CN111280450A - 提高5-甲基四氢叶酸稳定性的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种提高5‑甲基四氢叶酸稳定性的方法：将5‑甲基四氢叶酸、Vc、谷胱甘肽与超纯水混合，形成含5‑甲基四氢叶酸的混合液。本发明还同时公开了利用沙克乳酸杆菌(Lactobacillus sakei)提取5‑甲基四氢叶酸的方法。本发明还同时公开了增强液态奶中5‑甲基四氢叶酸稳定性的方法：在液态奶中加入5‑甲基四氢叶酸粗提液或者浓缩后的5‑甲基四氢叶酸粗提液，以及加入Vc和谷胱甘肽，从而形成强化奶。
Description
技术领域
本发明属于食品工程领域，具体涉及一种提高5-甲基四氢叶酸稳定性的方法。
背景技术
叶酸(Folic acid，FA)是人类饮食中重要的营养成分之一。又名维生素B11，B9，是一种水溶性的B族维生素。
叶酸是一种对光和温度敏感的物质，为了进一步研究叶酸的被氧化分解的机理，Off,Morten Kristian等将叶酸暴露于紫外线辐射时，发现叶酸分子会裂解为对氨基苯甲酰基-L-谷氨酸和6-甲酰基蝶呤。当继续照射时，6-甲酰基蝶呤被降解为蝶呤-6-羧酸。叶酸的光降解分为三个阶段。在第一阶段，光产物的形成遵循零级速率定律。在第二阶段，光产物的存在促进了叶酸的降解，并加速了降解过程。在第三阶段中，将6-甲酰基蝶呤降解为蝶呤-6-羧酸(PCA)是主要过程。该反应遵循一阶速率定律。同时，也发现了6-甲酰基蝶呤和蝶呤6-羧酸(PCA)均能促进叶酸的光降解。Hirakawa K通过荧光测量和高效液相色谱分析也表明表明，光辐射的叶酸是细胞中的光敏剂之一,会生成PCA，他们还发现紫外线辐射的叶酸或PCA会引起DNA特异性地在双链DNA的连续G残基处裂解，导致DNA损伤，动力学研究表明，DNA损伤主要是由叶酸产生的光激发PCA引起的，而不是叶酸本身引起的。总之，光辐射的叶酸生成PCA，它通过电子转移特异性地在连续的G残基上诱导DNA光氧化。叶酸补充剂的摄入过多可能会增加太阳紫外线导致皮肤癌的风险。
对于叶酸的稳定性，国内外学者已经进行了大量的研究，已经证明β-Ig与叶酸(FA)的可溶性微型化复合物会在不同程度上延迟其降解。Perez OE等人研究也表明β乳球蛋白能与叶酸(folic acid)结合成一种纳米级的复合物，这种形式的复合物不仅可以抵御胃十二指肠的对叶酸(folic acid)的水解作用，也可以有效防止叶酸的氧化作用。Zema,P研究了β-乳球蛋白与叶酸在不同pH条件下的结合，发现，ph越低，叶酸与β-乳球蛋白的结合率越高，相反，ph值升高，结合率下降，当ph升至7时，结合率为0，当ph＝3时，结合率为100％，这可能会导致叶酸在胃液中不受破坏。LiLiang等人将叶酸分别与a-乳白蛋白、牛血清蛋白和β-乳球蛋白结合，结果发现三种蛋白对叶酸的氧化都有一定的抑制作用。Jonathan Emiliano Laino等人研究也表明，叶酸在乳制品中28天内保持稳定。因此，将叶酸封装在蛋白质基质中是防止叶酸在储存或加工过程中降解以及提高其生物利用度的合适方法。另外，Liu Y等人将L-5-MTHF与抗坏血酸钠一起微囊化可有效地在强化面条中产生稳定的叶酸，Vahteristo LT等人研究发现在叶酸的提取和贮存过程中加入0.2％抗坏血酸(维生素C)或是0.2M的2-巯基乙醇就可以相对抑制叶酸的氧化，叶酸的最终回收率为70-95％。
5-甲基四氢叶酸是叶酸的一种衍生物，是叶酸在人体代谢中的活性形式，大量文献报道，其稳定性差，易被氧化分解，失去活性。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种提高5-甲基四氢叶酸稳定性的方法。
为了解决上述技术问题，本发明提供一种提高5-甲基四氢叶酸稳定性的方法：
将5-甲基四氢叶酸、Vc、谷胱甘肽与超纯水混合，得含5-甲基四氢叶酸的混合液；所述含5-甲基四氢叶酸的混合液中，5-甲基四氢叶酸的终浓度为0.01～10mg/L，Vc的终浓度0.05～0.3g/L，谷胱甘肽的终浓度为0.05～0.3g/L。
作为本发明的提高5-甲基四氢叶酸稳定性的方法的改进：含5-甲基四氢叶酸的混合液中，5-甲基四氢叶酸的终浓度为0.01～10mg/L，Vc的终浓度0.3g/L，谷胱甘肽的终浓度为0.3g/L。
本发明还同时提供了一种利用沙克乳酸杆菌(Lactobacillus sakei)提取5-甲基四氢叶酸的方法，依次进行以下步骤：
1)、将活化后的沙克乳酸杆菌(Lactobacillus sakei)挑取一个单菌落接种至10ml MRS培养基中，于(37±0.5)℃培养(24±0.5)h，然后混匀(利用漩涡振荡器震荡10s)，得混匀后菌体；
MRS液体培养基(1L)：酵母粉5g，硫酸镁0.58g，蛋白胨10g，葡萄糖20g，磷酸氢二钾2g，牛肉膏10g，硫酸锰0.25g，乙酸钠5g，柠檬酸氢二胺2g，Tween-80 1mL，加水定容至1L；pH7.0；高压灭菌，121℃，15min；
2)、将步骤1)所得的混匀后菌体倒入至1L的MRS液体培养基中，于(37±0.5)℃培养(24±0.5)h，从而实现扩培；
3)、超声波法提取：
将步骤2)所得的培养液先离心(8000r/min，4℃离心20min)，在离心所得的沉淀中加入0.2mol/L的磷酸盐缓冲液(Ph＝7.0)(16±1ml)，采用超声波破碎仪破碎；超声功率(390±40)W，超声时间(38±4)min，将所得的超声后产物进行离心(10000r/min，4℃离心10min)，取上清，所述上清为5-甲基四氢叶酸粗提液。
作为本发明的利用沙克乳酸杆菌(Lactobacillus sakei)提取5-甲基四氢叶酸的方法的改进：沙克乳酸杆菌(Lactobacillus sakei)为LZ217。
本发明还同时提供了一种增强液态奶中5-甲基四氢叶酸稳定性的方法：在液态奶中加入5-甲基四氢叶酸粗提液或者浓缩后的5-甲基四氢叶酸粗提液，以及加入Vc和谷胱甘肽，得强化奶；
所述强化奶中5-甲基四氢叶酸的终浓度为0.06～0.08mg/L，Vc的终浓度0.2～0.3g/L，谷胱甘肽的终浓度为0.2～0.3g/L。
本发明所用菌株Lactobacillus sakei LZ 217，在已发表的论述《产5-甲基四氢叶酸乳酸菌的筛选、鉴定及在发酵乳中的应用》中有明确告知。
本发明具有如下技术优势：
1、能有效提高液态下5-甲基四氢叶酸的稳定性；且方法简单、成本低。
2、提供一种高产5-甲基四氢叶酸的乳酸菌菌株Lactobacillus sakei LZ217培养作为5-甲基四氢叶酸的来源，提取菌内5-甲基四氢叶酸并用于强化牛奶，探究5-甲基四氢叶酸强化牛奶后的稳定性，为天然叶酸的稳定性研究和推广使用提供了提供了一条新的道路。
附图说明
下面结合附图对本发明的具体实施方式作进一步详细说明。
图1是强化奶中5-甲基四氢叶酸在不同稳定剂存在时保存率随保存时间的变化对比图；
注：图中消失的一组说明5-甲基四氢叶酸已被完全氧化。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此：
实施例1、
精确称量谷胱甘肽、vc各15，30，45，60，90mg溶于适量的超纯水，使vc和谷胱甘肽的浓度分别为0.15，0.3，0.45，0.6，0.9g/L；
称取5-甲基四氢叶酸标准品3mg溶于适量的超纯水中，超声10s辅助溶解，得到浓度为30μg/ml的5-甲基四氢叶酸溶液；
各取不同浓度的vc溶液10ml，分别加入等浓度的谷胱甘肽溶液10ml，再分别加入10ml的5-甲基四氢叶酸标准品溶液，充分摇匀；
从而配制成5种含5-甲基四氢叶酸的混合液，该5中混合液中，谷胱甘肽、vc、5-甲基四氢叶酸的终浓度如下表1所示。
另：单独配置了5-甲基四氢叶酸的水溶液，浓度为10μg/mL。
表1
性能实验1、将实施例1配制所得的5种混合液及水溶液(作为最初对照)，放入温度为25℃的恒温箱(避光)中，取样时间分别为1d，2d，3d，5d，7d，9d，11d，13d，过0.45μm的滤头，并进行HPLC分析，记录峰面积，计算5-甲基四氢叶酸的残存率(％)。
所得结果如下表2。
表2
由表2可以看出，vc和谷胱甘肽的存在，能大幅度的提高5-甲基四氢叶酸的稳定性能，即使低浓度的谷胱甘肽和vc，在13天内，5-甲基四氢叶酸的保存率高达88.29％，大幅度的提高5-甲基四氢叶酸的稳定性，当两者浓度达0.3g/L时，13天内，5-甲基四氢叶酸的保存率也接近99％；但在本实验结果中，当vc和谷胱甘肽的浓度为0.1，0.15g/L时，其对于5-甲基四氢叶酸的抗氧化性能反而低于了浓度为0.05g/L的谷胱甘肽和vc。这也说明只有合适的浓度才能有效实现提高5-甲基四氢叶酸在液体中的稳定性。
对比实验1、vc对5-甲基四氢叶酸稳定性的影响
本实验中，以纯5-甲基四氢叶酸溶液作为对照组，加入浓度分别为0.05，0.1，0.15，0.2，0.3g/L的vc作为实验组，实验条件同上述实验1。所得结果如下表3：
表3、不同浓度的Vc对5-甲基四氢叶酸残存率的影响
由表3可以看出，即使在避光条件下，5-甲基四氢叶酸以一定的速率很快被氧化分解，3天后保存率仅剩33.85％；而Vc作为保护5-甲基四氢叶酸中最为常用的一种抗氧化剂，其抗氧化能力在一定程度上与其浓度成正比，在某一时间段内，浓度较低的vc不仅不能起到保护5-甲基四氢叶酸的作用，反而会加速5-甲基四氢叶酸的氧化，当vc浓度低于0.05g/L时，24h内，5-甲基四氢叶酸的损失率便超过了纯溶液，当vc浓度在0.05g/L-0.2g/L之间，在前24小时内，vc能有效的保护5-甲基四氢叶酸，但在24后，5-甲基四氢叶酸的损失率却以更快的速度上升，低于24小时便完全氧化了5-甲基四氢叶酸，由上表3还可以看出，即使加大vc的浓度去保护5-甲基四氢叶酸，在一段时间过后，5-甲基四氢叶酸的保存率依然会呈现骤然下降的趋势，并且短时间内将完全氧化残存的5-甲基四氢叶酸。其原因可能是在储存过程中vc也发生了氧化，生成了具有氧化性的物质与5-甲基四氢叶酸发生反应，从而进一步加速了5-甲基四氢叶酸的降解，上表3同时也显示了当5-甲基四氢叶酸的残存率发生较大改变时，三次平行实验可见所测得的实验结果误差显著上升，这也反映了此时的5-甲基四氢叶酸在进行较为剧烈的反应，使得测量期间结果变化较大。
对比实验2、谷胱甘肽对5-甲基四氢叶酸稳定性的影响
本实验中，以纯5-甲基四氢叶酸溶液作为对照组，加入浓度分别为0.05，0.1，0.15，0.2，0.3g/L的vc作为实验组，实验条件同上述实验1。所得结果如下表4：
表4、不同浓度的谷胱甘肽对5-甲基四氢叶酸残存率的影响
由表4可知，谷胱甘肽对5-甲基四氢叶酸的影响与vc类似，低浓度的谷胱甘肽不仅不能起到保护的作用，反而能促使5-甲基四氢叶酸发生氧化，当谷胱甘肽浓度达到0.2g/L后，在2天内，对5-甲基四氢叶酸的活性具有一定的保护作用，其抗氧化作用也并不明显，当储存时间超过2天后，5-甲基四氢叶酸以更快的速率发生降解。其原因可能与谷胱甘肽易被氧化的化学性质有关，当谷胱甘肽分子间巯基脱水形成二硫键时，还原性谷胱甘肽即失去原有的活性，转变成氧化性谷胱甘肽。
对比实验3、
相对于实验1而言，改变混合液中谷胱甘肽、vc的终浓度，使得为Vc 0.02g/L+GSH0.08g/L，5-甲基四氢叶酸的终浓度保存不变，仍然为10μg/mL。
相对于实验1而言，改变混合液中谷胱甘肽、vc的终浓度，使得为Vc 0.08g/L+GSH0.02g/L，5-甲基四氢叶酸的终浓度保存不变，仍然为10μg/mL。
按照实验1所述方法进行5-甲基四氢叶酸的残存率的检测，上述2组的5-甲基四氢叶酸残存率在相同取样时间下远不如本发明的混合液Ⅰ。
实施例2、一种利用沙克乳酸杆菌(Lactobacillus sakei)LZ217提取5-甲基四氢叶酸的方法，依次进行以下步骤：
1)、将活化后的沙克乳酸杆菌(Lactobacillus sakei)挑取一个单菌落接种至10ml MRS培养基中，于37℃的培养箱里培养24h，然后混匀(利用漩涡振荡器震荡10s)，得混匀后菌体；
MRS液体培养基(1L)：酵母粉5g，硫酸镁0.58g，蛋白胨10g，葡萄糖20g，磷酸氢二钾2g，牛肉膏10g，硫酸锰0.25g，乙酸钠5g，柠檬酸氢二胺2g，Tween-80 1mL，加水定容至1L；pH7.0；高压灭菌，121℃，15min。
2)、将步骤1)所得的混匀后菌体倒入至1L的MRS液体培养基中，于37℃继续培养24h，从而实现扩培；
3)、超声波法提取：
将步骤2)所得的培养液先离心(8000r/min，4℃离心20min)，在离心所得的沉淀中加入0.2mol/L的磷酸盐缓冲液(Ph＝7.0)16ml，采用超声波破碎仪破碎；超声功率390W，超声时间38min，将所得的超声后产物进行离心(10000r/min，4℃离心10min，)取上清，该上清为5-甲基四氢叶酸粗提液。
HPLC检测该5-甲基四氢叶酸粗提液(约16ml)中含有70.9μg的5-甲基四氢叶酸。将5-甲基四氢叶酸粗提液经真空浓缩(浓缩温度约为40℃)至2ml左右，得浓缩液。
实施例4、一种提高液态牛奶中5-甲基四氢叶酸稳定性的方法，其特征是：
在1L牛奶(液态)中加入实施例3制备而得的浓缩液(含70.9μg的5-甲基四氢叶酸)，再加入0.3g的Vc、0.3g的谷胱甘肽，均匀混合；得强化奶。
取2ml强化奶，83.7℃水浴15min，使得5-甲基四氢叶酸与牛奶中的牛奶结合蛋白分离，待冷却至室温后，加入8mL的0.1％的冰乙酸，将牛奶中的蛋白沉淀，6000r/min，4℃离心10min。取上清液，加入2.5％的鸡胰酶和2.5％的木瓜蛋白酶，37℃水浴2h，过0.45μm滤头，作HPLC检测。HPLC测定条件：流动相为0.02mol/L，pH＝7.2的磷酸二氢钾/磷酸氢二钾缓冲液，柱类型：C18反向柱；甲醇：磷酸盐＝14：86；柱温：30℃；流速1mL/min，进样量10μL，时间为15min，检测波长290nm。
以未添加抗氧化剂作空白对照、添加了0.3g/L的vc和添加了0.3g/L的GSH作对照，探究牛奶中的5-甲基四氢叶酸在0.3g/L的vc和0.3g/L的谷胱甘肽联合作用与单独使用Vc和GSH时，牛奶中5-甲基四氢叶酸在温度为25℃时的稳定性。每隔3d取一次样做检测与初始5-甲基四氢叶酸含量作比较，计算保存率。结果如图1所示，由图1可看出，在没有添加抗氧化剂的情况下，5-甲基四氢叶酸很快发生降解，3天内保留率仅为37.18％，添加了0.3g/L的谷胱甘肽，3天后保留率仅为20.03％，其5-甲基四氢叶酸损失率超过了对照组，只添加了Vc的实验组，5-甲基四氢叶酸仅在6天内保存较好，9天后，损失率超过50％，12天后基本被氧化分解，而vc和谷胱甘肽的联合，5-甲基四氢叶酸在18天内保存率较好，其效果远远超过了vc、谷胱甘肽单独使用。
最后，还需要注意的是，以上列举的仅是本发明的若干个具体实施例。显然，本发明不限于以上实施例，还可以有许多变形。本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容直接导出或联想到的所有变形，均应认为是本发明的保护范围。
Claims (5)
1.提高5-甲基四氢叶酸稳定性的方法，其特征在于：
将5-甲基四氢叶酸、Vc、谷胱甘肽与超纯水混合，得含5-甲基四氢叶酸的混合液；所述含5-甲基四氢叶酸的混合液中，5-甲基四氢叶酸的终浓度为0.01～10mg/L，Vc的终浓度0.05～0.3g/L，谷胱甘肽的终浓度为0.05～0.3g/L。
2.根据权利要求1所述的提高5-甲基四氢叶酸稳定性的方法，其特征在于：
所述含5-甲基四氢叶酸的混合液中，5-甲基四氢叶酸的终浓度为0.01～10mg/L，Vc的终浓度0.3g/L，谷胱甘肽的终浓度为0.3g/L。
3.利用沙克乳酸杆菌(Lactobacillus sakei)提取5-甲基四氢叶酸的方法，其特征在于依次进行以下步骤：
1)、将活化后的沙克乳酸杆菌(Lactobacillus sakei)挑取一个单菌落接种至10mlMRS培养基中，于(37±0.5)℃培养(24±0.5)h，然后混匀，得混匀后菌体；
MRS液体培养基：酵母粉5g，硫酸镁0.58g，蛋白胨10g，葡萄糖20g，磷酸氢二钾2g，牛肉膏10g，硫酸锰0.25g，乙酸钠5g，柠檬酸氢二胺2g，Tween-80 1mL，加水定容至1L；pH7.0；高压灭菌，121℃，15min；
2)、将步骤1)所得的混匀后菌体倒入至1L的MRS液体培养基中，于(37±0.5)℃培养(24±0.5)h，从而实现扩培；
3)、超声波法提取：
将步骤2)所得的培养液先离心，在离心所得的沉淀中加入0.2mol/L的磷酸盐缓冲液(16±3ml)，采用超声波破碎仪破碎；超声功率(390±40)W，超声时间(38±4)min，将所得的超声后产物进行离心，取上清，所述上清为5-甲基四氢叶酸粗提液。
4.根据权利要求3所述的利用沙克乳酸杆菌(Lactobacillus sakei)提取5-甲基四氢叶酸的方法，其特征在于：沙克乳酸杆菌(Lactobacillus sakei)为LZ217。
5.增强液态奶中5-甲基四氢叶酸稳定性的方法，其特征在于：
在液态奶中加入5-甲基四氢叶酸粗提液或者浓缩后的5-甲基四氢叶酸粗提液，以及加入Vc和谷胱甘肽，得强化奶；
所述强化奶中5-甲基四氢叶酸的终浓度为0.06～0.08mg/L，Vc的终浓度0.2～0.3g/L，谷胱甘肽的终浓度为0.2～0.3g/L。
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Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113125611A (zh) * | 2021-04-22 | 2021-07-16 | 北京斯利安药业有限公司 | 叶酸中杂质6-甲酰蝶呤含量的检测方法 |
| CN116087373A (zh) * | 2023-03-27 | 2023-05-09 | 北京和合医学诊断技术股份有限公司 | 红细胞中叶酸和5-甲基四氢叶酸的检测方法及前处理方法 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20070202215A1 (en) * | 2006-02-28 | 2007-08-30 | Zahramehran Salari Lak | Dietary nutritional supplements for persons consuming alcohol products |
| US20170239275A1 (en) * | 2016-02-22 | 2017-08-24 | Matthew Scott Tucker | Compositions Containing Vitamin D and Magnesium |
| US20180125915A1 (en) * | 2016-11-07 | 2018-05-10 | Coast Wellness (dba RVRS) | Natural formulation for treating hangover |
| CN110461845A (zh) * | 2017-03-31 | 2019-11-15 | 默克专利股份有限公司 | 5-甲基-（6s）-四氢叶酸的结晶钠盐 |
-
2020
- 2020-01-29 CN CN202010077473.7A patent/CN111280450B/zh active Active
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20070202215A1 (en) * | 2006-02-28 | 2007-08-30 | Zahramehran Salari Lak | Dietary nutritional supplements for persons consuming alcohol products |
| US20170239275A1 (en) * | 2016-02-22 | 2017-08-24 | Matthew Scott Tucker | Compositions Containing Vitamin D and Magnesium |
| US20180125915A1 (en) * | 2016-11-07 | 2018-05-10 | Coast Wellness (dba RVRS) | Natural formulation for treating hangover |
| CN110461845A (zh) * | 2017-03-31 | 2019-11-15 | 默克专利股份有限公司 | 5-甲基-（6s）-四氢叶酸的结晶钠盐 |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113125611A (zh) * | 2021-04-22 | 2021-07-16 | 北京斯利安药业有限公司 | 叶酸中杂质6-甲酰蝶呤含量的检测方法 |
| CN113125611B (zh) * | 2021-04-22 | 2023-04-18 | 北京斯利安药业有限公司 | 叶酸中杂质6-甲酰蝶呤含量的检测方法 |
| CN116087373A (zh) * | 2023-03-27 | 2023-05-09 | 北京和合医学诊断技术股份有限公司 | 红细胞中叶酸和5-甲基四氢叶酸的检测方法及前处理方法 |
| CN116087373B (zh) * | 2023-03-27 | 2023-07-04 | 北京和合医学诊断技术股份有限公司 | 红细胞中叶酸和5-甲基四氢叶酸的检测方法及前处理方法 |
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| Publication number | Publication date |
|---|---|
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