CN111198270B - 一种用于甘油醛-3-磷酸脱氢酶磁微粒化学发光检测试剂盒及其制备方法 - Google Patents

一种用于甘油醛-3-磷酸脱氢酶磁微粒化学发光检测试剂盒及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本公开涉及一种用于甘油醛‑3‑磷酸脱氢酶磁微粒化学发光检测试剂盒及其制备方法，该试剂盒包括：偶联有甘油醛‑3‑磷酸脱氢酶单克隆抗体的磁微粒、10,10‑二甲基‑3,3‑二磺基‑9,9‑二双吖啶(DMDSBA)标记的甘油醛‑3‑磷酸脱氢酶单克隆抗体、甘油醛‑3‑磷酸脱氢酶标准品、化学发光预激发液、化学发光激发液以及清洗液。本公开的磁微粒化学发光检测试剂盒具有高灵敏度、简便快速、准确度高的特点，与传统的化学发光检测法比较，操作时间大幅度减少。

Description

一种用于甘油醛-3-磷酸脱氢酶磁微粒化学发光检测试剂盒及其制备方法
技术领域
本公开涉及临床诊断技术领域，具体地说，本公开涉及一种用于甘油醛-3-磷酸脱氢酶磁微粒化学发光检测试剂盒及其制备方法。
背景技术
这里的陈述仅提供与本公开有关的背景信息，而不必然构成现有技术。
恶性肿瘤是全球性的常见病及多发病，是危害人民健康的重大疾病之一。我国2015年约有429.2万例新增癌症病例，平均每天新增1.2万例；同时约有281.4万人死于癌症，平均每天死亡例数达7500例。其中肺和支气管癌、胃癌、肝癌、食道癌和结直肠癌占所有癌症死亡情况的四分之三(CACancer J Clin.2016；66:115-132)。我国恶性肿瘤发病率近年来呈持续高发趋势，已成为国内居民的首要死因。
甘油醛-3-磷酸脱氢酶(Glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase，GAPDH)是糖酵解过程中重要的酶。分子量37kDa，催化3-磷酸甘油醛(glyceraldehyde 3-phosphate)到1，3-二磷酸甘油酸的反应(D-glycerate 1,3-bisphosphate)。除此众所周知的代谢调控功能外，近几年研究证明GAPDH还参与了许多非代谢调控过程，包括转录激活(Oncogene.2007；26(18):2606–20.)等。
有研究报道在黑色素瘤(Anticancer Research.2013；35(1):439–44)和非小细胞肺癌组织中(PLOS ONE.2013；8(4):e61262)GAPDH的mRNA水平显著上升，且表达水平与肿瘤恶性程度正相关。这是因为GAPDH在糖酵解过程中的重要作用以及其抗凋亡功能对肿瘤细胞的增殖和保护也十分重要，例如GAPDH可以保护因化疗药物的作用导致的端粒缩短。但如果氧化压力等条件破坏了GAPDH的功能，细胞就会老化或者死亡(Clinical andExperimental Pharmacology&Physiology.2012；39(8):674–9.)，GAPDH的缺失同样会导致肿瘤细胞老化(Biochemical and Biophysical Research Communications.2011；411(2):409–15.)。我国科研工作者针对GAPDH在肿瘤中转录水平升高也有过类似报道，例如利用荧光定量PCR方法检测乳腺癌患者血清中的游离DNA，结果发现84.5％的乳腺癌患者DNA检测为阳性，I～II期乳腺癌患者阳性率为84％(肿瘤2011；31(12)：1099-1102)。目前，相关研究主要集中在几个瘤种中GAPDH基因水平，特别是mRNA的表达量的变化与肿瘤的关系，其蛋白水平的表达和变化情况鲜有报道，特别是肿瘤患者血清/血浆中GAPDH的含量与肿瘤发生发展的相关性更是有待研究。
化学发光免疫分析技术是继放免分析、酶免分析、荧光免疫分析和时间分辨荧光免疫分析之后发展起来的一项新的免疫测定技术。它将化学发光分析的高灵敏度与抗原抗体反应的高特异性相结合，与目前常用的其他免疫分析法相比具有灵敏度高、特异性强、检测时间短、测量线性范围宽、稳定性好，可实现自动化、使用简便、安全、无放射性污染等诸多优点,因此倍受人们的青睐，该技术已广泛应用于传染性疾病、肥胖及相关疾病、内分泌系统、遗传病、肿瘤的早期诊断、动植物检验检疫等众多领域。
但是，目前尚未有磁微粒化学发光方法检测人血清甘油醛-3-磷酸脱氢酶的相关报道，也没有用于人血清甘油醛-3-磷酸脱氢酶检测的磁微粒化学发光试剂盒。
发明内容
针对背景技术，本公开提供了一种具有高灵敏度、简便快速、准确度高的甘油醛-3-磷酸脱氢酶的磁微粒化学发光检测试剂盒。
本公开具体采用以下技术方案：
在本公开的第一个方面，提供一种用于甘油醛-3-磷酸脱氢酶磁微粒化学发光检测试剂盒，该试剂盒包括：
偶联有甘油醛-3-磷酸脱氢酶单克隆抗体的磁微粒、10,10-二甲基-3,3-二磺基-9,9-二双吖啶(DMDSBA)标记的甘油醛-3-磷酸脱氢酶单克隆抗体、甘油醛-3-磷酸脱氢酶标准品、化学发光预激发液、化学发光激发液以及清洗液；
其中，化学发光预激发液为H2O2、乙腈、十二烷基羟丙基磷酸酯甜菜碱和水组成的混合液，H2O2的质量分数为0.01-2.5％，乙腈的质量分数为1～2％，十二烷基羟丙基磷酸酯甜菜碱的质量分数为0.01～1％，剩余为水；
所述化学发光激发液为NaOH、乙腈、十二烷基羟丙基磷酸酯甜菜碱和水组成的混合液，NaOH的浓度为0.05-1.0mol/L，乙腈的质量分数为1～2％，十二烷基羟丙基磷酸酯甜菜碱的质量分数为0.01～1％。
在本公开的第二个方面，提供所述用于甘油醛-3-磷酸脱氢酶磁微粒化学发光检测试剂盒的制备方法，该方法包括以下步骤：
(1)甘油醛-3-磷酸脱氢酶单克隆抗体的制备：采用基因工程技术以大肠杆菌为载体制备重组人甘油醛-3-磷酸脱氢酶，将纯化后的甘油醛-3-磷酸脱氢酶免疫BALB/C小鼠，通过杂交瘤融合技术制备得到人甘油醛-3-磷酸脱氢酶单克隆抗体；
(2)磁微粒与甘油醛-3-磷酸脱氢酶单克隆抗体偶联：磁微粒通过EDC和NHS活化后与甘油醛-3-磷酸脱氢酶单克隆抗体偶联；
(3)DMDSBA标记的甘油醛-3-磷酸脱氢酶单克隆抗体：将待标记的甘油醛-3-磷酸脱氢酶单克隆抗体加入标记缓冲液，然后与含有DMDSBA的DMF溶液混合均匀，避光反应，即得DMDSBA标记的甘油醛-3-磷酸脱氢酶单克隆抗体。
在本公开的第三个方面，提供一种利用所述的磁微粒化学发光检测试剂盒进行甘油醛-3-磷酸脱氢酶含量检测的方法，包括以下步骤:
(1)标准曲线的建立：向偶联有甘油醛-3-磷酸脱氢酶单克隆抗体的磁微粒的混悬液中分别加入不同浓度的标准品溶液，然后分别加入稀释后的DMDSBA标记的甘油醛-3-磷酸脱氢酶单克隆抗体，水浴后离心，加入清洗液，震荡离心，去除上清并依此方法重复洗涤3-5次，然后向反应体系中依次加入化学发光预激发液和化学发光激发液，混匀，在化学发光检测仪上检测，得到不同浓度的标准品溶液的发光值，根据该发光值绘制标准曲线；
(2)样品的检测：将待检测样品加入偶联有甘油醛-3-磷酸脱氢酶单克隆抗体的磁微粒的混悬液中，再加入稀释后的酶标抗体，然后按照步骤(1)中的方法进行操作，得到待检测样品的发光值，将该发光值与所述标准曲线进行比对计算，得到待检测样品中甘油醛-3-磷酸脱氢酶的含量。
与本发明人知晓的相关技术相比，本公开其中的一个技术方案具有如下有益效果：
本公开的原理是将抗体－抗原反应的高度特异性与DMDSBA发光的高度灵敏性结合起来，利用DMDSBA捕捉反应产生的光子以检测产物浓度。本公开的优点在于采用双抗体夹心法联合磁微粒化学发光技术，测定人血清中甘油醛-3-磷酸脱氢酶的含量。
本公开的磁微粒化学发光检测试剂盒具有高灵敏度、简便快速、准确度高的特点，与传统的化学发光检测法比较，操作时间大幅度减少。
附图说明
构成本公开一部分的说明书附图用来提供对本公开的进一步理解，本公开的示意性实施例及其说明用于解释本公开，并不构成对本公开的不当限定。
图1是本公开的磁微粒化学发光检测试剂盒标准曲线。
图2不同化学发光体系对发光强度的影响。
具体实施方式
应该指出，以下详细说明都是示例性的，旨在对本公开提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本公开所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本公开的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作和/或它们的组合。
正如背景技术所介绍的，目前尚未有磁微粒化学发光方法检测人血清甘油醛-3-磷酸脱氢酶的相关报道，也没有用于人血清甘油醛-3-磷酸脱氢酶检测的磁微粒化学发光试剂盒。
鉴于此，在本公开的第一个典型的实施方式中，提供一种用于甘油醛-3-磷酸脱氢酶磁微粒化学发光检测试剂盒，该试剂盒包括：
偶联有甘油醛-3-磷酸脱氢酶单克隆抗体的磁微粒、10,10-二甲基-3,3-二磺基-9,9-二双吖啶(DMDSBA)标记的甘油醛-3-磷酸脱氢酶单克隆抗体、甘油醛-3-磷酸脱氢酶标准品、化学发光预激发液、化学发光激发液以及清洗液；
其中，化学发光预激发液为H2O2、乙腈、十二烷基羟丙基磷酸酯甜菜碱和水组成的混合液，H2O2的质量分数为0.01-2.5％，乙腈的质量分数为1～2％，十二烷基羟丙基磷酸酯甜菜碱的质量分数为0.01～1％，剩余为水；
所述化学发光激发液为NaOH、乙腈、十二烷基羟丙基磷酸酯甜菜碱和水组成的混合液，NaOH的浓度为0.05-1.0mol/L，乙腈的质量分数为1～2％，十二烷基羟丙基磷酸酯甜菜碱的质量分数为0.01～1％。
在本公开的一个或一些实施方式中，所述磁微粒化学发光检测试剂盒的检测样本为人血清样本或血浆样本或其它溶液。
在本公开的一个或一些实施方式中，所述磁微粒的表面修饰基团为一种或多种活性功能基团，包括但不限于羧基和氨基，所述磁微粒的内核为四氧化三铁，粒径为1.5～3μm，选择时应选分散性好、沉降速度慢的磁微粒。
在本公开的一个或一些实施方式中，偶联有甘油醛-3-磷酸脱氢酶单克隆抗体的磁微粒的形式为悬浮液，由甘油醛-3-磷酸脱氢酶单克隆抗体偶联的磁微粒和保存液(300mmol/L甘氨酸、2w/w％甘油、5w/w％蔗糖)组成，其中甘油醛-3-磷酸脱氢酶单克隆抗体的浓度为2.5～5μg/mL。
在本公开的一个或一些实施方式中，所述甘油醛-3-磷酸脱氢酶标准品的浓度分别为：0ng/mL、0.625ng/mL、1.25ng/mL、2.5ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、40ng/mL。
在本公开的一个或一些实施方式中，所述甘油醛-3-磷酸脱氢酶为重组人甘油醛-3-磷酸脱氢酶；所述的磁微粒可直接与甘油醛-3-磷酸脱氢酶单克隆抗体偶联。
在本公开的一个或一些实施方式中，所述清洗液为含有NaCl和Tween-20的Tris溶液，制备方法包括：称量3.05g Tris，8.775g NaCl至1000mL的烧杯中，加入l mL质量分数为0.05％Tween-20，搅拌混匀，将pH调至7.6后定容保存备用。
针对甘油醛-3-磷酸脱氢酶磁微粒的检测，本公开筛选优化了吖啶酯的种类，发现选择DMDSBA作为化学发光标记物，相比于其他的吖啶酯种类，比如NSP-DMAE-NHS、NSP-SA-NHS，更加容易与甘油醛-3-磷酸脱氢酶单克隆抗体结合，化学发光效果优异，使得灵敏度和准确度均有较好的提高。
经过试验验证，发明人发现现有的化学发光预激发液(H2O2和HNO3的混合液)和化学发光激发液(Triton X-100和NaOH的混合液)对DMDSBA的激发效果不稳定，从而使得发光效果较差，为此，发明人对化学发光预激发液和化学发光激发液进行了筛选优化，发现采用以表面张力较低两性离子作为增强剂，以乙腈作为稳定剂，能够使得DMDSBA发光强度较高，发光效果比较稳定，从而保证了检测的灵敏度和准确性。
在本公开的第二个典型的实施方式中，提供所述用于甘油醛-3-磷酸脱氢酶磁微粒化学发光检测试剂盒的制备方法，该方法包括以下步骤：
(1)甘油醛-3-磷酸脱氢酶单克隆抗体的制备：采用基因工程技术以大肠杆菌为载体制备重组人甘油醛-3-磷酸脱氢酶，将纯化后的甘油醛-3-磷酸脱氢酶免疫BALB/C小鼠，通过杂交瘤融合技术制备得到人甘油醛-3-磷酸脱氢酶单克隆抗体；
(2)磁微粒与甘油醛-3-磷酸脱氢酶单克隆抗体偶联：磁微粒通过EDC和NHS活化后与甘油醛-3-磷酸脱氢酶单克隆抗体偶联；
(3)DMDSBA标记的甘油醛-3-磷酸脱氢酶单克隆抗体：将待标记的甘油醛-3-磷酸脱氢酶单克隆抗体加入标记缓冲液，然后与含有DMDSBA的DMF溶液混合均匀，避光反应，即得DMDSBA标记的甘油醛-3-磷酸脱氢酶单克隆抗体。
在本公开的一个或一些实施方式中，步骤(2)中，偶联抗体缓冲液为pH5.0-6.0，浓度为20-200mmol/L的2-吗啉乙磺酸缓冲液。
在本公开的一个或一些实施方式中，步骤(3)中，标记缓冲液是pH 8.0-11.0、浓度为0.01-0.15mol/L的Na2CO3-NaHCO3缓冲液。
在本公开的第三个典型的实施方式中，一种利用所述的磁微粒化学发光检测试剂盒进行甘油醛-3-磷酸脱氢酶含量检测的方法，包括以下步骤:
(1)标准曲线的建立：向偶联有甘油醛-3-磷酸脱氢酶单克隆抗体的磁微粒的混悬液中分别加入不同浓度的标准品溶液，然后分别加入稀释后的DMDSBA标记的甘油醛-3-磷酸脱氢酶单克隆抗体，水浴后离心，加入清洗液，震荡离心，去除上清并依此方法重复洗涤3-5次，然后向反应体系中依次加入化学发光预激发液和化学发光激发液，混匀，在化学发光检测仪上检测，检测波长430～450nm，得到不同浓度的标准品溶液的发光值，根据该发光值绘制标准曲线；
(2)样品的检测：将待检测样品加入偶联有甘油醛-3-磷酸脱氢酶单克隆抗体的磁微粒的混悬液中，再加入稀释后的酶标抗体，然后按照步骤(1)中的方法进行操作，得到待检测样品的发光值，将该发光值与所述标准曲线进行比对计算，得到待检测样品中甘油醛-3-磷酸脱氢酶的含量。
为了使得本领域技术人员能够更加清楚地了解本公开的技术方案，以下将结合具体的实施例详细说明本公开的技术方案。
实施例1
1、一种用于甘油醛-3-磷酸脱氢酶磁微粒化学发光检测试剂盒，该试剂盒包括：
1)偶联有甘油醛-3-磷酸脱氢酶单克隆抗体的磁微粒；
其相应的混悬液的制备方法为：
a.活化：将质量比1：1：1的磁微粒、EDC和NHS混合，然后加入2-吗啉乙磺酸缓冲液(pH为6.0)中，使磁微粒浓度为5mg/ml，在27℃下活化30min；
b.偶联：将活化后的磁微粒溶液与甘油醛-3-磷酸脱氢酶单克隆抗体混合，然后在27℃下孵育40min，其中，磁微粒的羧基与抗体的摩尔比为125:1；
c.封闭：将反应后的磁微粒用洗液(TBS缓冲液)洗涤3次，然后加入含有0.5w/w％甘氨酸、0.5w/w％牛血清白蛋白、0.05w/w％Triton X-100、pH为7.4的磷酸盐缓冲液，使磁微粒浓度为5mg/ml，在27℃下封闭1h；
d.保存：将封闭后的磁微粒用洗液洗涤3次，置于保存液(300mmol/L甘氨酸、2w/w％甘油、5w/w％蔗糖)中进行保存；
2)DMDSBA标记的甘油醛-3-磷酸脱氢酶单克隆抗体；
其制备方法为：
a.取待标记甘油醛-3-磷酸脱氢酶单克隆抗体50μg，加入标记缓冲液(标记缓冲液是pH 8.0-11.0、浓度为0.01-0.15mol/L的Na2CO3-NaHCO3缓冲液)至体积为300μl；
b.称取2mg的DMDSBA，溶于450μL二甲基甲酰胺(DMF)中，配成DMDSBA DMF溶液；
c.将步骤a中的混合溶液和步骤b中的DMDSBA DMF溶液混合均匀，DMDSBA与甘油醛-3-磷酸脱氢酶单克隆抗体的摩尔比为8:1，震荡，避光室温下反应1h；加入100μL浓度为10g/L的赖氨酸，静置15min，使标记反应终止；
d.将步骤c反应后将产物转移至透析袋中，透析液为pH为7.4的20mM PBS缓冲液，2～8℃避光透析，每隔2h换一次PBS缓冲液，共更换3次，以除去未标记的DMDSBA；将标记物取出，加入封闭液(1％BSA)后分装冰冻保存。
3)一系列甘油醛-3-磷酸脱氢酶标准品溶液；
其浓度分别为：0ng/mL、0.625ng/mL、1.25ng/mL、2.5ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、40ng/mL。
4)化学发光预激发液和化学发光激发液；
所述化学发光预激发液为H2O2、乙腈、十二烷基羟丙基磷酸酯甜菜碱和水的混合液，H2O2的质量分数为0.05％，乙腈的质量分数为1％，十二烷基羟丙基磷酸酯甜菜碱的质量分数为0.05％，剩余为水；
所述化学发光激发液为NaOH、乙腈、十二烷基羟丙基磷酸酯甜菜碱和水的混合液，NaOH的浓度为1.0mol/L，乙腈的质量分数为1％，十二烷基羟丙基磷酸酯甜菜碱的质量分数为0.05％。
5)清洗液：称量3.05g Tris，8.775g NaCl至1000mL的烧杯中，加入l mL质量分数为0.05％Tween-20，搅拌混匀，将pH调至7.6后定容保存备用。
该试剂盒适用于确定受试者是否患有癌症或处于患癌风险中；用于肝癌、肺癌、乳腺癌、胃癌、食道癌、结直肠癌、胰腺癌、宫颈癌、淋巴瘤、甲状腺瘤等癌症进展阶段的分类；用于对肝癌、肺癌、乳腺癌、胃癌、食道癌、结直肠癌、胰腺癌、宫颈癌、淋巴瘤、甲状腺瘤患者进行病情监测和/或疗效评价。
该试剂盒检测样本为人血清样本。
实施例2
利用实施例1所述的甘油醛-3-磷酸脱氢酶的磁微粒化学发光检测试剂盒进行检测的步骤为:
(1)在反应杯中加入待测样本50μL，再加入磁颗粒偶联悬浮液150μL，振荡混匀，37℃孵育8min。
(2)分离，清洗3次，将洗涤后的反应容器充分振荡使磁微粒散开。
(3)向反应杯中加入DMDSBA标记物150μL，振荡混匀，37℃孵育7min。
(4)分离，清洗3次，将洗涤后的反应容器充分振荡使磁微粒散开。
(5)加入100μL化学发光预激发液，1s后加入100μL化学发光激发液，测量其相对发光强度，样本中甘油醛-3-磷酸脱氢酶的含量与其相对发光强度成一定比例关系。
实施例3实施例1试剂盒的灵敏度
用零浓度校准品作为样本进行检测，重复测定9次，得出9次测量结果的发光值(RLU值)，计算其平均值(M)和标准差(SD)，得出M+2SD所对应的RLU值,根据试剂盒所用校准品的定标曲线方程，将M+2SD所对应的RLU值带入标准曲线中，求出对应的浓度值，即为检测限。
Figure BDA0001868556460000081
实施例4实施例1试剂盒的准确度
取5ng/ml浓度标准品进行检测。重复测量3次后，其平均结果记为M，根据公式(1)计算测量浓度的相对偏差。
公式(1)：B＝(M－T)/T×100％
式中：
B－相对偏差；
M－测量浓度3次结果的平均值；
T－准确度参考品的浓度。
Figure BDA0001868556460000082
实施例5实施例1试剂盒的重复性
用5ng/ml浓度水平的样本各重复检测8次，计算8次测量浓度结果的平均值M和标准差SD，根据公式(2)得出变异系数CV。
公式(2)：CV＝SD/M×100％
式中：
CV－变异系数；
SD－8次测量结果的标准差；
M－8次测量结果的平均值。
Figure BDA0001868556460000083
Figure BDA0001868556460000091
本公开对不同的化学发光化学体系进行的对比试验，包括但不限于以下试验，每组重复三次，取平均值。
对比例1
与实施例1的区别是：化学发光标记物为NSP-DMAE-NHS。
对比例2
与实施例1的区别是：化学发光标记物为NSP-SA-NHS。
对比例3
与实施例1的区别是：化学发光预激发液由H2O2和HNO3组成。其中，H2O2的质量分数为2.0％，HNO3的浓度为1.2mol/L。化学发光激发液由Triton X-100和NaOH的混合液组成。其中，Triton X-100的质量分数为1.0％，NaOH的浓度为0.4mol/L。
对比例4
与实施例1的区别是：化学发光预激发液为H2O2、DMF、Tween-20和水的混合液，H2O2的质量分数为0.05％，DMF的质量分数为1％，Tween-20的质量分数为0.05％，剩余为水；所述化学发光激发液为NaOH、DMF、Tween-20和水的混合液，NaOH的浓度为1.0mol/L，DMF的质量分数为1％，Tween-20的质量分数为0.05％。
取浓度为5ng/ml标准品按照实施例2的方法进行检测化学发光强度的大小，结果如图2所示，从图2可以看出本公开实施例1的化学发光体系的增强发光效果十分优异，化学发光稳定性好，与其他化学发光体系差异较为明显；而且经过试验验证，采用本公开实施例1的化学发光体系其最终的检测结果的灵敏度更低、准确度和重复性更好。
上述实施例为本公开较佳的实施方式，但本公开的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本公开的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本公开的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种用于甘油醛-3-磷酸脱氢酶磁微粒化学发光检测试剂盒，其特征是，该试剂盒包括：
偶联有甘油醛-3-磷酸脱氢酶单克隆抗体的磁微粒、10,10-二甲基-3,3-二磺基-9,9-二双吖啶(DMDSBA)标记的甘油醛-3-磷酸脱氢酶单克隆抗体、甘油醛-3-磷酸脱氢酶标准品、化学发光预激发液、化学发光激发液以及清洗液；
其中，化学发光预激发液为H2O2、乙腈、十二烷基羟丙基磷酸酯甜菜碱和水组成的混合液，H2O2的质量分数为0.01-2.5％，乙腈的质量分数为1～2％，十二烷基羟丙基磷酸酯甜菜碱的质量分数为0.01～1％，剩余为水；
所述化学发光激发液为NaOH、乙腈、十二烷基羟丙基磷酸酯甜菜碱和水组成的混合液，NaOH的浓度为0.05-1.0mol/L，乙腈的质量分数为1～2％，十二烷基羟丙基磷酸酯甜菜碱的质量分数为0.01～1％。
2.如权利要求1所述的磁微粒化学发光检测试剂盒，其特征是：偶联有甘油醛-3-磷酸脱氢酶单克隆抗体的磁微粒的形式为悬浮液，由甘油醛-3-磷酸脱氢酶单克隆抗体偶联的磁微粒和保存液组成，其中甘油醛-3-磷酸脱氢酶单克隆抗体的浓度为2.5～5μg/mL。
3.如权利要求1所述的磁微粒化学发光检测试剂盒，其特征是：所述甘油醛-3-磷酸脱氢酶标准品的浓度分别为：0ng/mL、0.625ng/mL、1.25ng/mL、2.5ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、40ng/mL。
4.如权利要求1所述的磁微粒化学发光检测试剂盒，其特征是：所述磁微粒的表面修饰有羧基，所述磁微粒的内核为四氧化三铁，粒径为1.5～3μm。
5.如权利要求1所述的磁微粒化学发光检测试剂盒，其特征是：所述清洗液为含有NaCl和Tween-20的Tris溶液。
6.如权利要求1所述的磁微粒化学发光检测试剂盒，其特征是：所述化学发光预激发液为H2O2、乙腈、十二烷基羟丙基磷酸酯甜菜碱和水的混合液，H2O2的质量分数为0.05％，乙腈的质量分数为1％，十二烷基羟丙基磷酸酯甜菜碱的质量分数为0.05％，剩余为水；
所述化学发光激发液为NaOH、乙腈、十二烷基羟丙基磷酸酯甜菜碱和水的混合液，NaOH的浓度为1.0mol/L，乙腈的质量分数为1％，十二烷基羟丙基磷酸酯甜菜碱的质量分数为0.05％。
7.权利要求1～6中任一项所述的用于甘油醛-3-磷酸脱氢酶磁微粒化学发光检测试剂盒的制备方法，其特征是，该方法包括：
(1)甘油醛-3-磷酸脱氢酶单克隆抗体的制备：采用基因工程技术以大肠杆菌为载体制备重组人甘油醛-3-磷酸脱氢酶，将纯化后的甘油醛-3-磷酸脱氢酶免疫BALB/C小鼠，通过杂交瘤融合技术制备得到人甘油醛-3-磷酸脱氢酶单克隆抗体；
(2)磁微粒与甘油醛-3-磷酸脱氢酶单克隆抗体偶联：磁微粒通过EDC和NHS活化后与甘油醛-3-磷酸脱氢酶单克隆抗体偶联；
(3)DMDSBA标记的甘油醛-3-磷酸脱氢酶单克隆抗体：将待标记的甘油醛-3-磷酸脱氢酶单克隆抗体加入标记缓冲液，然后与含有DMDSBA的DMF溶液混合均匀，避光反应，即得DMDSBA标记的甘油醛-3-磷酸脱氢酶单克隆抗体。
8.如权利要求7所述的制备方法，其特征是：步骤(2)中，偶联抗体缓冲液为pH5.0-6.0，浓度为20-200mmol/L的2-吗啉乙磺酸缓冲液。
9.如权利要求7所述的制备方法，其特征是：步骤(3)中，标记缓冲液是pH 8.0-11.0、浓度为0.01-0.15mol/L的Na2CO3-NaHCO3缓冲液。
10.一种利用权利要求1～6中任一项所述的磁微粒化学发光检测试剂盒进行甘油醛-3-磷酸脱氢酶含量检测的方法，其特征是，包括以下步骤:
(1)标准曲线的建立：向偶联有甘油醛-3-磷酸脱氢酶单克隆抗体的磁微粒的混悬液中分别加入不同浓度的标准品溶液，然后分别加入稀释后的DMDSBA标记的甘油醛-3-磷酸脱氢酶单克隆抗体，水浴后离心，加入清洗液，震荡离心，去除上清并依此方法重复洗涤3-5次，然后向反应体系中依次加入化学发光预激发液和化学发光激发液，混匀，在化学发光检测仪上检测，得到不同浓度的标准品溶液的发光值，根据发光值绘制标准曲线；
(2)样品的检测：将待检测样品加入偶联有甘油醛-3-磷酸脱氢酶单克隆抗体的磁微粒的混悬液中，再加入稀释后的酶标抗体，然后按照步骤(1)中的方法进行操作，得到待检测样品的发光值，将该发光值与所述标准曲线进行比对计算，得到待检测样品中甘油醛-3-磷酸脱氢酶的含量。
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