CN111172251A - RT-qPCR法检测树鼩SLC22A8基因转录水平的方法、试剂盒及引物 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种RT‑qPCR法检测树鼩SLC22A8基因转录水平的方法、试剂盒及引物，属于分子生物技术领域。该方法包括cDNA第一链的合成、健康树鼩GAPDH基因、SLC22A8基因的扩增、标准曲线的建立、待测树鼩GAPDH基因、SLC22A8基因的扩增、树鼩SLC22A8基因转录水平的定量五大步骤。本发明操作简单，可重复性高，特异性强，灵敏度好，能够对树鼩SLC22A8基因转录水平进行定量检测，易于推广应用。

Description

RT-qPCR法检测树鼩SLC22A8基因转录水平的方法、试剂盒及 引物

技术领域

本发明属于分子生物技术领域，具体涉及一种RT-qPCR法检测树鼩SLC22A8基因转录水平的方法、试剂盒及引物。

背景技术

SLC22A8基因在基因库中的代码为SLC22A8基因，属SLC22A(有机阴离子转运蛋白)家族，SLC22A8基因主要在近曲肾小管上皮细胞的基侧膜上表达，在肝脏、肠和大脑亦有分布。其介导有机阴离子进入其分布的细胞，进而参与多种药物在肾脏的分泌、重吸收和在体内的分布等。主要转运体内内源性及外源性有机阴离子，在药物和毒物的排泄中发挥重要作用，尿酸的排泄是主要依靠肾小管中SLC22A8基因表达的一种内源性有机阴离子完成的。SLC22A8基因表达降低，肾脏分泌减少有机阴离子积累，导致肾脏炎症。

高尿酸血症是由于尿酸盐沉积或尿酸代谢障碍所致血清尿酸水平增高所引起的一种代谢性疾病，正常嘌呤饮食状态下，非同日2次空腹血尿酸水平，男性＞420微摩尔/升，女性＞360微摩尔/升，即可判定为高尿酸血症，近年来发病率不断上升。尿酸水平越高、高尿酸持续的时间越长，则发生痛风的可能性就越大。高尿酸血症的危害并不仅限于痛风发作，过高的尿酸水平会加剧动脉粥样硬化，损伤血管，所以很多高尿酸血症患者虽然没有出现痛风，但很可能会出现肾病、冠心病、高血压、肾脏结石等疾病。动物模型作为研究疾病发病机制和药理药效的一种方法在科学发展中有着非常重要的作用。研究显示血尿酸是肾功能异常的独立危险因素，其对肾功能的影响甚至超过尿蛋白。高尿酸血症对全身的健康状况都会带来影响，多项研究发现，高尿酸血症与心血管疾病、肾脏疾病、代谢综合征的发生、发展有密切关联，体内高尿酸水平也可增加癌症患者的病死率。反之，肾脏是体内调控尿酸排泄的重要器官，所以肾损伤又会阻碍尿酸的排泄，使得血尿酸浓度进一步升高，所以高尿酸血症和肾功能损害是相互作用的，在临床上表现为痛风性性肾病、急性高尿酸肾病、尿酸结石等。可见研究血尿酸升高导肾损伤的发病因素对于治疗肾损伤疾病和高尿酸血症都至关重要。同时探讨高尿酸血症的发病机理和建立动物模型对于攻克高尿酸血症尤为重要。

文献报道中对SLC22A8基因的研究主要集中在其结构、功能上，然对SLC22A8基因转录水平的研究也极其重要，目前，采用基因编辑技术敲除SLC22A8基因的研究可以进一步探索SLC22A8基因的作用机制，故建立一种可靠的，高效的基因转录水平检测方法就很有必要。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有技术的不足，提供一种RT-qPCR法检测树鼩SLC22A8基因转录水平的方法、试剂盒及引物。本发明引物灵敏度高，产物单一，对树鼩肝脏、肾脏、小肠都能高效的定量检测SLC22A8基因转录水平，为SLC22A8基因和其表达产物SLC22A8基因的进一步研究打下基础。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

用于非诊断目的RT-qPCR法检测树鼩SLC22A8基因转录水平的方法，包括如下步骤：

步骤（1），cDNA第一链的合成：

分别以健康和待测树鼩新鲜组织提取的总RNA为模板，逆转录合成得树鼩肾脏组织cDNA第一链；所述的新鲜组织为新鲜肾脏、肝脏、小肠组织；

步骤（2），健康树鼩GAPDH基因、SLC22A8基因的扩增：

以Easy dilution梯度稀释步骤（1）得到的健康树鼩组织cDNA第一链，分别以未稀释cDNA第一链及稀释后的cDNA为模板，进行实时荧光定量检测，并分别以SLC22A8 F和SLC22A8 R、GAPDH F和GAPDH R为特异性引物，进行实时荧光定量PCR扩增，分别得到健康树鼩GAPDH基因、SLC22A8基因的溶解曲线和扩增曲线；

步骤（3），标准曲线的建立：

以起始模板量拷贝数Log₁₀的对数值为X轴，以Ct值为Y轴进行绘制，分别得到GAPDH基因、SLC22A8基因的标准曲线；

步骤（4），待测树鼩GAPDH基因、SLC22A8基因的扩增：

将步骤（1）得到的待测树鼩组织cDNA第一链分别以SLC22A8 F和SLC22A8 R、GAPDH F和GAPDH R为特异性引物，进行实时荧光定量PCR扩增，扩增体系和扩增程序与步骤（2）相同，分别得到待测树鼩GAPDH基因、SLC22A8基因的溶解曲线和扩增曲线；

步骤（5），树鼩SLC22A8基因转录水平的定量：

根据步骤（2）得到的标准曲线进行计算，得到树鼩SLC22A8基因转录水平；

所述的SLC22A8 F、SLC22A8 R、GAPDH F、GAPDH R引物的序列如下：

SLC22A8 F：5＇-cagtcatccggcaaagaggt-3＇；

SLC22A8 R：5＇-caggaagggcttcacctcag-3＇；

GAPDH F：5＇-agccccatcaccatcttcc-3＇；

GAPDH R：5＇-aatgagccccagccttctc-3＇。

所述的SLC22A8 F、SLC22A8 R、GAPDH F、GAPDH R引物的序列如下：

SLC22A8 F：5＇-cagtcatccggcaaagaggt-3＇；

SLC22A8 R：5＇-caggaagggcttcacctcag-3＇；

GAPDH F：5＇-agccccatcaccatcttcc-3＇；

GAPDH R：5＇-aatgagccccagccttctc-3＇。

基于实时荧光定量检测的原理，即每个模板的Cq值与该模板的起始拷贝数的对数存在线性关系，公式如下：Cq=-1/lg(1+Ex)*lgX0+lgN/lg(1+Ex)（n为扩增反应的循环次数，X0为初始模板量，Ex为扩增效率，N为荧光扩增信号达到阈值强度时扩增产物的量。）起始拷贝数越多，Cq值越小。利用已知起始拷贝数的标准品可作出标准曲线，其中横坐标代表起始拷贝数的对数，纵坐标代Cq值。因此，获得未知样品的Cq值，即可从标准曲线上计算出该样品的起始拷贝数。所以根据步骤（2）得到的标准曲线和每个样品的Cq值，利用Bio-Rad CFXManager 3.1软件中自带的基因表达计算功能就能得到树鼩SLC22A8基因转录水平。

进一步，优选的是，以Easy dilution梯度稀释步骤（1）树鼩组织cDNA第一链，梯度稀释倍数分别为5倍、25倍、125倍、625倍。

进一步，优选的是，实时荧光定量PCR扩增体系下：SYBR Premix Ex Taq II (2x)5μL，上、下游引物各0.4μL，cDNA模板0.8μL，去离子水3.4μL，总计10μL；上、下游引物浓度均为10μM；

实时荧光定量PCR扩增程序为：95℃预变性30s，95℃变性10s、60℃退火30s、40个循环。

本发明同时提供检测树鼩SLC22A8基因转录水平的引物，包括树鼩SLC22A8基因表达水平的特异性上、下游引物和作为内参基因的树鼩GAPDH基因的特异性上、下游引物；

其中，树鼩SLC22A8基因表达水平的特异性上、下游引物序列如下：

SLC22A8 F：5＇-cagtcatccggcaaagaggt-3＇；

SLC22A8 R：5＇-caggaagggcttcacctcag-3＇；

作为内参基因的树鼩GAPDH基因的特异性上、下游引物序列如下：

GAPDH F：5＇-agccccatcaccatcttcc-3＇；

GAPDH R：5＇-aatgagccccagccttctc-3＇。

本发明另外提供上述检测树鼩SLC22A8基因转录水平的引物的试剂盒。

进一步，优选的是，还包括SYBR Premix Ex Taq II (2x)。

本发明同时提供上述引物或试剂盒在非诊断目的检测树鼩SLC22A8基因转录水平的应用。

在检测时，当溶解曲线上峰不唯一时，则说明实验中存在污染，需要重新进行检测。

本发明与现有技术相比，其有益效果为：

本发明提供的是一种用RT-qPCR法检测树鼩SLC22A8基因转录水平的方法、试剂盒及引物，应用本发明可实现对树鼩GAPDH基因及SLC22A8基因的特异性扩增，同时对材料中非目的基因并没有扩增信号，通过本发明可对树鼩SLC22A8基因转录水平的变化情况实施定量检测，其操作简便快捷，反应灵敏，特异性良好，可重复性较高，具有一定使用价值，本发明为研究树鼩SLC22A8基因的功能及影响因素提供了一种有效的检测工具，为今后临床标本中的SLC22A8基因表达情况的检测提供参考性技术。

附图说明

图1为树鼩GAPDH基因的扩增曲线；

图2为树鼩GAPDH基因的标准曲线；

图3为树鼩SLC22A8基因的扩增曲线；

图4为树鼩SLC22A8基因的标准曲线；

图5为树鼩GAPDH基因在肾脏的表达扩增曲线；

图6为树鼩GAPDH基因在肾脏的表达熔解峰；

图7为树鼩SLC22A8基因在肾脏的表达扩增曲线；

图8为树鼩SLC22A8基因在肾脏的表达熔解峰；

图9为树鼩SLC22A8基因在肾脏的表达相对表达；

图10为树鼩GAPDH基因在肝脏的表达扩增曲线；

图11为树鼩GAPDH基因在肝脏的表达熔解峰；

图12为树鼩SLC22A8基因在肝脏的表达扩增曲线；

图13为树鼩SLC22A8基因在肝脏的表达熔解峰；

图14为树鼩SLC22A8基因在肝脏的表达相对表达；

图15为树鼩GAPDH基因在小肠的表达扩增曲线；

图16为树鼩GAPDH基因在小肠的表达熔解峰；

图17为树鼩SLC22A8基因在小肠的表达扩增曲线；

图18为树鼩SLC22A8基因在小肠的表达熔解峰；

图19为树鼩SLC22A8基因在小肠的表达相对表达；

图20为树鼩SLC22A8基因在肝、肾、小肠的表达产物胶图；其中，M：maker；1和2：SLC22A8基因肝脏扩增产物；3和4：SLC22A8基因肾脏扩增产物；5和6：SLC22A8基因小肠扩增产物。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步的详细描述。

本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用材料或设备未注明生产厂商者，均为可以通过购买获得的常规产品。

下述实施例中所使用的试验方法，如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所使用的材料试剂等，如无特殊说明，均为商业途径得到。

1、本实施例中所使用的实验动物：树鼩，雌性9只，雄性10只。

2、实验动物的分组及给药：将做过空白血清检测的19只树鼩取出1只雄性树鼩待取肾脏组织做标准曲线，剩余18只树鼩随机分成对照组、30天给药组，120天给药组，各6只。雌雄各半，雌性体重均在110g~135g，雄性体重均在120g~150g。对照组每日腹腔注射（iP）质量浓度为1％羧甲基纤维素钠溶液（CMC-Na，1g羧甲基纤维素钠溶于100ml去离子水）40mg/kg，给药时间为120天，给药组以同样剂量ip注射氧嗪酸钾（OA），给药时间分别为30天和120天。

3.实验方法

3.1树鼩肾脏、肝脏、小肠各组织的采集

取肾脏、肝脏、小肠各组织置于RNA助溶剂（Tripure，Roche公司）用于SLC22A8基因转录水平的检测。

3.2肾脏、肝脏、小肠各组织总RNA的提取

19只动物都取新鲜肾脏、肝脏、小肠各0.1g于匀浆器中，加入1mL Tripure在室温下充分匀浆，静置5min，再将其转移至1.5mL EP管中静置5min，加入200μL -20℃预冷的氯仿，漩涡震荡充分，静置15min后4℃、12000r/min离心25min，吸取上清液450μL于另一只1.5mL EP管中，等体积加入-20℃预冷的异丙醇，充分混匀静置10min，4℃、12000r/m离心10min，弃上清液，待管内壁稍干，加1mL -20℃预冷的体积百分浓度为75%的乙醇洗涤沉淀，4℃、7500r/m离心5min，弃上清液，待管内壁稍干，加入30μL DEPC水溶解沉淀，65℃水浴10min，所提取的总RNA样品取1μL经Nanodrop-1000超微量核酸测定仪测定浓度及吸光度比值。测定浓度后加DEPC水稀释至1000ng/μL，放入-80℃冰箱备用。

3.3 cDNA的合成

按照逆转录试剂盒PrimeScript™RT reagent Kit说明操作，每30μL体系中依次加入5×PrimeScript Buffer 6μL，PrimeScript RT Enzyme Mix 1.5μL，Oligo dT Primer 1.5μL，Random 6 mers 1.5μL，总RNA(浓度稀释为1000 ng/μL) 3μL，RNaseFree dH₂O 16.5μL，逆转录条件为：37℃ 15min，85℃ 5s，4℃ 10min。

3.4 目的基因引物的设计

根据NCBI基因库中树鼩的SLC22A8基因和GAPDH的基因序列，利用引物设计软件PimerExpress 5.0分别进行引物设计，经北京百泰克公司合成，GAPDH作为内参基因。

3.5 本实施例树鼩SLC22A8基因表达水平定量用引物序列及片段大小见表1

表1

3.6 目的基因荧光定量PCR反应体系的确定

按TAKARA生物有限公司产品PCR试剂（SYBR Premix Ex TaqII），在实时荧光定量仪CFX96 Real-Time System 上进行扩增和数据分析，PCR扩增体系如下： SYBR Premix ExTaq II (2x) 5μL，上、下游引物各0.4μL，cDNA模板0.8μL，去离子水3.4μL，总计10μL，上、下游引物浓度均为10μM；实时荧光定量PCR扩增程序为：95℃预变性30s，95℃变性10s、60℃退火30s、40个循环。

其中，所扩增的树鼩SLC22A8基因片段的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；所扩增的树鼩内参基因GAPDH片段的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。

3.7 树鼩GAPDH基因及SLC22A8基因标准曲线的建立：以Easy dilution 梯度稀释步骤3.3逆转录合成的未给药树鼩肾脏、肝脏、小肠cDNA第一链，分别依次对其5倍、25倍、125倍、625倍稀释，以原始cDNA第一链及稀释后的cDNA为模板，各做2个平行样进行实时荧光定量检测，按步骤3.6荧光定量PCR体系进行实时荧光定量PCR。。实时荧光定量检测的原理，即每个模板的Cq值与该模板的起始拷贝数的对数存在线性关系，公式如下：Cq=-1/lg(1+Ex)*lgX0+lgN/lg(1+Ex)（n为扩增反应的循环次数，X0为初始模板量，Ex为扩增效率，N为荧光扩增信号达到阈值强度时扩增产物的量。）起始拷贝数越多，Cq值越小。基于以上原理，利用Bio-Rad CFX Manager 3.1软件可得到SLC22A8基因和GAPDH基因在肾脏、肝脏、小肠的溶解曲线和标准曲线。

3.8 样品基因表达差异分析

根据步骤3.7得到的SLC22A8基因和GAPDH基因标准曲线和每个样品的Cq值，利用Bio-Rad CFX Manager 3.1软件中自带的基因表达计算功能就能得到树鼩SLC22A6基因转录水平。

4. 结果

4.1 树鼩SLC22A8基因荧光定量PCR反应的溶解曲线

由图8、图13、图16可见，在SLC22A8基因在肾脏、肝脏、小肠的扩增过程中荧光定量PCR反应的溶解曲线仅见单独的峰，反应产物的电泳结果仅见一条特意条带，表明扩增的目的片段特异性良好。

4.2 树鼩SLC22A8基因和GAPDH基因的标准曲线

由图2、图4可见，树鼩SLC22A8基因和GAPDH基因的标准曲线R²均接近1，说明以此标准曲线进行相对定量较准确，由于荧光强度均较强，故能保证荧光强度的增加与PCR的扩增相对同步，能准确检测PCR的表达，以GAPDH为内源控制物，得到mRNA表达水平的变化。

4.3 氧嗪酸钾所致的高尿酸血症树鼩肾脏、肝脏、小肠组织SLC22A8基因 mRNA表达水平的变化的定量检测

步骤2各组所获得的新鲜肾脏组织所提取的RNA，反转录得cDNA，经实时荧光定量PCR检测，可得各组SLC22A8基因 mRNA表达水平差异，腹腔注射40mg/kg剂量的氧嗪酸钾，SLC22A8基因在肾脏的mRNA表达水平，对照组为1.1，30天给药组1.0较对照组无明显下调，120天给药组为1.1较对照组无变化，见图9。

各组所获得的新鲜肝脏组织所提取的RNA，反转录得cDNA，经实时荧光定量PCR检测，可得各组SLC22A8基因 mRNA表达水平差异，腹腔注射40mg/kg剂量的氧嗪酸钾，SLC22A8基因在肝脏的mRNA表达水平，对照组为1.4，30天给药组为0.5，较对照组下调明显，120天给药组为0.7，较对照组下调明显，见图14。

各组所获得的新鲜小肠组织所提取的RNA，反转录得cDNA，经实时荧光定量PCR检测，可得各组SLC22A8基因 mRNA表达水平差异，腹腔注射40mg/kg剂量的氧嗪酸钾，SLC22A8基因在小肠的mRNA表达水平，对照组为1.0，30天给药组为0.7，较对照组下调不明显、120天给药组为0.9，较对照组无明显变化，见图19。

4.4 氧嗪酸钾（OA)是尿酸酶抑制剂，能通过抑制尿酸酶活性，减少尿酸的分解与排泄，使尿酸值升高，可造成树鼩高尿酸血症，在灵长类动物造模中运用较多，用于上述实施例可使SLC22A8基因mRNA表达上调；主要用于代谢综合征的辅助治疗以及降低癌症患者的病死率。说明本发明可用于SLC22A8基因mRNA表达水平的检测，为研究树鼩SLC22A8基因的功能及影响因素提供了有效工具，为高尿酸血症等疾病的研究提供可靠手段。

以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。

序列表

SEQ ID NO.1

cagtcatccg gcaaagaggt 20

SEQ ID NO.2

caggaagggc ttcacctcag 20

SEQ ID NO.3

agccccatca ccatcttcc 19

SEQ ID NO.4

aatgagcccc agccttctc 19

SEQ ID NO.5

cagtcatccg gcaaagaggt atgggcatag gtaacgtgtg ggcccgcatt ggaagcatga 60

tatccccact ggtgaaaatc acatctgag 89

SEQ ID NO.6

ggcacagtca aggctgagaa tgggaagctg gtcatcaacg ggaaacccat caccatcttc 60

caggagcgag atcccgctaa catcaaatgg ggtgatgctg gtgctgagta tgtcgtggag 120

tctactggcg tcttcaccac cat 143

序列表

<110> 中国医学科学院医学生物学研究所

<120> RT-qPCR法检测树鼩SLC22A8基因转录水平的方法、试剂盒及引物

<160> 6

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列()

<400> 1

cagtcatccg gcaaagaggt 20

<210> 2

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列()

<400> 2

caggaagggc ttcacctcag 20

<210> 3

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列()

<400> 3

agccccatca ccatcttcc 19

<210> 4

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列()

<400> 4

aatgagcccc agccttctc 19

<210> 5

<211> 89

<212> DNA

<213> 人工序列()

<400> 5

cagtcatccg gcaaagaggt atgggcatag gtaacgtgtg ggcccgcatt ggaagcatga 60

tatccccact ggtgaaaatc acatctgag 89

<210> 6

<211> 143

<212> DNA

<213> 人工序列()

<400> 6

ggcacagtca aggctgagaa tgggaagctg gtcatcaacg ggaaacccat caccatcttc 60

caggagcgag atcccgctaa catcaaatgg ggtgatgctg gtgctgagta tgtcgtggag 120

tctactggcg tcttcaccac cat 143

Claims (7)

1.用于非诊断目的RT-qPCR法检测树鼩SLC22A8基因转录水平的方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤（1），cDNA第一链的合成：

分别以健康和待测树鼩新鲜组织提取的总RNA为模板，逆转录合成得树鼩肾脏组织cDNA第一链；所述的新鲜组织为新鲜肾脏、肝脏、小肠组织；

步骤（2），健康树鼩GAPDH基因、SLC22A8基因的扩增：

以Easy dilution梯度稀释步骤（1）得到的健康树鼩组织cDNA第一链，分别以未稀释cDNA第一链及稀释后的cDNA为模板，进行实时荧光定量检测，并分别以SLC22A8 F和SLC22A8 R、GAPDH F和GAPDH R为特异性引物，进行实时荧光定量PCR扩增，分别得到健康树鼩GAPDH基因、SLC22A8基因的溶解曲线和扩增曲线；

步骤（3），标准曲线的建立：

以起始模板量拷贝数Log₁₀的对数值为X轴，以Ct值为Y轴进行绘制，分别得到GAPDH基因、SLC22A8基因的标准曲线；

步骤（4），待测树鼩GAPDH基因、SLC22A8基因的扩增：

将步骤（1）得到的待测树鼩组织cDNA第一链分别以SLC22A8 F和SLC22A8 R、GAPDH F和GAPDH R为特异性引物，进行实时荧光定量PCR扩增，扩增体系和扩增程序与步骤（2）相同，分别得到待测树鼩GAPDH基因、SLC22A8基因的溶解曲线和扩增曲线；

步骤（5），树鼩SLC22A8基因转录水平的定量：

根据步骤（2）得到的标准曲线进行计算，得到树鼩SLC22A8基因转录水平；

所述的SLC22A8 F、SLC22A8 R、GAPDH F、GAPDH R引物的序列如下：

SLC22A8 F：5＇-cagtcatccggcaaagaggt-3＇；

SLC22A8 R：5＇-caggaagggcttcacctcag-3＇；

GAPDH F：5＇-agccccatcaccatcttcc-3＇；

GAPDH R：5＇-aatgagccccagccttctc-3＇。

2.根据权利要求1所述的用于非诊断目的RT-qPCR法检测树鼩SLC22A8基因转录水平的方法，其特征在于，以Easy dilution梯度稀释步骤（1）树鼩组织cDNA第一链，梯度稀释倍数分别为5倍、25倍、125倍、625倍。

3.根据权利要求1所述的用于非诊断目的RT-qPCR法检测树鼩SLC22A8基因转录水平的方法，其特征在于，实时荧光定量PCR扩增体系下：SYBR Premix Ex Taq II (2x) 5μL，上、下游引物各0.4μL，cDNA模板0.8μL，去离子水3.4μL，总计10μL，上、下游引物浓度均为10μM；

实时荧光定量PCR扩增程序为：95℃预变性30s，95℃变性10s、60℃退火30s、40个循环。

4.检测树鼩SLC22A8基因转录水平的引物，其特征在于，包括树鼩SLC22A8基因表达水平的特异性上、下游引物和作为内参基因的树鼩GAPDH基因的特异性上、下游引物；

其中，树鼩SLC22A8基因表达水平的特异性上、下游引物序列如下：

SLC22A8 F：5＇-cagtcatccggcaaagaggt-3＇；

SLC22A8 R：5＇-caggaagggcttcacctcag-3＇；

作为内参基因的树鼩GAPDH基因的特异性上、下游引物序列如下：

GAPDH F：5＇-agccccatcaccatcttcc-3＇；

GAPDH R：5＇-aatgagccccagccttctc-3＇。

5.含有权利要求4所述的所述检测树鼩SLC22A8基因转录水平的引物的试剂盒。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，还包括SYBR Premix Ex Taq II (2x)。

7.权利要求4所述的引物、权利要求5或6所述的试剂盒在非诊断目的检测树鼩SLC22A8基因转录水平的应用。

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