CN111264698B - 一种应对仔猪腹泻的混菌发酵饲料添加剂及其制备方法和应用 - Google Patents

一种应对仔猪腹泻的混菌发酵饲料添加剂及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种应对仔猪腹泻的混菌发酵饲料添加剂及其制备方法和应用，该添加剂主要由以下重量份数原料所制成：玉米粉30‑60份、豆粕10‑50份、米糠粕5‑30份、石粉1‑10份、碎米10‑40份、玉米油1‑10份、预混料2‑10份、辅助培养基10‑30份、混合菌液10‑40份；所述混合菌液包括酵母菌、黑曲霉和乳酸菌。本发明通过多菌混合培养来发酵饲料添加剂，以达到缓解甚至解决仔猪腹泻的问题，改善饲料的品质，以达到提高仔猪的免疫力从而减少甚至解决仔猪腹泻的问题。本发明应对仔猪腹泻的混菌发酵饲料添加剂，有利于保藏和降低成本，提高仔猪免疫力，缓解仔猪腹泻。

Description

一种应对仔猪腹泻的混菌发酵饲料添加剂及其制备方法和 应用
技术领域
本发明涉及猪饲料领域，具体涉及一种应对仔猪腹泻的混菌发酵饲料添加剂及其制备方法和应用。
背景技术
中国是世界上第一养猪大国，猪为我国的“六畜”之一。最近几个月爆发的非洲猪瘟，导致中国生猪的出栏量锐减，市面上的猪肉价格也随之上升，给百姓的生活造成不便，从侧面看出猪肉在中国国民生活中的重要性。因而，解决猪的养殖中出现的一系列问题就至关重要。
其中仔猪腹泻就是养殖业中所面临的一个大问题。仔猪腹泻是养殖业的一种常见疾病，它发病急、致死率高，给养殖业带来巨大损失，主要原因有生理性因素、细菌及病毒性因素、应激性因素等。
从外因角度来看，通过调节养殖场的温度、湿度、采光、卫生状况可以起到一定的减少仔猪发生腹泻的概率。但最主要的是从内因角度提高仔猪的免疫力和改善饲料品质来适应仔猪脆弱的肠道系统，起到肠道发育完全前的过渡作用。从饲料来看，中国是世界上第二饲料生产大国，其中猪饲料占饲料总量的40％以上。饲料工业在国民经济中占有重要的地位。现有技术中的饲料有动物性与植物性饲料。动物性饲料有鱼粉、血粉等蛋白型饲料。植物性饲料以麦麸、豆粕为主要成分。动物性饲料优点是蛋白含量高，缺点是成本高、易变质，植物性饲料优点是成本低，缺点是含有抗营养因子、难消化。饲料应用不当也会导致仔猪腹泻。如饲料中的蛋白含量过高，不仅会引起消化不良，而且增加了成本；又如饲料的抗营养因子比例过大，不仅难消化，且仔猪生长缓慢。
针对以上的背景情况，有人通过利用抗生素与饲料相结合的方式来治疗仔猪腹泻，但此法针对面太窄，只能应对细菌性因素导致的腹泻。且随着抗生素的过度使用会使细菌产生耐药性，抗生素的残留则会导致二次污染，并对人及环境造成潜在影响。还有人利用生物性制剂和饲料相结合的方式来缓解仔猪腹泻的问题，通过提高仔猪的免疫力来抵抗细菌性和病毒性应激，改善了饲料的品质来缓解断奶应激，效果不错，但是现有技术中操作繁琐，产品品质不稳定，可能会带来额外的成本和风险。
发明内容
发明目的：针对现有技术存在的问题如成本问题和难消化等问题，本发明提供一种应对仔猪腹泻的混菌发酵饲料添加剂，本发明通过多菌混合培养来发酵得到饲料添加剂，以达到缓解甚至解决仔猪腹泻的问题，改善饲料的品质，以达到提高仔猪的免疫力从而减少甚至解决仔猪腹泻的问题。
本发明还提供了该应对仔猪腹泻的混菌发酵饲料添加剂的制备方法和应用。
技术方案：为了实现上述目的，如本发明所述一种应对仔猪腹泻的混菌发酵饲料添加剂，主要由以下重量份数原料所制成：玉米粉30-60份、豆粕10-50份、米糠粕5-30份、石粉1-10份、碎米10-40份、玉米油1-10份、预混料2-10份、辅助培养基10-30份、混合菌液10-40份；所述混合菌液包括酵母菌、黑曲霉和乳酸菌。
其中，所述辅助培养基，按重量份其成分为玉米面5份，硫酸铵6份，氯化钠7份，无菌水10份；所述预混料为4％仔猪复合预混饲料(4002)。
作为优选，所述酵母菌和乳酸菌培养到对数生长期的菌液，黑曲霉于固体PDA平板生长4-5天的孢子悬液，黑曲霉孢子悬浮液的孢子数浓度数量级约为104CFU/mL；所述混合液中使用的酵母菌、黑曲霉、乳酸菌的菌液体积比为等体积比。
本发明所述的应对仔猪腹泻的混菌发酵饲料添加剂的制备方法，包括如下步骤：
(1)将玉米粉、碎米、豆粕、米糠粕粉碎，得到玉米、碎米、豆粕、米糠粕粉末混合均匀；
(2)称取石粉，玉米油，预混料混合均匀；称取玉米面，硫酸铵，氯化钠，水并灭菌，得到灭菌后的辅助培养基；
(3)将步骤(1)、步骤(2)制备的全部混合原料和辅助培养基搅拌均匀制备成初级猪饲料添加剂；
(4)将YPD液体培养基中的酵母菌和MRS液体培养基中的乳酸菌都培养至对数生长期，得到位于对数生长期的两种菌液；黑曲霉于固体PDA平板生长4-5天；再利用生理盐水洗脱黑曲霉平板，得到黑曲霉孢子悬浮液；
(5)向初级猪饲料添加剂中添加步骤(4)中的酵母菌菌液再向其加入步骤(5)中的黑曲霉悬浮液；最后再向其加入步骤(4)中的乳酸菌菌液，搅拌均匀制备成最终应对仔猪腹泻的混菌发酵饲料添加剂。
作为优选，步骤(5)所述向初级猪饲料添加剂中添加步骤(4)中的酵母菌菌液；4-8小时后再向其加入步骤(4)中的黑曲霉悬浮液；4-8小时最后再向其加入步骤(4)中的乳酸菌菌液，搅拌均匀制备成最终级应对仔猪腹泻的混菌发酵饲料添加剂猪饲料添加剂。
本发明所述的混菌发酵饲料添加剂在制备预防和治疗仔猪腹泻饲料中的应用。
所述混菌发酵饲料添加剂直接添加在仔猪基础饲料中后进行常规投喂即可，添加量为基础饲料质量1-10％。
本发明的应对仔猪腹泻的混菌发酵饲料添加剂主要从适口性、适用性、经济性、安全性考虑。
适口性：配合日粮时，除考虑供给营养物质的数量外，也必须考虑所用饲料的适口性，尽量配合一个营养完全、适口性良好的日粮，本发明配合日粮时，会加入预混料，其香味会促进仔猪的进食。
适用性：以饲喂对象的营养需要或饲养标准为基础，再结合具体动物在实践中的生产反应饲用原料的选择应使所配日粮既能满足饲喂对象的营养需求，又符合饲喂对象的消化生理特点，本发明中因为仔猪的肠道发育不完全，因此不能直接用大分子的粕类物质饲喂，通过三菌的混合培养，将原饲料中的大分子尽可能的降解成利于吸收的小分子物质，符合仔猪的消化能力，另外其中的大豆肽等物质还能提高其免疫力。
经济性：饲用原料的选择必须考虑经济原则，因地制宜，选取较低的价格。本发明饲料添加剂的原料是来源广泛，运输成本较低。
安全性：选用的原料必须保证质量与安全性，保证仔猪的健康，本发明中使用原料都是绿色安全可靠，使用的微生物都是益生菌。本发明是一种降低仔猪腹泻率的饲料添加剂；一方面为了改善饲料的品质，利用黑曲霉和酵母菌，前者拥有丰富的酶系和后者成熟后为单细胞蛋白；另一方面是提高仔猪的免疫力，利用乳酸菌，能降低pH值，抑制杂菌的生长；本发明通过多菌混合培养来发酵饲料添加剂，以达到缓解甚至解决仔猪腹泻的问题，改善饲料的品质，以达到提高仔猪的免疫力从而减少甚至解决仔猪腹泻的问题。同时本发明应对仔猪腹泻的混菌发酵饲料添加剂，有利于保藏和降低成本，提高仔猪免疫力，缓解仔猪腹泻。
本发明首先是确定三菌的培养时间。将酵母菌和乳酸菌都培养至对数期。同时将黑曲霉孢子悬浮液的孢子数量级控制在104CFU/mL。同时接下来是确定三菌的添加顺序。为改善饲料品质，通过考马斯亮蓝法测定可溶性蛋白的含量，确定了按照酵母菌-黑曲霉-乳酸菌的添加顺序，可溶性蛋白相对含量最高，可有效改善饲料品质。
此外现有技术中的饲料产品品质不稳定，操作繁琐，可能会带来额外的成本和风险，而本发明的饲料添加剂通过添加乳酸菌后，代谢产生的乳酸降低饲料添加剂中的pH，抑制其他杂菌的生长，有利于保藏。另一方面饲料添加剂中黑曲霉产生的大豆肽类物质具有提高仔猪免疫力的作用，减少了使用抗生素的机会，从而降低额外的医用投入成本。另外本添加剂原料来源广泛，因地制宜，运输成本方面较低。
有益效果：与现有技术相比，本发明具有如下优点：
1、本发明的饲料添加剂制备工艺简单；原料为常见饲料成分以及安全的益生菌。不含任何抗生素，无毒副作用；含有多种营养成分，弥补传统饲料营养不足。
2、在基础饲料中添加该饲料添加剂可促进仔猪的进食欲以及改善消化和免疫能力，降低仔猪的腹泻率，可以降低到2％。
3、本发明的饲料添加剂中由于加入了乳酸菌，可提高猪的免疫力，增强抵抗力，加入的酵母菌可以提高饲料的品质。
4、本发明的饲料添加剂中由于添加了益生菌，黑曲霉拥有丰富的纤维素酶、蛋白酶，它能够降解饲料中的大分子，使其变为易吸收消化的物质，再者由于酵母菌本生也有蛋白酶系使得大分子被继续降解，并利用黑曲霉降解的物质生长发育，自身为单细胞蛋白，从而提高了饲料的营养品质，而且降解出来的大豆肽可以提高仔猪的免疫力，另外乳酸菌能降低pH值，抑制杂菌的生长。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明做进一步说明。
实施例涉及的菌株：
黑曲霉：CCTCCAF91006，中国典型微生物保藏中心；
酵母菌：CCTCCAY92003，中国典型微生物保藏中心；
乳酸菌：CICC6045，上海瑞楚生物科技有限公司。
也可采用常规市售菌株，例如可选择如下来源的菌株，但并不限于此，可采用其他食品、饲料用的酵母菌、黑曲霉、乳酸菌。
其他原料均市售可得。其中预混料购置于徐州正昌饲料有限公司：4％仔猪复合预混饲料4002，产品标准编号：Q/32038NZ03-2018，产品批准文号：苏饲预字(2016)119322。
实施例1(对比例1基础猪饲料)
玉米56.325份、麸皮31份、豆粕2.67份、鱼粉2份、棉粕3份、菜粕3份、石粉1.65份、赖氨酸0.055份、食盐0.3份。
制备方法：
(1)称取玉米、麸皮、豆粕、鱼粉、棉粕、菜粕、石粉、赖氨酸、食盐；
(2)将称取的饲料添加原料混合均匀制备成基础猪饲料。
实施例2
组方(重量份)：
玉米粉50份、豆粕40份、米糠粕20份、石粉8份、碎米40份、玉米油8份、预混料3份、辅助培养基20份；
辅助培养基，其成分为玉米面5份，硫酸铵6份，氯化钠7份，无菌水10份。
制备方法：
(1)将玉米粉、碎米、豆粕、米糠粕粉碎过80目筛，得到玉米、碎米、豆粕、米糠粕粉末混合均匀；
(2)称取石粉，玉米油，预混料混合均匀；称取玉米面，硫酸铵，氯化钠，水并灭菌(121℃，0.1MPa，20min)，得到灭菌后的辅助培养基；
(3)将步骤(1)、步骤(2)制备的饲料添加剂原料和辅助培养基搅拌均匀制备成猪饲料添加剂。
实施例3
组方(重量份)：
玉米粉50份、豆粕40份、米糠粕20份、石粉8份、碎米40份、玉米油8份、预混料3份、辅助培养基20份、黑曲霉菌液30份；
辅助培养基，其成分为玉米面5份，硫酸铵6份，氯化钠7份，无菌水10份。
制备方法：
(1)将玉米粉、碎米、豆粕、米糠粕粉碎过80目筛，得到玉米、碎米、豆粕、米糠粕粉末混合均匀；
(2)称取石粉，玉米油，预混料混合均匀；称取玉米面，硫酸铵，氯化钠，水并灭菌(121℃，0.1MPa，20min)，得到灭菌后的辅助培养基；
(3)将步骤(1)、步骤(2)制备的饲料添加剂原料和辅助培养基搅拌均匀制备成初级猪饲料添加剂；
(4)将黑曲霉于固体PDA平板生长4天；再利用含3％吐温-80的生理盐水洗脱黑曲霉平板(3g吐温-80溶到100mL生理盐水)，得到黑曲霉孢子悬浮液，悬浮液中孢子数约为104CFU/mL；
(5)无菌条件下向初级猪饲料添加剂中添加步骤(4)中的黑曲霉悬浮液；搅拌均匀制备成最终级应对仔猪腹泻的混菌发酵饲料添加剂猪饲料添加剂。
实施例4
组方(重量份)：
玉米粉50份、豆粕40份、米糠粕20份、石粉8份、碎米40份、玉米油8份、预混料3份、辅助培养基20份、酵母菌菌液30份；
辅助培养基，其成分为玉米面5份，硫酸铵6份，氯化钠7份，无菌水10份。
制备方法：
(1)将玉米粉、碎米、豆粕、米糠粕粉碎过80目筛，得到玉米、碎米、豆粕、米糠粕粉末混合均匀；
(2)称取石粉，玉米油，预混料混合均匀；称取玉米面，硫酸铵，氯化钠，水并灭菌(121℃，0.1MPa，20min)，得到灭菌后的辅助培养基；
(3)将步骤(1)、步骤(2)制备的饲料添加剂原料和辅助培养基搅拌均匀制备成初级猪饲料添加剂；
(4)将YPD液体培养基中的酵母菌培养至对数生长期，得到位于对数生长期的菌液；
(5)无菌条件下向初级猪饲料添加剂中添加步骤(4)中的酵母菌菌液；搅拌均匀制备成最终级应对仔猪腹泻的混菌发酵饲料添加剂猪饲料添加剂。
实施例5
组方(重量份)：
玉米粉50份、豆粕40份、米糠粕20份、石粉8份、碎米40份、玉米油8份、预混料3份、辅助培养基20份、乳酸菌菌液30份；
辅助培养基，其成分为玉米面5份，硫酸铵6份，氯化钠7份，无菌水10份。
制备方法：
(1)将玉米粉、碎米、豆粕、米糠粕粉碎过80目筛，得到玉米、碎米、豆粕、米糠粕粉末混合均匀；
(2)称取石粉，玉米油，预混料混合均匀；称取玉米面，硫酸铵，氯化钠，水并灭菌(121℃，0.1MPa，20min)，得到灭菌后的辅助培养基；
(3)将步骤(1)、步骤(2)制备的饲料添加剂原料和辅助培养基搅拌均匀制备成初级猪饲料添加剂；
(4)将MRS液体培养基中的乳酸菌都培养至对数生长期，得到位于对数生长期菌液；
(5)无菌条件下向初级猪饲料添加剂中添加步骤(4)中的乳酸菌菌液，搅拌均匀制备成最终级应对仔猪腹泻的混菌发酵饲料添加剂猪饲料添加剂。
实施例6
组方(重量份)：
玉米粉50份、豆粕40份、米糠粕20份、石粉8份、碎米40份、玉米油8份、预混料3份、辅助培养基20份、混合菌液30份；所述混合菌液包括黑曲霉和乳酸菌。
辅助培养基，其成分为玉米面5份，硫酸铵6份，氯化钠7份，无菌水10份。
制备方法：
(1)将玉米粉、碎米、豆粕、米糠粕粉碎过80目筛，得到玉米、碎米、豆粕、米糠粕粉末混合均匀；
(2)称取石粉，玉米油，预混料混合均匀；称取玉米面，硫酸铵，氯化钠，水并灭菌(121℃，0.1MPa，20min)，得到灭菌后的辅助培养基；
(3)将步骤(1)、步骤(2)、制备的饲料添加剂原料和辅助培养基搅拌均匀制备成初级猪饲料添加剂；
(4)将MRS液体培养基中的乳酸菌培养至对数生长期，得到位于对数生长期菌液；黑曲霉于固体PDA平板生长4天；再利用含3％吐温-80的生理盐水洗脱黑曲霉平板，得到黑曲霉孢子悬浮液，悬浮液中孢子数约为104CFU/mL；两种菌液的使用量体积比为1：1；
(5)无菌条件下向初级猪饲料添加剂中添加步骤(4)中的黑曲霉悬浮液；4小时最后再向其加入步骤(4)中的乳酸菌菌液，搅拌均匀制备成最终级应对仔猪腹泻的混菌发酵饲料添加剂猪饲料添加剂。
实施例7
组方(重量份)：
玉米粉50份、豆粕40份、米糠粕20份、石粉8份、碎米40份、玉米油8份、预混料3份、辅助培养基20份、混合菌液30份；所述混合菌液包括酵母菌和黑曲霉。
辅助培养基，其成分为玉米面5份，硫酸铵6份，氯化钠7份，无菌水10份。
制备方法：
(1)将玉米粉、碎米、豆粕、米糠粕粉碎过80目筛，得到玉米、碎米、豆粕、米糠粕粉末混合均匀；
(2)称取石粉，玉米油，预混料混合均匀；称取玉米面，硫酸铵，氯化钠，水并灭菌(121℃，0.1MPa，20min)，得到灭菌后的辅助培养基；
(3)将步骤(1)、步骤(2)、制备的饲料添加剂原料和辅助培养基搅拌均匀制备成初级猪饲料添加剂；
(4)将YPD液体培养基中的酵母菌培养至对数生长期，得到位于对数生长期的菌液；黑曲霉于固体PDA平板生长4天，再利用含3％吐温-80的生理盐水洗脱黑曲霉平板，得到黑曲霉孢子悬浮液，悬浮液中孢子数约为104CFU/mL；两种菌液的使用量体积比为1：1；
(5)无菌条件下向初级猪饲料添加剂中添加步骤(4)中的酵母菌菌液；4小时后再向其加入步骤(4)中的黑曲霉悬浮液搅拌均匀制备成最终级应对仔猪腹泻的混菌发酵饲料添加剂猪饲料添加剂。
实施例8
组方(重量份)：
玉米粉50份、豆粕40份、米糠粕20份、石粉8份、碎米40份、玉米油8份、预混料3份、辅助培养基20份、混合菌液30份；所述混合菌液包括酵母菌和乳酸菌。
辅助培养基，其成分为玉米面5份，硫酸铵6份，氯化钠7份，无菌水10份。
制备方法：
(1)将玉米粉、碎米、豆粕、米糠粕粉碎过80目筛，得到玉米、碎米、豆粕、米糠粕粉末混合均匀；
(2)称取石粉，玉米油，预混料混合均匀；称取玉米面，硫酸铵，氯化钠，水并灭菌(121℃，0.1MPa，20min)，得到灭菌后的辅助培养基；
(3)将步骤(1)、步骤(2)制备的饲料添加剂原料和辅助培养基搅拌均匀制备成初级猪饲料添加剂；
(4)将YPD液体培养基中的酵母菌和MRS液体培养基中的乳酸菌都培养至对数生长期，得到位于对数生长期的两种菌液；两种菌液的使用量体积比为1：1；
(5)无菌条件下向初级猪饲料添加剂中添加步骤(4)中的酵母菌菌液；4小时最后再向其加入步骤(4)中的乳酸菌菌液，搅拌均匀制备成最终级应对仔猪腹泻的混菌发酵饲料添加剂猪饲料添加剂。
实施例9
组方(重量份)：
玉米粉50份、豆粕40份、米糠粕20份、石粉8份、碎米40份、玉米油8份、预混料3份、辅助培养基20份、混合菌液30份；所述混合菌液包括酵母菌、黑曲霉和乳酸菌。
辅助培养基，其成分为玉米面5份，硫酸铵6份，氯化钠7份，无菌水10份。
制备方法：
(1)将玉米粉、碎米、豆粕、米糠粕粉碎过80目筛，得到玉米、碎米、豆粕、米糠粕粉末混合均匀；
(2)称取石粉，玉米油，预混料混合均匀；称取玉米面，硫酸铵，氯化钠，水并灭菌(121℃，0.1MPa，20min)，得到灭菌后的辅助培养基；
(3)将步骤(1)、步骤(2)、制备的饲料添加剂原料和辅助培养基搅拌均匀制备成初级猪饲料添加剂；
(4)将YPD液体培养基中的酵母菌和MRS液体培养基中的乳酸菌都培养至对数生长期，得到位于对数生长期的两种菌液；黑曲霉于固体PDA平板生长4天；再利用含3％吐温-80的生理盐水洗脱黑曲霉平板，得到黑曲霉孢子悬浮液，悬浮液中孢子数约为104CFU/mL；；三种菌液的使用量体积比为1：1：1；
(5)无菌条件下向初级猪饲料添加剂中添加步骤(4)中的酵母菌菌液；4小时后再向其加入步骤(4)中的黑曲霉悬浮液；4小时最后再向其加入步骤(4)中的乳酸菌菌液，搅拌均匀制备成最终级应对仔猪腹泻的混菌发酵饲料添加剂猪饲料添加剂。
实施例10
组方(重量份)：
玉米粉30份、豆粕10份、米糠粕5份、石粉1份、碎米10份、玉米油1份、预混料2份、辅助培养基10份、混合菌液10份；混合菌液包括酵母菌、黑曲霉和乳酸菌。
辅助培养基，其成分为玉米面1份，硫酸铵1份，氯化钠1份，无菌水1份。
制备方法：
(1)将玉米粉、碎米、豆粕、米糠粕粉碎过80目筛，得到玉米、碎米、豆粕、米糠粕粉末混合均匀；
(2)称取石粉，玉米油，预混料混合均匀；称取玉米面，硫酸铵，氯化钠，水并灭菌(121℃，0.1MPa，20min)，得到灭菌后的辅助培养基；
(3)将步骤(1)、步骤(2)、制备的饲料添加剂原料和辅助培养基搅拌均匀制备成初级猪饲料添加剂；
(4)将YPD液体培养基中的酵母菌和MRS液体培养基中的乳酸菌都培养至对数生长期，得到位于对数生长期的两种菌液；黑曲霉于固体PDA平板生长4天；再利用含3％吐温-80的生理盐水洗脱黑曲霉平板，得到黑曲霉孢子悬浮液，悬浮液中孢子数约为104CFU/mL；三种菌液的使用量体积比为1：1：1；
(5)无菌条件下向初级猪饲料添加剂中添加步骤(4)中的酵母菌菌液；4小时后再向其加入步骤(4)中的黑曲霉悬浮液；4小时最后再向其加入步骤(4)中的乳酸菌菌液，搅拌均匀制备成最终级应对仔猪腹泻的混菌发酵饲料添加剂猪饲料添加剂。
实施例11
组方(重量份)：
玉米粉60份、豆粕50份、米糠粕30份、石粉10份、碎米40份、玉米油10份、预混料10份、辅助培养基30份、混合菌液40份；混合菌液包括酵母菌、黑曲霉和乳酸菌。
辅助培养基，其成分为玉米面10份，硫酸铵12份，氯化钠14份，无菌水20份。
制备方法：
(1)将玉米粉、碎米、豆粕、米糠粕粉碎过80目筛，得到玉米、碎米、豆粕、米糠粕粉末混合均匀；
(2)称取石粉，玉米油，预混料混合均匀；称取玉米面，硫酸铵，氯化钠，水并灭菌(121℃，0.1MPa，20min)，得到灭菌后的辅助培养基；
(3)将步骤(1)、步骤(2)制备的饲料添加剂原料和辅助培养基搅拌均匀制备成初级猪饲料添加剂；
(4)将YPD液体培养基中的酵母菌和MRS液体培养基中的乳酸菌都培养至对数生长期，得到位于对数生长期的两种菌液；黑曲霉于固体PDA平板生长5天；再利用含3％吐温-80的生理盐水洗脱黑曲霉平板，得到黑曲霉孢子悬浮液，悬浮液中孢子数约为104CFU/mL；三种菌液的使用量体积比为1：1：1；
(5)无菌条件下向初级猪饲料添加剂中添加步骤(4)中的酵母菌菌液；8小时后再向其加入步骤(4)中的黑曲霉悬浮液；8小时最后再向其加入步骤(4)中的乳酸菌菌液，搅拌均匀制备成最终级应对仔猪腹泻的混菌发酵饲料添加剂猪饲料添加剂。
实施例12
本发明实施例2-11任一得到的应对仔猪腹泻率的饲料添加剂，直接添加在仔猪基础饲料(实施例1制备)中后进行常规投喂即可，添加量为基础饲料质量1-10％。
试验例1
下面通过喂食试验以验证本发明的效果：
选取180头体重7kg左右健康的断奶仔猪，将所选仔猪按品种、胎次相同，体重相近、公母各半的分组原则随机分为9个组，每个组进行2个重复，每个重复10头(其中公母各半)。各组基础日粮相同，试验从28日龄断奶仔猪开始，为期28天。
按照实施例的方案，实施例1为对比组(不添加添加剂的基础猪饲料)，实施例2至实例9为试验组。其中8组试验组在基础日粮猪饲料中分别添加为基础饲料质量3％的上述各实施例所得的应对仔猪腹泻率的饲料添加剂，对比组只饲喂基础日粮猪饲料。
仔猪定时饲喂，饲喂时间分别在每天的8、12、16和20点。饲料采用粉料拌湿的方式饲喂，饲料加水拌湿即可。仔猪在试验期间自由饮水，猪舍管理按照试验猪场常规进行。
计算腹泻率(腹泻率＝[腹泻头数/(仔猪头数×试验天数)]×100％)。最后的统计结果如下：
Figure BDA0002397395560000111
由以上试验结果可看出，本发明的降低仔猪腹泻率的饲料添加剂具有显著降低仔猪腹泻率的效果，并结合三种益生菌的代谢机理来看，由于黑曲霉拥有丰富的纤维素酶、蛋白酶，它能够降解饲料中的大分子，使其变为容易利用的物质。再者由于酵母菌它本生也有蛋白酶系使得大分子被继续降解，并利用黑曲霉降解的物质生长发育，况且它自身为单细胞蛋白，从而提高了饲料的营养品质，而且降解出来的大豆肽可以提高仔猪的免疫力从而验证上述实验结果，而乳酸菌能产生乳酸，抑制后发酵过程的杂菌生长。所以本发明利用三种益生菌复配并与其他原料结合得到的降低仔猪腹泻率的饲料添加剂可有效降低基础饲料的对仔猪产生的腹泻，并明显优于任意一种或者两种的益生菌的复配，协同增效效果显著，并且利于保藏，而降低成本；因此具有较好的市场推广前景。

Claims (7)

1.一种应对仔猪腹泻的混菌发酵饲料添加剂，其特征在于，主要由以下重量份数原料所制成：玉米粉30-60份、豆粕10-50份、米糠粕5-30份、石粉1-10份、碎米10-40份、玉米油1-10份、预混料2-10份、辅助培养基10-30份、混合菌液10-40份；所述混合菌液包括酵母菌、黑曲霉和乳酸菌；
所述应对仔猪腹泻的混菌发酵饲料添加剂的制备方法，包括如下步骤：
（1）将玉米粉、碎米、豆粕、米糠粕粉碎，得到玉米、碎米、豆粕、米糠粕粉末混合均匀；
（2）称取石粉，玉米油，预混料混合均匀；称取玉米面，硫酸铵，氯化钠，水并灭菌，得到灭菌后的辅助培养基；
（3）将步骤（1）、步骤（2）制备的混合原料和辅助培养基搅拌均匀制备成初级猪饲料添加剂；
（4）将YPD液体培养基中的酵母菌和MRS液体培养基中的乳酸菌都培养至对数生长期，得到位于对数生长期的两种菌液；黑曲霉于固体PDA平板生长4-5天；洗脱黑曲霉平板，得到黑曲霉孢子悬浮液；
（5）向初级猪饲料添加剂中添加步骤（4）中的酵母菌菌液，再向其加入步骤（4）中的黑曲霉悬浮液；最后向其加入步骤（4）中的乳酸菌菌液，搅拌均匀制备成最终应对仔猪腹泻的混菌发酵饲料添加剂。
2.根据权利要求1所述的应对仔猪腹泻的混菌发酵饲料添加剂，其特征在于，所述辅助培养基，按重量份其成分为玉米面1-10份，硫酸铵1-12份，氯化钠1-14份，无菌水1-20份。
3.根据权利要求1所述的应对仔猪腹泻的混菌发酵饲料添加剂，其特征在于，所述酵母菌和乳酸菌培养到对数生长期，黑曲霉于固体PDA平板生长4-5天，所述混合菌 液中酵母菌、黑曲霉、乳酸菌的菌液体积比为等体积比。
4.一种如权利要求1所述的应对仔猪腹泻的混菌发酵饲料添加剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
（1）将玉米粉、碎米、豆粕、米糠粕粉碎，得到玉米、碎米、豆粕、米糠粕粉末混合均匀；
（2）称取石粉，玉米油，预混料混合均匀；称取玉米面，硫酸铵，氯化钠，水并灭菌，得到灭菌后的辅助培养基；
（3）将步骤（1）、步骤（2）制备的混合原料和辅助培养基搅拌均匀制备成初级猪饲料添加剂；
（4）将YPD液体培养基中的酵母菌和MRS液体培养基中的乳酸菌都培养至对数生长期，得到位于对数生长期的两种菌液；黑曲霉于固体PDA平板生长4-5天；洗脱黑曲霉平板，得到黑曲霉孢子悬浮液；
（5）向初级猪饲料添加剂中添加步骤（4）中的酵母菌菌液，再向其加入步骤（4）中的黑曲霉悬浮液；最后向其加入步骤（4）中的乳酸菌菌液，搅拌均匀制备成最终应对仔猪腹泻的混菌发酵饲料添加剂。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤（5）所述向初级猪饲料添加剂中添加步骤（4）中的酵母菌菌液；4-8小时后再向其加入步骤（4）中的黑曲霉悬浮液；最后 4-8小时后再向其加入步骤（4）中的乳酸菌菌液，搅拌均匀制备成最终级应对仔猪腹泻的混菌发酵饲料添加剂猪饲料添加剂。
6.一种如权利要求1所述的混菌发酵饲料添加剂在制备预防和治疗仔猪腹泻饲料中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述混菌发酵饲料添加剂直接添加在仔猪基础饲料中后进行常规投喂即可，添加量为基础饲料质量1-10％。
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