AQ柱，流动相为体积比70:30的乙腈/水，流速为2mL/min，收集保留时间为19.0min的洗脱组分，得到化合物trieffusol D。
所述的步骤(1)制备海洋真菌Trichobotrys effuse FS524的固体发酵培养物具体步骤为：挑取海洋真菌Trichobotrys effuse FS524的菌丝体接种于马铃薯葡萄糖液体培养基中，在28℃、120r/min条件下培养4天，制得种子液，然后将种子液按0.1mL/g的接种量接种于大米培养基中，28℃条件下培养24天，制得FS524的固体发酵培养物，所述的马铃薯葡萄糖液体培养基，每升是通过以下方法配制的：用500mL的纯水煮200g的马铃薯，煮沸20min，过滤得马铃薯汁，再加入葡萄糖20g、KH2PO4 3g、MgSO4 1.5g、维生素B1 10mg，用水补足至1000mL，灭菌制得；所述的大米培养基是通过以下方法配制的：按每280g大米与300mL质量体积比为0.5％g/mL的粗海盐水溶液混合灭菌制得。
本发明的第三个目的是提供化合物trieffusols C-E，或其药用盐在制备抗炎药物中的应用。
本发明通过实验发现，化合物trieffusols C-E对脂多糖LPS诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7炎症模型抑制一氧化氮NO的产生IC50值分别为51.9±1.4,54.3±2.2,55.9±1.6,65.5±1.3μM。阳性对照物吲哚美辛对脂多糖LPS诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7炎症模型抑制一氧化氮NO的产生IC50值为35.4±1.3μM。此结果表明：本发明的化合物trieffusols C-E具有比较显著的抗炎活性。
Figure BDA0002387236260000041
本发明的第四个目的是提供一种抗炎药物，该抗炎药物包含化合物trieffusolsC-E中的至少一种，或其药用盐作为活性成分。
本发明的第五个目的是提供海洋真菌Trichobotrys effuse FS524在制备化合物trieffusols C-E中的应用。
与现有技术相比，本发明的优势在于：
本发明从海洋真菌Trichobotrys effuse FS524中分离制备得到化合物trieffusols C-E，该类化合物trieffusols C-E具有比较显著的抗炎活性，可以用于制备抗炎药物，为研究与开发新的抗炎药物提供了候选化合物，为开发利用海洋微生物来源的天然活性物质提供了科学依据。
本发明的海洋真菌Trichobotrys effuse FS524公开于NCBI中(https:// www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/MN545626.1/)，该菌株本申请人持有，并保证自申请日起20年内向公众提供。
附图说明
图1是化合物trieffusol C的1H NMR谱；
图2是化合物trieffusol C的13C NMR谱；
图3是化合物trieffusol C的1H-1H COSY谱；
图4是化合物trieffusol C的HSQC谱；
图5是化合物trieffusol C的HMBC谱；
图6是化合物trieffusol C的NOESY谱；
图7是化合物trieffusol C的HR-ESIMS谱；
图8是化合物trieffusol C的CD谱；
图9是化合物trieffusol C的UV谱；
图10是化合物trieffusol C的IR谱。
图11是化合物trieffusol D的1H NMR谱；
图12是化合物trieffusol D的13C NMR谱；
图13是化合物trieffusol D的1H-1H COSY谱；
图14是化合物trieffusol D的HSQC谱；
图15是化合物trieffusol D的HMBC谱；
图16是化合物(+)-trieffusol D的HR-ESIMS谱；
图17是化合物(-)-trieffusol D的HR-ESIMS谱；
图18是化合物(+)-trieffusol D的CD谱；
图19是化合物(-)-trieffusol D的CD谱；
图20是化合物trieffusol D的UV谱；
图21是化合物trieffusol D的IR谱。
图22是化合物trieffusol E的1H NMR谱；
图23是化合物trieffusol E的13C NMR谱；
图24是化合物trieffusol E的1H-1H COSY谱；
图25是化合物trieffusol E的HSQC谱；
图26是化合物trieffusol E的HMBC谱；
图27是化合物trieffusol E的HR-ESIMS谱；
图28是化合物trieffusol E的UV谱；
图29是化合物trieffusol E的IR谱。
具体实施方式
以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。
实施例1
1、海洋真菌Trichobotrys effuse FS524的分离纯化和鉴定
本发明的海洋真菌Trichobotrys effuse FS524是2017年6月，从中国南海海洋沉积物(110°59′04″E,18°00′47″N，水深1428米)中分离得到的，经ITS序列分析鉴定，GenBank基因登录号为：MN545626(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/MN545626.1/)，经blast比对，同源分析，鉴定该菌株为Trichobotrys effuse DFFSCS021，编号为FS524，命名为Trichobotrys effuse FS524。
2、Trichobotrys effuse FS524的固体发酵
将活化的海洋真菌Trichobotrys effuse FS524菌丝体接种于马铃薯葡萄糖液体培养基(每升培养基是通过以下方法配制的：用500mL的纯水煮200g的马铃薯，煮沸20min，过滤得马铃薯汁，再加入葡萄糖20g、KH2PO4 3g、MgSO4 1.5g、维生素B1 10mg，用水补足至1000mL，灭菌制得)中，在28℃、120r/min条件下培养4天，制得种子液，然后将种子液按0.1mL/g大米培养基的接种量接种于大米培养基(该培养基是通过以下方法配制的：将280g大米与300mL质量体积比为0.5％mg/mL的粗海盐水溶液混合，121℃高压灭菌20min，冷却，制得)中，28℃条件下培养24天，制得FS524的固体发酵培养物。
3、化合物trieffusols C-E的制备
(1)往FS524的固体发酵培养物中加入乙酸乙酯，浸泡提取24小时，重复提取3次，提取液合并后经浓缩后得浸膏(67.3g)。
(2)浸膏经过硅胶柱层析，用石油醚-乙酸乙酯以体积比为30:1，20:1，10:1，5:1，2:1，1:1和二氯甲烷-甲醇10:1，5:1，1:1分别作为洗脱剂，梯度洗脱；收集石油醚-乙酸乙酯体积比20:1洗脱获得的且经TLC薄层层析以正己烷：乙酸乙酯＝10:1(v/v)展开得Rf＝0.5-0.6的组分Fr.3；
收集石油醚-乙酸乙酯体积比10:1洗脱获得的且经TLC薄层层析以正己烷:乙酸乙酯＝8:1(v/v)展开得Rf＝0.5-0.6的组分Fr.4；
收集石油醚-乙酸乙酯体积比5:1洗脱获得的且经TLC薄层层析以正己烷:乙酸乙酯＝5:1(v/v)展开得Rf＝0.5-0.6的组分Fr.5；
将组分Fr.3(14.8g)经正相柱色谱，用石油醚-乙酸乙酯30:1，20:1，10:1，5:1，2:1，1:1(v/v)梯度洗脱，收集石油醚-乙酸乙酯5:1梯度洗脱的组分Fr.3.4，将组分Fr.3.4经半制备HPLC在Chiralpak IC柱，流动相为体积比50:50的异丙醇-正己烷，流速为2mL/min，收集保留时间为21.9min的洗脱组分，得到化合物trieffusol E。
将组分Fr.4(3.9g)经Sephadex LH-20 CC凝胶柱色谱以二氯甲烷-甲醇＝1:1(v/v)，得到5个亚组分Fr.4.1-Fr.4.5。收集石油醚：乙酸乙酯＝5:1(v/v)展开得Rf＝0.65的组分Fr.4.5，经半制备HPLC使用YMC-ODS-A/AQ柱，流动相为体积比80:20的乙腈/水，流速为2mL/min，收集保留时间为9.2min的洗脱组分，得到化合物trieffusol D。Trieffusol D的手性拆分具体条件为：半制备HPLC使用Chiralpak IC柱，流动相为体积比20:80的异丙醇-正己烷，流速为2mL/min，收集保留时间为12min的洗脱组分，得到化合物(-)-trieffusolD，收集保留时间为14.5min的洗脱组分，得到化合物(+)-trieffusol D。
将组分Fr.5(11.1g)经反相C18色谱柱，用MeOH-H2O(30:70→100:0，v/v)梯度洗脱，得到5个亚组分Fr.5.1-Fr.5.5。收集MeOH-H2O(30：70，v/v)洗脱下来的组分Fr.5.1，再经正相柱色谱，用石油醚-乙酸乙酯8:1，5:1，2:1，1:1(v/v)梯度洗脱，得到5个亚组分Fr.5.1.1-Fr.5.1.5。收集石油醚-乙酸乙酯2:1(v/v)洗脱下来的亚组分Fr.5.1.4，经半制备HPLC使用YMC-ODS-A/AQ柱，流动相为体积比70:30的乙腈/水，流速为2mL/min，收集保留时间为19.0min的洗脱组分，得到化合物trieffusol C。
4、化合物trieffusols C-E的结构鉴定
1H-NMR、13C-NMR、HMBC核磁共振谱图用Bruker Advance-600核磁共振光谱仪测定，以四甲基硅烷(TMS)为内标；ESI-MS数据用VG Autospec-3000型质谱仪测定；紫外光谱用岛津UV-2600分光光度计测定，其结构鉴定如下：
如图1-29所示，图1是化合物trieffusol C的1H NMR谱；图2是化合物trieffusolC的13C NMR谱；图3是化合物trieffusol C的1H-1H COSY谱；图4是化合物trieffusol C的HSQC谱；图5是化合物trieffusol C的HMBC谱；图6是化合物trieffusol C的NOESY谱；图7是化合物trieffusol C的HR-ESIMS谱；图8是化合物trieffusol C的CD谱；图9是化合物trieffusol C的UV谱；图10是化合物trieffusol C的IR谱。图11是化合物trieffusol D的1H NMR谱；图12是化合物trieffusol D的13C NMR谱；图13是化合物trieffusol D的1H-1HCOSY谱；图14是化合物trieffusol D的HSQC谱；图15是化合物trieffusol D的HMBC谱；图16是化合物(+)-trieffusol D的HR-ESIMS谱；图17是化合物(-)-trieffusol D的HR-ESIMS谱；图18是化合物(+)-trieffusol D的CD谱；图19是化合物(-)-trieffusol D的CD谱；图20是化合物trieffusol D的UV谱；图21是化合物trieffusol D的IR谱。图22是化合物trieffusol E的1H NMR谱；图23是化合物trieffusol E的13C NMR谱；图24是化合物trieffusol E的1H-1H COSY谱；图25是化合物trieffusol E的HSQC谱；图26是化合物trieffusol E的HMBC谱；图27是化合物trieffusol E的HR-ESIMS谱；图28是化合物trieffusol E的UV谱；图29是化合物trieffusol E的IR谱。
化合物trieffusol C为棕色油状物；根据HRESIMS m/z 293.1385[M+H]+(计算值293.1384)，确定化合物的分子式为C16H20O5，不饱和度为7；1H-NMR谱显示一个苯环的信号[δH 7.07(2H,d,J＝8.5Hz,H-2,6),6.72(2H,d,J＝8.5Hz,H-3,5)]，一个三取代的双键氢信号δH 5.34(1H,d,J＝1.5Hz,H-10)，一个连氧次甲基信号δH 3.98(1H,dd,J＝9.9,5.9Hz,H-13)，一个连氧亚甲基信号δH 4.07(2H,td,J＝6.8,1.6Hz,H-8)，以及一个甲基信号δH0.81(3H,t,J＝7.5Hz,H-16)。13C-NMR谱以及HSQC谱显示有16个碳信号(表1)，包括5个季碳，6个次甲基，4个亚甲基，以及1个甲基。化合物trieffusol C的平面结构通过进一步分析其COSY、HSQC以及HMBC等二维谱图得以确定，化合物trieffusol C的绝对构型是通过计算ECD得以确定。
表1化合物trieffusol C和D的核磁数据(600MHz/150MHz,δin ppm,J in Hz)
Figure BDA0002387236260000101
Figure BDA0002387236260000111
化合物trieffusol D为白色粉末；根据HRESIMS m/z 223.0966[M+H]+(计算值223.0965)，确定化合物的分子式为C12H14O4，不饱和度为6；1H-NMR谱显示一个苯环的信号[δH 5.89(1H,s,H-5)]，一个连氧次甲基信号[δH 4.47(1H,dqd,J＝12.3,6.3,3.2Hz,H-7)]，一个亚甲基信号[δH 2.53(2H,q,J＝7.4Hz,H2-10)]，以及两个甲基信号[δH 1.04(3H,t,J＝7.4Hz,H3-11),1.43(3H,d,J＝6.3Hz,H3-12)]。13C-NMR谱以及HSQC谱显示有12个碳信号(表1)，包括1个羰基碳，6个芳香碳、1个次甲基，2个亚甲基，以及2个甲基。化合物trieffusol D的平面结构通过进一步分析其COSY、HSQC以及HMBC等二维谱图得以确定。由于化合物trieffusol D的比旋光度接近零，为一对消旋体。经过手性柱的拆分分别获得化合物(+)-trieffusol D和(-)-trieffusol D。化合物(+)-trieffusol D和(-)-trieffusol D的绝对构型最终通过计算ECD得以确定。
化合物trieffusol E为无色粉末；根据HRESIMS m/z 235.0971[M+H]+(计算值235.0965)，确定化合物的分子式为C13H14O4，不饱和度为7；13C-NMR谱以及HSQC谱显示有13个碳信号(表2)，包括6个季碳，3个次甲基，2个亚甲基，以及2个甲基。化合物trieffusol E的平面结构通过进一步分析其COSY、HSQC以及HMBC等二维谱图以及比对文献得以确定。
表2化合物trieffusol E的核磁数据(600MHz/150MHz,δin ppm,J in Hz)
Figure BDA0002387236260000121
经过上述方法分离的目标化合物trieffusols C-E的结构式如式(I)所示：
Figure BDA0002387236260000122
实施例2
采用Griess法测试化合物trieffusols C-E的抗炎活性。
1、试验用试剂：将本发明制备的化合物trieffusols C-E用二甲基亚砜(DMSO)溶解得浓度为10mM的母液，再用DMEM培养基稀释至所需浓度。阳性对照为吲哚美辛水溶液。
本实验所用细胞株为小鼠巨噬细胞RAW264.7。
2、实验方法：采用Griess法测定化合物对细菌脂多糖(LPS)诱导RAW264.7细胞炎症模型一氧化氮(NO)释放的影响，从而评估化合物的抗炎活性。取对数生长期的RAW264.7细胞，用胰酶消化，台盼蓝染色计数，台盼蓝排斥实验检测细胞活力大于95％后，用新鲜DMEM培养基调整细胞浓度为5×105个/mL，细胞接种于96孔板，每孔加入180μL的细胞悬液，并设3个空白孔调零，于37℃、5％CO2培养箱培养。24h后弃去原培养液加入200μL含一定浓度上述化合物及1μg/mL LPS培养基，阴性对照加200μL 1μg/mL LPS培养基，阳性对照加200μL含一定浓度的吲哚美辛及1μg/mL LPS培养基。置于37℃、5％CO2培养箱内孵育24h后，吸出50μL各孔的上清，移至新的96孔板，采用Griess法测定化合物对一氧化氮(NO)释放的影响，每孔加入50μL Griess A液和50μL Griess B液，混匀，在540nm波长下用酶标仪测定各孔的OD值。每次试验重复3次，并计算其IC50值。用以下公式计算药物对NO产生的抑制率：NO产生抑制率(％)＝(1-A样品组/A对照组)×100％。
3、实验结果：本发明制备的化合物trieffusol C、(+)-trieffusol D、(-)-trieffusol D和trieffusol E对脂多糖LPS诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7炎症模型抑制一氧化氮NO的产生IC50值为51.9±1.4,54.3±2.2,55.9±1.6,65.5±1.3μM。阳性对照物吲哚美辛对脂多糖LPS诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7炎症模型抑制一氧化氮NO的产生IC50值为35.4±1.3μM。此结果表明：本发明的化合物trieffusol C、(+)-trieffusol D、(-)-trieffusol D和trieffusol E具有比较显著的抗炎活性，因此，本发明为研究与开发新的抗肿瘤药物提供了候选化合物，为开发利用深海微生物来源的天然活性物质提供了科学依据。
以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出的是，上述优选实施方式不应视为对本发明的限制，本发明的保护范围应当以权利要求所限定的范围为准。对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明的精神和范围内，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (8)

1.如式(I)所示的任一化合物：
Figure FDA0002387236250000011
2.一种权利要求1所述的化合物trieffusols C-E的制备方法，其特征在于，所述的化合物trieffusols C-E是从海洋真菌Trichobotrys effuse FS524的发酵培养物中分离制备得到的。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
(1)制备海洋真菌Trichobotrys effuse FS524的固体发酵培养物，用乙酸乙酯萃取该固体发酵培养物，将乙酸乙酯萃取液经浓缩后得浸膏；
(2)浸膏经过硅胶柱层析，用石油醚-乙酸乙酯以体积比为30:1，20:1，10:1，5:1，2:1，1:1和二氯甲烷-甲醇10:1，5:1，1:1分别作为洗脱剂，梯度洗脱；收集石油醚-乙酸乙酯体积比20:1洗脱获得的且经TLC薄层层析以正己烷：乙酸乙酯＝10:1v/v展开得Rf＝0.5-0.6的组分Fr.3；收集石油醚-乙酸乙酯体积比10:1洗脱的且经TLC薄层层析以正己烷:乙酸乙酯＝8:1v/v展开得Rf＝0.5-0.6的组分Fr.4；收集石油醚-乙酸乙酯体积比5:1洗脱获得的且经TLC薄层层析以正己烷:乙酸乙酯＝5:1v/v展开的Rf＝0.5-0.6的组分Fr.5；
将组分Fr.3经正相柱色谱，用石油醚-乙酸乙酯30:1，20:1，10:1，5:1，2:1，1:1v/v梯度洗脱，收集石油醚-乙酸乙酯5:1洗脱的组分Fr.3.4，经纯化得到化合物trieffusol E；
将组分Fr.4经Sephadex LH-20 CC凝胶柱色谱以二氯甲烷-甲醇＝1:1v/v洗脱，收集石油醚：乙酸乙酯＝5:1v/v展开得Rf＝0.65的组分Fr.4.5，经纯化得到消旋化合物trieffusol D，经进一步的手性拆分得到化合物(+)-trieffusol D和(-)-trieffusol D；
将组分Fr.5经反相C18色谱柱，用MeOH-H2O 30:70→100:0，v/v梯度洗脱，收集MeOH-H2O30：70，v/v洗脱下来的组分Fr.5.1，再经正相柱色谱，用石油醚-乙酸乙酯8:1，5:1，2:1，1:1v/v梯度洗脱，收集石油醚-乙酸乙酯2:1v/v洗脱下来的亚组分Fr.5.1.4，经纯化得到化合物trieffusol C。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述的将组分Fr.3.4纯化具体为：将组分Fr.3.4经半制备HPLC在Chiralpak IC柱，流动相为体积比50:50的异丙醇-正己烷，流速为2mL/min，收集保留时间为21.9min的洗脱组分，得到化合物trieffusol E；所述的将组分Fr.4.5纯化具体为：将组分Fr.4.5经半制备HPLC使用YMC-ODS-A/AQ柱，流动相为体积比80:20的乙腈/水，流速为2mL/min，收集保留时间为9.2min的洗脱组分，得到化合物trieffusol D，Trieffusol D的手性拆分具体条件为：半制备HPLC使用Chiralpak IC柱，流动相为体积比20:80的异丙醇-正己烷，流速为2mL/min，收集保留时间为12min的洗脱组分，得到化合物(-)-trieffusol D，收集保留时间为14.5min的洗脱组分，得到化合物(+)-trieffusol D，所述的将组分Fr.5.1.4纯化具体为：将组分Fr.5.1.4经半制备HPLC使用YMC-ODS-A/AQ柱，流动相为体积比70:30的乙腈/水，流速为2mL/min，收集保留时间为19.0min的洗脱组分，得到化合物trieffusol D。
5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述的步骤(1)制备海洋真菌Trichobotrys effuse FS524的固体发酵培养物具体步骤为：挑取海洋真菌Trichobotryseffuse FS524的菌丝体接种于马铃薯葡萄糖液体培养基中，在28℃、120r/min条件下培养4天，制得种子液，然后将种子液按0.1mL/g的接种量接种于大米培养基中，28℃条件下培养24天，制得FS524的固体发酵培养物，所述的马铃薯葡萄糖液体培养基，每升是通过以下方法配制的：用500mL的纯水煮200g的马铃薯，煮沸20min，过滤得马铃薯汁，再加入葡萄糖20g、KH2PO4 3g、MgSO4 1.5g、维生素B1 10mg，用水补足至1000mL，灭菌制得；所述的大米培养基是通过以下方法配制的：按每280g大米与300mL质量体积比为0.5％g/mL的粗海盐水溶液混合灭菌制得。
6.权利要求1所述的化合物trieffusols C、D或E，或其药用盐在制备抗炎药物中的应用。
7.一种抗炎药物，其特征在于，包含权利要求1所述的化合物trieffusols C、D或E，或其药用盐作为活性成分。
8.海洋真菌Trichobotrys effuse FS524在制备权利要求1所述的化合物trieffusolsC-中E的应用。
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