CN111235298B - 一种用于检测四倍体长穗偃麦草1e染色体的引物对tte1e-3及其应用 - Google Patents
一种用于检测四倍体长穗偃麦草1e染色体的引物对tte1e-3及其应用 Download PDFInfo
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Abstract
本分案申请公开了一种用于检测四倍体长穗偃麦草1E染色体的引物对TTE1E‑3及其应用。所述的引物对TTE1E‑3为SEQ ID NO.35～36，采用该引物对以四倍体长穗偃麦草的基因组DNA为模板进行扩增得到了四倍体长穗偃麦草1E染色体特异序列，并在小麦及其近缘属物种中进行了验证。本分案申请开发的引物对不仅可用于四倍体长穗偃麦草1E染色体(或片段)的快速检测，而且可以准确地鉴别四倍体长穗偃麦草与二倍体、十倍体长穗偃麦草及其他近缘属物种染色体，这为小麦族系统进化、种质资源鉴定和分子标记辅助选择育种提供了重要途径。
Description
本申请为申请号201910357629.4、申请日2019年4月29日、发明名称“一种四倍体长穗偃麦草1E染色体分子标记及其应用”的分案申请。
技术领域
本发明属于作物遗传育种技术领域，具体涉及一种用于检测四倍体长穗偃麦草1E染色体的引物对TTE1E-3及其应用。
背景技术
普通小麦(Triticum aestivum L.，2n＝6x＝42，AABBDD)是世界上种植面积最大、总产量仅次于玉米的粮食作物，养活了世界上约40％的人口(李圣军2017)。然而，随着耕作制度的变化、育种中少数亲本的反复使用以及环境条件的改变，普通小麦遗传多样性变低，其对生物和非生物胁迫的抗性也降低，这严重制约着其产量、抗性和品质的进一步提高(张璐璐2016)。小麦近缘物种中包含许多普通小麦所不具有的优良基因，目前主要通过远缘杂交将这些优良基因导入到普通小麦，来丰富小麦的遗传多样性。
长穗偃麦草(Thinopyrum elongatum(Host)D.R.Dewey)是小麦近缘物种，属禾本科、小麦族、偃麦草属。主要生长在温带和寒冷地带，具有许多优良特性，如多花，高蛋白含量，强适应性和繁殖能力等。另外长穗偃麦草还包含许多抗逆和抗病的基因，如抗寒、抗旱、耐盐碱、抗多种小麦病害(赤霉病、锈病、白粉病、黄矮病等)，因此可以作为改善小麦生物和非生物抗性的重要潜在基因供体(闫小丹等2010)。它包括二倍体(2n＝2x＝14，EE)，四倍体(2n＝4x＝28，EEEE)和十倍体(2n＝10x＝70，EEEEEEStStStSt)三种倍性。以前的研究表明二倍体的E基因组是长穗偃麦草的基本基因组，并且其与普通小麦(ABD基因组)的遗传分化程度较小，因此易与和小麦杂交，产生附加系、代换系、易位系等中间材料，被广泛应用于小麦遗传改良及育种中(
and Chen 1984；Li等2008)。
有关四倍体长穗偃麦草的研究如下：李娜等(2005)等推测四倍体长穗偃麦草可能是一个异源四倍体。韩方普等(1993)首次获得四倍体长穗偃麦草与硬粒小麦及提莫菲维小麦的属间杂种。由四倍体长穗偃麦草和硬粒小麦杂交回交形成的六倍体小偃麦8801、8802、8803均高抗赤霉病，8802，8803高抗杆锈菌小种Ug99(Guo等2015)。在六倍体小偃麦8801与硬粒小麦的杂交后代中，黄泽峰等(2013)选育出了硬粒小麦-长穗偃麦草7E双体异附加系。李海凤等(2016)探讨了长穗偃麦草染色体在硬粒小麦背景中的传递特征，结果表明1E传递率最高，6E传递率最低。Liu等(2018)获得了一个抗赤霉病的硬粒小麦二体附加系(2n＝30)，由28条硬粒小麦的染色体和2条长穗偃麦草的7E染色体组成。六倍体小偃麦8801和六倍体小黑麦T182杂交形成的小麦-黑麦-长穗偃麦草三属杂种后代对赤霉病、叶锈病、杆锈菌小种Ug99均表现出优越的抗性(Dai等2017)。我们课题组利用8801和四川麦区小麦品种(蜀麦482，川农16，蜀麦51等)杂交回交获得了一些小麦-四倍体长穗偃麦草的异染色体系，其染色体条数在40-47之间，并且后代中70％的材料高抗条锈病(Li等2018a)，利用寡聚核苷酸探针pSc119.2、pTa535、pTa71和pTa713，开发了四倍体长穗偃麦草E基因组的FISH模式图(Li等2018b)，这对于小麦-四倍体长穗偃麦草衍生后代中E染色体组的鉴定具有非常重要的意义。
开发长穗偃麦草分子标记可以快速准确的检测在小麦-长穗偃麦草衍生后代的长穗偃麦草染色质，目前基于各种分子标记技术已经开发了许多长穗偃麦草的特异分子标记，具体见表1。然而，这些分子标记的开发主要集中在二倍体长穗偃麦草和十倍体长穗偃麦草，而只针对四倍体长穗偃麦草染色体的特异分子标记较少，这阻碍了四倍体长穗偃麦草优异基因资源的开发和应用。
表1长穗偃麦草特异分子标记
GBS(Genotyping By Sequencing)是简化基因组测序的一种，其基本原理是利用限制性内切酶将一段完整DNA切成很多的DNA片段，然后选取300-500bp的片段，在该片段的两端测序，得到相应的序列片段，用这样的方法来达到简化测序的目的。该技术具有测序量低、价格便宜、数据利用率高、性价比高、参考基因组不依赖性等特点。目前GBS技术已经广泛应用于分子标记的开发、构建遗传图谱、QTL定位、GWAS关联分析等。
本发明利用GBS技术对二倍体长穗偃麦草、四倍体长穗偃麦草、硬粒小麦-四倍体长穗偃麦双二倍体8801和普通小麦-四倍体长穗偃麦草1E-7E染色体代换系进行测序，进行序列比对，获得了四倍体长穗偃麦草1E染色体特异序列，以这些序列为基础，开发了四倍体长穗偃麦草1E染色体的特异分子标记，并在小麦及其近缘属物种中进行了验证。本发明利用GBS测序开发的四倍体长穗偃麦草1E染色体的分子标记目前还未见报道，这对四倍体长穗偃麦草优异基因在小麦遗传育种的进一步研究利用奠定了基础。
发明内容
本发明的目的在于提供一种四倍体长穗偃麦草1E染色体分子标记，该分子标记的开发不仅可用于四倍体长穗偃麦草1E染色体(或片段)的快速检测，而且可以准确地鉴别四倍体长穗偃麦草与二倍体、十倍体长穗偃麦草及其他近缘属物种染色体，这为小麦族系统进化、种质资源鉴定和分子标记辅助选择育种提供了重要途径。
为了实现上述技术目的，本发明具体通过以下技术方案实现：
一种四倍体长穗偃麦草1E染色体分子标记，所述的分子标记是以四倍体长穗偃麦草的基因组DNA为模板，采用引物对1～25中的任一对进行扩增得到的DNA分子：
所述引物对1由序列1所示的单链分子和序列2所示的单链分子组成；
所述引物对2由序列3所示的单链分子和序列4所示的单链分子组成；
所述引物对3由序列5所示的单链分子和序列6所示的单链分子组成；
所述引物对4由序列7所示的单链分子和序列8所示的单链分子组成；
所述引物对5由序列9所示的单链分子和序列10所示的单链分子组成；
所述引物对6由序列11所示的单链分子和序列12所示的单链分子组成；
所述引物对7由序列13所示的单链分子和序列14所示的单链分子组成；
所述引物对8由序列15所示的单链分子和序列16所示的单链分子组成；
所述引物对9由序列17所示的单链分子和序列18所示的单链分子组成；
所述引物对10由序列19所示的单链分子和序列20所示的单链分子组成；
所述引物对11由序列21所示的单链分子和序列22所示的单链分子组成；
所述引物对12由序列23所示的单链分子和序列24所示的单链分子组成；
所述引物对13由序列25所示的单链分子和序列26所示的单链分子组成；
所述引物对14由序列27所示的单链分子和序列28所示的单链分子组成；
所述引物对15由序列29所示的单链分子和序列30所示的单链分子组成；
所述引物对16由序列31所示的单链分子和序列32所示的单链分子组成；
所述引物对17由序列33所示的单链分子和序列34所示的单链分子组成；
所述引物对18由序列35所示的单链分子和序列36所示的单链分子组成；
所述引物对19由序列37所示的单链分子和序列38所示的单链分子组成；
所述引物对20由序列39所示的单链分子和序列40所示的单链分子组成；
所述引物对21由序列41所示的单链分子和序列42所示的单链分子组成；
所述引物对22由序列43所示的单链分子和序列44所示的单链分子组成；
所述引物对23由序列45所示的单链分子和序列46所示的单链分子组成；
所述引物对24由序列47所示的单链分子和序列48所示的单链分子组成；
所述引物对25由序列49所示的单链分子和序列50所示的单链分子组成。
在本发明的另一方面，提供了一种用于检测四倍体长穗偃麦草1E染色体的引物对，所述的引物对为上述引物对1～25中的任一对。
上述引物对中，每个所述引物对中的各条引物的摩尔量比是1:1。
在本发明的另一方面，提供了用于检测四倍体长穗偃麦草1E染色体的PCR试剂，所述的包括上述引物对1～25中的任一对。
上述试剂中，每个所述引物对中的各条引物在所述试剂中的终浓度均为10uM。
在本发明的另一方面，还提供了所述的分子标记或所述的引物对或所述的PCR试剂在如下①-⑧中任一种的应用：
①检测四倍体长穗偃麦草1E染色体或其片段；
②检测含有四倍体长穗偃麦草1E染色体或其片段的产品；
③追踪四倍体长穗偃麦草1E染色体或其片段；
④追踪含有四倍体长穗偃麦草1E染色体或其片段的产品；
⑤分子标记辅助选择育种；
⑥制备分子标记辅助选择育种的产品；
⑦小麦分子育种；
⑧制备小麦分子育种的产品。
在本发明的另一方面，还提供一种检测待测植物中是否含有四倍体长穗偃麦草1E染色体或其片段的方法，用上述引物对待测植物进行扩增，若实现成功扩增，则表示待测植物中含有四倍体长穗偃麦草1E染色体或其片段。
本发明的有益效果为：
本发明利用简化基因组测序技术(GBS)对二倍体长穗偃麦草、四倍体长穗偃麦草、硬粒小麦-四倍体长穗偃麦草双二倍体8801和普通小麦-四倍体长穗偃麦草1E-7E染色体代换系进行测序，利用计算机软件进行序列比对，获得了四倍体长穗偃麦草1E染色体特异序列，以这些序列为基础，开发了四倍体长穗偃麦草1E染色体的特异分子标记。这些分子标记的开发不仅可用于四倍体长穗偃麦草1E染色体(或片段)的快速检测，而且可以准确地鉴别四倍体长穗偃麦草与二倍体、十倍体长穗偃麦草及其他近缘属物种染色体，这为小麦族系统进化、种质资源鉴定和分子标记辅助选择育种提供了重要途径。
附图说明
图1是四倍体长穗偃麦草1E染色体特异分子标记TTE1E-12在普通小麦、长穗偃麦草、小麦-四倍体长穗偃麦草1E-7E染色体代换系中的扩增；M:Marker(500bp)；1:CS；2:蜀麦482；3:蜀麦921；4:Th.elongatum(2x)；5:Th.elongatum(4x)；6:8801；7:1E/1D代换系；8:2E/2A代换系；9:3E/3D代换系；10:4E/4D代换系；11:5E/5D代换系；12:6E/6D代换系；13:7E/7D代换系；
图2是四倍体长穗偃麦草1E染色体特异分子标记TTE1E-140在普通小麦、长穗偃麦草、小麦-四倍体长穗偃麦草1E-7E染色体代换系中的扩增；M:Marker(500bp)；1:CS；2:蜀麦482；3:蜀麦921；4:Th.elongatum(2x)；5:Th.elongatum(4x)；6:8801；7:1E/1D代换系；8:2E/2A代换系；9:3E/3D代换系；10:4E/4D代换系；11:5E/5D代换系；12:6E/6D代换系；13:7E/7D代换系；
图3是四倍体长穗偃麦草1E染色体特异分子标记TTE1E-189在普通小麦、长穗偃麦草、小麦-四倍体长穗偃麦草1E-7E染色体代换系中的扩增；M:Marker(500bp)；1:CS；2:蜀麦482；3:蜀麦921；4:Th.elongatum(2x)；5:Th.elongatum(4x)；6:8801；7:1E/1D代换系；8:2E/2A代换系；9:3E/3D代换系；10:4E/4D代换系；11:5E/5D代换系；12:6E/6D代换系；13:7E/7D代换系；
图4是四倍体长穗偃麦草1E染色体特异分子标记TTE1E-3在普通小麦、长穗偃麦草、小麦-四倍体长穗偃麦草1E-7E染色体代换系中的扩增；M:Marker(500bp)；1:CS；2:蜀麦482；3:蜀麦482；4:Th.elongatum(2x)；5:Th.elongatum(4x)；6:8801；7:1E/1D代换系；8:2E/2A代换系；9:3E/3D代换系；10:4E/4D代换系；11:5E/5D代换系；12:6E/6D代换系；13:7E/7D代换系；
图5是四倍体长穗偃麦草1E染色体特异分子标记TTE1E-12在小麦族近缘二倍体及两个包含E基因组的多倍体物种中的扩增；M:Marker(500bp)；1:CS；2:8801；3:1E/1D代换系；4:Th.elongatum(2x)；5:Th.elongatum(4x)；6:Th.ponticum(10x)；7:Th.bessarabicum；8:Pseudoro egneria libanotica；9:Dasypyrum villosum；10:Hordeumbogdanii；11:Agropyron cristatum；12:Secale cereale；13:Psathyrostachyshuashanica；14:Trichopyrum caespitosum；15:Psammopyrum athericum；
图6是四倍体长穗偃麦草1E染色体特异分子标记TTE1E-140在小麦族近缘二倍体及两个包含E基因组的多倍体物种中的扩增；M:Marker(500bp)；1:CS；2:8801；3:1E/1D代换系；4:Th.elongatum(2x)；5:Th.elongatum(4x)；6:Th.ponticum(10x)；7:Th.bessarabicum；8:Pseud oroegneria libanotica；9:Dasypyrum villosum；10:Hordeumbogdanii；11:Agropyron cristatum；12:Secale cereale；13:Psathyrostachys huashanica；14:Trichopyrum caespitosum；15:Psammopyrum athericum；
图7是四倍体长穗偃麦草1E染色体特异分子标记TTE1E-189在小麦族近缘二倍体及两个包含E基因组的多倍体物种中的扩增；M:Marker(500bp)；1:CS；2:8801；3:1E/1D代换系；4:Th.elongatum(2x)；5:Th.elongatum(4x)；6:Th.ponticum(10x)；7:Th.bessarabicum；8:Pseud oroegneria libanotica；9:Dasypyrum villosum；10:Hordeumbogdanii；11:Agropyron cristatum；12:Secale cereale；13:Psathyrostachys huashanica；14:Trichopyrum caespitosum；15:Psammopyrum athericum；
图8是四倍体长穗偃麦草1E染色体特异分子分子标记TTE1E-3在小麦族近缘二倍体及两个包含E基因组的多倍体物种中的扩增；M:Marker(500bp)；1:CS；2:8801；3:1E/1D代换系；4:Th.elongatum(2x)；5:Th.elongatum(4x)；6:Th.ponticum(10x)；7:Th.bessarabicum；8:Pseudor oegneria libanotica；9:Dasypyrum villosum；10:Hordeumbogdanii；11:Agropyron cristatum；12:Secale cereale；13:Psathyrostachys huashanica；14:Trichopyrum caespitosum；15:Psammopyrum athericum。
具体实施方式
下面将结合本发明具体的实施例，对本发明技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实验材料：普通小麦中国春(CS，Triticum aestivum，2n＝6x＝42)、蜀麦921(Triticum aestivum，2n＝6x＝42)、蜀麦482(Triticum aestivum，2n＝6x＝42)、二倍体长穗偃麦草(Th.elongatum，EE，2n＝2x＝14)、四倍体长穗偃麦草(Th.elongatum，2n＝4x＝28)、十倍体长穗偃麦草(Th.ponticum，2n＝10x＝70)、硬粒小麦Langdon-四倍体长穗偃麦草双二倍体8801(2n＝6x＝42，AABBEE)、普通小麦-四倍体长穗偃麦草1E-7E染色体代换系(由8801和西南地区小麦品种川农16、蜀麦482等杂交、回交创制获得)、百萨偃麦草(Th.bessarabicum，EbEb，2n＝2x＝14)、拟鹅观草(Pseudoroegneria libanotica，StSt，2n＝2x＝14)、簇毛麦(Dasypyrum villosum，VV，2n＝2x＝14)、大麦(Hordeum bogdanii，HH，2n＝2x＝14)、冰草(Agropyron cristatum，PP，2n＝2x＝14)、黑麦(Secale cereale，RR，2n＝2x＝14)、华山新麦草(Psathyrostachys huashanica，NsNs，2n＝2x＝14)以及两个包含E基因的多倍体物种Trichopyrum caespitosum(StStEE，2n＝4x＝28)和Psammopyrumathericum(StStEEPP，2n＝6x＝42)。
实施例1基于GBS技术获得四倍体长穗偃麦草1E染色体特异片段
待二倍体长穗偃麦草、四倍体长穗草、亲本8801和普通小麦-四倍体长穗偃麦草1-7E染色体代换系等材料生长至苗期时，取其叶片送往北京诺禾致源科技股份有限公司进行GBS测序，通过GBS测序获得各样品的有效序列。
将获得的小麦-四倍体长穗偃麦草1E/1D代换系的序列首先与已知的中国春的序列进行比对，剔除与小麦相似度在22.85％(23％)以上的序列，剩下的序列再与8801和四倍体长穗偃麦草的序列进行比对，获得相似度大于22.85％(23％)的序列，剩余的序列再与二倍体长穗偃麦草及其他代换系的序列进行比较，除去相似度大于90％的序列，即四倍体长穗偃麦草1E染色体的特异序列，最终获得1E染色体特异的序列共597个。
实施例2四倍体长穗偃麦草1E染色体特异分子标记的开发
对于上述获得的597个特异序列进行引物设计，PCR引物设计用的是在线软件TTE3Plus，所有的引物均在成都擎科伟业生物技术有限公司合成。成功设计了235对引物。
PCR反应体系如下：PCR反应的总体积是25uL，DNA模板(浓度需要稀释到100ng/uL左右)加1uL，上下引物各1uL(10uM)，2×Taq Master Mix(P114)12.5uL，ddH2O 9.5uL。
PCR程序为：94℃5h；94℃30min，50～60℃30min，72℃2h，35个循环；72℃10h；12℃。
实施例3琼脂糖凝胶电泳检测
PCR产物用3％的琼脂糖凝胶电泳检测，设计的引物在四倍体长穗偃麦草、亲本8801、1E/1D代换系中能扩增出特异条带，在CS、蜀麦482、蜀麦921、二倍体长穗偃麦草、2E/2A代换系、3E/3D代换系、4E/4D代换系、5E/5D代换系、6E/6D代换系、7E/7D代换系中均不能扩增出条带，这种引物就是1E/1D代换系特异的引物，即四倍体长穗偃麦草1E染色体特异的分子标记。成功设计了235对引物，在以上材料中PCR扩增、产物回收、测序验证后获得了132对特异的引物，分子标记开发效率达56.17％。
附图1、附图2、附图3、附图4所示分别为4对分子标记TTE1E-12、TTE1E-140、TTE1E-189、TTE1E-3在以上材料中的扩增情况，结果说明其只在四倍体长穗偃麦草、亲本8801和1E/1D代换系扩增出特异条带，在CS、蜀麦482、蜀麦921、二倍体长穗偃麦草和其他代换系中均没有扩增出条带，说明以上4对标记是四倍体长穗偃麦草1E染色体特异标记。
实施例4四倍体长穗偃麦草1E染色体特异标记在小麦近缘物种中的验证
对上述获得的132对引物，我们进一步在长穗偃麦草近缘的其他小麦族二倍体及两个包含E基因组的多倍体物种中进行验证，具体包括：CS，8801，1E/1D代换系，Th.elongatum(2x)，Th.elongatum(4x)，Th.ponticum(10x)，Th.bessarabicum(Eb)，Pseudoroegneria libanotica(St)，Dasypyrum villosum(V)，Hordeum bogdanii(H)，Agropyron cristatum(P)，Secale cereale(R)，Psathyrostachys huashanica(Ns)，Trichopyrum caespitosum(StE)，Psammopyrum athericum(StEP)。
结果表明有25对标记只在含有四倍体长穗偃麦草染色体的材料(8801，1E/1D代换系，四倍体长穗偃麦草)能扩增出条带，在二倍体、十倍体长穗偃麦草以及其它近缘物种中均不能扩增出条带，因此，这些标记即为四倍体长穗偃麦草1E染色体特异且稳定的标记，它们不仅可用于四倍体长穗偃麦草1E染色体(或片段)的快速检测，而且可以准确地鉴别四倍体长穗偃麦草与二倍体、十倍体长穗偃麦草及其他近缘属物种染色体。25对特异分子标记的引物序列如表2所示，相应的分子标记的DNA序列见表3。
表2 25对四倍体长穗偃麦草1E染色体特异分子标记
表3 25个四倍体长穗偃麦草1E染色体特异分子标记的DNA序列
附图5、附图6、附图7、附图8所示分别为4对分子标记TTE1E-12、TTE1E-140、TTE1E-189、TTE1E-3在小麦族其他物种中的验证情况，结果表明他们只在四倍体长穗偃麦草、8801和1E/1D代换系中扩增出了条带，在二倍体、十倍体长穗偃麦草及其他近缘物种中均没有扩增出条带，说明这些标记为四倍体长穗偃麦草1E染色体特异的分子标记，而且是稳定的。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。
序列表
<110> 四川农业大学
<120> 一种用于检测四倍体长穗偃麦草1E染色体的引物对TTE1E-3及其应用
<160> 75
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
gccaggaaat ggttagaagg 20
<210> 2
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
cttccttggg gactaacata cg 22
<210> 3
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
gccctgtttg tacgggatta 20
<210> 4
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
gatcgccaca ccaactga 18
<210> 5
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
aacaccccct aaaggcaact 20
<210> 6
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 6
agaggtggct gcggatact 19
<210> 7
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 7
ctctcccgga gtacaagtgc 20
<210> 8
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 8
aaggagatgt agcacgtagg ag 22
<210> 9
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 9
ggcattcgtt tgtgtgagtc 20
<210> 10
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 10
caccttcttg gtcagagcat 20
<210> 11
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 11
tctatgcagt gatcgagacg 20
<210> 12
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 12
ccaggagcca aaaatcctc 19
<210> 13
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 13
aaggagatgt agcacgtagg ag 22
<210> 14
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 14
ctctcccgga gtacaagtgc 20
<210> 15
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 15
cgcaccaaag acatctcg 18
<210> 16
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 16
agtcatttca cgcgtcgtc 19
<210> 17
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 17
tgcagaggat gcgtgtgta 19
<210> 18
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 18
tcgtcaaacg ttggcatc 18
<210> 19
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 19
cacagttccg taggtgcaga 20
<210> 20
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 20
gctcaccatt gcagttgaag 20
<210> 21
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 21
ggttcagatg gtaacgacga a 21
<210> 22
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 22
gtatgtgggg tcgccaac 18
<210> 23
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 23
acgaggaggc tgactggtt 19
<210> 24
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 24
ctctcttcca cacccattcc 20
<210> 25
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 25
aggaggggaa gctatgcaa 19
<210> 26
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 26
gtcaagtttg accacgagga 20
<210> 27
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 27
ctctcccgga gtacaagtgc 20
<210> 28
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 28
tggcatagtg gaccgaaa 18
<210> 29
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 29
acgaggaggc tgactggtt 19
<210> 30
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 30
ctcttccaca cccattccat 20
<210> 31
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 31
cccagacttt gtcgagcttc 20
<210> 32
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 32
tcctcatcga cgagctacc 19
<210> 33
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 33
gccaagcaca gtcactggta 20
<210> 34
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 34
ggtggagaca aggtaggaag g 21
<210> 35
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 35
ctcttccaca cccagtccat 20
<210> 36
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 36
ggagacgagg aggctgact 19
<210> 37
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 37
acgaggaggc tgactggtt 19
<210> 38
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 38
ctcttccaca cccattccat 20
<210> 39
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 39
tggcatagtg gaccgaaa 18
<210> 40
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 40
ctctcccgga gtacaagtgc 20
<210> 41
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 41
caccagccta caggtaccaa 20
<210> 42
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 42
gtagcacggg tgctcaaaa 19
<210> 43
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 43
ctctcccgga gtacaagtgc 20
<210> 44
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 44
tggcatagtg gaccgaaa 18
<210> 45
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 45
tggcatagtg gaccgaaa 18
<210> 46
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 46
ctctcccgga gtacaagtgc 20
<210> 47
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 47
ctcttccaca cccattccat 20
<210> 48
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 48
acgaggaggc tgactggtt 19
<210> 49
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 49
gccaagcaca gtcactggta 20
<210> 50
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 50
ggtggagaca aggtaggaag g 21
<210> 51
<211> 568
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 51
taactaatgt gtagccagga aatggttaga aggactggtt ctaggcagat agctagattg 60
atgactagtt catcgtggaa tttttgccta ctattttggc tatagttttt aatcaaacta 120
cttggttaca aacagtcaat gaagnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 180
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 240
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 300
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 360
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 420
nnnntttggt tcctatggta acgaagaatg attgagggac taaatttcta ttcaattgta 480
tgaacgtatg ttagtcccca aggaagtata tgaaaaaaag gggttggcga ccccacatac 540
aaaaagtata aaacaagatg ttgtctta 568
<210> 52
<211> 568
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 52
taaggccctg tttgtacggg attatactta tgatttccta atttgactta tactaaaagc 60
caaaaaaaaa atcctaaata tcgattgggg gtggcggcga ggcctcgcgc aacatcgagt 120
gggggtggtt cagtgggggt ggcgnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 180
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 240
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 300
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 360
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 420
nnnngagtgg gggtggttca gttggtgtgg cgatccaccc acgacaggtg cggctgcggg 480
ggtttgatct cggaggcggc gtggcggttg ttgctcgacc acaatacggt ggtgcggtcc 540
aaaactgcag ccgcacctgt cgtgctta 568
<210> 53
<211> 568
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 53
taaattgtta taacagaaat tggataaaat gaaaatcagt tctatataaa ctctgtacca 60
aatccaaaca ccccctaaag gcaactctag tcaatccctc aaaagggtct aactcctaaa 120
atttccccct ttggaggacc cctannnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 180
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 240
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 300
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 360
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 420
nnnntctgcc tcaaatatga gtatccgcag ccacctctca gcaaaaaaat cccctccccc 480
actcgccccc atccacactt gcaccgcctg ccgccatcgt gcagcctccg ttggtgccac 540
aacccccgcc tccctcatcc ccacatta 568
<210> 54
<211> 568
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 54
taattaataa atatttttat acacgcatag acaaaaagtt cctctcccgg agtacaagtg 60
ctacactccc actgttgcga tccgaaatag cagacgtgaa atgtcgcggc ctgctatgag 120
ccattatgta ggtacactct gcccnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 180
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 240
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 300
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 360
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 420
nnnnactatg ccacatcatt ccttcactag ttcaacaaga ttttgttctt ttcatatctt 480
ccatttggca acgaaattta ttttggcatt ttgtactcct acgtgctaca tctccttttt 540
ttttaggaca actgaaaact aacaatta 568
<210> 55
<211> 568
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 55
taaagtttgc gtgacgcctc tgtagcctcc aaatgcgtgg agcacactcc atatgacacc 60
tgtcaagaac acatatggtg actctccaag attttcccta tgtgtgtagg cattcgtttg 120
tgtgagtcaa tagtttatgc aacannnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 180
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 240
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 300
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 360
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 420
nnnncctcta cccaaatgac aaaaatcaag caagaataac caataggaaa tctattatgc 480
tctgaccaag aaggtgatat tcttgttgtc ctcgagaaag atttagttca cataacaaaa 540
cacaaccgcc ttgttcttag cacaatta 568
<210> 56
<211> 568
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 56
taactcctag acctaatttt ctatgcagtg atcgagacgt ttgcgaaaaa tcttcaagga 60
atagtagggg tataaactct agcagtcaac tagtacgtac taatttttat agtacttact 120
agatgtaaat agtgtcttct ttgcnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 180
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 240
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 300
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 360
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 420
nnnnactaga tgtaaatagt gtcttctttg cagggtaaat agtgtctttt tgacgaggat 480
ttttggctcc tgggagctgt agaagccgtt acaccaaatt accgttgatt actgtttgga 540
gatattgtaa ggtacttcct ctgtctta 568
<210> 57
<211> 568
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 57
taattgttag ttttcagttg tcctaaaaaa aaaggagatg tagcacgtag gagtacaaaa 60
tgccaaaata aatttcgttg ccaaatgtaa gatatgaaaa gaacaaaatc ttgttgaact 120
agtgaaggaa tgatgtggca tagtnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 180
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 240
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 300
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 360
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 420
nnnntggcat agtggacaga aataatggct catagcaggc cgctacattt cacgtctgct 480
atttcgtatc gcaacagtgg gagtgtagca cttgtactcc gggagaggaa cttttggtct 540
atgcgtgtat aaaaatattt agtaatta 568
<210> 58
<211> 568
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 58
taaatcactt gtcgtgtcag cccccggttt agcaggcgcc ccatatgacg gttccatccg 60
ccaggcgcac caaccggtgc agtgcgggcg caccaaagac atctcgtgaa ctcacttgtc 120
gtgttagccc cggtgtagcc ggctnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 180
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 240
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 300
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 360
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 420
nnnngccaac cgttttggtt gcgggcgcac caaagacgac gcgtgaaatg acttgtcgtg 480
tcagcccctg tatagccggc tcctcatatg acgcttccat ccgccaggcg caccaaccgg 540
tttgggtacg gccgtacaaa atgcgtta 568
<210> 59
<211> 568
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 59
taaaccgaat cgggagcaag gcgtcgcgtg gatggcctga gggcgtgcag aggatgcgtg 60
tgtaatcgtt tctatggtgt tactaaatta gcatcttcaa taagaaatgt attctcttgt 120
tgtcactacg aggctgattg attcnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 180
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 240
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 300
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 360
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 420
nnnncgatgc caacgtttga cgatgcaaat gctcttgtta ttactacgag gctaattggt 480
atgatgcaaa tatttgttga gtcaacattt gacaaaaaca aaaagatgct aaaatttggc 540
aaattttcgt gtgcttgagt aagcatta 568
<210> 60
<211> 568
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 60
taagcttggt ttactggcat ttgatattct cttctcccat ttcgctgatg ttgtttaatt 60
catcacacag ttccgtaggt gcagaaaggg acaccgcctg cctgaccccc gcttgaacat 120
cacacaaaga gcgtgtatgt ctgannnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 180
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 240
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 300
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 360
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 420
nnnntctgat tgaacttcaa ctgcaatggt gagcctcact ctggctacta cctctccttt 480
tcttttctga gagctaaaat gtattgcatg ggatgaaatc gaacattcct agcttgtttg 540
agggtttctt tagtacaccc ccttgtta 568
<210> 61
<211> 568
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 61
taacgaatgt ggagccagga aatggtgaga aggcctggtt ctaggcagat agctagagtg 60
atgactagtt catcggggaa ttggtgccta ctattttggc tatagtttgg aagcacacta 120
atttgtgaca cacagtcaag gaatnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 180
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 240
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 300
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 360
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 420
nnnngttggt tcagatggta acgacgaatg attgagggcc taacttgcta ttcaagtgta 480
tgaacgtatg ttagtccaca cggaagtata tgcaaaaaag gggttggcga ccccacatac 540
aaaaaggata aaacaagatg ttgtctta 568
<210> 62
<211> 568
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 62
taataacggg ggagacgagg aggctgactg gtttggtttt ggtggaatgg aatgggtggg 60
cttttcagtt tccttttatt actagtacga aactggtttg gttttggtgg actggaatgg 120
gtgtggaaga gaggggctag ggttnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 180
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 240
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 300
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 360
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 420
nnnnccggcg gcccccgggc cgctgtagag cgggcggggg ggggcggggg ggccggggga 480
agacgacggt ctccggcggc ggcggcagga ttggggattg gggattggga agaccgccga 540
gcggggaggg attgtgggtt gggaatta 568
<210> 63
<211> 568
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 63
taaacgagga aatgtgtgtt tagtagagat gggaaggagg ggaagctatg caaagtgagg 60
cctatggagc aaacgacagg ctaggcgaag tgaagcaata tgggttggct ggatgtcctc 120
gtggtcaaac ttgacggtgc aggcnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 180
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 240
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 300
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 360
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 420
nnnnaggcgc attgtcgact caaggcacgg cccgaggaga tgcacgattg gaatatcggt 480
ggagggtaga aaggaaaaaa aaacctaaat agtaccccat caatgagtgg gtcccaggtg 540
gcaaaaaaaa aaacactggg tgcagtta 568
<210> 64
<211> 568
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 64
taattactaa atatttttat acacgcatag accaaaagtt cctctcccgg agtacaagtg 60
ctacactccc actgttgcga tccgaaatag cagacgtgaa atgtagcggc ctgctatgag 120
ccattatttc ggtccactat gccannnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 180
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 240
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 300
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 360
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 420
nnnnactatg ccacatcatt ccttcactag ttcaacaaga ttttgttctt ttcatatctt 480
ccatttggca acgaaattta ttttggcatt ttgtactcct acgtgctaca tctccttttt 540
ttttaggaca actgaaaact aacaatta 568
<210> 65
<211> 568
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 65
taataacggg ggagacgagg aggctgactg gtttggtttt ggtggaatgg aatgggtggg 60
cttttcagtt tccttttatt actagtacga aactggtttg gttttggtgg aatggaatgg 120
gtgtggaaga gaggggctag ggttnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 180
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 240
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 300
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 360
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 420
nnnnacgccg cccccggggg cgccgccccg ccgccggcgc cggccggcgg gggcggggca 480
cccccaaggc ggccgggggc ggcggcagga ttgggcattg gggattggga agaccgccga 540
gcggggaggg attgtgggtt gggaatta 568
<210> 66
<211> 568
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 66
taactttccc ctcggcaatc acagtgtccc agactttgtc gagcttcgat tggtctcctc 60
gtgtggagaa gaatcgacaa ggcctatagg gccgagctca gagtgaagca tcggtagctc 120
gtcgatgagg acctagtttg ctacnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 180
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 240
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 300
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 360
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 420
nnnngggcta taagaagttt agcaacaacg ccgatgaggc cggaccctca gcctccgcgg 480
gggtgatcga tatatcctcc agctgctctg accccgtcga ctccgaggtg aattggaacg 540
agcttatgga ggaatccgaa taatttta 568
<210> 67
<211> 568
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 67
taatttgctt cagccaagca cagtcactgg taatgtggct gtctctgcca tataccaaac 60
aatgaccaat tttgcattct ctggtagaat gcctgggata tttgcttttc ccacaaatct 120
gccttcctac cttgtctcca cctannnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 180
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 240
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 300
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 360
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 420
nnnngtctcc acctatgttc tgagccacca cattcctgtt tacttgattc ttgccttctc 480
ccactctgtc atttcccctg tcattccacc aaacaccatc ttttccccac cagatctcac 540
aactgcattg ctagtttcct tcacttta 568
<210> 68
<211> 568
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 68
taattcccaa cccacaatcc ctccccgctc ggcggtcttc ccaatcccca atccccaatc 60
ctgccgccgc cgccggcgac cttcgtcggc ccccgccccg accgccgcgc cgcgccgggg 120
ctccggcgcc ccggggccct ccgtnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 180
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 240
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 300
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 360
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 420
nnnnaaccct cgcccctctc ttccacaccc agtccattcc accaaaacca aaccagtttc 480
gtactagtaa tcacaggaaa ctgaaaagcc cacccattcc attccaccac acccaaacca 540
gtcagcctcc tcgtctcccc cgttagta 568
<210> 69
<211> 568
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 69
taataacggg ggagacgagg aggctgactg gtttggtttt ggtggaatgg aatgggtggg 60
cttatcagtt tccttttatt actagtacga aactggtttg gttttggtgg aatggaatgg 120
gtgtggaaga gaggggctag ggttnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 180
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 240
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 300
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 360
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 420
nnnncggggg gccccggccg cccccccccc ctgcccgcgg gggtcccgcg ggctgggtaa 480
cccctctggc ccccgggggc gtcggacgga ttgggtatgg ggtattggta agaccgccga 540
gcggggaggg attgtgggtt gggaatta 568
<210> 70
<211> 568
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 70
taattgttag ttttcagttg tcctaaaaaa aaagtagatg tagcacgaag tagtacaaaa 60
tgccaaaata aatttcgttg ccaaatggaa gatatgaaaa gaacaaaatc ttgtttaact 120
agtgaaggaa tgatgtttca tagtnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 180
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 240
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 300
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 360
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 420
nnnntggcat agtggaccga aataatggct catagcaggc cgctacattt cacgtctgct 480
atttcggatc gcaacagtgg gagtgtagca cttgtactcc gggagaggaa cttttggtct 540
atgcgtgtat aaaaatattt agtaatta 568
<210> 71
<211> 568
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 71
taacagatca ccagcctaca ggtaccaatc tctttagtgt catttttttt tctaacaaca 60
aacttctcag cgctagatcc tctacattca tctatcttga ctcttgggtg aaaggttttt 120
gagcacccgt gctacttata ggtannnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 180
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 240
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 300
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 360
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 420
nnnnttaccg ggtgcagtta cacccacatt tcatatgaca ttgtcaataa caatggatgg 480
tacaaaatct tagttggcaa agtagaagac atagatcagc cgaaggtaac ataggaccat 540
agattcatag gcacaaatta gattttta 568
<210> 72
<211> 568
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 72
taattactaa atatttttat acacgcatag accaaaagtt cctctcccgg agtacaagtg 60
ctacactccc actgttgcga tccgaaatag cagacgtgaa atgtagcggc ctgctatgag 120
ccattatttc ggtccactat gccannnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 180
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 240
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 300
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 360
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 420
nnnnactatg ccacatcatt ccttcactag ttcaacaaga ttttgttctt ttcatatctt 480
ccatttggca tcgaaattta ttttggcatt ttgtactcct acgtgctaca tctccttttt 540
ttttaggaca actgaaaact aacaatta 568
<210> 73
<211> 568
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 73
taattgttag ttttcanttg tcctaaaaaa aaaggagatg tagcacgtag gagtaaaaaa 60
tgccaaaata aatttcgttg ccaaatggaa gatatgaaaa gaacaaaata ttgttgaact 120
agtgaatgaa tgatgtggca tagtnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 180
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 240
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 300
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 360
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 420
nnnntggcat agtggaccga aataatggct catagcaggc cgctacattt cacgtctgct 480
atttcggatc gcaacagtgg gagtgtagca cttgtactcc gggagaggaa cttttggtct 540
atgcgtgtat aaaaatattt agtaatta 568
<210> 74
<211> 568
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 74
taattcccaa cccacaatcc ctccccgctc ggcggtcttc ccaatcccca atccccaatc 60
ctgccgccgc cgccggagcc cttcgtcttc cccagccccg cccgcctccc cgcgccggct 120
cgccagcgcc cctgctcccg ccggnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 180
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 240
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 300
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 360
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 420
nnnnaaccct agcccctctc ttccacaccc attccattcc accaaaacca aaccagtttc 480
gtactagtaa taaaaggaaa ctgaaaagcc cacccattcc attccaccaa aaccaaacca 540
gtcagcctcc tcgtctcccc cgttatta 568
<210> 75
<211> 568
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 75
tactttgctt cagccaagca cagtcactgg taatgtggct gtctctgcca tataccaaac 60
aatgaccaat tttgcattct ctggtagaat gcctgggata tttgcttttc ccacaaatct 120
gccttcctac cttgtctcca cctannnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 180
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 240
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nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 360
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 420
nnnntgtctc cacctatgtt ctgagccccc acattcctgt ttccttgatt cttgccttct 480
cccactctgt catttcccct gtcattccac caaacaccat cttttcccca ccagatctca 540
caactgcatt gctagtttcc tcacttta 568
Claims (4)
1.一种用于检测四倍体长穗偃麦草1E染色体的引物对TTE1E-3，其特征在于，所述的引物对为SEQ ID NO.35～36。
2.一种用于检测四倍体长穗偃麦草1E染色体的PCR试剂，其特征在于，所述的PCR试剂包括权利要求1所述的引物对。
3.一种用于检测四倍体长穗偃麦草1E染色体或其片段的方法，其特征在于，利用权利要求1所述的引物对对待测植物进行扩增，若实现成功扩增，则表示待测植物中含有四倍体长穗偃麦草1E染色体或其片段。
4.权利要求1所述的引物对或权利要求2所述的PCR试剂在如下①-⑥中任一种的应用：
①检测四倍体长穗偃麦草1E染色体或其片段；
②检测含有四倍体长穗偃麦草1E染色体或其片段的产品；
③分子标记辅助选择育种；
④制备分子标记辅助选择育种的试剂盒；
⑤小麦分子育种；
⑥制备小麦分子育种的试剂盒。
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