CN111265521A - 小分子化合物sjb2-043作为抑制马立克氏病毒药物的新用途 - Google Patents

小分子化合物sjb2-043作为抑制马立克氏病毒药物的新用途 Download PDF

Info

Publication number
CN111265521A
CN111265521A CN202010246020.2A CN202010246020A CN111265521A CN 111265521 A CN111265521 A CN 111265521A CN 202010246020 A CN202010246020 A CN 202010246020A CN 111265521 A CN111265521 A CN 111265521A
Authority
CN
China
Prior art keywords
sjb2
marek
virus
compound
drug
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN202010246020.2A
Other languages
English (en)
Other versions
CN111265521B (zh
Inventor
艾永兴
林俊彦
许家翠
谢知航
周宏达
王梦涵
王梦云
周小露
周文杰
周正轩
吕岩
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Jilin University
Original Assignee
Jilin University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Jilin University filed Critical Jilin University
Priority to CN202010246020.2A priority Critical patent/CN111265521B/zh
Publication of CN111265521A publication Critical patent/CN111265521A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN111265521B publication Critical patent/CN111265521B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/42—Oxazoles
    • A61K31/423—Oxazoles condensed with carbocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A61P31/22—Antivirals for DNA viruses for herpes viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)

Abstract

本发明涉及化合物的新用途领域，具体涉及小分子化合物SJB2‑043作为抑制马立克氏病毒药物的新用途，通过CEF细胞的制备和培养、药物毒性实验、抑制病毒噬斑、Q‑PCR验证病毒拷贝数和初步动物实验证明了化合物SJB2‑043在安全浓度下能够有效地抑制马立克氏病毒的复制，攻毒实验动物的肌肉出血、神经症状和动物肿瘤的产生，在禽类养殖具有很好的应用前途。

Description

小分子化合物SJB2-043作为抑制马立克氏病毒药物的新用途
技术领域
本发明涉及化合物新用途领域，具体涉及小分子化合物SJB2-043作为抑制马立克氏病毒药物的新用途。
背景技术
马立克氏病(MD)是一种高传染性、高致病性、由马立克氏病毒(MDV)诱导引发的恶性肿瘤性疾病，能够引发鸡群很高的发病率和死亡率，目前是危害养鸡业的三大主要疫病之一。根据食品与农业组织(FAO)统计，全世界养禽业每年因MD造成的损失至少20亿美元。据世界动物健康组织(OIE)统计，世界上各养禽国家均有MD的发生，而我国和埃及属于高发病率地区。我国是世界上禽蛋禽肉生产的大国，分别位居世界第一和第二，我国将MD列为禽类的重要传染病。
MD疫苗接种是目前广泛应用MD防御的有效手段。自上世纪80年代，世界各国养禽业开始使用血清I型的CVI988疫苗有效地控制了MDV，成为防御MDV的“黄金标准”，CVI988与HVT和SB-1的三价苗或在HVT和SB-1二价苗接种后再单独使用CVI988，是目前最有效的MD疫苗防御措施。近年来马立克氏病毒的毒力不断增强，是否还会出现更强毒力的MDV我们还不得而知。CVI988已经是源于血清I型MDV的疫苗株，因此，MD疫苗研究领域认为，再研制出新的疫苗用于抵抗更强毒力MDV是件非常困难的事。所以从其他角度，比如开发小分子药物，来控制MDV是重要而有意义的。
SJB2-043是一种新型有效的USP1抑制剂。泛素特异性蛋白酶1(USP1)是一种去泛素化酶(DUB)，是泛素特异性加工(UBP)蛋白酶家族的成员。SJB2-043能使USP1失活并促进ID 1降解，在低微摩尔水平下抑制原代人脐带血CD34+细胞生长，是一种潜在的白血病治疗药物。至今未见任何关于SJB2-043抑制马立克氏病毒的活性或任何抗病毒活性的报道。
发明内容
本发明为了克服上述技术问题，提供了一种小分子化合物SJB2-043作为抑制马立克氏病毒药物的新用途，基于细胞接种病毒和马立克疾病动物模型，筛选出化合物SJB2-043在安全浓度下，有效地抑制马立克氏病毒的复制，攻毒实验动物的肌肉出血、神经症状和动物肿瘤的产生。
解决上述技术问题的技术方案如下：
小分子化合物SJB2-043作为抑制马立克氏病毒药物的新用途。
进一步地说，小分子化合物SJB2-043是在CEF或者DF-1细胞水平上抑制马立克氏病毒的复制。
进一步地说，所述的小分子化合物SJB2-043的浓度大于0.625μM。当浓度达到0.625μM时即可显著减少病毒的增殖。当浓度达到1.25μM时，基本上可以抑制病毒感染细胞，并且对细胞没有造成伤害。
进一步地说，所述的小分子化合物SJB2-043抑制感染马立克病毒鸡的肌肉出血、神经症状和肿瘤生成。
进一步，本发明对药物的剂型没有特殊的限制，采用本领域所熟知的药物剂型即可。对于剂型的制备方案没有特殊限制，采用本领域所熟知的药物剂型的制备方案即可。
本发明的另一个目的是提供一种抑制马立克氏病毒的药物，该药物包括作为活性成分的小分子化合物SJB2-043、载体、赋形剂和功能辅料。
进一步地说，载体、赋形剂和功能辅料为药学上可以接受的载体、赋形剂和功能辅料。
本发明还有一个目的是提供这种药物的使用方法，该药物在马立克病毒感染前使用或尽早使用。
进一步地说，该药物腹腔注射的药剂量为使得活性成分小分子化合物SJB2-043不低于0.1mg/kg/天。当给药量达到0.1mg/kg/天时即可显著减轻疾病症状，减少肿瘤的产生。当给药量达到0.3mg/kg/天时，没有症状，没有发现肿瘤。
本发明的有益效果是：
本发明首次筛选出小分子化合物SJB2-043除了是USP1抑制剂，用于白血病外，还能够抑制马立克氏病毒，在动物水平上抑制肿瘤生成和病毒复制等，且抑制效果强，剂量小。在马立克氏病毒的毒力不断增强，接种了疫苗的鸡群仍有可能爆发马立克氏病疫情的现状下，找到了一个新的控制疫情的途径，应用前途广。
附图说明
下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细的说明。
图1为本发明实施例1中显微镜观察细胞贴壁后给药的细胞状态图；
图2为本发明实施例1中药物浓度与细胞死亡率关系示意图；
图3为本发明实施例1三天后在显微镜下观察病毒噬斑图；
图4为本发明实施例1药物浓度与细胞个数关系图；
图5为以病毒基因序列为基础设计的一对实时荧光定量PCR引物；
图6为本发明实施例1的Q-PCR标准曲线示意图；
图7为本发明实施例1的药物浓度与拷贝数关系图；
图8为本发明实施例1未给药的小鸡出现精神萎靡示意图；
图9为本发明实施例1未给药的小鸡出现神经症状劈叉示意图；
图10为本发明实施例1未给药的小鸡出现腿部肌肉出血示意图；
图11为本发明实施例1给药后的小鸡腿部肌肉正常图；
图12为本发明实施例1未给药的小鸡28天后解剖观察到明显的脾脏肿瘤状突起；
图13为本发明实施例1给药后的小鸡28天后解剖观察到正常脾脏。
具体实施方式
实施例1：
CEF细胞制备及病毒感染：
1、取9～11日龄SPF鸡胚，分别用碘酒和酒精棉由鸡胚中央向四周擦拭消毒，然后放入超净台，将有气室的部位朝上，小心地用无菌镊子磕破蛋壳，沿气室边缘夹掉蛋壳，注意不让蛋壳碎屑落入蛋内。
2、换用新的无菌镊子揭开尿囊绒毛膜，再用弯头镊子深入胚内夹住鸡胚颈部取出，放入一次性平皿中，将鸡胚去头去四肢。
3、移入小烧杯中，分批次6％trypsin消化，溶液混浊时，应用70μm滤网过滤细胞，移入离心管，离心管中预加培养基来终止消化。
4、500rpm进行离心5min，弃上清，加入2ml培养基重悬。
5、移入两个培养瓶，加入14ml培养基。放入CO2培养箱中。
6、37℃培养，直至细胞长成80％单层。
7、从液氮罐中取出之前分装冻好的病毒，用培养基稀释。
8、将病毒加入铺好的细胞单层。
CCK8法检测小分子化合物SJB2-043的细胞毒性：
1)贴壁前给药，具体为：用培养基将SJB2-043稀释成浓度梯度，在96孔板每孔铺入30000个CEF细胞，补充含有梯度浓度的抑制剂的培养基，终体积为至100μL，37℃培养3天。
2)贴壁后给药，具体为：在96孔板每孔铺入30000个CEF细胞，用培养基将SJB2-043稀释成浓度梯度，待细胞贴壁后更换含有梯度浓度的抑制剂的培养基，终体积为至100μL，37℃培养3天，最后用显微镜观察细胞状态，如图1所示。
3)CCK8检测细胞活力，具体为：向每孔加入10μL的CCK-8溶液，培养板放入37℃5％，CO2培养箱，将培养板置于培养箱内孵育4小时，用酶标仪测定波长450nm处的吸光度OD值，将各测试孔的OD值减去对照孔或调零孔OD值。各平行孔的OD值取平均数。抑制率％＝(对照细胞OD-加药细胞OD)/(对照细胞OD-空白OD)×100％，用origin2018作图。横坐标为药物浓度，纵坐标为细胞死亡率，如见图2所示。所有实验进行3次重复。
小分子化合物SJB2-043在CE细胞水平上抑制马立克病毒：
1)形态学观察，具体为：在六孔板中每孔铺入750000个CEF细胞，贴壁长成单层细胞后，以120PFU接毒，然后将生长培养基分别更换为含有等体积的DMSO，终浓度为1.25μM和0.625μM的抑制剂的培养基，三天后在显微镜下观察病毒噬斑，如图3所示，统计每孔噬斑个数，用origin2018作图。横坐标为药物浓度，纵坐标为细胞个数，如图4所示。所有实验进行3次重复。
2)拷贝数变化
a、标准曲线绘制
根据马立克病毒基因组基因序列，构建了荧光定量PCR标准品PMD质粒(包含马立克病毒基因组特异序列)。以标准品质粒序列为基础设计了一对实时荧光定量PCR引物，如图5所示。通过标准质粒进行Q-PCR绘制了标准曲线，结果显示CT值和标准品之间有良好的线性关系，如图6所示。所有实验进行3次重复。
b、病毒拷贝数测定
接着采用同上面一样的方法接毒给药，然后以每孔为单位提取基因组。用上述引物进行Q-PCR，根据结果进行定量分析。将每组得到的CT值代入标准曲线得到拷贝数。用origin2018作图。横坐标为药物浓度，纵坐标为拷贝数，如图7所示。所有实验进行3次重复。
小分子化合物SJB2-043可在马立克疾病动物模型中抑制肿瘤的生成
将15只小鸡按照表1要求分组
表1
组 攻毒1 攻毒2 攻毒3
SJB2-043 SJB2-043 对照
注射量 0.1mg/kg 0.3mg/kg 根据药物体积
只数 5 5 5
一日龄攻毒，八小时后第一次腹腔给药，以后每天定时给药，每天观察小鸡状态。未给药组发现出现精神萎靡，如图8所示，出现神经症状劈叉，如图9所示，出现肌肉出血，如图10所示，而给药组未见相应症状，如图11所示。28天后解剖小鸡观察症状。未给药组发现明显的脾脏肿瘤状突起，如图12所示，而给药组未见肿瘤状突起，如图13所示。
除了腹腔直接注射药物，本发明还进行了肌肉注射，滴鼻给药，以水喂服，混合饲料等方式，均得到了类似效果。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例，并非对本发明做任何形式上的限制，凡是依据本发明的技术实质上对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化，均落入本发明的保护范围之内。

Claims (9)

1.小分子化合物SJB2-043作为抑制马立克氏病毒药物的新用途。
2.根据权利要求1所述的新用途，其特征在于，所述的小分子化合物SJB2-043是在CEF或者DF-1细胞水平上抑制马立克氏病毒的复制。
3.根据权利要求1或2任一项所述的新用途，其特征在于，所述的小分子化合物SJB2-043的浓度大于0.625μM。
4.根据权利要求1或2任一项所述的新用途，其特征在于，所述的小分子化合物SJB2-043抑制感染马立克病毒鸡的肌肉出血、神经症状和肿瘤生成。
5.一种抑制马立克氏病毒的药物，其特征在于，包括作为活性成分的权利要求1所述的小分子化合物SJB2-043、载体、赋形剂和功能辅料。
6.根据权利要求5所述的药物，其特征在于，所述的载体、赋形剂和功能辅料为药学上可以接受的载体、赋形剂和功能辅料。
7.一种如权利要求5所述的药物的使用方法，其特征在于，所述的药物在马立克病毒感染前使用。
8.根据权利要求7所述的药物的使用方法，其特征在于，所述的药物腹腔注射的药剂量为使得活性成分小分子化合物SJB2-043不低于0.1mg/kg/天。
9.一种验证权利要求1所述的小分子化合物SJB2-043作为抑制马立克氏病毒药物的新用途的方法，其特征在于，通过CEF细胞的制备和培养、药物毒性实验、抑制病毒噬斑、Q-PCR验证病毒拷贝数和初步动物实验验证化合物SJB2-043在安全浓度下能够有效地抑制马立克氏病毒的复制，攻毒实验动物的肌肉出血、神经症状和动物肿瘤的产生。
CN202010246020.2A 2020-03-31 2020-03-31 小分子化合物sjb2-043作为抑制马立克氏病毒药物的新用途 Active CN111265521B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010246020.2A CN111265521B (zh) 2020-03-31 2020-03-31 小分子化合物sjb2-043作为抑制马立克氏病毒药物的新用途

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010246020.2A CN111265521B (zh) 2020-03-31 2020-03-31 小分子化合物sjb2-043作为抑制马立克氏病毒药物的新用途

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN111265521A true CN111265521A (zh) 2020-06-12
CN111265521B CN111265521B (zh) 2021-04-20

Family

ID=70992130

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202010246020.2A Active CN111265521B (zh) 2020-03-31 2020-03-31 小分子化合物sjb2-043作为抑制马立克氏病毒药物的新用途

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN111265521B (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113368112A (zh) * 2021-05-10 2021-09-10 河南农业大学 Usp1-uaf1抑制剂在制备药物中的应用，药物组合物
CN114470160A (zh) * 2022-03-18 2022-05-13 山东农业大学 病毒复制抑制剂及其应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3039925A (en) * 1957-04-24 1962-06-19 Bayer Ag Compositions for the treatment of tuberculosis
CN102151295B (zh) * 2009-06-25 2013-01-02 天津艾森生物工程有限公司 一种防治禽病毒性疾病药物的制备方法及产品的应用

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3039925A (en) * 1957-04-24 1962-06-19 Bayer Ag Compositions for the treatment of tuberculosis
CN102151295B (zh) * 2009-06-25 2013-01-02 天津艾森生物工程有限公司 一种防治禽病毒性疾病药物的制备方法及产品的应用

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
AHMEII S.HAMMAM ET AL.: "Heterocyclic quinones. XVI. The reaction of acid amides with 2,3-dichloro-1,4-naphthoquinone, a novel route to naphth[2,3-d]oxazole-4,9-diones", 《JOURNAL FUER PRAKTISCHE CHEMIE》 *
GLAUDIA G.T. DE OLIVEIRA ET AL.: "Synthesis and antimicrobial evaluation of oxazole-1,4-naphthquinones", 《HETEROCYCLIC COMMUNICATIONS》 *
王梦涵: "《中国优秀硕士学位论文数据库 基础科学辑》", 15 November 2019 *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113368112A (zh) * 2021-05-10 2021-09-10 河南农业大学 Usp1-uaf1抑制剂在制备药物中的应用，药物组合物
CN113368112B (zh) * 2021-05-10 2022-09-27 河南农业大学 Usp1-uaf1抑制剂在制备药物中的应用，药物组合物
CN114470160A (zh) * 2022-03-18 2022-05-13 山东农业大学 病毒复制抑制剂及其应用
CN114470160B (zh) * 2022-03-18 2023-08-25 山东农业大学 病毒复制抑制剂及其应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN111265521B (zh) 2021-04-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN111265521B (zh) 小分子化合物sjb2-043作为抑制马立克氏病毒药物的新用途
KR102456294B1 (ko) 코로나바이러스 감염 예방 및 치료용 약학 조성물
CN113201505B (zh) 一株具备跨种裂解能力的溶藻弧菌噬菌体、其噬菌体组合物及其应用
KR102597757B1 (ko) 천연물 유래 화합물 및 이를 유효성분으로 함유하는 항바이러스제
Jones Epidemic tremor, an encephalomyelitis affecting young chickens
CN116286671A (zh) 一株沙门氏菌噬菌体sp8、噬菌体组合物及其应用
CN114306307A (zh) Dsf在制备抗炎药物或抗氧化药物中的应用及药物
CN110327317B (zh) 紫草素在制备抗轮状病毒感染的药物中的应用
CN111067898B (zh) 盐酸小檗碱在水产养殖中抗鲤疱疹病毒ⅱ型的用途
CN108619247A (zh) 一种利用中西药联用治疗石斑鱼溶藻弧菌病的组合物及其制备方法和应用
CN116869979B (zh) 补骨脂乙素在制备治疗流行性乙型脑炎病毒感染药物中的应用
CN110075131A (zh) 寨卡病毒减毒株在治疗脑胶质瘤中的应用
CN115837074B (zh) 一种鲑鳟鱼传染性造血器官坏死病和传染性胰脏坏死病二联佐剂疫苗及其制备方法
CN108815241A (zh) 一种用于治疗石斑鱼溶藻弧菌病的中药组合物及其制备方法和应用
CN114246894B (zh) 双葛止泻口服液在制备预防和治疗鸭传染性浆膜炎的药物中的应用
CN108815279A (zh) 一种用于治疗石斑鱼河流弧菌病的中药组合物及其制备方法和应用
CN115721654B (zh) 藜芦碱在制备抗冠状病毒的药物中的应用
CN118217361A (zh) 防治鸡传染性支气管炎的中药组合物及其制备方法和应用
CN114831976A (zh) 氯硝柳胺在抗鸡传染性支气管炎病毒药物中的应用
CN117323322A (zh) 连翘脂素在制备抗鸡传染性支气管炎病毒药物中的应用
CN115869329A (zh) 预防covid-19和抗covid-19变异株的连翘药物
CN117427106A (zh) 中药组合物及其在制备预防、缓解或治疗对虾急性肝胰腺坏死病产品中的应用
CN100404029C (zh) 格尔德霉素（c-3559）在制备疱疹病毒生殖道感染药物中的应用
CN116942710A (zh) 中药提取物及其在制备预防、缓解或治疗常见鱼类病毒病产品中的应用
CN105596838B (zh) 一种抗鸡新城疫病毒的多糖药物及其制备方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant