CN111239405A - 一种载脂蛋白ai检测试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种载脂蛋白AI检测试剂盒，涉及医学检验的技术领域，包括试剂R1和试剂R2，试剂R1包括第一缓冲液和第一原料，第一缓冲液包括三羟甲基氨基甲烷、Proclin150、聚山梨酯‑80、叠氮钠，第一原料包括聚乙二醇、曲拉通‑100，试剂R2包括第二缓冲液和第二原料，第二缓冲液包括三羟甲基氨基甲烷、Proclin150、聚山梨酯‑80、叠氮钠、聚乙二醇，第二原料包括抗APOA1血清。本发明的载脂蛋白AI检测试剂盒采用免疫比浊法在西门子1200型全自动生化仪上检测试剂空白、分析灵敏度、线性范围、重复性、批间差、准确度等各项指标，符合该产品拟定的产品技术要求，能够满足临床实际需要。
Description
技术领域
本发明涉及医学检验的技术领域，更具体地说，它涉及一种载脂蛋白AI检测试剂盒。
背景技术
载脂蛋白是由血液内的脂类物质与载脂蛋白组成的，不同的脂类物质结合的载脂蛋白不同。在高密度脂蛋白(HDL)组成中蛋白质占50％。蛋白质中载脂蛋白AI(ApoAI)约占65％-70％,其他脂蛋白中载脂蛋白AI极少，所以载脂蛋白AI是高密度脂蛋白的主要载脂蛋白，载脂蛋白AI的量与高密度脂蛋白的量呈正相关，载脂蛋白AI水平检测可以代表高密度脂蛋白水平检测，并与高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)呈明显正相关。载脂蛋白AI是临床检验中常用的检测项目,被应用于冠心病、高血压、急性心肌梗死的诊断、治疗及监护，具有非常重要的临床意义。载脂蛋白AI的降低会引起冠心病，其降低主要见于冠心病、脑血管病、感染、血液透析、慢性肾炎、吸烟、糖尿病、胆汁淤积综合征、慢性肝炎、肝硬化等。
高密度脂蛋白为一系列颗粒大小与组成不均一的脂蛋白，病理状态下，高密度脂蛋白脂类与组成往往会发生变化，导致载脂蛋白AI的升降不一定与高密度脂蛋白胆固醇成比例。由于载脂蛋白AI的含量较低，其测定方法需要较高的灵敏度和特异性。临床上主要有免疫透射比浊法，免疫散射比浊法和免疫印迹法的检测。目前，免疫透射比浊法是最为普遍通用的方法，但是，免疫透射比浊法存在灵敏度，精密度、准确性、线性范围等方面的问题，在临床应用上存在着差异性。
因此，本领域急需一种特异性、灵敏度、准确度、线性范围均满足在要求的在职蛋白AI检测试剂盒。
发明内容
针对实际运用中这一问题，本发明目的在于提出一种载脂蛋白AI检测试剂盒，具体方案如下：
一种载脂蛋白AI检测试剂盒，所述试剂盒内装有试剂R1和试剂R2，所述试剂R1包括第一缓冲液和第一原料，所述第一缓冲液包括三羟甲基氨基甲烷、Proclin150、聚山梨酯-80、叠氮钠，所述第一原料包括聚乙二醇、曲拉通-100，所述试剂R2包括第二缓冲液和第二原料，所述第二缓冲液包括三羟甲基氨基甲烷、Proclin150、聚山梨酯-80、叠氮钠、聚乙二醇，所述第二原料包括抗APOA1血清；
其中，所述第一缓冲液中三羟甲基氨基甲烷、Proclin150、聚山梨酯-80、叠氮钠的含量分别为3g/L、1g/L、1g/L、9g/L，所述第一原料中聚乙二醇、曲拉通-100的含量分别为55g/L、1ml/L；
所述第二缓冲液中三羟甲基氨基甲烷、Proclin150、聚山梨酯-80、叠氮钠、聚乙二醇的含量分别为3g/L、1g/L、1g/L、9g/L、55g/L；所述第二原料中抗APOA1血清的含量为0.25L/L。
进一步地，包括所述第一缓冲液的溶解方法，包括以下步骤：
步骤1、于1L容器内加水约0.8L；
步骤2、加入3g/L的三羟甲基氨基甲烷，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解；
步骤3、加入1g/L的Proclin150，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解；
步骤4、加入1g/L的聚山梨酯-80，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解；
步骤5、加入9g/L的叠氮钠，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解；
步骤6、搅拌30分钟±3；
步骤7、室温环境下调PH值至7.5；
步骤8、加去离子水补足至1L。
进一步地，包括所述第一原料的溶解方法，包括以下步骤：
步骤1、于1L容器内加第一缓冲液0.8L，，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解；
步骤2、加入55g/L的聚乙二醇，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解；
步骤3、加入1ml/L的曲拉通-100，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解；
步骤4、室温环境下调PH值至7.5；
步骤5、加第一缓冲液稀释至1L，用磁力搅拌器2-3档搅拌2h。
进一步地，包括所述第二缓冲液的溶解方法，包括以下步骤：
步骤1、于1L容器内加水约0.8L；
步骤2、加入3g/L的三羟甲基氨基甲烷，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解；
步骤3、加入1g/L的Proclin150，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解；
步骤4、加入1g/L的聚山梨酯-80，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解；
步骤5、加入9g/L的叠氮钠，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解；
步骤6、加入55g/L的聚乙二醇，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解；
步骤7、室温环境下调PH值至7.5；
步骤8、加去离子水补足至1L。
进一步地，包括所述第二原料的溶解方法，包括以下步骤：
步骤1、于1L容器内加第一缓冲液0.125L，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解；
步骤2、加入0.25L/L的抗APOA1血清，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解；
步骤3、加入0.5L的第一缓冲液，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解；
步骤4、加入0.125L的第二缓冲液，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解；
步骤5、定容至1L，用磁力搅拌器2-3档搅拌2h。
进一步地，60ML所述试剂盒中试剂R1和试剂R2的含量分别为45ML和15ML。
与现有技术相比，本发明的有益效果如下：
本发明的载脂蛋白AI检测试剂盒采用免疫比浊法在西门子1200型全自动生化仪上检测试剂空白、分析灵敏度、线性范围、重复性、批间差、准确度等各项指标，符合该产品拟定的产品技术要求，能够满足临床实际需要。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的详细说明，但本发明的实施方式不仅限于此。
一种载脂蛋白AI检测试剂盒，试剂盒内装有试剂R1和试剂R2，试剂R1包括第一缓冲液和第一原料，第一缓冲液包括三羟甲基氨基甲烷、Proclin150、聚山梨酯-80、叠氮钠，第一原料包括聚乙二醇、曲拉通-100。其中，第一缓冲液中三羟甲基氨基甲烷、Proclin150、聚山梨酯-80、叠氮钠的含量分别为3g/L、1g/L、1g/L、9g/L，第一原料中聚乙二醇、曲拉通-100的含量分别为55g/L、1ml/L。
具体的，第一缓冲液的溶解方法，包括以下步骤：
步骤1、于1L容器内加水约0.8L；
步骤2、加入3g/L的三羟甲基氨基甲烷，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解；
步骤3、加入1g/L的Proclin150，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解；
步骤4、加入1g/L的聚山梨酯-80，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解；
步骤5、加入9g/L的叠氮钠，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解；
步骤6、搅拌30分钟±3；
步骤7、室温环境下调PH值至7.5；
步骤8、加去离子水补足至1L。
第一原料的溶解方法，包括以下步骤：
步骤1、于1L容器内加第一缓冲液0.8L，，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解；
步骤2、加入55g/L的聚乙二醇，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解；
步骤3、加入1ml/L的曲拉通-100，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解；
步骤4、室温环境下调PH值至7.5；
步骤5、加第一缓冲液稀释至1L，用磁力搅拌器2-3档搅拌2h。
试剂R2包括第二缓冲液和第二原料，第二缓冲液包括三羟甲基氨基甲烷、Proclin150、聚山梨酯-80、叠氮钠、聚乙二醇，第二原料包括抗APOA1血清。其中，第二缓冲液中三羟甲基氨基甲烷、Proclin150、聚山梨酯-80、叠氮钠、聚乙二醇的含量分别为3g/L、1g/L、1g/L、9g/L、55g/L；第二原料中抗APOA1血清的含量为0.25L/L。
具体的，第二缓冲液的溶解方法，包括以下步骤：
步骤1、于1L容器内加水约0.8L；
步骤2、加入3g/L的三羟甲基氨基甲烷，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解；
步骤3、加入1g/L的Proclin150，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解；
步骤4、加入1g/L的聚山梨酯-80，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解；
步骤5、加入9g/L的叠氮钠，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解；
步骤6、加入55g/L的聚乙二醇，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解；
步骤7、室温环境下调PH值至7.5；
步骤8、加去离子水补足至1L。
第二原料的溶解方法，包括以下步骤：
步骤1、于1L容器内加第一缓冲液0.125L，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解；
步骤2、加入0.25L/L的抗APOA1血清，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解；
步骤3、加入0.5L的第一缓冲液，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解；
步骤4、加入0.125L的第二缓冲液，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解；
步骤5、定容至1L，用磁力搅拌器2-3档搅拌2h。
进一步的，本实施例设计了八种规格的载脂蛋白AI检测试剂盒，
60ml(R1:1×45ml,R2:1×15ml)；
120ml(R1:2×45ml,R2:2×15ml)；
144ml(R1:6×19ml,R2:6×5ml)；
160ml(R1:2×60ml,R2:1×40ml)；
200ml(R1:2×75ml,R2:1×50ml)；
250ml(R1:4×50ml,R2:1×50ml)；
800t；
2000ml。
大小包装不同，对性能评估结果没有影响。因此，本实施例选择其中一种最常用规格：60ml(R1:1×45ml,R2:1×15ml)，批号为Lot20141220、Lot20150119、Lot20150128的三批试剂盒进行测定。
本实施例中，用于性能评估的校准品为：上海科华校准品，Lot:20141112，标示值:0.50，0.79，1.20，1.98g/L；用于准确度性能评估的参考物质为：Cobas-C.f.a.s.Lipids，Lot:174327，标示值:1.07g/L；质控品为：BIO-RAD公司Liquichek Lipids Control，Lot:57281，target:0.862g/L，range:0.855-1.28g/L；Lot:57282，target:2.13g/L，range:1.70-2.56g/L。用于性能评估的仪器为西门子1200型全自动生化分析仪。
1、试剂空白。(要求试剂空白吸光度：A600nm(1.0cm)≤0.065)
用量筒量取试剂R1和R2，净含量不少于：试剂R1:45ml；试剂R2:15ml。用纯水测试试剂盒，在测试主波长600nm下，记录测试启动时的吸光度(A1)和约5分钟(T)后的吸光度(A2)，A2测试结果即为试剂空白吸光度测定值。试验结果如表1所示：
表1
结论：三个批号的APOA1试剂盒分别在西门子1200生化仪测定，试验结果符合试剂空白吸光度：A600nm(1cm)≤0.065。
2、分析灵敏度。(用已知浓度的样品测试试剂盒，记录在试剂盒规定参数下产生的吸光度变化；本试验测定1.58g/L样品，吸光度变化要求>1.0A。)
试验结果如表2所示：
表2
结论：三个批号的APOA1试剂盒分别在西门子1200生化仪测定，实验结果表明测定理论值在1.58g/L样品，吸光度变化要求>1.0A。
3、线性范围。(要求试剂盒在样本浓度0.30g/L～2.60g/L范围内，整个反应呈线性，r≥0.990，线性相对偏差<±15％。)
用接近线性范围上限的高浓度样品和接近线性范围下限的低浓度样品，混合成6个稀释浓度(xi)。分别测试试剂盒，每个稀释度测试3次，分别求测定均值(yi)。以稀释浓度(xi)为自变量，以测定均值(yi)为因变量求出线性回归方程及相关系数(r)。按公式1计算相关系数(r)。
用上述方法中稀释浓度xi代入线性回归方程，计算yi的估算值与yi的线性偏差，应符合产品技术要求的规定。试验结果如表3所示，
表3
结论：三个批号的APOA1试剂盒分别在西门子1200生化仪测定，实验结果表明在0.30g/L～2.60g/L测定范围内，线性误差均未出现线性异常状况,所有R2值均大于行业普遍认可的0.990的标准，线性相对偏差均<±15％。
4.1、测量精密度。(要求：CV≤5.0％)
在重现性条件下，用质控品测试试剂盒。测试10次，分别计算测量值的平均值和标准差，按公式(2)计算变异系数(CV)，应符合产品技术要求。
试验结果如表4所示：
表4
结论：在高低两个不同浓度水平的质控血清测试下，使用西门子1200生化分析仪测得的批内不精密度均小于5％，属于可接受范畴。
4.2、批间差。(要求：批间相对偏差≤8.0％)
用质控品分别测试3个不同批号的试剂盒。每个批号测试3次，分别计算每批3次检测的均值(i＝1,2,3)，以及总计9次的均值，按公式3、公式4计算相对偏差(R)，结果应符合产品技术要求的规定。
试验结果如表5所示：
表5
结论：用质控品分别测试3个不同批号的试剂盒，使用西门子1200生化分析仪测得的批间相对偏差小于8％，属于可接受范畴。
4.3、准确度。(与有证参考物质的相对偏差不超过±15％)
测定APOA1 Cobas-C.f.a.s.Lipids 3次，计算3次结果平均值，按公式5计算相对偏差。
X靶---有证参考物质的标示值。
试验结果如表6所示：
表6
结论：使用西门子1200生化分析仪测得的相对偏差均小于±15％，属于可接受范畴。
4.4、稳定性。
产品配方工艺与此次进行性能分析的试剂无改变。
本发明的载脂蛋白AI检测试剂盒采用免疫比浊法在西门子1200型全自动生化仪上检测试剂空白、分析灵敏度、线性范围、重复性、批间差、准确度等各项指标，符合该产品拟定的产品技术要求，能够满足临床实际需要。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，本发明的保护范围并不仅局限于上述实施例，凡属于本发明思路下的技术方案均属于本发明的保护范围。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理前提下的若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (6)
1.一种载脂蛋白AI检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒内装有试剂R1和试剂R2，所述试剂R1包括第一缓冲液和第一原料，所述第一缓冲液包括三羟甲基氨基甲烷、Proclin150、聚山梨酯-80、叠氮钠，所述第一原料包括聚乙二醇、曲拉通-100，所述试剂R2包括第二缓冲液和第二原料，所述第二缓冲液包括三羟甲基氨基甲烷、Proclin150、聚山梨酯-80、叠氮钠、聚乙二醇，所述第二原料包括抗APOA1血清；
其中，所述第一缓冲液中三羟甲基氨基甲烷、Proclin150、聚山梨酯-80、叠氮钠的含量分别为3g/L、1g/L、1g/L、9g/L，所述第一原料中聚乙二醇、曲拉通-100的含量分别为55g/L、1ml/L；
所述第二缓冲液中三羟甲基氨基甲烷、Proclin150、聚山梨酯-80、叠氮钠、聚乙二醇的含量分别为3g/L、1g/L、1g/L、9g/L、55g/L；所述第二原料中抗APOA1血清的含量为0.25L/L。
2.根据权利要求1所述的载脂蛋白AI检测试剂盒，其特征在于，包括所述第一缓冲液的溶解方法，包括以下步骤：
步骤1、于1L容器内加水约0.8L；
步骤2、加入3g/L的三羟甲基氨基甲烷，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解；
步骤3、加入1g/L的Proclin150，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解；
步骤4、加入1g/L的聚山梨酯-80，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解；
步骤5、加入9g/L的叠氮钠，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解；
步骤6、搅拌30分钟±3；
步骤7、室温环境下调PH值至7.5；
步骤8、加去离子水补足至1L。
3.根据权利要求1所述的载脂蛋白AI检测试剂盒，其特征在于，包括所述第一原料的溶解方法，包括以下步骤：
步骤1、于1L容器内加第一缓冲液0.8L，，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解；
步骤2、加入55g/L的聚乙二醇，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解；
步骤3、加入1ml/L的曲拉通-100，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解；
步骤4、室温环境下调PH值至7.5；
步骤5、加第一缓冲液稀释至1L，用磁力搅拌器2-3档搅拌2h。
4.根据权利要求1所述的载脂蛋白AI检测试剂盒，其特征在于，包括所述第二缓冲液的溶解方法，包括以下步骤：
步骤1、于1L容器内加水约0.8L；
步骤2、加入3g/L的三羟甲基氨基甲烷，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解；
步骤3、加入1g/L的Proclin150，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解；
步骤4、加入1g/L的聚山梨酯-80，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解；
步骤5、加入9g/L的叠氮钠，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解；
步骤6、加入55g/L的聚乙二醇，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解；
步骤7、室温环境下调PH值至7.5；
步骤8、加去离子水补足至1L。
5.根据权利要求1所述的载脂蛋白AI检测试剂盒，其特征在于，包括所述第二原料的溶解方法，包括以下步骤：
步骤1、于1L容器内加第一缓冲液0.125L，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解；
步骤2、加入0.25L/L的抗APOA1血清，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解；
步骤3、加入0.5L的第一缓冲液，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解；
步骤4、加入0.125L的第二缓冲液，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解；
步骤5、定容至1L，用磁力搅拌器2-3档搅拌2h。
6.根据权利要求1所述的载脂蛋白AI检测试剂盒，其特征在于，60ML所述试剂盒中试剂R1和试剂R2的含量分别为45ML和15ML。
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- 2020-01-17 CN CN202010049922.7A patent/CN111239405A/zh active Pending
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