CN111227126A - 抗腹泻促生长仔猪饲料添加剂及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种抗腹泻促生长仔猪饲料添加剂及其制备方法，该抗腹泻促生长仔猪饲料添加剂由以下百分比的原料组成：复合中药添加剂30～50份，复合益生菌制剂10～25份，γ‑氨基丁酸10～30份，低聚木糖3～5份，葡萄糖氧化酶0.3～0.5份，单宁酸10～20份。该饲料添加剂所含成分均绿色安全、无药物残留，能够有效维持仔猪肠道微生态平衡，降低腹泻率，提高仔猪生长性能。

Description

抗腹泻促生长仔猪饲料添加剂及其制备方法
技术领域
本发明属于新型饲料技术领域，具体涉及一种抗腹泻促生长仔猪饲料添加剂及其制备方法抗腹泻促生长仔猪饲料添加剂及其制备方法。
背景技术
仔猪早期断奶是现代规模化养殖场普遍采用的方式，它一方面有效利用了畜舍，提高了母猪年生产能力，同时减少了仔猪疾病的发生，另一方面由于此时仔猪消化系统发育不全，机体免疫调控机制尚未完全建立，断奶时间过早，会给仔猪带来较大应激，表现为采食量低、消化功能减弱、生长缓慢、腹泻、免疫力低、死亡率高等仔猪断奶应激综合征，其中典型症状为腹泻，腹泻是影响仔猪存活率和生长发育的一个重要原因。
仔猪腹泻目前的控制手段是在饲料中添加抗生素类药物为主，但随着抗生素的添加也带来严重安全隐患，如病原微生物抗药性增加、动物自身免疫能力下降、畜禽产品药物残留对人类健康造成严重危害，欧盟早在2006年已经禁止饲料中添加抗生素，各种相关的法律法规的出台严格控制抗生素在动物源食品中的残留，因此，寻求“绿色安全”的抗生素类添加剂的替代品日益受到关注。
中草药具有固本培元、益气生津等特点，主要来源于自然界，具有不产生耐药性、副作用小等优点。微生态制剂是由益生菌发酵后经加工所得到的微生物菌体及其代谢产物制备的生物制剂。中草药与微生态制剂联合应用于畜禽日粮，具有调节肠道微生态平衡、改善畜禽消化吸收、提高生产性能和免疫功能等作用，并且长期使用无毒副作用，具有广泛的实际应用价值。
发明内容
本发明的目的之一在于提供一种抗腹泻促生长仔猪饲料添加剂，该添加剂绿色安全、无残留，能够有效改善仔猪肠道健康，降低腹泻率，提高饲料转化率和免疫能力，进而促进仔猪生长，本发明的目的之二在于提供上述添加剂的制备方法，本发明的目的之三在于提供该饲料添加剂在仔猪生产中的应用，证实可有效修复肠粘膜、维持肠道微生态平衡、促进消化吸收、减少腹泻、增强免疫力，为解决上述技术中的问题，本发明是采用以下技术方案来实现的：
本发明提供了一种抗腹泻促生长仔猪饲料添加剂，由以下百分比的原料组成：复合中药添加剂30～50份，复合益生菌制剂10～25份，γ-氨基丁酸10～30份，低聚木糖3～5份，葡萄糖氧化酶0.3～0.5份，单宁酸10～20份。
优选的是，所述复合中药添加剂包括以下份数的各组分：黄芪20～30份，杜仲叶10～30份，泡桐花10～20份，黄柏3～6份，马齿苋3～6份，松针5～15份，山楂5～15份，甘草5～15份，陈皮5～15份，车前草3～6份。
在上述任一方案中优选的是，所述所述复合益生菌制剂由丁酸梭菌与凝结芽孢杆菌组成，活菌总数≥5.0×108CFU/g。
在上述任一方案中优选的是，所述γ-氨基丁酸、葡萄糖氧化酶与单宁酸为市售产品，含量为：γ-氨基丁酸≥45％，低聚木糖≥35％，葡萄糖氧化酶≥3000IU，单宁酸≥50％。
本发明还提供了了一种上述抗腹泻促生长仔猪饲料添加剂的制备方法，按照先后顺序包括以下步骤：
(1)按照预定比例称取各组分：复合中药添加剂、复合益生菌制剂、γ-氨基丁酸、低聚木糖、葡萄糖氧化酶和单宁酸；
(2)开起混合机搅拌，依次从大料口投入复合中药添加剂、复合益生菌制剂、γ-氨基丁酸、低聚木糖和单宁酸，混合3～5分钟；
(3)从小料口投入葡萄糖氧化酶，混合3～5分钟，即得成品。
优选的是，所述复合中药添加剂制备方法包括以下步骤：
(1)按照百分比称取复合中药添加剂的各组成分，机械粉碎至粒度为40～60目，混合，加水搅拌成糊状物，静置3h；
(2)将上述混合物进行两次醇提，抽滤，合并滤液；
(3)减压蒸馏，除去滤液中的乙醇，得到浓缩液；
(4)对浓缩液进行喷雾干燥即得。
在上述任一方案中优选的是，步骤(2)的详细步骤为：将上述混合物与95％乙醇按照料液比1:5～1:10进行混合，在55～75℃条件下提取1～2h，抽滤，重复3次，合并滤液。
在上述任一方案中优选的是，步骤(3)中，所述浓缩液的浓缩密度为:1.08～1.16g/ml。
在上述任一方案中优选的是，步骤(4)中，喷雾干燥工艺为：进风温度160～180℃，出风温度60～80℃，最终产品为淡黄色至黄棕色粉末，水分≤8％。
在上述任一方案中优选的是，所述复合益生菌制剂制备方法包括以下步骤：
(1)菌种活化
丁酸梭菌活化：将丁酸梭菌甘油管菌种接入液体三角瓶中，37℃厌氧培养14～18h；凝结芽孢杆菌活化：将凝结芽孢杆菌甘油管菌种接入液体三角瓶中，40～45℃，160转振荡培养20～24h；
(2)摇瓶种子制备
丁酸梭菌：将三角瓶菌种按照1～3％的接种量，接入大摇瓶中，37℃厌氧培养12～14h；凝结芽孢杆菌：将三角瓶菌种按照1～3％的接种量，接入大摇瓶中，40～45℃，160转振荡培养16～20h；
(3)种子罐培养
丁酸梭菌：将摇瓶种子液按照1％的接种量接入种子罐中，通入氮气，35～37℃环境下，厌氧培养20～24h，罐压控制0.03～0.05Mpa；凝结芽孢杆菌:将摇瓶种子液按照1％的接种量接入种子罐中，通入无菌空气，控制温度40～45℃，搅拌转速120～160r/min，罐压控制0.03～0.05Mpa；
(4)固体发酵
将丁酸梭菌种子液与凝结芽孢杆菌种子液按照1:1体积比进行混合，加入纯水中，混合均匀，然后接入固态发酵基质，发酵物料水分控制在40～50％，厌氧发酵3～5d；
(5)气流烘干
发酵好的物料，采用流化床烘干，进风温度控制120～150℃，出口温度控制55～65℃，控制水分≤8％；
(6)粉碎过筛
烘干好物料利用垂片式粉碎机粉碎，过60目筛，得复合益生菌制剂成品；
其中，所述丁酸梭菌活化培养基配方为：蛋白胨10～12g/L，牛肉膏5～7g/L，酵母膏3～6g/L，葡萄糖5～10g/L，可溶性淀粉1～5g/L，氯化钠5～8g/L，乙酸钠3～6g/L，L～半胱氨酸盐酸盐0.5～2g/L，pH7.0；所述凝结芽孢杆菌活化培养基配方为：胰蛋白胨15～25g/L，大豆蛋白胨5～10g/L，酵母膏5～10g/L，焦亚硫酸钠1～3g/L，柠檬酸铁铵1～3g/L，pH7.6；所述丁酸梭菌摇瓶与种子罐培养基配方为:葡萄糖10～30g/L，蛋白胨10～20g/L，豆饼粉3～6g/L，KH2PO40.2～1.0g/L，MnSO40.2～0.4g/L，半胱氨酸盐酸盐0.3～0.8g/L，CaCO33～10g/L，pH6.8～7.2；所述凝结芽孢杆菌摇瓶与种子罐培养基配方为：玉米粉5～10g/L，豆饼粉15～30g/L，麸皮10～20g/L，MnSO40.2～0.4g/L，KH2PO41～3g/L，pH6.5～6.8；
所述培养基使用前需蒸汽灭菌，灭菌条件为：灭菌温度121℃，灭菌时间30min；
步骤(4)中，所述固体发酵培养基配方为：固体发酵培养基配方为：豆粕80～85份，玉米粉5～25份，葡萄糖1～2份，硫酸铵1.5～2份，硫酸镁0.02～0.04份。
本发明有以下有益效果：
本发明复合中草药添加剂含有黄芪、杜仲叶、泡桐花、黄柏、马齿苋、松针、山楂、甘草、陈皮和车前草等10种成分。其中黄芪性微温，含有黄芪多糖、黄芪皂苷和黄酮类成分，具有增强免疫系统、调节血压、抗肿瘤、清除自由基和抗衰老等作用。杜仲叶性温，其主要成分有木质素类、环烯醚萜类、黄酮类化合物，具有镇静、镇痛、降压、提高免疫力、抗炎、促生长、改善肠道微生态环境等作用。泡桐花：泡桐花为玄参科植物泡桐的花，性寒，具有疏风散热、清热解毒、清肝明目的功效，可促进畜禽生长速度，抗菌抗病毒、提高免疫力。黄柏性寒，含有小檗碱，对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、溶血性链球菌均具有不同程度抑制作用，能够预防和治疗腹泻。马齿苋性寒，味酸，功能清热，解毒，消肿，主治痢疾，疮疡等。松针性温苦，含有维生素、黄酮、儿茶素、对香豆酸、低聚原花青素、有机酸和槲皮素的活性物质，具有抗氧化及清除自由基的作用，有免疫增强功能及抗菌抗病毒等作用，作为添加剂使用可以改善仔猪生长性能，提高日增重。山楂味甘，性微温酸，入脾、胃、肝经，具有消食健胃、活血化瘀、驱虫之功效，可以增加仔猪食欲，提高采食量。甘草味甘，性平，入脾、胃、肺经，具有补脾益气、清热解毒、祛咳止痰、缓急止痛、调和诸药的功效，在畜禽生产中具有开胃进食、强化消化、改善风味、促长育肥的功能。陈皮味辛苦，性温，具有理气调中、健胃消食的作用。车前草味甘，性寒，具有祛痰、镇咳、抗炎等功效。
丁酸梭菌：可分泌丁酸和丁酸梭菌素，丁酸可以修复肠绒毛，同时可为肠道提供能量，丁酸梭菌素可以抑制肠道有害菌的生长繁殖，饲粮添加丁酸梭菌可以改善断奶仔猪生长性能，调节肠道菌群平衡，降低血清中促炎性细胞因子的含量，改善断奶仔猪肠粘膜屏障功能和机体免疫功能。
凝结芽孢杆菌：是一种产L-乳酸的芽孢菌，在生长后期产生细菌素抑制病原菌生长，刺激抗体及抗炎细胞因子的分泌，增强肠道免疫应答；凝结芽孢杆菌代谢过程中可产生蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶及木聚糖酶等消化酶，有助于改善断奶仔猪胃肠道的消化吸收能力，提高饲料利用率。
γ-氨基丁酸：是一种非蛋白氨基酸，具有镇定作用，能够促进生长激素分泌，增加动物食欲，增强营养物质的消化吸收代谢，降低动物应激。
低聚木糖：是以富含木聚糖的植物(如玉米芯、蔗渣、棉籽糖、麦麸等)为原料，通过木聚糖酶水解，分离精制而得的一种非消化性低聚糖，理化性质稳定，耐热、耐酸，具有很强促进肠道益生菌增殖的功能。
葡萄糖氧化酶：是一种高活性需氧脱氢酶，能专一氧化葡萄糖生成葡萄糖酸酸和过氧化氢。通过耗氧，能够清除肠道病原菌生存环境，保持肠道菌群平衡；通过产酸，能够为肠道提供酸性环境，抑菌，提高消化酶活性和饲料消化率。
单宁酸：又称鞣酸，是一类复杂的高分子多元酚类化合物，具有抗菌抑菌、抗氧化、抗炎症、收敛等作用，在动物饲料中添加适量单宁酸能改善动物肠道微生态环境、促进生长、提高营养物质利用率等作用。
本发明将中草药、益生菌、γ-氨基丁酸、低聚木糖、葡萄糖氧化酶及单宁酸相结合，各种活性成分协同作用，提高饲料效率、增强仔猪机体免疫力、改善仔猪肠道健康、提高仔猪生长性能。
具体实施方式
为了更进一步了解本发明的发明内容，下面将结合具体实施例详细阐述本发明。
实施例1
一种抗腹泻促生长仔猪饲料添加剂的制备方法，由以下百分比的原料组成：复合中药添加剂50份，复合益生菌制剂10份，γ-氨基丁酸20份，低聚木糖3份，葡萄糖氧化酶0.3份，单宁酸16.7份。
所述复合中药添加剂各成分组成为：黄芪20份，杜仲叶10份，泡桐花10份，黄柏3份，马齿苋3份，松针15份，山楂15份，甘草10份，陈皮14份，车前草3份。
所述复合益生菌制剂由丁酸梭菌与凝结芽孢杆菌组成，活菌总数≥5.0×108CFU/g。
所述γ-氨基丁酸、葡萄糖氧化酶与单宁酸为市售产品，含量为：γ-氨基丁酸≥45％，低聚木糖≥35％，葡萄糖氧化酶≥3000IU，单宁酸≥50％。
一种抗腹泻促生长仔猪饲料添加剂，包括以下生产步骤：
1)按照预定比例称取各组分：复合中药添加剂、复合益生菌制剂、γ-氨基丁酸、低聚木糖、葡萄糖氧化酶和单宁酸；
2)开起混合机搅拌，依次从大料口投入复合中药添加剂、复合益生菌制剂、γ-氨基丁酸、低聚木糖和单宁酸，混合3～5分钟；
3)从小料口投入葡萄糖氧化酶，混合3～5分钟，即得成品。
其中，复合中药添加剂制备方法包括以下步骤：
1)按照百分比称取复合中药添加剂各成分，机械粉碎至粒度为40～60目，混合，加水搅拌成糊状物，静置3h；
2)将上述混合物进行两次醇提，抽滤，合并滤液；
3)减压蒸馏，除去滤液中的乙醇，得到浓缩液。
4)喷雾干燥。
所述步骤2)中混合物与95％乙醇按照料液比1:5～1:10进行混合，在55～75℃条件下提取1h，抽滤，重复3次，合并滤液。
所述步骤3)中，浓缩液的浓缩液的浓缩密度要求为:1.08～1.16g/ml
所述步骤4)喷雾干燥工艺为：进风温度160～180℃，出风温度60～80℃，最终产品为淡黄色至黄棕色粉末，水分≤8％。
其中，复合益生菌制剂制备方法包括以下步骤：
1)菌种活化
a)丁酸梭菌活化：将丁酸梭菌甘油管菌种接入液体三角瓶中，37℃厌氧培养14h。
b)凝结芽孢杆菌活化：将凝结芽孢杆菌甘油管菌种接入液体三角瓶中，40℃，160转振荡培养20h。
2)摇瓶种子制备
a)丁酸梭菌：将三角瓶菌种按照1～3％的接种量，接入大摇瓶中，37℃厌氧培养12h。
b)凝结芽孢杆菌：将三角瓶菌种按照1～3％的接种量，接入大摇瓶中，40℃，160转振荡培养16～20h。
3)种子罐培养
a)丁酸梭菌：将摇瓶种子液按照1％的接种量接入种子罐中，通入氮气，35～37℃环境下，厌氧培养20h，罐压控制0.03～0.05Mpa。
b)凝结芽孢杆菌:将摇瓶种子液按照1％的接种量接入种子罐中，通入无菌空气，控制温度40℃，搅拌转速120r/min，罐压控制0.03～0.05Mpa。
4)固体发酵
将丁酸梭菌种子液与凝结芽孢杆菌种子液按照1:1体积比进行混合，加入纯水中，混合均匀，然后接入固态发酵基质，发酵物料水分控制在40％，厌氧发酵3～5d。
5)气流烘干
发酵好的物料，采用流化床烘干，进风温度控制120～150℃，出口温度控制55～65℃，控制水分≤8％。
6)粉碎过筛
烘干好物料利用垂片式粉碎机粉碎，过60目筛，得复合益生菌制剂成品。
所述丁酸梭菌活化培养基配方为：蛋白胨10g/L，牛肉膏5g/L，酵母膏3g/L，葡萄糖5g/L，可溶性淀粉1g/L，氯化钠5g/L，乙酸钠3g/L，L-半胱氨酸盐酸盐0.5g/L，pH7.0；
所述凝结芽孢杆菌活化培养基配方为：胰蛋白胨15g/L，大豆蛋白胨5g/L，酵母膏5g/L，焦亚硫酸钠1g/L，柠檬酸铁铵1g/L，pH7.6；
所述丁酸梭菌摇瓶与种子罐培养基配方为:葡萄糖10g/L，蛋白胨10g/L，豆饼粉3g/L，KH2PO40.2g/L，MnSO40.2g/L，半胱氨酸盐酸盐0.3g/L，CaCO33g/L，pH6.8～7.2；
所述凝结芽孢杆菌摇瓶与种子罐培养基配方为：玉米粉5g/L，豆饼粉15g/L，麸皮10g/L，MnSO40.2g/L，KH2PO41g/L，pH6.5～6.8。
所述培养基使用前需蒸汽灭菌，灭菌条件为：灭菌温度121℃，灭菌时间30min。
所述步骤4)中所述固体发酵培养基配方为：固体发酵培养基配方为：豆粕80份，玉米粉17.5份，葡萄糖1份，硫酸铵1.5份，硫酸镁0.02份。
实施例2
一种抗腹泻促生长仔猪饲料添加剂的制备方法，由以下百分比的原料组成：复合中药添加剂30份，复合益生菌制剂25份，γ-氨基丁酸30份，低聚木糖4份，葡萄糖氧化酶0.4份，单宁酸10.6份。
所述复合中药添加剂各成分组成为：黄芪30份，杜仲叶25份，泡桐花12份，黄柏4份，马齿苋6份，松针8份，山楂5份，甘草8份，陈皮5份，车前草3份。
所述复合益生菌制剂由丁酸梭菌与凝结芽孢杆菌组成，活菌总数≥5.0×108CFU/g。
所述γ-氨基丁酸、葡萄糖氧化酶与单宁酸为市售产品，含量为：γ-氨基丁酸≥45％，低聚木糖≥35％，葡萄糖氧化酶≥3000IU，单宁酸≥50％。
一种抗腹泻促生长仔猪饲料添加剂，包括以下生产步骤：
1)按照预定比例称取各组分：复合中药添加剂、复合益生菌制剂、γ-氨基丁酸、低聚木糖、葡萄糖氧化酶和单宁酸；
2)开起混合机搅拌，依次从大料口投入复合中药添加剂、复合益生菌制剂、γ-氨基丁酸、低聚木糖和单宁酸，混合3～5分钟；
3)从小料口投入葡萄糖氧化酶，混合3～5分钟，即得成品。
其中，复合中药添加剂制备方法包括以下步骤：
1)按照百分比称取复合中药添加剂各成分，机械粉碎至粒度为40～60目，混合，加水搅拌成糊状物，静置3h；
2)将上述混合物进行两次醇提，抽滤，合并滤液；
3)减压蒸馏，除去滤液中的乙醇，得到浓缩液。
4)喷雾干燥。
所述步骤2)中混合物与95％乙醇按照料液比1:5～1:10进行混合，在55～75℃条件下提取2h，抽滤，重复3次，合并滤液。
所述步骤3)中，浓缩液的浓缩液的浓缩密度要求为:1.08～1.16g/ml
所述步骤4)喷雾干燥工艺为：进风温度160～180℃，出风温度60～80℃，最终产品为淡黄色至黄棕色粉末，水分≤8％。
其中，复合益生菌制剂制备方法包括以下步骤：
1)菌种活化
a)丁酸梭菌活化：将丁酸梭菌甘油管菌种接入液体三角瓶中，37℃厌氧培养18h。
b)凝结芽孢杆菌活化：将凝结芽孢杆菌甘油管菌种接入液体三角瓶中，45℃，160转振荡培养24h。
2)摇瓶种子制备
a)丁酸梭菌：将三角瓶菌种按照1～3％的接种量，接入大摇瓶中，37℃厌氧培养14h。
b)凝结芽孢杆菌：将三角瓶菌种按照1～3％的接种量，接入大摇瓶中，45℃，160转振荡培养20h。
3)种子罐培养
a)丁酸梭菌：将摇瓶种子液按照1％的接种量接入种子罐中，通入氮气，35～37℃环境下，厌氧培养24h，罐压控制0.03～0.05Mpa。
b)凝结芽孢杆菌:将摇瓶种子液按照1％的接种量接入种子罐中，通入无菌空气，控制温度45℃，搅拌转速160r/min，罐压控制0.03～0.05Mpa。
4)固体发酵
将丁酸梭菌种子液与凝结芽孢杆菌种子液按照1:1体积比进行混合，加入纯水中，混合均匀，然后接入固态发酵基质，发酵物料水分控制在50％，厌氧发酵5d。
5)气流烘干
发酵好的物料，采用流化床烘干，进风温度控制120～150℃，出口温度控制55～65℃，控制水分≤8％。
6)粉碎过筛
烘干好物料利用垂片式粉碎机粉碎，过60目筛，得复合益生菌制剂成品。
所述丁酸梭菌活化培养基配方为：蛋白胨12g/L，牛肉膏7g/L，酵母膏6g/L，葡萄糖10g/L，可溶性淀粉5g/L，氯化钠8g/L，乙酸钠6g/L，L-半胱氨酸盐酸盐2g/L，pH7.0；
所述凝结芽孢杆菌活化培养基配方为：胰蛋白胨25g/L，大豆蛋白胨10g/L，酵母膏10g/L，焦亚硫酸钠3g/L，柠檬酸铁铵3g/L，pH7.6；
所述丁酸梭菌摇瓶与种子罐培养基配方为:葡萄糖30g/L，蛋白胨20g/L，豆饼粉6g/L，KH2PO41.0g/L，MnSO400.4g/L，半胱氨酸盐酸盐0.8g/L，CaCO310g/L，pH6.8～7.2；
所述凝结芽孢杆菌摇瓶与种子罐培养基配方为：玉米粉10g/L，豆饼粉30g/L，麸皮20g/L，MnSO40.4g/L，KH2PO43g/L，pH6.5～6.8。
所述培养基使用前需蒸汽灭菌，灭菌条件为：灭菌温度121℃，灭菌时间30min。
所述步骤4)中所述固体发酵培养基配方为：固体发酵培养基配方为：豆粕85份，玉米粉11份，葡萄糖2份，硫酸铵2份，硫酸镁0.04份。
实施例3
一种抗腹泻促生长仔猪饲料添加剂的制备方法，由以下百分比的原料组成：复合中药添加剂40份，复合益生菌制剂20份，γ-氨基丁酸14.5份，低聚木糖5份，葡萄糖氧化酶0.5份，单宁酸20份。
所述复合中药添加剂各成分组成为：黄芪25份，杜仲叶20份，泡桐花10份，黄柏5份，马齿苋4份，松针15份，山楂5份，甘草5份，陈皮10份，车前草5份。
所述复合益生菌制剂由丁酸梭菌与凝结芽孢杆菌组成，活菌总数≥5.0×108CFU/g。
所述γ-氨基丁酸、葡萄糖氧化酶与单宁酸为市售产品，含量为：γ-氨基丁酸≥45％，低聚木糖≥35％，葡萄糖氧化酶≥3000IU，单宁酸≥50％。
一种抗腹泻促生长仔猪饲料添加剂，包括以下生产步骤：
1)按照预定比例称取各组分：复合中药添加剂、复合益生菌制剂、γ-氨基丁酸、低聚木糖、葡萄糖氧化酶和单宁酸；
2)开起混合机搅拌，依次从大料口投入复合中药添加剂、复合益生菌制剂、γ-氨基丁酸、低聚木糖和单宁酸，混合3～5分钟；
3)从小料口投入葡萄糖氧化酶，混合3～5分钟，即得成品。
其中，复合中药添加剂制备方法包括以下步骤：
1)按照百分比称取复合中药添加剂各成分，机械粉碎至粒度为40～60目，混合，加水搅拌成糊状物，静置3h；
2)将上述混合物进行两次醇提，抽滤，合并滤液；
3)减压蒸馏，除去滤液中的乙醇，得到浓缩液。
4)喷雾干燥。
所述步骤2)中混合物与95％乙醇按照料液比1:5～1:10进行混合，在55～75℃条件下提取1.5h，抽滤，重复3次，合并滤液。
所述步骤3)中，浓缩液的浓缩液的浓缩密度要求为:1.08～1.16g/ml
所述步骤4)喷雾干燥工艺为：进风温度160～180℃，出风温度60～80℃，最终产品为淡黄色至黄棕色粉末，水分≤8％。
其中，复合益生菌制剂制备方法包括以下步骤：
1)菌种活化
a)丁酸梭菌活化：将丁酸梭菌甘油管菌种接入液体三角瓶中，37℃厌氧培养16h。
b)凝结芽孢杆菌活化：将凝结芽孢杆菌甘油管菌种接入液体三角瓶中，42℃，160转振荡培养22h。
2)摇瓶种子制备
a)丁酸梭菌：将三角瓶菌种按照1～3％的接种量，接入大摇瓶中，37℃厌氧培养13h。
b)凝结芽孢杆菌：将三角瓶菌种按照1～3％的接种量，接入大摇瓶中，42℃，160转振荡培养18h。
3)种子罐培养
a)丁酸梭菌：将摇瓶种子液按照1％的接种量接入种子罐中，通入氮气，35～37℃环境下，厌氧培养22h，罐压控制0.03～0.05Mpa。
b)凝结芽孢杆菌:将摇瓶种子液按照1％的接种量接入种子罐中，通入无菌空气，控制温度42℃，搅拌转速140r/min，罐压控制0.03～0.05Mpa。
4)固体发酵
将丁酸梭菌种子液与凝结芽孢杆菌种子液按照1:1体积比进行混合，加入纯水中，混合均匀，然后接入固态发酵基质，发酵物料水分控制在45％，厌氧发酵3～5d。
5)气流烘干
发酵好的物料，采用流化床烘干，进风温度控制120～150℃，出口温度控制55～65℃，控制水分≤8％。
6)粉碎过筛
烘干好物料利用垂片式粉碎机粉碎，过60目筛，得复合益生菌制剂成品。
所述丁酸梭菌活化培养基配方为：蛋白胨11g/L，牛肉膏6g/L，酵母膏5g/L，葡萄糖7g/L，可溶性淀粉3g/L，氯化钠7g/L，乙酸钠5g/L，L-半胱氨酸盐酸盐1g/L，pH7.0；
所述凝结芽孢杆菌活化培养基配方为：胰蛋白胨20g/L，大豆蛋白胨8g/L，酵母膏8g/L，焦亚硫酸钠2g/L，柠檬酸铁铵2g/L，pH7.6；
所述丁酸梭菌摇瓶与种子罐培养基配方为:葡萄糖20g/L，蛋白胨15g/L，豆饼粉5g/L，KH2PO40.5g/L，MnSO40.3g/L，半胱氨酸盐酸盐0.5g/L，CaCO35g/L，pH6.8～7.2；
所述凝结芽孢杆菌摇瓶与种子罐培养基配方为：玉米粉7g/L，豆饼粉25g/L，麸皮15g/L，MnSO40.3g/L，KH2PO42g/L，pH6.5～6.8。
所述培养基使用前需蒸汽灭菌，灭菌条件为：灭菌温度121℃，灭菌时间30min。
所述步骤4)中所述固体发酵培养基配方为：固体发酵培养基配方为：豆粕82份，玉米粉14.8份，葡萄糖1.5份，硫酸铵1.7份，硫酸镁0.03份。
性能测试
1试验方案
试验采用单因子试验设计，选择28日龄健康、体重大小接近(8.7±0.5)kg断奶仔猪160头，随机分为4个组，每个组4个重复，每个重复10头猪，对照组饲喂基础日粮，试验1组、试验2组、试验3组分别在基础日粮基础上添加1％的实施例1、实施例2、实施例3的饲料添加剂。试验期间采取自由采食和饮水，基础日粮组成及营养水平见表1，试验期31天。
表1基础日粮组成及营养水平(风干基础)
Figure BDA0002348972990000171
2测定指标
2.1生长性能
分别于试验开始、结束时称每头仔猪空腹体重，准确记录饲料消耗量，计算平均日增重(ADG)、平均日采食量(ADFI)及料重比(F/G)。
2.2腹泻率
试验期间，每天观察两次(早8:00，午14:00)，记录腹泻仔猪头数，计算腹泻率。
2.3血清生化指标
试验结束前一天，每个重复随机选择3头仔猪(空腹12h)，前腔静脉采血，收集于9ml肝素钠抗凝管中，静置15min后，3000r/min离心10min，分离血清，分装后-80℃保存，用全自动生化仪测定免疫球蛋白A(lgA)、免疫球蛋白G(lgG)、免疫球蛋白M(lgM)，试剂盒由南京建成生物工程研究所提供。
2.4肠道菌群数量的测定
试验结束当天，每个重复随机选取3头体重相近的健康仔猪屠宰，分别截取结肠和盲肠肠段，于肠段两端双线结扎，低温保存送往实验室，立即进行大肠杆菌、乳酸杆菌数量的测定，结果以1g肠道内容物细菌数量的对数值表示。
2.5数据统计处理
数据采用SAS9.3软件进行统计学处理，方差分析使用one-wayANOVA，多重比较采用Duncan氏法，显著性水平为P<0.05
3试验结果
3.1饲料添加剂对仔猪生长性能的影响
由表2可知，试验结束后，试验组体重均显著高于对照组(P<0.05)，其中试验2组与试验3组体重显著高于试验1组(P<0.05)；平均日增重与日采食量对照组与试验1组差异不显著，试验2组与试验3组显著高于试验1组(P<0.05)；各试验组料重比显著低于对照组(P<0.05)，试验2组与试验3组料重比差异不显著(P>0.05)。
表2饲料添加剂对仔猪生长性能影响的结果
Figure BDA0002348972990000191
注：同行数据肩标不同字母表示差异显著(P<0.05)；肩标相同字母或无字母标注表示差异不显著(P>0.05)。
3.2饲料添加剂对仔猪腹泻率的影响
由表3可知，添加饲料添加剂的各组试验全期腹泻率显著低于对照组(P<0.05)。
表3饲料添加剂对仔猪腹泻率的影响
Figure BDA0002348972990000192
3.3饲料添加剂对仔猪血清生化指标的影响
由表4可知，试验2组与试验3组免疫球蛋白lgA与lgG含量显著高于对照组与试验1组(P<0.05)，试验1组显著高于对照组(P<0.05)；各组免疫球蛋白lgM含量差异不显著(P>0.05)。
表4饲料添加剂对仔猪血清免疫指标的影响
Figure BDA0002348972990000201
3.4饲料添加剂对肠道菌群数量的影响
由表5可知，各组盲肠大肠杆菌数量差异不显著(P>0.05)，试验1组至试验3组显著增加了盲肠乳酸菌数量(P<0.05)，分别增加了4.58％、16.4％和17.1％；饲料添加剂组与对照组相比，显著降低了结肠大肠杆菌数量(P<0.05)，分别降低了6.83％、7.22％和10.18％，各试验组显著增加了结肠乳酸菌数量(P<0.05)，其中试验2组和试验3组乳酸菌数差异不显著(P>0.05)。
表5饲料添加剂对肠道菌群数量的影响(lg(CFU/g))
Figure BDA0002348972990000202
Figure BDA0002348972990000211
4结论
饲料中添加本发明饲料添加剂，可以改善仔猪生产性能、降低仔猪腹泻率、提高免疫力和维持肠道微生态平衡的作用。
本领域技术人员不难理解，本发明的抗腹泻促生长仔猪饲料添加剂及其制备方法包括上述本发明说明书的发明内容和具体实施方式部分，限于篇幅并为使说明书简明而没有将这些组合构成的各方案一一描述。凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种抗腹泻促生长仔猪饲料添加剂，其特征在于，由以下百分比的原料组成：复合中药添加剂30～50份，复合益生菌制剂10～25份，γ-氨基丁酸10～30份，低聚木糖3～5份，葡萄糖氧化酶0.3～0.5份，单宁酸10～20份。
2.根据权利要求1所述的抗腹泻促生长仔猪饲料添加剂，其特征在于，所述复合中药添加剂包括以下份数的各组分：黄芪20～30份，杜仲叶10～30份，泡桐花10～20份，黄柏3～6份，马齿苋3～6份，松针5～15份，山楂5～15份，甘草5～15份，陈皮5～15份，车前草3～6份。
3.根据权利要求1所述的抗腹泻促生长仔猪饲料添加剂，其特征在于，所述所述复合益生菌制剂由丁酸梭菌与凝结芽孢杆菌组成，活菌总数≥5.0×108CFU/g。
4.根据权利要求1所述的抗腹泻促生长仔猪饲料添加剂，其特征在于，所述γ-氨基丁酸、葡萄糖氧化酶与单宁酸为市售产品，含量为：γ-氨基丁酸≥45％，低聚木糖≥35％，葡萄糖氧化酶≥3000IU，单宁酸≥50％。
5.一种抗腹泻促生长仔猪饲料添加剂的制备方法，其特征在于，按照先后顺序包括以下步骤：
(1)按照预定比例称取各组分：复合中药添加剂、复合益生菌制剂、γ-氨基丁酸、低聚木糖、葡萄糖氧化酶和单宁酸；
(2)开起混合机搅拌，依次从大料口投入复合中药添加剂、复合益生菌制剂、γ-氨基丁酸、低聚木糖和单宁酸，混合3～5分钟；
(3)从小料口投入葡萄糖氧化酶，混合3～5分钟，即得成品。
6.根据权利要求5所述的抗腹泻促生长仔猪饲料添加剂的制备方法，其特征在于，所述复合中药添加剂制备方法包括以下步骤：
(1)按照百分比称取复合中药添加剂的各组成分，机械粉碎至粒度为40～60目，混合，加水搅拌成糊状物，静置3h；
(2)将上述混合物进行两次醇提，抽滤，合并滤液；
(3)减压蒸馏，除去滤液中的乙醇，得到浓缩液；
(4)对浓缩液进行喷雾干燥即得。
7.根据权利要求5所述的抗腹泻促生长仔猪饲料添加剂的制备方法，其特征在于，步骤(2)的详细步骤为：将上述混合物与95％乙醇按照料液比1:5～1:10进行混合，在55～75℃条件下提取1～2h，抽滤，重复3次，合并滤液。
8.根据权利要求5所述的抗腹泻促生长仔猪饲料添加剂的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，所述浓缩液的浓缩密度为:1.08～1.16g/ml。
9.根据权利要求5所述的抗腹泻促生长仔猪饲料添加剂的制备方法，其特征在于，步骤(4)中，喷雾干燥工艺为：进风温度160～180℃，出风温度60～80℃，最终产品为淡黄色至黄棕色粉末，水分≤8％。
10.根据权利要求5所述的抗腹泻促生长仔猪饲料添加剂的制备方法，其特征在于，所述复合益生菌制剂制备方法包括以下步骤：
(1)菌种活化
丁酸梭菌活化：将丁酸梭菌甘油管菌种接入液体三角瓶中，37℃厌氧培养14～18h；凝结芽孢杆菌活化：将凝结芽孢杆菌甘油管菌种接入液体三角瓶中，40～45℃，160转振荡培养20～24h；
(2)摇瓶种子制备
丁酸梭菌：将三角瓶菌种按照1～3％的接种量，接入大摇瓶中，37℃厌氧培养12～14h；凝结芽孢杆菌：将三角瓶菌种按照1～3％的接种量，接入大摇瓶中，40～45℃，160转振荡培养16～20h；
(3)种子罐培养
丁酸梭菌：将摇瓶种子液按照1％的接种量接入种子罐中，通入氮气，35～37℃环境下，厌氧培养20～24h，罐压控制0.03～0.05Mpa；凝结芽孢杆菌:将摇瓶种子液按照1％的接种量接入种子罐中，通入无菌空气，控制温度40～45℃，搅拌转速120～160r/min，罐压控制0.03～0.05Mpa；
(4)固体发酵
将丁酸梭菌种子液与凝结芽孢杆菌种子液按照1:1体积比进行混合，加入纯水中，混合均匀，然后接入固态发酵基质，发酵物料水分控制在40～50％，厌氧发酵3～5d；
(5)气流烘干
发酵好的物料，采用流化床烘干，进风温度控制120～150℃，出口温度控制55～65℃，控制水分≤8％；
(6)粉碎过筛
烘干好物料利用垂片式粉碎机粉碎，过60目筛，得复合益生菌制剂成品；
其中，所述丁酸梭菌活化培养基配方为：蛋白胨10～12g/L，牛肉膏5～7g/L，酵母膏3～6g/L，葡萄糖5～10g/L，可溶性淀粉1～5g/L，氯化钠5～8g/L，乙酸钠3～6g/L，L-半胱氨酸盐酸盐0.5～2g/L，pH 7.0；所述凝结芽孢杆菌活化培养基配方为：胰蛋白胨15～25g/L，大豆蛋白胨5～10g/L，酵母膏5～10g/L，焦亚硫酸钠1～3g/L，柠檬酸铁铵1～3g/L，pH 7.6；所述丁酸梭菌摇瓶与种子罐培养基配方为:葡萄糖10～30g/L，蛋白胨10～20g/L，豆饼粉3～6g/L，KH2PO40.2～1.0g/L，MnSO40.2～0.4g/L，半胱氨酸盐酸盐0.3～0.8g/L，CaCO33～10g/L，pH 6.8～7.2；所述凝结芽孢杆菌摇瓶与种子罐培养基配方为：玉米粉5～10g/L，豆饼粉15～30g/L，麸皮10～20g/L，MnSO40.2～0.4g/L，KH2PO41～3g/L，pH 6.5～6.8；
所述培养基使用前需蒸汽灭菌，灭菌条件为：灭菌温度121℃，灭菌时间30min；
步骤(4)中，所述固体发酵培养基配方为：固体发酵培养基配方为：豆粕80～85份，玉米粉5～25份，葡萄糖1～2份，硫酸铵1.5～2份，硫酸镁0.02～0.04份。
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