CN111269866B - 用于枯草芽孢杆菌发酵培养基的复合营养源及其制备方法 - Google Patents
用于枯草芽孢杆菌发酵培养基的复合营养源及其制备方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及一种用于枯草芽孢杆菌发酵培养基的复合营养源及其制备方法，所述用于枯草芽孢杆菌发酵培养基的复合营养源包括芯源及依次包覆在芯源外侧的第一壁源和第二壁源，芯源为微孔豆粕颗粒，第一壁源包括玉米粉和酵母膏，第二壁源包括黄豆粉和蔗糖，其中，芯源、第一壁源和第二壁源按重量份的比为100:(100‑125):(165‑230)；所述第一壁源中，玉米粉和酵母膏按重量份的比为100:(115‑130)；第二壁源中，黄豆粉和蔗糖按重量份的比为100:(155‑200)。本发明与现有技术相比，根据本发明实施例的用于枯草芽孢杆菌发酵培养基的复合营养源，可以提高枯草芽孢杆菌的芽孢产率和活菌含量。
Description
技术领域
本发明属于微生物发酵技术领域，尤其涉及一种用于枯草芽孢杆菌发酵培养基的复合营养源及其制备方法。
背景技术
益生芽孢杆菌(Bacillus subtilis)由于其稳定性好、抗逆性强、存活率高等，给制剂的保藏和运输都提供了极大的便利。因而芽孢杆菌的研究开发与应用受到人们广泛重视。芽孢杆菌在外界营养即将耗尽时在细胞内形成抗逆性很强的休眠体，在工业化生产过程中，微生态制剂难免要经历强酸、强碱和高温，以及较长的货架期，因而提高益生芽孢杆菌的芽孢产量产率即成为企业降本增效的一大手段。
枯草芽孢杆菌是益生芽孢杆菌中最重要的芽孢杆菌，其作为微生态制剂在农林渔牧业中得到广泛的应用。作为较为成熟的工业化生产菌种，行业竞争日益激烈，如果能在这激烈的竞争之中提高芽孢的产量产率，就能拿到产能优势，并且保证后期的储存和使用效果。
发酵培养组分是影响枯草芽孢杆菌芽孢产率和活菌含量的关键因素。当前工业枯草芽孢杆菌发酵终止时的芽孢产率只能达到60％-85％，活菌含量约为500亿cfu/ml。如何制备优化的发酵培养组分，对于提高枯草芽孢杆菌的芽孢产率和活菌含量，具有重要意义。
发明内容
为了克服现有技术的不足，本发明提供一种用于枯草芽孢杆菌发酵培养基的复合营养源及其制备方法，本发明主旨如下：
根据本发明的一方面，一种用于枯草芽孢杆菌发酵培养基的复合营养源，所述用于枯草芽孢杆菌发酵培养基的复合营养源包括芯源及依次包覆在芯源外侧的第一壁源和第二壁源，所述芯源为微孔豆粕颗粒，第一壁源包括玉米粉和酵母膏，第二壁源包括黄豆粉和蔗糖，其中，所述芯源、第一壁源和第二壁源按重量份的比为100:(100-125)：(165-230)；所述第一壁源中，玉米粉和酵母膏按重量份的比为100:(115-130)；所述第二壁源中，黄豆粉和蔗糖按重量份的比为100:(155-200)。
根据本发明的另一方面，一种用于枯草芽孢杆菌发酵培养基的复合营养源的制备方法，所述方法包括：
步骤一、芯源制备
1)豆粕预处理
采用乙醚对豆粕粉进行沉浸180min，然后在95℃的温度下保温90min，冷却至室温，离心收集沉淀物；
采用乙醇对豆粕沉淀物进行二次沉浸，沉浸时间为90min，然后在60℃的温度下保温90min，冷却至室温，离心收集沉淀物后在90℃温度下干燥处理，并通过超微粉碎，得到平均粒径为50μm-128μm的预处理豆粕粉；
2)豆粕水解处理
将预处理后的豆粕粉配制成豆粕粉水悬液，调节水悬液PH至11-13，在80℃温度下水浴45min，得到豆粕水解液；
3)豆粕微孔化处理
将豆粕水解液经过加压雾化，并在冷却介质中冷冻成型，制得具有微孔表面的豆粕颗粒；
步骤二、第一壁源制备和包覆
通过超微粉碎将玉米粉体的平均粒径控制在25μm-80μm，并和酵母膏按重量份的比为100:(115-130)充分混合，121℃灭菌15min后沉浸于乙醇，制成固液质量比为1:10的第一壁源悬液；
将第一壁源悬液经过加压雾化，并在冷却介质中对具有微孔表面的豆粕颗粒进行包覆，制得第一壁源包覆颗粒；
步骤三、第二壁源制备和包覆
将黄豆粉和蔗糖通过超微粉进行粉碎，黄豆粉平均粒径控制在35μm-50μm，蔗糖平均粒径控制在50μm-80μm，并按重量份的比为100:(155-200)充分混合，121℃灭菌15min后沉浸于乙醇，制成固液质量比为1:5的第二壁源悬液；
将第二壁源悬液经过加压雾化，并在冷却介质中对第一壁源包覆颗粒进行包覆，制得第二壁源包覆颗粒；
步骤四、复合营养源制备
将第二壁源包覆颗粒在50℃温度下进行热风循环筛选，得到用于枯草芽孢杆菌发酵培养基的复合营养源。
根据本发明的示例性实施例，所述豆粕水解处理时，豆粕粉水悬液的固液质量比为1:25。
根据本发明的示例性实施例，所述豆粕微孔化处理后，平均粒径不大于12.8μm，比表面积不小于152.5m2/g。
根据本发明的示例性实施例，所述豆粕微孔化处理时，其中雾化压力为2.8MPa-4.5MPa，冷却介质为液态二氧化碳，冷却温度为-9℃。
根据本发明的示例性实施例，所述第一壁源制备和包覆时，雾化压力为3.5MPa-5.5MPa，冷却介质为液态二氧化碳，冷却温度为-5℃。
根据本发明的示例性实施例，所述第二壁源制备和包覆时，雾化压力为4.5MPa-6.5MPa，冷却介质为液态二氧化碳，冷却温度为-2℃。
根据本发明的示例性实施例，用于枯草芽孢杆菌发酵培养基的复合营养源的平均粒径不大于66.9μm。
本发明通过芯源、第一壁源和第二壁源的制备实现用于枯草芽孢杆菌发酵培养基的复合营养源的制备。与现有技术相比，根据本发明实施例的用于枯草芽孢杆菌发酵培养基的复合营养源，可以有效提高枯草芽孢杆菌的芽孢产率和活菌含量。
具体实施方式
为使本发明技术方案和优点更加清楚，通过以下几个具体实施例对本发明作进一步详细描述。显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1：
用于枯草芽孢杆菌发酵培养基的复合营养源的制备
步骤一、芯源制备
1)豆粕预处理
采用乙醚对豆粕粉进行沉浸180min，然后在95℃的温度下保温90min，冷却至室温，离心收集沉淀物；
采用乙醇对豆粕沉淀物进行二次沉浸，沉浸时间为90min，然后在60℃的温度下保温90min，冷却至室温，离心收集沉淀物后在90℃温度下干燥处理，并通过超微粉碎，得到平均粒径为50μm的预处理豆粕粉；
2)豆粕水解处理
将预处理后的豆粕粉配制成固液质量比为1:25的豆粕粉水悬液，调节水悬液PH至11-13，在80℃温度下水浴45min，得到豆粕水解液；
3)豆粕微孔化处理；
将豆粕水解液在4.5MPa的雾化压力下经过加压雾化，并在温度为-9℃的液态二氧化碳中冷冻成型，制得具有微孔表面的豆粕颗粒；
步骤二、第一壁源制备和包覆
通过超微粉碎将玉米粉体的平均粒径控制在25μm，并和酵母膏按重量份的比为100:115充分混合，121℃灭菌15min后沉浸于乙醇，制成固液质量比为1:10的第一壁源悬液；
将第一壁源悬液在5.5MPa的雾化压力下经过加压雾化，并在温度为-5℃的液态二氧化碳中对具有微孔表面的豆粕颗粒进行包覆，制得第一壁源包覆颗粒；
步骤三、第二壁源制备和包覆
将黄豆粉和蔗糖通过超微粉进行粉碎，黄豆粉平均粒径控制在35μm，蔗糖平均粒径控制在50μm，并按重量份的比为100:155充分混合，121℃灭菌15min后沉浸于乙醇，制成固液质量比为1:5的第二壁源悬液；
将第二壁源悬液在4.5MPa的雾化压力下经过加压雾化，并在温度为-2℃的液态二氧化碳中对第一壁源包覆颗粒进行包覆，制得第二壁源包覆颗粒；
步骤四、复合营养源制备
将第二壁源包覆颗粒在50℃温度下进行热风循环筛选，得到用于枯草芽孢杆菌发酵培养基的复合营养源。
实施例2：
用于枯草芽孢杆菌发酵培养基的复合营养源的制备
步骤一、芯源制备
1)豆粕预处理
采用乙醚对豆粕粉进行沉浸180min，然后在95℃的温度下保温90min，冷却至室温，离心收集沉淀物；
采用乙醇对豆粕沉淀物进行二次沉浸，沉浸时间为90min，然后在60℃的温度下保温90min，冷却至室温，离心收集沉淀物后在90℃温度下干燥处理，并通过超微粉碎，得到平均粒径为85μm的预处理豆粕粉；
2)豆粕水解处理
将预处理后的豆粕粉配制成固液质量比为1:25的豆粕粉水悬液，调节水悬液PH至11-13，在80℃温度下水浴45min，得到豆粕水解液；
3)豆粕微孔化处理；
将豆粕水解液在3.2MPa的雾化压力下经过加压雾化，并在温度为-9℃的液态二氧化碳中冷冻成型，制得具有微孔表面的豆粕颗粒；
步骤二、第一壁源制备和包覆
通过超微粉碎将玉米粉体的平均粒径控制在40μm，并和酵母膏按重量份的比为100:130充分混合，121℃灭菌15min后沉浸于乙醇，制成固液质量比为1:10的第一壁源悬液；
将第一壁源悬液在3.8MPa的雾化压力下经过加压雾化，并在温度为-5℃的液态二氧化碳中对具有微孔表面的豆粕颗粒进行包覆，制得第一壁源包覆颗粒；
步骤三、第二壁源制备和包覆
将黄豆粉和蔗糖通过超微粉进行粉碎，黄豆粉平均粒径控制在35μm，蔗糖平均粒径控制在65μm，并按重量份的比为100:180充分混合，121℃灭菌15min后沉浸于乙醇，制成固液质量比为1:5的第二壁源悬液；
将第二壁源悬液在4.5MPa的雾化压力下经过加压雾化，并在温度为-2℃的液态二氧化碳中对第一壁源包覆颗粒进行包覆，制得第二壁源包覆颗粒；
步骤四、复合营养源制备
将第二壁源包覆颗粒在50℃温度下进行热风循环筛选，得到用于枯草芽孢杆菌发酵培养基的复合营养源。
实施例3：
用于枯草芽孢杆菌发酵培养基的复合营养源的制备
步骤一、芯源制备
1)豆粕预处理
采用乙醚对豆粕粉进行沉浸180min，然后在95℃的温度下保温90min，冷却至室温，离心收集沉淀物；
采用乙醇对豆粕沉淀物进行二次沉浸，沉浸时间为90min，然后在60℃的温度下保温90min，冷却至室温，离心收集沉淀物后在90℃温度下干燥处理，并通过超微粉碎，得到平均粒径为95μm的预处理豆粕粉；
2)豆粕水解处理
将预处理后的豆粕粉配制成固液质量比为1:25的豆粕粉水悬液，调节水悬液PH至11-13，在80℃温度下水浴45min，得到豆粕水解液；
3)豆粕微孔化处理；
将豆粕水解液在3.8MPa的雾化压力下经过加压雾化，并在温度为-9℃的液态二氧化碳中冷冻成型，制得具有微孔表面的豆粕颗粒；
步骤二、第一壁源制备和包覆
通过超微粉碎将玉米粉体的平均粒径控制在80μm，并和酵母膏按重量份的比为100:130充分混合，121℃灭菌15min后沉浸于乙醇，制成固液质量比为1:10的第一壁源悬液；
将第一壁源悬液在5.2MPa的雾化压力下经过加压雾化，并在温度为-5℃的液态二氧化碳中对具有微孔表面的豆粕颗粒进行包覆，制得第一壁源包覆颗粒；
步骤三、第二壁源制备和包覆
将黄豆粉和蔗糖通过超微粉进行粉碎，黄豆粉平均粒径控制在50μm，蔗糖平均粒径控制在70μm，并按重量份的比为100:200充分混合，121℃灭菌15min后沉浸于乙醇，制成固液质量比为1:5的第二壁源悬液；
将第二壁源悬液在5.5MPa的雾化压力下经过加压雾化，并在温度为-2℃的液态二氧化碳中对第一壁源包覆颗粒进行包覆，制得第二壁源包覆颗粒；
步骤四、复合营养源制备
将第二壁源包覆颗粒在50℃温度下进行热风循环筛选，得到用于枯草芽孢杆菌发酵培养基的复合营养源。
实施例4：
用于枯草芽孢杆菌发酵培养基的复合营养源的制备
步骤一、芯源制备
1)豆粕预处理
采用乙醚对豆粕粉进行沉浸180min，然后在95℃的温度下保温90min，冷却至室温，离心收集沉淀物；
采用乙醇对豆粕沉淀物进行二次沉浸，沉浸时间为90min，然后在60℃的温度下保温90min，冷却至室温，离心收集沉淀物后在90℃温度下干燥处理，并通过超微粉碎，得到平均粒径为108μm的预处理豆粕粉；
2)豆粕水解处理
将预处理后的豆粕粉配制成固液质量比为1:25的豆粕粉水悬液，调节水悬液PH至11-13，在80℃温度下水浴45min，得到豆粕水解液；
3)豆粕微孔化处理；
将豆粕水解液在4.5MPa的雾化压力下经过加压雾化，并在温度为-9℃的液态二氧化碳中冷冻成型，制得具有微孔表面的豆粕颗粒；
步骤二、第一壁源制备和包覆
通过超微粉碎将玉米粉体的平均粒径控制在65μm，并和酵母膏按重量份的比为100:125充分混合，121℃灭菌15min后沉浸于乙醇，制成固液质量比为1:10的第一壁源悬液；
将第一壁源悬液在3.5MPa的雾化压力下经过加压雾化，并在温度为-5℃的液态二氧化碳中对具有微孔表面的豆粕颗粒进行包覆，制得第一壁源包覆颗粒；
步骤三、第二壁源制备和包覆
将黄豆粉和蔗糖通过超微粉进行粉碎，黄豆粉平均粒径控制在42μm，蔗糖平均粒径控制在80μm，并按重量份的比为100:175充分混合，121℃灭菌15min后沉浸于乙醇，制成固液质量比为1:5的第二壁源悬液；
将第二壁源悬液在6.5MPa的雾化压力下经过加压雾化，并在温度为-2℃的液态二氧化碳中对第一壁源包覆颗粒进行包覆，制得第二壁源包覆颗粒；
步骤四、复合营养源制备
将第二壁源包覆颗粒在50℃温度下进行热风循环筛选，得到用于枯草芽孢杆菌发酵培养基的复合营养源。
实施例5：
用于枯草芽孢杆菌发酵培养基的复合营养源的制备
步骤一、芯源制备
1)豆粕预处理
采用乙醚对豆粕粉进行沉浸180min，然后在95℃的温度下保温90min，冷却至室温，离心收集沉淀物；
采用乙醇对豆粕沉淀物进行二次沉浸，沉浸时间为90min，然后在60℃的温度下保温90min，冷却至室温，离心收集沉淀物后在90℃温度下干燥处理，并通过超微粉碎，得到平均粒径为128μm的预处理豆粕粉；
2)豆粕水解处理
将预处理后的豆粕粉配制成固液质量比为1:25的豆粕粉水悬液，调节水悬液PH至11-13，在80℃温度下水浴45min，得到豆粕水解液；
3)豆粕微孔化处理；
将豆粕水解液在2.8MPa的雾化压力下经过加压雾化，并在温度为-9℃的液态二氧化碳中冷冻成型，制得具有微孔表面的豆粕颗粒；
步骤二、第一壁源制备和包覆
通过超微粉碎将玉米粉体的平均粒径控制在50μm，并和酵母膏按重量份的比为100:125充分混合，121℃灭菌15min后沉浸于乙醇，制成固液质量比为1:10的第一壁源悬液；
将第一壁源悬液在5.2MPa的雾化压力下经过加压雾化，并在温度为-5℃的液态二氧化碳中对具有微孔表面的豆粕颗粒进行包覆，制得第一壁源包覆颗粒；
步骤三、第二壁源制备和包覆
将黄豆粉和蔗糖通过超微粉进行粉碎，黄豆粉平均粒径控制在50μm，蔗糖平均粒径控制在77μm，并按重量份的比为100:185充分混合，121℃灭菌15min后沉浸于乙醇，制成固液质量比为1:5的第二壁源悬液；
将第二壁源悬液在4.8MPa的雾化压力下经过加压雾化，并在温度为-2℃的液态二氧化碳中对第一壁源包覆颗粒进行包覆，制得第二壁源包覆颗粒；
步骤四、复合营养源制备
将第二壁源包覆颗粒在50℃温度下进行热风循环筛选，得到用于枯草芽孢杆菌发酵培养基的复合营养源。
实施例6：
根据实施例1-5制备用于枯草芽孢杆菌发酵培养基的复合营养源的技术方案，在豆粕微孔化处理后获得具有微孔表面的豆粕颗粒试样组，试样组分别编号为A1、A2、A3、A4和A5；根据GB/T 19587-2017《气体吸附BET法测定固态物质比表面积》对具有微孔表面的豆粕颗粒的比表面积进行测定；根据ASTM E112-2013《测定平均粒径的标准试验方法》对具有微孔表面的豆粕颗粒的平均粒径进行测定，其检测结果见表1。
表1
| 实施例 | 试样组编号 | 组内样本数 | 平均粒径μm | 比表面积m<sup>2</sup>/g |
| 实施例1 | A1 | 50 | 12.1 | 157.3 |
| 实施例2 | A2 | 50 | 12.5 | 161.1 |
| 实施例3 | A3 | 50 | 11.3 | 168.2 |
| 实施例4 | A4 | 50 | 12.8 | 152.5 |
| 实施例5 | A5 | 50 | 11.9 | 169.9 |
根据实施例1-5制备用于枯草芽孢杆菌发酵培养基的复合营养源的技术方案，获得用于枯草芽孢杆菌发酵培养基的复合营养源试样组，试样组分别编号为B1、B2、B3、B4和B5；根据ASTM E112-2013《测定平均粒径的标准试验方法》对用于枯草芽孢杆菌发酵培养基的复合营养源颗粒的平均粒径进行测定，其检测结果见表2。
表2
| 实施例 | 试样组编号 | 组内样本数 | 平均粒径μm | 粒度分布μm |
| 实施例1 | B1 | 50 | 62.8 | 32.1-85.2 |
| 实施例2 | B2 | 50 | 63.2 | 33.5-88.9 |
| 实施例3 | B3 | 50 | 59.8 | 42.9-92.5 |
| 实施例4 | B4 | 50 | 58.1 | 39.5-81.8 |
| 实施例5 | B5 | 50 | 66.9 | 42.3-79.3 |
实施例7：
采用本申请实施例1-5制备的用于枯草芽孢杆菌发酵培养基的复合营养源作为发酵培养组分和作为对比例的现有通用的发酵培养基组分，分别对枯草芽孢杆菌进行培养。其中本申请实施例1-5制备的用于枯草芽孢杆菌发酵培养基的复合营养源试样组分别编号为C1、C2、C3、C4和C5，其结构和组元配比见表3和表4。现有对比例的试样组分别编号为D1，其组元配比见表5。
表3
表4
表5
枯草芽孢杆菌培养：
1)枯草芽孢杆菌活化：将本实验室保藏菌株枯草芽孢杆菌SQ0617冻干管划线于LB固体培养基平板上30℃-37培养2-4天。其中LB培养基配方为：蛋白胨1％，氯化钠1％，酵母浸粉0.5％，琼脂粉2％，调PH值7.0-7.2，121℃灭菌20min
2)枯草芽孢杆菌复壮：挑选①所得枯草芽孢杆菌平板上单菌落继续划线LB培养基平板于30℃培养4天。
3)将步骤2)处理好的种子液接种于高活菌发酵培养基中，高活菌发酵培养基中分别为实施例1-实施例5所制得的用于枯草芽孢杆菌发酵培养基的复合营养源以及对比例D1组元，121℃灭菌30min,降温保持温度于28-32℃，罐压0.05MPa，发酵罐转速300r/min，通气比0.5:1，然后将步骤2)所得种子按照2％接种量接种，连续发酵培养24小时。
4)在步骤3)培养至24h之后改变发酵参数：设置培养温度35-37℃，发酵罐转速80r/min，通气比0.3:1，继续发酵4-6h。
5)在步骤4)结束后调发酵液的PH至4-5，酸化2h。
6)完成步骤5)之后进行正常的浓缩加辅料喷雾干燥，获得高含量稳定性高的成品枯草芽孢杆菌活菌剂。
对所制得的枯草芽孢杆菌进行芽孢产率和活菌含量测定，测定结果见表6。
表6
| 试样组 | 芽孢产率 | 活菌含量 |
| C1 | 85％ | 600亿cfu/ml |
| C2 | 88％ | 632亿cfu/ml |
| C3 | 95％ | 631亿cfu/ml |
| C4 | 92％ | 642亿cfu/ml |
| C5 | 86％ | 655亿cfu/ml |
| D1 | 82％ | 500亿cfu/ml |
由表6可见，采用本申请实施例制备的用于枯草芽孢杆菌发酵培养基的复合营养源作为发酵培养组分，可以有效提高枯草芽孢杆菌的芽孢产率和活菌含量。
以上所述的具体实施方式，对本发明的目的、技术方案和有益效果进行了进一步详细说明，所应理解的是，以上所述仅为本发明的具体实施方式而已，并不用于限定本发明的保护范围，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (3)
1.一种用于枯草芽孢杆菌发酵培养基的复合营养源，其特征在于，所述用于枯草芽孢杆菌发酵培养基的复合营养源包括芯源及依次包覆在芯源外侧的第一壁源和第二壁源，所述芯源为微孔豆粕颗粒，第一壁源包括玉米粉和酵母膏，第二壁源包括黄豆粉和蔗糖，其中，所述芯源、第一壁源和第二壁源按重量份的比为100:(100-125):(165-230)；其中，用于枯草芽孢杆菌发酵培养基的复合营养源的制备方法包括：
步骤一、芯源制备
1)豆粕预处理
采用乙醚对豆粕粉进行沉浸180min，然后在95℃的温度下保温90min，冷却至室温，离心收集沉淀物；
采用乙醇对豆粕沉淀物进行二次沉浸，沉浸时间为90min，然后在60℃的温度下保温90min，冷却至室温，离心收集沉淀物后在90℃温度下干燥处理，并通过超微粉碎，得到平均粒径为50μm-128μm的预处理豆粕粉；
2)豆粕水解处理
将预处理后的豆粕粉配制成豆粕粉水悬液，调节水悬液PH至11-13，在80℃温度下水浴45min，得到豆粕水解液，其中，豆粕粉水悬液的固液质量比为1:25；
3)豆粕微孔化处理
将豆粕水解液经过加压雾化，并在冷却介质中冷冻成型，制得具有微孔表面的豆粕颗粒，其中，雾化压力为2.8MPa-4.5MPa，冷却介质为液态二氧化碳，冷却温度为-9℃；
所述豆粕微孔化处理后，平均粒径不大于12.8μm，比表面积不小于152.5m2/g；
步骤二、第一壁源制备和包覆
通过超微粉碎将玉米粉体的平均粒径控制在25μm-80μm，并和酵母膏按重量份的比为100:(115-130)充分混合，121℃灭菌15min后沉浸于乙醇，制成固液质量比为1:10的第一壁源悬液；
将第一壁源悬液经过加压雾化，并在冷却介质中对具有微孔表面的豆粕颗粒进行包覆，制得第一壁源包覆颗粒，其中，雾化压力为3.5MPa-5.5MPa，冷却介质为液态二氧化碳，冷却温度为-5℃；
步骤三、第二壁源制备和包覆
将黄豆粉和蔗糖通过超微粉进行粉碎，黄豆粉平均粒径控制在35μm-50μm，蔗糖平均粒径控制在50μm-80μm，并按重量份的比为100:(155-200)充分混合，121℃灭菌15min后沉浸于乙醇，制成固液质量比为1:5的第二壁源悬液；
将第二壁源悬液经过加压雾化，并在冷却介质中对第一壁源包覆颗粒进行包覆，制得第二壁源包覆颗粒，其中，雾化压力为4.5MPa-6.5MPa，冷却介质为液态二氧化碳，冷却温度为-2℃；
步骤四、复合营养源制备
将第二壁源包覆颗粒在50℃温度下进行热风循环筛选，得到用于枯草芽孢杆菌发酵培养基的复合营养源。
2.一种用于枯草芽孢杆菌发酵培养基的复合营养源的制备方法，其特征在于，所述方法包括：
步骤一、芯源制备
1)豆粕预处理
采用乙醚对豆粕粉进行沉浸180min，然后在95℃的温度下保温90min，冷却至室温，离心收集沉淀物；
采用乙醇对豆粕沉淀物进行二次沉浸，沉浸时间为90min，然后在60℃的温度下保温90min，冷却至室温，离心收集沉淀物后在90℃温度下干燥处理，并通过超微粉碎，得到平均粒径为50μm-128μm的预处理豆粕粉；
2)豆粕水解处理
将预处理后的豆粕粉配制成豆粕粉水悬液，调节水悬液PH至11-13，在80℃温度下水浴45min，得到豆粕水解液，其中，豆粕粉水悬液的固液质量比为1:25；
3)豆粕微孔化处理
将豆粕水解液经过加压雾化，并在冷却介质中冷冻成型，制得具有微孔表面的豆粕颗粒，其中，雾化压力为2.8MPa-4.5MPa，冷却介质为液态二氧化碳，冷却温度为-9℃；
所述豆粕微孔化处理后，平均粒径不大于12.8μm，比表面积不小于152.5m2/g；
步骤二、第一壁源制备和包覆
通过超微粉碎将玉米粉体的平均粒径控制在25μm-80μm，并和酵母膏按重量份的比为100:(115-130)充分混合，121℃灭菌15min后沉浸于乙醇，制成固液质量比为1:10的第一壁源悬液；
将第一壁源悬液经过加压雾化，并在冷却介质中对具有微孔表面的豆粕颗粒进行包覆，制得第一壁源包覆颗粒，其中，雾化压力为3.5MPa-5.5MPa，冷却介质为液态二氧化碳，冷却温度为-5℃；
步骤三、第二壁源制备和包覆
将黄豆粉和蔗糖通过超微粉进行粉碎，黄豆粉平均粒径控制在35μm-50μm，蔗糖平均粒径控制在50μm-80μm，并按重量份的比为100:(155-200)充分混合，121℃灭菌15min后沉浸于乙醇，制成固液质量比为1:5的第二壁源悬液；
将第二壁源悬液经过加压雾化，并在冷却介质中对第一壁源包覆颗粒进行包覆，制得第二壁源包覆颗粒，其中，雾化压力为4.5MPa-6.5MPa，冷却介质为液态二氧化碳，冷却温度为-2℃；
其中，芯源、第一壁源和第二壁源按重量份的比为100:(100-125):(165-230)；
步骤四、复合营养源制备
将第二壁源包覆颗粒在50℃温度下进行热风循环筛选，得到用于枯草芽孢杆菌发酵培养基的复合营养源。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述用于枯草芽孢杆菌发酵培养基的复合营养源的平均粒径不大于66.9μm。
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