CN111250068B

CN111250068B - 乙酰化介质填料用于分离纯化茶儿茶素的用途和方法

Info

Publication number: CN111250068B
Application number: CN202010073149.8A
Authority: CN
Inventors: 涂云飞; 宛晓春; 张梁; 杨秀芳; 朱跃进
Original assignee: Hangzhou Tea Research Institute China Coop
Current assignee: Hangzhou Tea Research Institute China Coop
Priority date: 2020-01-21
Filing date: 2020-01-21
Publication date: 2022-10-18
Anticipated expiration: 2040-01-21
Also published as: CN111250068A

Abstract

本发明涉及乙酰化介质填料用于分离纯化茶儿茶素的用途以及使用该乙酰化介质填料分离纯化茶儿茶素的方法。本发明所用介质填料的结构骨架基质以天然的纤维素或硅胶为材料，本身具有绿色安全的特性，引入特定的乙酰基功能团可以优先吸附茶儿茶素，而对咖啡碱吸附极弱，从而有利于咖啡碱脱除。吸附茶多酚的介质填料，以高浓度乙醇水溶液洗脱后，柱填料回复至原初状态，且未受到多酚类色素形成的顽固吸附而影响重复利用。本发明所用介质填料机械强度高，分离富集茶儿茶素及脱除咖啡碱能力强，性价比高，能够满足产业化需求。

Description

乙酰化介质填料用于分离纯化茶儿茶素的用途和方法

技术领域

本发明涉及茶儿茶素的分离纯化方法，更具体而言，涉及一种乙酰化介质填料用于分离纯化茶儿茶素的用途以及使用该乙酰化介质填料分离纯化茶儿茶素的方法。

背景技术

正常情况下，人体内的自由基是处于不断产生与清除的动态平衡之中，但自由基产生过多或清除过慢，它通过攻击生命大分子物质及各种细胞器，会造成机体在分子水平、细胞水平及组织器官水平的各种损伤，加速机体的衰老进程并诱发各种疾病。此外，外界环境中的空气污染、吸烟、农药等都会使人体产生更多活性氧自由基，使核酸突变，也是人类衰老和患病的根源。而抗氧化剂的摄入，能将体内多余的自由基清除掉，从而起到抗氧化作用。抗氧化食品因为其所提供的抗氧化性物质能够清除体内过多的活性氧自由基，而起到延缓衰老、增强人体抵抗力的作用。茶多酚类物质作为茶叶中多羟基酚类天然化合物，如表没食子儿茶素没食子酸酯((-)-epigallocatechin-3-gallate，EGCG)、表儿茶素没食子酸酯((-)-epicatechin-3-gallate，ECG)，具有抗氧化、抗癌、抗辐射、降血脂防治动脉粥样硬化、降血糖、去除口臭、抗衰老、抗龋护齿、消炎抑菌及抑制逆转录酶活性，等药理作用。

提取茶叶中茶多酚的同时，也会将茶叶中含量在2％～5％的生物碱一并提取出来。茶叶中的生物碱主要有咖啡碱、可可碱及茶碱，并以咖啡碱的含量最高。咖啡碱在水中的pKa＝14，在胃液内(pH2～3)主要以非解离形式存在，口服后吸收快而完全，口服与静脉注射的血浆浓度相似，生物利用度近100％，并主要以简单扩散方式吸收，少部分经低亲和力载体(kM＝5.4mmol/L)转运通过血脑屏障。脑内浓度在口服后5min即上升，30min达峰浓度，血浆与脑的浓度之比约为1。进入人体后，咖啡碱主要通过肝微粒体混合功能酶代谢，其中84％经去甲基成为副黄嘌呤，与咖啡碱有相同的药理活性，其血浆浓度为咖啡碱浓度的三分之二，并最后代谢成1,7-二甲基尿酸及1-甲基尿酸等排出体外，仅1％～5％以原型排泄。咖啡碱在成人血浆中的半衰期为2.5h～4.5h。

整体上，咖啡碱对人或动物既可通过兴奋中枢神经系统的迷走中枢，引起胃腺分泌亢进，亦可刺激胃局部释放组织胺进而造成胃壁细胞泌酸增加(程言亮,贾恒明,王峰,刘敏,林秋,钱厚海.咖啡因刺激离体豚鼠胃的胃酸分泌,空军总医院学报,1996,12(2):82-84.)。日常饮茶生活中，茶中的咖啡碱能够用来减少人们的困意和疲倦感。主要因为咖啡碱具有中枢神经系统兴奋作用。并且，咖啡碱有舒张平滑肌、兴奋心肌、增加胃酸分泌及利尿等外周作用。同时，慢性摄入咖啡碱能够对抗高盐引起的高血压，主要与咖啡碱增加尿钠排出有关，并可能通过降低收缩压发挥作用(杨涛.膳食因子咖啡因和薄荷醇调控血压的机制研究.第三军医大学博士学位论文,2015.)。单次高剂量咖啡碱对预防呼吸暂停有效。咖啡碱具有刺激神经和改善神经肌肉传导的作用，从而可以作为一种外在刺激因素用于提高运动的速度，中等剂量咖啡碱可以改善需快速反应和速度型项目的能力，其中包括短跑和短距离游泳。

大剂量的咖啡碱对小鼠胃粘膜有刺激作用提示：饮用含咖啡碱的饮料或服用含咖啡碱的药物，应注意不要超量，避免长期、大量滥用，防止消化道疾病发生(张健,段相林,邵素霞,李纪标.咖啡因对小鼠胃粘膜影响的扫描电镜观察,解剖科学进展,1997,3(3):246-247.)。对于冠状动脉疾病，特别是运动前和高原作业的冠脉缺血者来说咖啡碱可直接降低血流量，并会引起心肌缺血、心绞痛(心肌氧供需失调)或急性冠状动脉疾病综合征发作(惠亚玲.咖啡因可降低运动者的心肌血流.国外医学情报,2006,27:20-21.)。另外，咖啡碱本身无镇痛作用，小剂量咖啡碱(65mg～130mg)能增强非甾体抗炎镇痛药(阿司匹林、醋氨酚、布洛芬及其组合)的镇痛作用；但长期每天大剂量的摄入大于600mg的咖啡碱能产生类似焦虑状态的综合症：包括焦虑、烦躁不安、失眠的副作用(陈莹.中枢兴奋药咖啡碱的再评价(综述).国外医学生理、病理科学与临床分册,1997,17(4):375-378.)。对于易失眠者、小孩、孕妇以及老人，也不宜饮用咖啡碱含量高的茶叶。同时，咖啡碱是使茶汤产生混浊的重要成分，降低茶汤中咖啡碱含量可以显著降低混浊产生的量(岳鹏翔.咖啡碱含量对速溶茶浊度的影响.饮料工业,1999,2(2)31-34.)，因此在茶饮料领域控制原料中咖啡碱的量十分重要。

为避免咖啡碱对特殊人群所带来的生理副作用及特定领域的应用需求，从茶叶中制备脱除咖啡碱的高纯度茶儿茶素产品显得由为重要。卤代烷烃(如氯仿、二氯甲烷类溶剂)能够萃取脱除茶多酚中咖啡碱，但该类溶剂毒性大，对环境及产品的安全性均构成威胁；同时，以苯乙烯、二乙烯苯为原料合成的大孔吸附树脂，含有的致孔剂及长期使用过程中降解的产物危害茶儿茶素产品安全性，并且以聚苯乙烯为结构骨架的大孔吸附树脂的选择性吸附不高，纯化过程中易受到原料多酚类物质的污染而形成的顽固性色素吸附，从而降低大孔吸附树脂的吸附性能。经清洗、碱处理、剖皮、脱碱、缓冲液处理、脱水、干燥及研磨处理的皮胶原纤维，再经高纯水浸泡处理后，以交联剂进行反应交联所得的吸附材质，对茶多酚中的酯型儿茶素吸附较强，而咖啡碱的吸附弱，且用纯水即可洗脱除去咖啡碱，酯型儿茶素EGCG、ECG类成分总回收率在80％以上(廖学品,陆忠兵,邓慧,杜晓,石碧.胶原纤维吸附材料除去茶多酚中的咖啡因.中国科技论文在线,2009,1-9.)，然而该类材料，不易获得，且机械稳定性差、承受压力小。另一方面，木粉分子结构中不仅含有大量的醇基和醚基等含氧官能团，具有很高的极性，还含有木质素、纤维素、半纤维素及多酚类物质等，在碱与酸分别处理下所得的柱填充物基质直接应用于茶多酚与咖啡碱的分离，其效果有限；进一步以乙基纤维素、丙烯酰胺与已二酸以一定比例混合在乙醇的助溶下形成浆液对木粉进行物理吸附改性所形成柱填充物，可用于茶多酚中儿茶素与咖啡碱的分离，但通过物理方式形成的化学基团结合不牢，易在弱极性有机溶剂解析液的作用下析出，且丙烯酰胺为毒性试剂(彭锦荣,王兵,罗洋,李瑞霞,吴大诚.改性木粉填充柱对茶多酚与咖啡因分离应用的研究.离子交换与吸附,2009,25(5):402-410.)。与此同时，回归自然的热潮及产品绿色化的理念正席卷全球，这为茶儿茶素的绿色化制备带来新的契机。

本发明的发明人长期从事茶叶天然产物的分离纯化方面的工作，已针对茶儿茶素的分离提纯分别设计发明了两项中国发明专利：ZL201410316521.8和ZL201510001063.3，并以绿色的低取代羟丙基纤维素作为吸附层析介质填料，但仍略有不足，如：纯化过程中咖啡碱与茶儿茶素类成分不能够一次性实现洗脱分离，需要增加串联柱的方式方能实现，导致分离效率低，并且柱填料对茶多酚中的色素类成分存在顽固性吸附，重复利用率低。因此，仍然需要进一步寻找发现新的用于茶儿茶素的提纯分离介质填料，以提高分离效率与重复利用率。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种乙酰化的介质填料用于分离纯化茶儿茶素的用途，并利用乙酰化的介质填料对茶儿茶素和咖啡碱吸附力的不同，在吸附柱层析洗脱时，咖啡碱首先被洗脱出，从而达到将两者分离，并富集纯化茶儿茶素的目的。

本发明的一方面提供了一种乙酰化的介质填料用于分离纯化茶儿茶素的用途。

优选地，所述乙酰化的介质填料是由如结构通式I或者结构通式II的介质填料经乙酰化修饰而得：

100<n1<5000；

n2>1000。

优选地，乙酰化修饰是指结构通式I或者结构通式II的羟基氢部分或全部被乙酰基取代而成为乙酰化的介质填料。

优选地，所述乙酰化的介质填料是乙酰化纤维素。

优选地，所述乙酰化的介质填料是乙酰化硅胶。

本发明的另一方面提供了一种分离纯化茶儿茶素的方法，所述方法采用乙酰化的介质填料对茶儿茶素进行吸附。

100<n1<5000；

n2>1000。

优选地，所述方法采用色谱柱吸附层析。

优选地，所述方法包括：

(1)将包含通式I或II所示的乙酰化介质填料置于水中拌匀，并装入色谱柱中，用水进行平衡洗脱；

(2)将含茶儿茶素的茶多酚溶液上样于乙酰化介质填料色谱柱，并用水平衡洗脱；

(3)依次用乙醇浓度逐渐增加的乙醇水溶液洗脱，并洗脱出咖啡碱后，收集含茶儿茶素部分洗脱溶液；

(4)减压真空浓缩茶儿茶素部分洗脱溶液，得浓缩液；

(5)干燥浓缩液，得分离纯化的茶儿茶素产品。

本发明的有益效果在于：

1、本发明所用介质填料的结构骨架基质以天然的纤维素或硅胶为材料，本身具有绿色安全的特性，引入特定的乙酰基功能团可以优先吸附茶儿茶素，而对咖啡碱吸附极弱，从而有利于咖啡碱脱除。

2、吸附茶多酚的介质填料，以高浓度乙醇水溶液洗脱后，柱填料回复至原初状态，且未受到多酚类色素形成的顽固吸附而影响重复利用。

3、本发明所用介质填料机械强度高，分离富集茶儿茶素及脱除咖啡碱能力强，性价比高，能够满足产业化需求。

附图说明

图1为实施例5中茶多酚溶液中咖啡碱的吸附动力学曲线。

图2为实施例5中茶多酚溶液中茶儿茶素EGCG吸附动力学曲线。

图3为实施例5中茶多酚溶液中茶儿茶素ECG吸附动力学曲线。

图4为实施例5中咖啡碱的洗脱解析动力学曲线。

图5为实施例5中茶儿茶素EGCG的洗脱解析动力学曲线。

图6为实施例5中茶儿茶素ECG的洗脱解析动力学曲线。

图7为实施例5中茶儿茶素纯化前后的高效液相色谱图。

具体实施方式

为了进一步阐述本发明的主旨与技术方案，提供本发明的具体实施例以有助于本领域技术人员理解和实施本发明，但是本发明的保护范围不限于这些实施例。在本发明的精神和权利要求前提下，对本发明作出的任何修改，如以淀粉作为基质连接乙酰基团，均被认为落入本发明的保护范围。

下述实施例中，茶儿茶素及咖啡碱的测定采用反相高效液相色谱法。液相色谱以双液相梯度洗脱(1mL/min.)，其中水相(A)为：含5％乙酸乙酯及2％醋酸水溶液；有机相(B)为乙腈。具体：0-2min.为100％A，再2min.线性梯度变至75％A，维持11min.后，1min.变至100％A，并平衡5min.。高效液相色谱仪为Waters1525泵配备柱温箱、2487紫外可见双通道检测器、717-plus自动进样器、Breeze控制软件。色谱柱为WatersSymmetryC₁₈(4.6mm×150mm)。

下述实施例中，乙酰化介质填料的制备方法为：

(I)在圆底烧瓶中加入1g纤维素粉(结构通式I，100<n1<5000)与20mL无水吡啶，超声波超声分散处理15分钟，再逐滴加入5mL乙酸酐于纤维素悬浮液中，震荡均匀，并在氮气保护下，反应温度为80℃，持续搅拌5小时完成乙酰化反应。反应结束后，产物分别水洗三次，然后再通过丙酮或乙醇洗三次，以便去除未反应的物质和副产物。最后，60℃充分干燥，得到白色固体粉状的乙酰化的纤维素。

(II)10g硅胶(结构通式II，n2>1000)与25mLHCl(18.5％，w/w)溶液混合，在磁力搅拌下，加热回流12h；然后，过滤，用适量的蒸馏水漂洗硅胶，直到滤液呈中性。将活化的硅胶粗品在鼓风干燥箱中，150℃下干燥12h，得到活化的硅胶。对硅胶的表面进行乙酰化修饰，引入疏水基团。具体地，在圆底烧瓶中加入2.0g上述活化的硅胶，量取一定体积乙酸酐加入到圆底烧瓶中，室温搅拌30min。然后，于90℃条件下，加热反应10h。待反应结束后，过滤分离。将固体用蒸馏水浸泡30min，洗涤数次至中性。最后将所得固体于60℃充分干燥，即得到乙酰化硅胶介质填料。

下述实施例中，乙酰基团质量份数的测定参照中国药典(2015版)中的方法进行。具体(1)乙酰基含量低于42.0％的测定方法为：取本品约2.0g，精密称定，置锥形瓶中，加丙酮100ml和水10ml，密塞。用磁力搅拌器搅拌至完全溶解，精密加入氢氧化钠滴定液(1.0mol/L)30ml，继续搅拌30分钟，加热水100ml，冲洗锥形瓶内壁，再继续搅拌2分钟，放冷，加酚酞指示液2～3滴，用硫酸滴定液(0.5mol/L)滴定至终点，并将滴定结果用空白试验校正。每1ml硫酸滴定液(0.5mol/L)相当于43.05mg的C₂H₃O。(2)乙酰基含量高于42.0％的测定方法为：取本品约2.0g，精密称定，置锥形瓶中，加丙酮100ml和二甲亚砜30ml，密塞，用磁力搅拌器搅拌16小时，精密加入氢氧化钠滴定液(1.0mol/L)30ml，继续搅拌6分钟，静置60分钟，加热水100ml，冲洗锥形瓶内壁，再继续搅拌2分钟，放冷，加酚酞指示液4～5滴，用盐酸滴定液(0.5mol/L)滴定至终点，精密加过量的盐酸滴定液(0.5mol/L)0.5ml，搅拌5分钟，静置30分钟，用氢氧化钠滴定液(0.5mol/L)滴定至粉红色，并将滴定结果用空白试验校正。每1ml盐酸滴定液(0.5mol/L)相当于21.525mg的C₂H₃O。

下述实验例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

实施例1

以筛选制备的含乙酰基团质量份数5％(w/w)的醋酸纤维素1g装入直径1.1cm，高15cm的玻璃柱，水平衡后上样以5％(v/v)乙醇含0.05％(v/v)醋酸水溶液溶解配制的0.2％(w/v)茶多酚(茶多酚中咖啡碱6.3％(w/w)，EGCG24.4％(w/w)，ECG9.5％(w/w))8mL，待上样之后水洗脱平衡，再以1％(v/v)、2％(v/v)、4％(v/v)、8％(v/v)、16％(v/v)、32％(v/v)、64％(v/v)的乙醇水溶液进行梯度洗脱。舍去小于4％乙醇洗脱液部份(主要含有咖啡碱)，收集大于4％乙醇洗脱液部份浓缩干燥得茶儿茶素纯化制品，其中咖啡碱的含量低于0.1％(w/w)，茶酯型儿茶素含量高于80％(w/w)。

实施例2

以筛选制备的含乙酰基团质量份数8％(w/w)的醋酸纤维素1g装入直径1.1cm，高15cm的玻璃柱，水平衡后上样以5％(v/v)乙醇含0.05％(v/v)醋酸水溶液溶解配制的0.2％(w/v)茶多酚(茶多酚中咖啡碱6.3％(w/w)，EGCG24.4％(w/w)，ECG9.5％(w/w))12mL，待上样之后水洗脱平衡，再以1％(v/v)、2％(v/v)、4％(v/v)、8％(v/v)、16％(v/v)、32％(v/v)、64％(v/v)的乙醇水溶液进行梯度洗脱。舍去小于4％乙醇洗脱液部份(主要含有咖啡碱)，收集大于4％乙醇洗脱液部份浓缩干燥得茶儿茶素纯化制品，其中咖啡碱的含量低于0.1％(w/w)，茶酯型儿茶素含量高于80％(w/w)。

实施例3

以筛选制备的含乙酰基团质量份数14％(w/w)的醋酸纤维素1g装入直径1.1cm，高15cm的玻璃柱，水平衡后上样以5％(v/v)乙醇含0.05％(v/v)醋酸水溶液溶解配制的0.2％(w/v)茶多酚(茶多酚中咖啡碱6.3％(w/w)，EGCG24.4％(w/w)，ECG9.5％(w/w))22mL，待上样之后水洗脱平衡，再以1％(v/v)、2％(v/v)、4％(v/v)、8％(v/v)、16％(v/v)、32％(v/v)、64％(v/v)的乙醇水溶液进行梯度洗脱。舍去小于4％乙醇洗脱液部份(主要含有咖啡碱)，收集大于4％乙醇洗脱液部份浓缩干燥得茶儿茶素纯化制品，其中咖啡碱的含量低于0.1％(w/w)，茶酯型儿茶素含量高于80％(w/w)。

实施例4

以筛选制备的含乙酰基团质量份数17％(w/w)的醋酸纤维素1g装入直径1.1cm，高15cm的玻璃柱，水平衡后上样以5％(v/v)乙醇含0.05％(v/v)醋酸水溶液溶解配制的0.2％(w/v)茶多酚(茶多酚中咖啡碱6.3％(w/w)，EGCG24.4％(w/w)，ECG9.5％(w/w))29mL，待上样之后水洗脱平衡，再以1％(v/v)、2％(v/v)、4％(v/v)、8％(v/v)、16％(v/v)、32％(v/v)、64％(v/v)的乙醇水溶液进行梯度洗脱。舍去小于4％乙醇洗脱液部份(主要含有咖啡碱)，收集大于4％乙醇洗脱液部份浓缩干燥得茶儿茶素纯化制品，其中咖啡碱的含量低于0.1％(w/w)，茶酯型儿茶素含量高于80％(w/w)。

实施例5

以筛选制备的含乙酰基团质量份数23.7％(w/w)的醋酸纤维素1g装入直径1.1cm，高15cm的玻璃柱，水平衡后上样以5％(v/v)乙醇含0.05％(v/v)醋酸水溶液溶解配制的0.2％(w/v)茶多酚(茶多酚中咖啡碱6.3％(w/w)，EGCG24.4％(w/w)，ECG9.5％(w/w))40mL，等在上样过程中溶剂流出1个柱体积(约9mL)后，以每1ml收集1管(对咖啡碱、EGCG、ECG的吸附曲线如图1-3所示)，之后水洗脱平衡后，以1％(v/v，1-4管)、2％(v/v，5-9管)、4％(v/v，10-13管)、8％(v/v，14-17管)、16％(v/v，18-21管)、32％(v/v，22-24管)、64％(v/v，25-29管)的乙醇水溶液进行梯度洗脱(对咖啡碱、EGCG、ECG的洗脱解析曲线如图4-6所示)。并收集合并4％以后的洗脱液部份，浓缩干燥得茶儿茶素纯化制品，其中咖啡碱，EGCG，ECG分别占干重的0.05％(w/w)，52.2％(w/w)，29.8％(w/w)，即茶酯型儿茶素含量占总重量的82％(w/w)。上样前后的高效液相色谱图如图7所示。

实施例6

以筛选制备的含乙酰基团质量份数32％(w/w)的醋酸纤维素1g装入直径1.1cm，高15cm的玻璃柱，水平衡后上样以5％(v/v)乙醇含0.05％(v/v)醋酸水溶液溶解配制的0.2％(w/v)茶多酚(茶多酚中咖啡碱6.3％(w/w)，EGCG24.4％(w/w)，ECG9.5％(w/w))50mL，待上样之后水洗脱平衡，再以1％(v/v)、2％(v/v)、4％(v/v)、8％(v/v)、16％(v/v)、32％(v/v)、64％(v/v)的乙醇水溶液进行梯度洗脱。舍去小于4％乙醇洗脱液部份(主要含有咖啡碱)，收集大于4％乙醇洗脱液部份浓缩干燥得茶儿茶素纯化制品，其中咖啡碱的含量低于0.1％(w/w)，茶酯型儿茶素含量高于80％(w/w)。

实施例7

以筛选制备的含乙酰基团质量份数44.8％(w/w)的醋酸纤维素1g装入直径1.1cm，高15cm的玻璃柱，水平衡后上样以5％(v/v)乙醇含0.05％(v/v)醋酸水溶液溶解配制的0.2％(w/v)茶多酚(茶多酚中咖啡碱6.3％(w/w)，EGCG24.4％(w/w)，ECG9.5％(w/w))75mL，待上样之后水洗脱平衡，再以1％(v/v)、2％(v/v)、4％(v/v)、8％(v/v)、16％(v/v)、32％(v/v)、64％(v/v)的乙醇水溶液进行梯度洗脱。舍去小于4％乙醇洗脱液部份(主要含有咖啡碱)，收集大于4％乙醇洗脱液部份浓缩干燥得茶儿茶素纯化制品，其中咖啡碱的含量低于0.1％(w/w)，茶酯型儿茶素含量高于80％(w/w)。

实施例8

以制备的含乙酰基团质量份数6.5％的乙酰化层析硅胶2g装入直径1.1cm，高15cm的玻璃柱，水平衡后上样以5％乙醇含0.05％醋酸水溶液溶解配制的0.2％(w/v)茶多酚(茶多酚中咖啡碱6.3％(w/w)，EGCG24.4％(w/w)，ECG9.5％(w/w))8mL，之后水洗脱平衡后，梯度切换成70％的乙醇水溶液进行洗脱。并收集合并富含茶儿茶素洗脱液部份，浓缩干燥得茶儿茶素纯化制品，其中咖啡碱的含量低于0.1％(w/w)，茶酯型儿茶素含量高于80％(w/w)。

实施例9

以制备的含乙酰基团质量份数29.1％的乙酰化层析硅胶2g装入直径1.1cm，高15cm的玻璃柱，水平衡后上样以5％乙醇含0.05％醋酸水溶液溶解配制的0.2％(w/v)茶多酚(茶多酚中咖啡碱6.3％(w/w)，EGCG24.4％(w/w)，ECG9.5％(w/w))35mL，之后水洗脱平衡后，梯度切换成70％的乙醇水溶液进行洗脱。并收集合并富含茶儿茶素洗脱液部份，浓缩干燥得茶儿茶素纯化制品，其中咖啡碱的含量低于0.1％(w/w)，茶酯型儿茶素含量高于80％(w/w)。

实施例10

以制备的含乙酰基团质量份数45.3％的乙酰化层析硅胶2g装入直径1.1cm，高15cm的玻璃柱，水平衡后上样以5％乙醇含0.05％醋酸水溶液溶解配制的0.2％(w/v)茶多酚(茶多酚中咖啡碱6.3％(w/w)，EGCG24.4％(w/w)，ECG9.5％(w/w))56mL，之后水洗脱平衡后，梯度切换成70％的乙醇水溶液进行洗脱。并收集合并富含茶儿茶素洗脱液部份，浓缩干燥得茶儿茶素纯化制品，其中咖啡碱的含量低于0.1％(w/w)，茶酯型儿茶素含量高于80％(w/w)。

对比例1

以未乙酰化的纤维素1g装入直径1.1cm，高15cm的玻璃柱，水平衡后上样以5％乙醇含0.05％醋酸水溶液溶解配制的0.2％(w/v)茶多酚(茶多酚中咖啡碱6.3％(w/w)，EGCG24.4％(w/w)，ECG9.5％(w/w))8mL，之后水洗脱平衡，并收集水洗脱至近无色的洗脱液部份，浓缩干燥得茶多酚产品150mg，其中咖啡碱，EGCG，ECG分别占干重的6.6％(w/w)，25.7％(w/w)，9.8％(w/w)。

对比例2

以未乙酰化的层析硅胶2g装入直径1.1cm，高15cm的玻璃柱，水平衡后上样以5％乙醇含0.05％醋酸水溶液溶解配制的0.2％(w/v)茶多酚(茶多酚中咖啡碱6.3％(w/w)，EGCG24.4％(w/w)，ECG9.5％(w/w))8mL，之后水洗脱平衡，并收集水洗脱至近无色的洗脱液部份，浓缩干燥得茶多酚产品155mg，其中咖啡碱，EGCG，ECG分别占干重的6.5％(w/w)，25.1％(w/w)，9.8％(w/w)。