CN111184742A - Trem-2+t细胞在制备用于治疗结核病药物中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及生物制药技术领域，尤其涉及TREM‑2+T细胞在制备用于治疗结核病药物中的应用，本发明的有益效果：首次将TREM‑2+T细胞应用制备治疗结核病的药物，利用上述药物可以实现对结核病的免疫治疗，可以降低肺部结核杆菌、减轻炎症；此外因为TREM‑2+T细胞来源于患者自体外周血，不存在排斥，反应适于结核病的综合治疗；本发明采用流式细胞分选、白介素‑2刺激体外培养扩增和洗涤的过程制备用于治疗结核病的TREM‑2+T细胞，制备过程更加科学高效。

Description

TREM-2+T细胞在制备用于治疗结核病药物中的应用
技术领域
本发明涉及生物制药技术领域，尤其涉及TREM-2+T细胞在制备用于治疗结核病药物中的应用。
背景技术
结核病是我国的健康医疗问题，当前临床主要通过化学药物治疗。然而长期化疗容易导致结核分枝杆菌产生耐药性。随着高耐药率和耐药菌的播散，结核病的治疗愈来愈严峻。因此，开发治疗结核病和耐药结核病的新方案十分迫切。近年来，生物治疗领域进行了众多尝试，如细胞免疫治疗、细胞因子、单克隆抗体等。其中细胞治疗是通过体外激活、扩增自体或异体的免疫效应细胞，再回输给患者，起到杀伤目标细胞和提高患者免疫功能等作用。细胞免疫治疗是未来难治性结核病综合治疗的重要组成部分。
TREM-2是髓系细胞诱发受体2，是一种新型炎症激发受体，属于免疫球蛋白超家族的球蛋白，TREM-2+T细胞是一种髓系细胞诱发受体2阳性的T细胞。本发明创新的采用TREM-2+T细胞制备用于治疗结核病药物，并提供一种用于治疗结核病的TREM-2+T细胞的制备方法。
发明内容
本发明的目的是提供一种TREM-2+T细胞在制备用于治疗结核病药物中的应用；本发明的另一个目的是提供一种用于治疗结核病的TREM-2+T细胞的制备方法。
为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：
本发明的第一个方面是提供一种TREM-2+T细胞在制备用于治疗结核病药物中的应用；
优选地，所述TREM-2+T细胞来源于自体外周血。
优选地，所述治疗结核病药物采用静脉注射药剂剂型。
优选地，所述治疗结核病药物采用尾静脉注射的方式输入病人体内。
本发明的另一个方面是提供一种用于治疗结核病的TREM-2+T细胞的制备方法，包括以下步骤：步骤一，流式细胞分选，抽取外周血，采用流式分选法获得自体TREM-2+T细胞；步骤二，白介素-2刺激体外培养扩增，将步骤一获得的自体TREM-2+T细胞加入培养基，然后加入10-40ng/ml的白介素-2，体外培养10-20天，每隔2-4天更换培养基和白介素-2；步骤三，洗涤，采用生理盐水洗涤细胞3-5次，得到用于治疗结核病药物的TREM-2+T细胞。
优选地，所述步骤二中白介素-2的浓度为10-40ng/ml，优选为15-25ng/ml，最优为10-40ng/ml。
优选地，所述步骤二中体外培养天数为10-20天，优选为13-15天，最优为14天。
优选地，所述步骤二中更换培养基和白介素-2的频率为2-4天，优选为2-3天，最优为3天。
优选地，所述步骤二中生理盐水洗涤细胞次数为3-5次，优选为3-4次，最优为3次。
与现有技术相比，本发明的有益效果：
本发明首次将TREM-2+T细胞应用制备治疗结核病的药物，利用上述药物可以实现对结核病的免疫治疗，可以降低肺部结核杆菌、减轻炎症；此外因为TREM-2+T细胞来源于患者自体外周血，不存在排斥反应，适于结核病的综合治疗；本发明采用流式细胞分选、白介素-2刺激体外培养扩增和洗涤的过程制备用于治疗结核病的TREM-2+T细胞，制备过程更加科学高效。
附图说明
图1为输入TREM-2+T细胞受体小鼠肺部和脾脏的结核杆菌数量对比图；
图2为输入TREM-2+T细胞受体小鼠肺部结核肉芽肿数量对比图。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明进行详细说明，但是本发明可以由权利要求限定和覆盖的多种不同方式实施。
实施例1
实验准备：
（1）TREM-2的特异性荧光抗体；（2）T细胞的特异性荧光抗体；（3）10%胎牛血清的1640培养基；（4）白介素-2；（5）感染结核杆菌的受体小鼠；（6）TREM-2-T细胞（即阴性T细胞）。
实验步骤：
（1）抽取外周血20ml，采用淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞；
（2）染色标记TREM-2+T细胞；
（3）流式分选仪分选纯化TREM-2+T细胞；
（4）加入培养基和白介素-2（20ng/ml）体外培养14天，每隔3天换一次培养基和白介素-2；
（5）生理盐水洗涤细胞3次，静脉注射至受体小鼠体内。
（6）疗效判定：以不注射细胞、注射TREM-2-T细胞（即阴性T细胞）为对照，检测受体小鼠肺部和脾脏的结核杆菌数量（结果如图1），及肺部结核肉芽肿（结果如图2）。
实验结果：
结核杆菌数量结果见图1，与不输入T细胞（no T cell）组相比，回输T细胞（包括TREM-2-和TREM-2+T细胞）肺部和脾脏的菌量明显减少。与回输TREM-2-T细胞相比，回输TREM-2+T细胞肺部和脾脏的菌量明显减少。
肺部肉芽肿结果见图2，与不输入T细胞（no T cell）组相比，回输T细胞（包括TREM-2-和TREM-2+T细胞）肺部肉芽肿体积减小，数量减少。与回输TREM-2-T细胞相比，回输TREM-2+T细胞肺部肉芽肿体积减小，数量减少。
从以上实施例可以看出本发明可以有效降低肺部结核杆菌、减轻炎症，适于结核病的综合治疗。
以上所述仅为发明的优选实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书内容所作的简单修改或变换，或直接或间接运用在其他相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。

Claims (9)

1.TREM-2+T细胞在制备用于治疗结核病药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述TREM-2+T细胞来源于自体外周血。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述治疗结核病药物采用静脉注射药剂剂型。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述治疗结核病药物采用尾静脉注射的方式输入病人体内。
5.一种用于治疗结核病的TREM-2+T细胞的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
步骤一，流式细胞分选，抽取外周血，采用流式分选法获得自体TREM-2+T细胞；
步骤二，白介素-2刺激体外培养扩增，将步骤一获得的自体TREM-2+T细胞加入培养基，然后加入10-40ng/ml的白介素-2，体外培养10-20天，每隔2-4天更换培养基和白介素-2；
步骤三，洗涤，采用生理盐水洗涤细胞3-5次，得到用于治疗结核病药物的TREM-2+T细胞。
6.根据权利要求5所述的一种用于治疗结核病的TREM-2+T细胞的制备方法，其特征在于所述步骤二中白介素-2的浓度为10-40ng/ml，优选为15-25ng/ml，最优为10-40ng/ml。
7.根据权利要求5所述的一种用于治疗结核病的TREM-2+T细胞的制备方法，其特征在于所述步骤二中体外培养天数为10-20天，优选为13-15天，最优为14天。
8.根据权利要求5所述的一种用于治疗结核病的TREM-2+T细胞的制备方法，其特征在于所述步骤二中更换培养基和白介素-2的频率为2-4天，优选为2-3天，最优为3天。
9.根据权利要求5所述的一种用于治疗结核病的TREM-2+T细胞的制备方法，其特征在于所述步骤二中生理盐水洗涤细胞次数为3-5次，优选为3-4次，最优为3次。
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