CN110106272B - 一种四倍体长穗偃麦草3e染色体分子标记及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种四倍体长穗偃麦草3E染色体分子标记及其应用。该分子标记是以四倍体长穗偃麦草的基因组DNA为模板，采用引物对1～20中的任一对扩增得到的。通过对二倍体、四倍体长穗偃麦草、硬粒小麦‑四倍体长穗偃麦草双二倍体和小麦‑四倍体长穗偃麦草1E‑7E染色体代换系进行测序，获得四倍体长穗偃麦草3E染色体特异序列，开发了3E染色体的特异分子标记，并在小麦及其近缘属物种中进行了验证。该特异分子标记不仅可用于四倍体长穗偃麦草3E染色体的快速检测，而且可以准确地鉴别四倍体长穗偃麦草与二倍体、十倍体长穗偃麦草及其他近缘属物种染色体，为小麦族系统进化、种质资源鉴定和分子标记辅助选择育种提供了重要途径。
Description
技术领域
本发明属于作物遗传育种技术领域，具体涉及一种四倍体长穗偃麦草3E染色体分子标记及其应用。
背景技术
小麦(Triticum aestivum L.)是世界上种植面积最大、总产量仅次于玉米的粮食作物(葛江燕，2012)，对人类的发展有着举足轻重的作用。但是近年来随着耕作制度的变化及育种中少数亲本的反复使用(张璐璐，2016)，导致小麦的遗传多样性降低。小麦近缘物种中蕴藏着丰富的优良基因，目前主要通过远缘杂交的方式将其优良基因导入到普通小麦，从而来丰富小麦的遗传多样性。
长穗偃麦草(Elytrigia elongata(Host)Nevski)是小麦近缘物种，属禾本科小麦族偃麦草属，目前公认的有3种倍性：二倍体 (2n＝2x＝14)、四倍体(2n＝4x＝28)和十倍体(2n＝10x＝70)。该物种生长繁茂、多花多实，抗寒、抗旱、耐盐碱、抗多种小麦病害(赤霉病、锈病、白粉病、黄矮病等)，是小麦遗传改良不可多得的优异外源基因供体，将其优良基因导入到普通小麦，对于普通小麦的遗传改良具有重要的作用。四倍体长穗偃麦草同样具有上述特点，由四倍体长穗偃麦草和硬粒小麦杂交回交形成的六倍体小偃麦8801、8802、 8803均高抗赤霉病，8802、8803高抗杆锈菌小种Ug99(Guo等， 2015)。由8801和六倍体小黑麦T182杂交形成的小麦-黑麦-长穗偃麦草三属杂种后代对赤霉病、叶锈病、杆锈菌小种Ug99均表现出优越的抵抗力(Dai等，2017b)。
开发长穗偃麦草分子标记可以快速准确的检测在小麦-长穗偃麦草衍生后代的长穗偃麦草染色质，目前基于各种分子标记技术已经开发了许多长穗偃麦草的分子标记，具体如下：(1)利用RAPD分子标记技术，找到了1E和3E染色体上两个特异的RAPD分子标记(刘树兵等，1998)；(2)利用小麦微卫星引物建立了偃麦草Ee染色体组 SSR分子标记(尤明山等，2002)；(3)利用分子标记技术还建立了偃麦草E染色体组特异RAPD和SCAR标记(尤明山等，2003)；(4) 利用RGAP分子标记技术,构建了一套完整的长穗偃麦草1E-7E染色体的特异RGAP标记(陈国跃等，2007)；(4)建立了小麦中国春背景下长穗偃麦草Ee染色体组特异AFLP及STS标记(张丽等，2008)； (5)基于SSH技术开发了36个长穗偃麦草E染色体特异分子标记(葛江燕等，2012)；(6)基于SLAF-seq技术开发了20个长穗偃麦草1E染色体和89个7E染色体特异分子标记(陈士强等，2013；chen 等，2013)；(7)基于TRAP技术开发了长穗偃麦草SCAR标记(秦树文等，2014)；(8)基于SLAF-seq技术开发了二倍体长穗偃麦草 1E-7E染色体特异分子标记(Dai等，2017a)。以上分子标记的开发主要集中在二倍体长穗偃麦草和十倍体长穗偃麦草，而四倍体长穗偃麦草的分子标记较少，这阻碍了四倍体长穗偃麦草基因资源的开发和应用。
GBS(Genotyping By Sequencing)是简化基因组测序的一种，其基本原理是利用限制性内切酶将一段完整DNA切成很多的DNA片段，然后选取300-500bp的片段，在该片段的两端测序，得到相应的序列片段，用这样的方法来达到简化测序的目的。该技术具有测序量低、价格便宜、数据利用率高、性价比高、参考基因组不依赖性等特点。目前GBS技术已经广泛应用于分子标记的开发、构建遗传图谱、 QTL定位、GWAS关联分析等。
本发明利用简化基因组测序技术(GBS)对二倍体长穗偃麦草、四倍体长穗偃麦草、硬粒小麦-四倍体长穗偃麦双二倍体和普通小麦- 四倍体长穗偃麦草1E-7E染色体代换系进行测序，进行序列比对，获得了四倍体长穗偃麦草3E染色体特异序列，以这些序列为基础，开发了四倍体长穗偃麦草3E染色体的特异分子标记。本发明利用GBS 测序开发的四倍体长穗偃麦草3E染色体的分子标记目前还未见报道，这对四倍体长穗偃麦草在小麦遗传育种的进一步研究利用奠定了基础。
发明内容
本发明的目的在于提供一种四倍体长穗偃麦草3E染色体分子标记，该分子标记的开发不仅可用于四倍体长穗偃麦草3E染色体(或片段)的快速检测，而且可以准确地鉴别四倍体长穗偃麦草与二倍体、十倍体长穗偃麦草及其他近缘属物种染色体，这为小麦族系统进化、种质资源鉴定和分子标记辅助选择育种提供了重要途径。
本发明具体通过以下技术方案实现：
一种四倍体长穗偃麦草3E染色体分子标记，所述的分子标记是以四倍体长穗偃麦草的基因组DNA为模板，采用引物对1～20中的任一对进行扩增得到的DNA分子：
所述引物对1由序列1所示的单链分子和序列2所示的单链分子组成；
所述引物对2由序列3所示的单链分子和序列4所示的单链分子组成；
所述引物对3由序列5所示的单链分子和序列6所示的单链分子组成；
所述引物对4由序列7所示的单链分子和序列8所示的单链分子组成；
所述引物对5由序列9所示的单链分子和序列10所示的单链分子组成；
所述引物对6由序列11所示的单链分子和序列12所示的单链分子组成；
所述引物对7由序列13所示的单链分子和序列14所示的单链分子组成；
所述引物对8由序列15所示的单链分子和序列16所示的单链分子组成；
所述引物对9由序列17所示的单链分子和序列18所示的单链分子组成；
所述引物对10由序列19所示的单链分子和序列20所示的单链分子组成；
所述引物对11由序列21所示的单链分子和序列22所示的单链分子组成；
所述引物对12由序列23所示的单链分子和序列24所示的单链分子组成；
所述引物对13由序列25所示的单链分子和序列26所示的单链分子组成；
所述引物对14由序列27所示的单链分子和序列28所示的单链分子组成；
所述引物对15由序列29所示的单链分子和序列30所示的单链分子组成；
所述引物对16由序列31所示的单链分子和序列32所示的单链分子组成；
所述引物对17由序列33所示的单链分子和序列34所示的单链分子组成；
所述引物对18由序列35所示的单链分子和序列36所示的单链分子组成；
所述引物对19由序列37所示的单链分子和序列38所示的单链分子组成；
所述引物对20由序列39所示的单链分子和序列40所示的单链分子组成。
在本发明的另一方面，提供了一种用于检测四倍体长穗偃麦草 3E染色体的引物对，所述的引物对为上述引物对1～20中的任一对。
上述引物对中，每个所述引物对中的各条引物的摩尔量比是1:1。
在本发明的另一方面，提供了用于检测四倍体长穗偃麦草3E染色体的PCR试剂，所述的包括上述引物对1～20中的任一对。
上述试剂中，每个所述引物对中的各条引物在所述试剂中的终浓度均为10uM。
在本发明的另一方面，还提供了所述的分子标记或所述的引物对或所述的PCR试剂在如下(1)～(10)中任一种的应用：
1)检测四倍体长穗偃麦草3E染色体或其片段；
2)检测含有四倍体长穗偃麦草3E染色体或其片段的产品；
3)追踪四倍体长穗偃麦草3E染色体或其片段；
4)追踪含有四倍体长穗偃麦草3E染色体或其片段的产品；
5)鉴别四倍体长穗偃麦草与二倍体、十倍体长穗偃麦草及其他近缘属物种染色体；
6)鉴别含有四倍体长穗偃麦草与含有二倍体、十倍体长穗偃麦草及其他近缘属物种染色体的产品；
7)分子标记辅助选择育种；
8)制备分子标记辅助选择育种的产品；
9)小麦分子育种；
10)制备小麦分子育种的产品。
在本发明的另一方面，还提供一种检测待测植物中是否含有四倍体长穗偃麦草3E染色体或其片段的方法，用上述引物对待测植物进行扩增，若实现成功扩增，则表示待测植物中含有四倍体长穗偃麦草3E染色体或其片段。
本发明的有益效果为：
本发明利用简化基因组测序技术(GBS)对二倍体长穗偃麦草、四倍体长穗偃麦草、硬粒小麦-四倍体长穗偃麦草双二倍体和普通小麦-四倍体长穗偃麦草1E-7E染色体代换系进行测序，利用计算机软件进行序列比对，获得了四倍体长穗偃麦草3E染色体特异序列，以这些序列为基础，开发了四倍体长穗偃麦草3E染色体的特异分子标记，并在小麦及其近缘属物种中进行了验证。这些分子标记不仅可以快速准确检测四倍体长穗偃麦草3E染色体(或片段)，而且可以准确地鉴别四倍体长穗偃麦草与二倍体、十倍体长穗偃麦草及其他近缘属物种染色体，这为小麦族系统进化、种质资源鉴定和分子标记辅助选择育种提供重要途径。
附图说明
图1四倍体长穗偃麦草3E染色体特异分子标记Primer3E-23在普通小麦、长穗偃麦草、小麦-四倍体长穗偃麦草1E-7E染色体代换系中的扩增；M:Marker(500bp)；1:CS；2:川农16；3:蜀麦482；4:T h.elongatum(2x)；5:Th.elongatum(4x)；6:8801；7:1E/1D代换系；8:2E/2A代换系；9:3E/3D代换系；10:4E/4D代换系；11:5E/5D代换系；1 2:6E/6D代换系；13:7E/7D代换系；
图2四倍体长穗偃麦草3E染色体特异分子标记Primer3E-66在普通小麦、长穗偃麦草、小麦-四倍体长穗偃麦草1E-7E染色体代换系中的扩增；M:Marker(500bp)；1:CS；2:川农16；3:蜀麦482；4:T h.elongatum(2x)；5:Th.elongatum(4x)；6:8801；7:1E/1D代换系；8:2E/2A代换系；9:3E/3D代换系；10:4E/4D代换系；11:5E/5D代换系；1 2:6E/6D代换系；13:7E/7D代换系；
图3四倍体长穗偃麦草3E染色体特异分子标记Primer3E-70在普通小麦、长穗偃麦草、小麦-四倍体长穗偃麦草1E-7E染色体代换系中的扩增；M:Marker(500bp)；1:CS；2:川农16；3:蜀麦482；4:T h.elongatum(2x)；5:Th.elongatum(4x)；6:8801；7:1E/1D代换系；8:2E/2A代换系；9:3E/3D代换系；10:4E/4D代换系；11:5E/5D代换系；1 2:6E/6D代换系；13:7E/7D代换系；
图4四倍体长穗偃麦草3E染色体特异分子标记Primer3E-106在普通小麦、长穗偃麦草、小麦-四倍体长穗偃麦草1E-7E染色体代换系中的扩增；M:Marker(500bp)；1:CS；2:川农16；3:蜀麦482；4:T h.elongatum(2x)；5:Th.elongatum(4x)；6:8801；7:1E/1D代换系；8:2E /2A代换系；9:3E/3D代换系；10:4E/4D代换系；11:5E/5D代换系；1 2:6E/6D代换系；13:7E/7D代换系；
图5四倍体长穗偃麦草3E染色体特异分子标记Primer3E-23在小麦族近缘二倍体及两个包含E基因组的多倍体物种中的扩增；M: Marker(500bp)；1:CS；2:8801；3:3E/3D代换系；4:Th.elongatum(2x)； 5:Th.elongatum(4x)；6:Th.ponticum(10x)；7:Th.bessarabicum；8:Pseudoro egneria libanotica；9:Dasypyrum villosum；10:Hordeumbogdanii；1 1:Agropyron cristatum；12:Secale cereale；13:Psathyrostachys huashanica；14:Trichopyrum caespitosum；15:Psammopyrum athericum；
图6四倍体长穗偃麦草3E染色体特异分子标记Primer3E-66在小麦族近缘二倍体及两个包含E基因组的多倍体物种中的扩增；M: Marker(500bp)；1:CS；2:8801；3:3E/3D代换系；4:Th.elongatum(2x)； 5:Th.elongatum(4x)；6:Th.ponticum(10x)；7:Th.bessarabicum；8:Pseud oroegneria libanotica；9:Dasypyrum villosum；10:Hordeumbogdanii； 11:Agropyron cristatum；12:Secale cereale；13:Psathyrostachys huashanica；14:Trichopyrum caespitosum；15:Psammopyrum athericum；
图7四倍体长穗偃麦草3E染色体特异分子标记Primer3E-70在小麦族近缘二倍体及两个包含E基因组的多倍体物种中的扩增；M: Marker(500bp)；1:CS；2:8801；3:3E/3D代换系；4:Th.elongatum(2x)； 5:Th.elongatum(4x)；6:Th.ponticum(10x)；7:Th.bessarabicum；8:Pseud oroegneria libanotica；9:Dasypyrum villosum；10:Hordeumbogdanii； 11:Agropyron cristatum；12:Secale cereale；13:Psathyrostachys huashanica；14:Trichopyrum caespitosum；15:Psammopyrum athericum；
图8四倍体长穗偃麦草3E染色体特异分子分子标记Primer3E- 106在小麦族近缘二倍体及两个包含E基因组的多倍体物种中的扩增； M:Marker(500bp)；1:CS；2:8801；3:3E/3D代换系；4:Th.elongatum(2 x)；5:Th.elongatum(4x)；6:Th.ponticum(10x)；7:Th.bessarabicum；8:Pseu doroegneria libanotica；9:Dasypyrum villosum；10:Hordeumbogdani i；11:Agropyron cristatum；12:Secale cereale；13:Psathyrostachys huashanica；14:Trichopyrum caespitosum；15:Psammopyrum athericum。
具体实施方式
下面将结合本发明具体的实施例，对本发明技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实验材料：普通小麦中国春(CS，Triticum aestivum，2n＝6x＝42)、川农16(Triticum aestivum，2n＝6x＝42)、蜀麦482(Triticum aestivum， 2n＝6x＝42)、二倍体长穗偃麦草(Th.elongatum，EE，2n＝2x＝14)、四倍体长穗偃麦草(Th.elongatum，2n＝4x＝28)、十倍体长穗偃麦草 (Th.ponticum，2n＝10x＝70)、硬粒小麦Langdon-四倍体长穗偃麦草双二倍体8801(2n＝6x＝42，AABBEE)、普通小麦-四倍体长穗偃麦草1E-7E染色体代换系(由8801和西南地区小麦品种川农16、蜀麦482等杂交、回交创制获得)、百萨偃麦草(Th.bessarabicum，EbEb， 2n＝2x＝14)、拟鹅观草(Pseudoroegneria libanotica，StSt，2n＝2x＝14)、簇毛麦(Dasypyrum villosum，VV，2n＝2x＝14)、大麦(Hordeum bogdanii， HH，2n＝2x＝14)、冰草(Agropyron cristatum，PP，2n＝2x＝14)、黑麦(Secale cereale，RR，2n＝2x＝14)、华山新麦草(Psathyrostachys huashanica，NsNs，2n＝2x＝14)以及两个包含E基因的多倍体物种 Trichopyrum caespitosum(StStEE，2n＝4x＝28)和Psammopyrumathericum(StStEEPP，2n＝6x＝42)。
实施例1基于GBS技术获得四倍体长穗偃麦草3E染色体特异片段
待二倍体长穗偃麦草、四倍体长穗草、亲本8801和普通小麦- 四倍体长穗偃麦草1-7E染色体代换系等材料生长至苗期时，取其叶片送往北京诺禾致源科技股份有限公司进行GBS测序，通过GBS测序获得各样品的有效序列。
将获得的小麦-四倍体长穗偃麦草3E/3D代换系的序列首先与已知的中国春的序列进行比对，剔除与小麦相似度在22.85％(23％)以上的序列，剩下的序列再与8801和四倍体长穗偃麦草的序列进行比对，获得相似度大于22.85％(23％)的序列，剩余的序列再与二倍体长穗偃麦草及其他代换系的序列进行比较，除去相似度大于90％的序列，即四倍体长穗偃麦草3E染色体的特异序列，最终获得3E染色体特异的序列共269个。
实施例2四倍体长穗偃麦草3E染色体特异分子标记的开发
对于上述获得的269个特异序列进行引物设计，PCR引物设计用的是在线软件Primer3 Plus，所有的引物均在成都擎科伟业生物技术有限公司合成。
PCR反应体系如下：PCR反应的总体积是25uL，DNA模板(浓度需要稀释到100ng/uL左右)加1uL，上下引物各1uL(10uM)，2× Taq Master Mix(P114)12.5uL，ddH2O 9.5uL。
PCR程序为：94℃5h；94℃30min，50～60℃30min，72℃2h， 35个循环；72℃10h；12℃。
实施例3琼脂糖凝胶电泳检测
PCR产物用3％的琼脂糖凝胶电泳检测，设计的引物在四倍体长穗偃麦草、亲本8801、3E/3D代换系中能扩增出特异条带，在CS、蜀麦482、川农16、二倍体长穗偃麦草、1E/1D代换系、2E/2A代换系、4E/4D代换系、5E/5D代换系、6E/6D代换系、7E/7D代换系中均不能扩增出条带，这种引物就是3E/3D代换系特异的引物，即四倍体长穗偃麦草3E染色体特异的分子标记。成功设计了246对引物，在以上材料中PCR扩增、产物回收、测序验证后获得了146对特异的引物，分子标记开发效率达59.35％。其中20对特异分子标记的引物序列如表1所示，相应的分子标记的DNA序列见表2。
附图1、附图2、附图3、附图4所示分别为4对分子标记 Primer3E-23、Primer3E-66、Primer3E-70、Primer3E-106在以上材料中的扩增情况，结果说明其只在四倍体长穗偃麦草、亲本8801和 3E/3D代换系扩增出特异条带，在CS、蜀麦482、川农16、二倍体长穗偃麦草和其他代换系中均没有扩增出条带，说明以上4对标记是四倍体长穗偃麦草3E染色体特异标记。
表1 20对四倍体长穗偃麦草3E染色体特异分子标记
表2 20个四倍体长穗偃麦草3E染色体特异分子标记的DNA序列
实施例4四倍体长穗偃麦草3E染色体特异标记在小麦及其近缘物种中的验证
对上述获得的20对特异分子标记，我们进一步在长穗偃麦草近缘的其他小麦族二倍体及两个包含E基因组的多倍体物种中进行验证，具体包括：CS，8801，3E/3D代换系，Th.elongatum(2x)，Th.el ongatum(4x)，Th.ponticum(10x)，Th.bessarabicum(Eb)，Pseudoroegn eria libanotica(St)，Dasypyrum villosum(V)，Hordeum bogdanii (H)，Agropyron cristatum(P)，Secale cereale(R)，Psathyrostach ys huashanica(Ns)，Trichopyrum caespitosum(StE)，Psammopyru m athericum(StEP)。结果表明以上20对标记只在含有四倍体长穗偃麦草染色体的材料(8801，3E/3D代换系，四倍体长穗偃麦草)能扩增出条带，在二倍体、十倍体长穗偃麦草以及其它近缘物种中均不能扩增出条带，因此，这些标记即为四倍体长穗偃麦草3E染色体特异且稳定的标记，它们不仅可用于四倍体长穗偃麦草3E染色体(或片段)的快速检测，而且可以准确地鉴别四倍体长穗偃麦草与二倍体、十倍体长穗偃麦草及其他近缘属物种染色体。
附图5、附图6、附图7、附图8所示分别为4对分子标记TTE3E-23、 TTE3E-66、TTE3E-70、TTE3E-106在小麦族其他物种中的验证情况，结果表明他们只在四倍体长穗偃麦草、8801和3E/3D代换系中扩增出了条带，在二倍体、十倍体长穗偃麦草及其他近缘物种中均没有扩增出条带，说明这些标记为四倍体长穗偃麦草3E染色体特异的分子标记，而且是稳定的。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。
序列表
<110> 四川农业大学
<120> 一种四倍体长穗偃麦草3E染色体分子标记及其应用
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 8
gcttgaactt ggcgttgag 19
<210> 9
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 9
gactttgggt gcctattcca 20
<210> 10
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 10
ttcgcaaaca gccctacac 19
<210> 11
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 11
cagggagcta atgacttgga 20
<210> 12
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 12
cccatcttga accgggtat 19
<210> 13
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 13
gatggcaagt gcaccgtat 19
<210> 14
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 14
gcttgaactt ggcgttgag 19
<210> 15
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 15
cgtgctgcaa tccaacag 18
<210> 16
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 16
cgctcgagct gtagcaga 18
<210> 17
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 17
gcgggggata ttttagaggt 20
<210> 18
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 18
tgcccactgt tttcacca 18
<210> 19
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 19
gcttgaactt ggcgttgag 19
<210> 20
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 20
gatggcaagt gcaccgtat 19
<210> 21
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 21
ccggctcgga ataaattg 18
<210> 22
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 22
gtttgacccg attgtcccta 20
<210> 23
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 23
ccatatcgat gggtggaact 20
<210> 24
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 24
gcattgccgt aagtcatcc 19
<210> 25
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 25
gctatacagc tgcgatggtg 20
<210> 26
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 26
cagatccagg aagggagatg 20
<210> 27
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 27
atctggtgtg ggagttttgg 20
<210> 28
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 28
ctgtcctcgg catacctctt 20
<210> 29
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 29
cacctctgtg gtggacaaag 20
<210> 30
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 30
cggggtatga ctgggagtag 20
<210> 31
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 31
agagaaggtc ccatcggttt 20
<210> 32
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 32
ccggtaagga gccatagaaa 20
<210> 33
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 33
gctatacagc tgcgatggtg 20
<210> 34
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 34
cagatccagg aagggagatg 20
<210> 35
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 35
tctgtgctct tcatccatcc 20
<210> 36
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 36
gatccaggaa gggagatgc 19
<210> 37
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 37
catccatagt cggcgataca 20
<210> 38
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 38
cagatccagg aagggagatg 20
<210> 39
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 39
gcctgcttat cctccagaag 20
<210> 40
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 40
ccagcttatt ccaagcctct 20
<210> 41
<211> 568
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 41
taagtagctt tattttagat aaccttttat tccaaagact tccaacattg ttcattaccc 60
acactattgt atggaatttg ggtgcatatt ccaaaggact tctgcagagc attggatagt 120
gttctgctta cttcacaaac tatcnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 180
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 240
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 300
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 360
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 420
nnnnactatc actaggaaaa acattgtatg ccgagtgtcg ggctgtttgc gaagtatata 480
tcattgggca gtcgggcacc tggcaaacta taaaaaagat aaaaatatat gtgtttgctc 540
atattttgaa aacatttttt ttgaatta 568
<210> 42
<211> 568
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 42
taatcagtgg ccagtgccgt tgataaaata tcttcggtag cccgtgtgcc cccgttgctt 60
ttgtcggccc catcttgaac agggtatttt caatttcctc gtccttgaac tccataataa 120
gcttttcatt catctcttct gtaannnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 180
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 240
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 300
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 360
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 420
nnnnatggat atgccacgaa atagttcctc tgtatcaaaa tataatacgt tcttgcaatt 480
caaattgaac tgaaaaacat aataaaaaaa cgtatatgcc acgaaaacag agggagtatt 540
ttccaagtca ttagctccct gacaatta 568
<210> 43
<211> 568
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 43
taattgtcag ggagctaatg acttggaaaa tactccctct gttttcgtgg catatacgtt 60
tttttattat gtttttcagt tcaatttgaa ttgcaagaac gtattatatt ttgatacaga 120
gtaaatattt cgtggcatat ccatnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 180
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 240
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 300
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 360
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 420
nnnnttacag aagagatgaa tgaaaagctt atgatggagt tcaaggacga ggaaattgaa 480
aataccctgt tcaagatggg gccgacaaaa gcaacggggg cacacgggct accgaagata 540
ttttatcaac ggcactggcc actgatta 568
<210> 44
<211> 568
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 44
taatccagtt attagatttc ttgcataggc taacaagtgg acccacgaca gctccatcgg 60
tcaatatggt gccatttcag cagggacgac gtgtacggat ggcaagtgca ccgtattata 120
cgtatttgcc cactgttttc accannnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 180
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 240
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 300
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 360
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 420
nnnnttcacc actttttcgt actgtgcaac tacggtcacc aaagtgcagc tcaacgccaa 480
gttcaagcat cgtcaatatg caattacctc taaaatatcc cccgcaaaat aaattacctc 540
caaaataaac tataaataaa agtagtta 568
<210> 45
<211> 568
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 45
taagtagctt tattttatat aaccttttat tccaaagact tccaacattg ttcattaccc 60
acaatattgt atggactttg ggtgcctatt ccaaatgacg tatgccgagc gttggagagt 120
gttctgctta ctgcacaaac tatcnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 180
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 240
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 300
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 360
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 420
nnnnactagc acgaggaaca acattgtatg ccgtgtgtag ggctgtttgc gaagtctata 480
tcattgggca gtcgggcacc tggcaaacta taaaaaagat aaaaatatat gtgtttgctc 540
atattttgaa aacatttttt ttgaatta 568
<210> 46
<211> 568
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 46
taattgtcag ggagctaatg acttggaaaa tactccctct gttttcgtgg catatacgtt 60
tttttattat gtttttcagt tcaatttgaa ttgcaagaac gtattatatt ttgatacaga 120
ggaaatattt cgtggcatat ccatnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 180
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 240
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 300
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 360
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 420
nnnnttacag aagagatgac tgaaaagctt attatggagt tcaaggacga ggaaattgaa 480
aatacccggt tcaagatggg gccgacaaaa gcaacggggg cacacgggct accgaagata 540
ttttatcaac ggcactggcc actgatta 568
<210> 47
<211> 568
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 47
taatccagtt attagatttc ttgcataggc taacaagtgg acccacgaca gctccatcgg 60
taaatatggt gccatttcag cagggacgac gtgtacggat ggcaagtgca ccgtattata 120
cgtatttgcc aactgttttc accannnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 180
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 240
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 300
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 360
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 420
nnnnttcacc actttttcgt actttgcaac tactgtcacc aaagtgcagc tcaacgccaa 480
gttcaagcat cgtaaatatg caattacctc taaaatatcc cccgcaaaat aaattacctc 540
caaaataaac tataaataaa agtagtta 568
<210> 48
<211> 568
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 48
taatcgtctc aaatctcctt gccaagcgtg tgcataccgg atgcaccgaa ttttttacac 60
gtggatccgg aatgcacagc cgagcgtgtg cataccggag cccgatacgc ggaacctggt 120
gcgtgctgca atccaacagt aatcnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 180
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 240
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 300
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 360
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 420
nnnngctcct cgtgacgctt cggcccgtct gcgatctcag ctccagcgcg cgcgatccaa 480
tcggtccacc cagggctcca cgatcggccg cctgcgagcc cttctgctac agctcgagcg 540
actacaatcg ccatagccag ctacatta 568
<210> 49
<211> 568
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 49
taactacttt tatttatagt ttatttttga ggtaatttat tttgcggggg atattttaga 60
ggtaattgca tattgacgat gcttgaaatt ggcgttgagc tgcactttgg tgaccgtagt 120
tgcacagtac gaaaaagtgg tgaannnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 180
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 240
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 300
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 360
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 420
nnnntggtga aaacagtggg caaatacgta taatccggtg cacttgccat ccgtacacgt 480
cgtccctgct gaaatggcac catatttacc gatggagctg tcgtgggtcc acttgttagc 540
ctatgcaaga aatctaataa ctggatta 568
<210> 50
<211> 568
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 50
taactacttt tatttatagt ttattttgga ggtaatttat tttgcggggg atattttaga 60
ggtaattgca tattgacgat gcttgaactt ggcgttgagc tgcactttgg tgaccgtagt 120
tgcacagtac gaaaaagtgg tgaannnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 180
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 240
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 300
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 360
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 420
nnnntggtga aaacagtggg caaatacgta taatacggtg cacttgccat ccgtacacgt 480
cgtccctgct gaaatggcac catatttacc gatggagctg tcgtgggtcc acttgttagc 540
ctatgcaaga aatctaataa ctggatta 568
<210> 51
<211> 568
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 51
taagcatcgc gtccggctcg gaataaattg aatcctcctc caacgttttt cgggcttccg 60
ctagttccag tttagaggag gaatacaaga tttttactcc tctataggtt tttagggaca 120
atcgggtcaa actgctagtt acttnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 180
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 240
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 300
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 360
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 420
nnnngcgtcg tcttttggtt gtgtggatac tagttataca taacaagtat gagctcagtg 480
cgtttataga cattttgagt cgacaaaagc gcatctacga aaataaagga atggaagttt 540
tattgatatt gcatcaagat gaccctta 568
<210> 52
<211> 568
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 52
taaagcatag cagggctcgc acttcatagt tgggcatttt cccatatcga tgggtggaac 60
tattactaac aattgtggaa tatctgtcaa caactacggc aatgtagttc cattttcatt 120
tttgggatga cttacggcaa tgctnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 180
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 240
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 300
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 360
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 420
nnnntttaat tcgggcaatg cttgtacttt tttttgccac cctattttgg ggcttaaaaa 480
gccctttttt aaaaaaaatt ttcccacccc gaaaaaaaaa aaaaaaaaaa agtttccaaa 540
ttgaagtttt tttttcttct ctgtatta 568
<210> 53
<211> 568
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 53
taaaaaaaat gtgtctgtgc tcttcatcca tccatccata gtcggctata cagctgcgat 60
ggtgagctga gggatgccct cattggtttg gttgctcctt ccatcggtcg cgctagcttt 120
gcagcatctc ccttcctgga tctgnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 180
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 240
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 300
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 360
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 420
nnnngcatct caaggacacg tcgccagctg gagggtggtg agagagagta gactgagttc 480
gtccctgaga cgctatttta ctgctatgat tcgtttgttc ttgagttctt ttacaaaaag 540
gtttcgcccc gctttatata tagggtta 568
<210> 54
<211> 568
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 54
taatgaagat gctaacaata tgagatctgg tgtgggagtt ttggttactc ctaccacagg 60
aagtcaaaat gtgagaatgg agtctgggtt gtaaaacatt ttgggaaaga ggtatgccga 120
ggacagtaat ttaggtgctg gcaannnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 180
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 240
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 300
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 360
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 420
nnnnaatgag aataatagta ccaccgttct ggaccctaag acaacacttg ttccttttgc 480
agggacaaaa tcagataaga atccagagtt ggcgacaata gcggaaaaag taaatcgttt 540
cgaaggggta gtggatgaag aggattta 568
<210> 55
<211> 568
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 55
taacatctac cacctctgtg gtggacaaag tccaggagac tgccactgga cgaatgcagg 60
acgaccaaag tcgtgcgcaa ggaaagggct tgcgtgggtg gttcttctac tcccagtcat 120
accccgtggc cggtggctct gattnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 180
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 240
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 300
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 360
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 420
nnnncctacc cttcgcgact gttgtgtatg gtttattttg gaaatgttgc ttgcttcgga 480
cgagctatag agtttgcaca tcgaaagcca agggtattag ttttcatttt tcagggaatg 540
tgagggatta ggttcgtcac acatttta 568
<210> 56
<211> 568
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 56
taaggatcct tcaaaaagtt agagaaggtc ccatcggttt tgtcagcgca gagtggtttg 60
tcctggttgt cttggtccac gggcagtact ccggcaccgg attctttgtg tcagtttatt 120
tttctatggc tccttaccgg tggannnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 180
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 240
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 300
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 360
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 420
nnnntggctc cttcccggtt gagtgtcgga gcagggacca acgtagatca cgcgtaaggc 480
caaacttcag tccaaggacg tatttggtcc atttgcatct ttataggtct caaccactga 540
aaatgtatag cgcgatataa tgccttta 568
<210> 57
<211> 568
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 57
taaaaaaaat gtgactgagc tcttcatcca tccatccata gacggctata cagctgcgat 60
ggtgagctga gggatgcact cattggtttt gatgctcctt ccatcggacg cgctagctta 120
gcagcatctc ccttcctgga tctgnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 180
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 240
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 300
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 360
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 420
nnnngcatct caaggacacg tcgccagctg gagggtggtg agagtgagta gactgagttc 480
gtccctgaga cgctatttta ctgctatgat tcgtttgttc ttgagttctt ttacaaaaag 540
ttttcgcccc gctttattta tagggtta 568
<210> 58
<211> 568
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 58
taaaaaaaat gtgtctgtgc tcttcatcca tccatccata gtcggctata cagctgcgat 60
ggtgagctga gggatgccct cattggtttg gttgctcctt ccatcggtcg cgctagcttt 120
gcagcatctc ccttcctgga tcggnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 180
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 240
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 300
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 360
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 420
nnnngcatct caaggacacg tcgccagctg gagggtggtg agagagagta gactgagttc 480
gtccctgaga cgctatttta ctgctatgat tcgtttgttc ttgagtnctt ttacaaaaag 540
gtttcgcccc gctttatata tagggtta 568
<210> 59
<211> 568
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 59
taaaaaaaat gtgtctgtgc tcttcatcca tccatccata gtcggcgata cagctgcgat 60
ggtgagctga gggatgccct cattggtttg gttgctcctt ccatcggtcg cgctagcttt 120
gcagcatctc ccttcctgga tctgnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 180
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 240
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 300
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 360
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 420
nnnngcatct caaggacacg tcgccagctg gagggtggtg agagagagta gactgagttc 480
gtccctgaga cgctattnta ctgctatgat tcgtttgttc ttgagttctt ttacaaaaag 540
gtttcgcccc gctttatata tagggtta 568
<210> 60
<211> 568
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 60
taacattaga atgatcgtta gatttagaag cataattgaa gatttcgagc ttcaggaatt 60
tcagcttctg ggcagaaagt tcactggggt cagtgacagt cacaccaaca tctccacaaa 120
gattgatcgg attctcaaga cctgnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 180
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 240
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 300
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 360
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 420
nnnncttcta caggtacatc tgattattgc ctgcttatcc tccagaagat ggtggtgcct 480
aaatttggag gctttcggtt caaatcctcc taggtatctc ttctggggtt tcaggatgtg 540
atcaaagagg cttggaataa gctggtta 568
Claims (7)
1.一种用于检测四倍体长穗偃麦草3E染色体的引物对组合，其特征在于，所述的引物对组合由引物对1～20组成；
所述引物对1由序列1所示的单链分子和序列2所示的单链分子组成；
所述引物对2由序列3所示的单链分子和序列4所示的单链分子组成；
所述引物对3由序列5所示的单链分子和序列6所示的单链分子组成；
所述引物对4由序列7所示的单链分子和序列8所示的单链分子组成；
所述引物对5由序列9所示的单链分子和序列10所示的单链分子组成；
所述引物对6由序列11所示的单链分子和序列12所示的单链分子组成；
所述引物对7由序列13所示的单链分子和序列14所示的单链分子组成；
所述引物对8由序列15所示的单链分子和序列16所示的单链分子组成；
所述引物对9由序列17所示的单链分子和序列18所示的单链分子组成；
所述引物对10由序列19所示的单链分子和序列20所示的单链分子组成；
所述引物对11由序列21所示的单链分子和序列22所示的单链分子组成；
所述引物对12由序列23所示的单链分子和序列24所示的单链分子组成；
所述引物对13由序列25所示的单链分子和序列26所示的单链分子组成；
所述引物对14由序列27所示的单链分子和序列28所示的单链分子组成；
所述引物对15由序列29所示的单链分子和序列30所示的单链分子组成；
所述引物对16由序列31所示的单链分子和序列32所示的单链分子组成；
所述引物对17由序列33所示的单链分子和序列34所示的单链分子组成；
所述引物对18由序列35所示的单链分子和序列36所示的单链分子组成；
所述引物对19由序列37所示的单链分子和序列38所示的单链分子组成；
所述引物对20由序列39所示的单链分子和序列40所示的单链分子组成。
2.一种用于检测四倍体长穗偃麦草3E染色体的PCR试剂，其特征在于，所述PCR试剂包括权利要求1所述的引物对组合。
3.一种用于检测四倍体长穗偃麦草3E染色体的方法，其特征在于，利用权利要求1所述的引物对组合对待测植物进行扩增，若实现特异性扩增，则表示待测植物中含有四倍体长穗偃麦草3E染色体。
4.权利要求1所述的引物对组合在检测四倍体长穗偃麦草3E染色体中的应用。
5.权利要求1所述的引物对组合在检测含有四倍体长穗偃麦草3E染色体的产品中的应用。
6.权利要求1所述的引物对组合在鉴别四倍体长穗偃麦草与二倍体、十倍体长穗偃麦草染色体中的应用。
7.权利要求1所述的引物对组合在鉴别含有四倍体长穗偃麦草与含有二倍体、十倍体长穗偃麦草染色体的产品中的应用。
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