CN111154782B - 一种苦豆子SaPOD基因的克隆及应用 - Google Patents

一种苦豆子SaPOD基因的克隆及应用 Download PDF

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Abstract

一种苦豆子SaPOD基因的克隆及应用属基因工程技术领域，本发明从苦豆子酵母表达文库中通过模拟逆境胁迫筛选出与抗盐相关的苦豆子基因，通过生物信息学分析确定其为苦豆子过氧化物酶基因SaPOD，利用RT‑PCR技术进行定量检测发现该基因在苦豆子的根、茎、叶片中均有表达，其中在根中表达量最高，且在盐处理条件下，根中表达量在处理4h明显提高，说明苦豆子SaPOD基因能够响应逆境胁迫。将该基因通过构建酵母表达载体和植物表达载体并成功转化酵母BY4743和拟南芥中进行功能验证，结果表明该基因在酵母和拟南芥中过表达后能够明显提高其耐盐性和耐旱性，这为通过基因工程技术提高作物的抗逆性提供了新的基因资源。

Description

一种苦豆子SaPOD基因的克隆及应用
技术领域
本发明属基因工程技术领域，具体涉及一种苦豆子过氧化物酶基因的获取、构建含有编码基因的重组载体在酵母菌BY4743中进行耐盐功能验证、构建植物过表达重组载体在拟南芥中进行耐逆性功能验证、同时利用实时荧光定量PCR（实时PCR，Real-Time-PCR，）的方法来研究该基因在非生物胁迫NaCl和PEG处理条件下的功能。
背景技术
全球土壤盐渍化是目前农业生产中的一个主要问题，全球大约有近20％的耕地受到盐害的威胁，43％的耕地分布在干旱、半干旱地区。盐害严重影响植物的生长发育，造成农作物减产，并使生态环境日益恶化。在自然条件下，由于环境胁迫而严重影响了作物生长发育，其遗传潜力难以发挥，盐渍不仅影响了作物的产量，而且限制了植物的广泛分布，因此，提高作物的耐盐能力已成为抗逆育种急需解决的关键问题之一。 随着分子生物学的发展和转基因技术的成熟，利用转基因技术提高植物的耐盐碱性，已在盐碱土壤改良方面得到广泛的应用。同时，以旱生、耐盐碱植物为研究材料，从中分离克隆得到耐盐碱性显著的基因，是获得抗性基因资源的有效方法。
苦豆子( Sophora alopecuroides. L) 为豆科槐属植物，别名、苦豆草、苦甘草等，为多年生草本、根茎地下芽旱生耐盐植物。其耐旱、耐盐碱性显著，是一个抗性基因丰富的基因资源库。因此，从苦豆子中筛选克隆盐胁迫相关基因，分析其耐盐性，阐明其相关功能，有助于对抗盐基因的进一步利用。
过氧化物酶( Peroxidase，POD) 是一种广泛存在于植物中的氧化还原酶，在结构上可以分为3 类，Ⅰ类为胞内过氧化物酶，包括抗坏血酸-过氧化物酶、细胞色素C-过氧化物酶等; Ⅱ类为胞外过氧化物酶，包括锰-过氧化物酶、木质素酶-过氧化物酶等; Ⅲ类是分泌过氧化物酶，如辣根过氧化物酶。分泌过氧化物酶是植物血红素依赖性过氧化物酶，催化涉及过氧化氢作为电子受体的多步氧化反应，含有4个保守的二硫键和2 个保守的钙结合位点。最常见的是Ⅲ类分泌过氧化物酶，其生物学功能是催化除去H2O2，并参与有毒还原剂的氧化、木质素的生物合成和降解、苏木素化、生长素分解代谢、植物形态建成，并参与环境胁迫响应如伤害、病原体攻击和氧化应激反应等。
植物在非生物胁迫和生物胁迫下会导致细胞活性氧过量的积累，过量的ROS 积累会非特异性的损害细胞组分，包括细胞核、核酸、蛋白质以及光合色素等，在生物体内抗氧化酶可以清除活性氧，维持细胞内ROS 平衡，在抗氧化物酶中POD 起着关键的作用。在植物中广泛存在过氧化物酶，且具有多种功能。过氧化物酶是多基因家族酶类，参与植物多种代谢途径，如植物的抗旱、抗盐、抗寒等多种抗逆功能。
我们利用苦豆子苗期处理cDNA酵母表达文库对苦豆子抗盐相关基因进行筛选，得到了一个盐胁迫相关基因，过氧化物酶基因，命名为SaPOD。在苦豆子中，到目前为止，关于SaPOD未见报道。
发明内容
本发明通过构建苦豆子（Sophora alopecuroides l）盐胁迫（200mM NaCl）、碱胁迫（200mM NaHCO3）和干旱胁迫（8% PEG）全长cDNA文库，并成功重组到酵母表达载体（pYES-DEST52）中，混合质粒载体经转化到酵母菌株INVSc1中成功构建苦豆子酿酒酵母表达文库，然后对酵母文库通过模拟逆境胁迫（NaCl和PEG），筛选出与逆境胁迫相关的苦豆子基因，通过测序获得基因核酸序列，对该基因进行生物信息学分析，发现该基因属于过氧化物酶家族基因，并命名为SaPOD,
一种苦豆子过氧化物酶基因SaPOD，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。
所述苦豆子过氧化物酶基因SaPOD的表达产物苦豆子过氧化物酶SaPOD，其氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。
苦豆子过氧化物酶基因SaPOD在植物耐盐和耐干旱方面的应用。
根据测序获得的序列设计克隆引物和定量引物，利用RT-PCR技术检测该基因在逆境胁迫（NaCl和PEG）条件下苦豆子不同组织中的表达量变化，以初步研究该基因在苦豆子逆境胁迫中的相应作用，发现该基因在根中表达量要明显高于茎和叶中，根中的表达量是叶和茎中的20倍，且在盐处理4h根中表达量升高2倍，这说明该基因参与了苦豆子中的逆境响应。同时对该基因构建酵母表达载体和植物过表达载体并成功转入酵母BY4743和野生型拟南芥中进行功能初步验证，结果表明该基因在酵母和拟南芥中过表达后能够显著提高酵母和拟南芥的耐盐性和耐旱性，这为通过基因工程技术提高作物的抗逆性提供了新的资源。
附图说明
图1为SD/-Ura(含NaCl 0.68mol/l)筛选培养基菌落图
图2 为酵母阳性克隆PCR检测的电泳图
其中：M:为SaPOD基因，2000bp marker；1-6为酵母扩增结果
图3为SaPOD基因克隆电泳图
图4为pCHF3300-SaPOD载体酶切验证电泳图
图5为苦豆子SaPOD基因在对照和NaCl处理条件下，不同组织中的相对表达量
图6为苦豆子SaPOD基因在NaCl处理条件下，叶中不同处理时间下的相对表达量
图7为苦豆子SaPOD基因在NaCl处理条件下，茎中不同处理时间下的相对表达量
图8为苦豆子SaPOD基因在NaCl处理条件下，根中不同处理时间下的相对表达量
图9为苦豆子SaPOD基因在8%PEG处理条件下，根中不同处理时间下的相对表达量
图10为重组酵母pYES-SaPOD和pYES-DEST52非胁迫下的结果
图11为重组酵母pYES-SaPOD和pYES-DEST52在1.0M NaCl胁迫下的结果
图12为pCHF3300-SaPOD载体转化农杆菌EHA105菌液pcr检测的电泳图
图13为转SaPOD基因拟南芥T1代检测结果的电泳图
图14为转SaPOD基因拟南芥T2代检测结果的电泳图
图15为转SaPOD基因拟南芥相对定量分析
图16为野生型拟南芥和转SaPOD基因拟南芥，在对照和处理(100mMNaCl和4%PEG)条件下发芽率统计
图17为野生型拟南芥和转SaPOD基因拟南芥，在6%PEG处理条件下根长统计
图18为野生型拟南芥和转SaPOD基因拟南芥，在100mM NaCl处理条件下根长统计
图19为野生型拟南芥和转SaPOD基因拟南芥，在1/2MS固体培养基中发芽情况
图20为野生型拟南芥和转SaPOD基因拟南芥，在1/2MS固体（含100mMNaCl）培养基中发芽情况
图21为野生型拟南芥和转SaPOD基因拟南芥，在200mMNaCl处理条件下表型
图22为野生型拟南芥和转SaPOD基因拟南芥，在6%PEG处理条件下表型
具体实施方式
实施例1：苦豆子SaPOD基因的筛选与克隆
选取籽粒饱满的苦豆子种子10g，加入5ml浓度98%的浓硫酸浸泡处理20min。洗净种子后播种于花土中盆栽。培养条件为：16h光照，温度26℃，湿度65%，光强30000勒克斯。萌发四周后，分别将幼苗转移至NaCl浓度为200mmol、Na2CO3浓度为140 mmol和PEG6000浓度为8%的hoagland营养液中分别处理3h，12h，24h，72h。取各处理下的苦豆子根部，分别提取不同处理条件下苦豆子根的total RNA。取上述提取的4个处理的苦豆子根部RNA，等质量混合各组样品用于cDNA文库构建。提取构建完成的cDNA文库质粒，将文库质粒大规模转化酿酒酵母INVSC1感受态细胞构建苦豆子苗期酵母表达cDNA文库。利用酵母植物抗逆基因筛选体系筛选苦豆子抗盐相关基因，筛选方法如下：
取适量文库菌液（使克隆总数达文库滴度的 5-10 倍），涂布SD/ -Ura (含NaCl0.68mol/l) 筛选平板，30°C 倒置培养2-4 天至菌落出现，如图1所示；保存筛选到的酵母菌株，根据酵母表达载体序列设计引物，引物为：
引物名称5’到3’序列
Figure SMS_1
按照表1反应和表2程序进行PCR检测：
Figure SMS_2
Figure SMS_3
根据pcr结果，参照Sangon酵母质粒提取试剂盒的方法分别提取上述酵母菌液的质粒，转化Ecoli DH5α，保存菌液并进行测序，将测序后的序列，利用NCBI数据库Blast（http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgiPROGRAM=blastn&PAGE_TYPE=BlastSearch&LINK_LOC=blasthome）进行序列比对分析，得到苦豆子过氧化物酶(SaPOD)基因。由1058个碱基对组成，读码框自5'端第50位到第1000位碱基，编码一个由313个氨基酸残基组成的蛋白质，SaPOD蛋白包含一个过氧化物酶结构域，通过进化树分析，苦豆子SaPOD基因属于第三类分泌过氧化物酶，说明苦豆子SaPOD基因与过氧化物酶家族基因具有相似的功能。
实施例2：苦豆子SaPOD基因的组织特异性表达
对苦豆子进行NaCl盐胁迫处理，处理方法同实施例1。处理时间分别为0h，4h，12h，24h，36h，48h, 72h。取在hoagland营养液中培养的苦豆子的根、茎、叶。参照sangon公司的柱式植物总RNA抽提纯化试剂盒提取处理材料的总RNA，经1%琼脂糖电泳检测RNA的完整性。cDNA的合成按照Reverse Transcriptase M-MLV（RNase H-）的说明书进行。利用实时荧光定量PCR对SaPOD基因在苦豆子不同组织及不同盐处理时间根中的表达情况进行检测。实验操作按照sangong公司SGExcel FastSYBR Mixture（With ROX）说明书在在实时荧光定量PCR仪ABI7500中进行。以苦豆子Lectin为内参基因，引物如下：
Figure SMS_4
PCR反应体系及程序如表3：
Figure SMS_5
采采用2−ΔΔCT法分析数据，确定基因的相对表达量。试验共设3次技术重复，3次生物学重复。
结果表明SaPOD基因在苦豆子的根、茎、叶片中均有表达，其中，根中的表达量最高，其他组织表达量相对较低，SaPOD基因在叶片中的表达量最低。如图所示，在根茎叶中的表达时间存在差异，在根中处理4h表达量达到最高，在茎中12h表达量达到最高，在叶中24h表达量达到最高，说明苦豆子过氧化物酶基因SaPOD通过在根茎叶中的高表达可以促进植物的耐盐性。
实施例3： 重组酵母的转化及检测
酿酒酵母菌株BY4743为尿氨酸营养缺陷型(Ura−)的模式菌株，在缺乏尿氨酸的酵母基本培养基(SC-Ura−)上, 该酵母菌株几乎不能生长和繁殖。而酵母表达载体（pYES2-DEST52）上含有URA3基因, 且该基因的表达可以使酵母转化子在SC-Ura−培养基上正常生长。因此，SC-Ura−选择培养基可以进行阳性和非阳性酵母转化子的筛选。通过醋酸锂法将载体质粒pYES-SaPOD和pYES-DEST52分别转化到酵母感受态菌株BY4743中，将转化酵母菌液涂在SC-Ura−固体选择培养基上，以未转化的酵母做对照，进行培养，2d后除了空酵母完全不长外，转化两种质粒的酵母均可以生长并有菌落长出，说明酵母转化成功，挑取酵母单菌落，过夜培养后进行破除细胞壁，并通过菌液PCR方法进行阳性转化子的进一步鉴定。
1. 运用醋酸锂化学转化法转化酿酒酵母BY4743，其具体转化步骤：
1.1将一个酵母菌株单克隆（BY4743）加入到10mL YPDA液体培养基中，30℃过夜摇培。
1.2检测酵母菌液的OD600值，利用50mL YPDA液体培养基将过夜培养的酵母菌液稀释至OD600为0.4，30℃继续摇培2-4h。
1.3 低温离心（4℃，2500rpm）5min后，去除上清收集菌体，用40mL1xTE缓冲液重悬菌体。
1.4 再次低温离心（4℃，2500rpm）5min后，收集菌体，用2mL1xLiAc/0.5xTE缓冲液
重悬菌体。
1.5 将获得的重悬菌体按照每管100μL的体系分装到1.5mL离心管。
1.6 将分装的酵母细胞置于室温孵育10min。
1.7 在每个转化体系（100μL）中，加入1μg质粒DNA，100μg变性鲑鱼精DNA，混匀。
1.8 每个体系中加入600μL 1xLiAc/40% PEG-3350/1x TE，混匀。
1.9 200rpm，30℃孵育步骤1.8中的混合液30min。
1.10 在每个体系中再加入70μL的DMSO，混匀后，42℃条件下水浴热击15min。
1.11 5000rpm低温离心1min，去除上清。
1.12 用备好的1mL1xTE的缓冲液重悬菌体，5000rpm低温离心1min，进一步去除上清。
1.13 用100μL1xTE的缓冲液将菌体重悬，并涂于酵母选择培养基上，30℃培养24h。
2. 阳性转化子的鉴定
从酵母选择培养基上随机挑取5个酵母转化子(pYES2-SaPOD)的单菌落，30℃振荡培养过夜（200rpm），收集过夜培养菌体，沸水煮5min，迅速置于冰上5 min以破碎细胞，重复几次，以细胞破碎液离心浓缩样品作为模板进行菌液PCR，以引物T7和R进行PCR扩增，PCR反应体系为(25μL)：Buffer2.5µL、上下游引物（T7、R）各0.5µL、Tag酶0.5µL、dNTP 0. 5µL、模板5µL、ddH2O 15.5µL。
PCR产物在1%的琼脂糖凝胶上电泳检测，扩增片段大小为1041bp，与目标长度吻合(图9)。证明重组质粒pYES2-SaPOD已经转化到酵母菌株中。
实施例4：阳性转化酵母逆境胁迫处理
1.逆境胁迫处理前准备
取适量阳性酵母转化子(pYES-DEST52，pYES2-SaPOD)菌液，接种到含2%葡萄糖的SD-U液体培养基中，30℃条件下200rpm振荡培养24h，测OD600值，并用SD-U液体培养基（2%葡萄糖）将菌液OD600统一调整为0.4，总体积5 mL，8 000 rpm离心1 min，吸取上清液，加2mL含2%半乳糖的酵母诱导培养基重悬菌体，以1:50的比例接到5 mL的诱导培养基中扩大培养，30℃振荡培养24h，检测酵母BY4743(pYES-DEST52)和BY4743 (pYES2-SaPOD)的OD600值,并统一调整到OD600值为2.0备用。对这两种酵母转化子进行不同的非生物胁迫处理，比较两种酵母转化子抗盐和干旱胁迫能力, 实验重复3次。
2.模拟逆境胁迫处理
存在于自然界中的植物面对各种生物和非生物逆境，非生物胁迫中最主要的是盐胁迫（NaCl、KCl等）和干旱胁迫。
在实验室条件下进行盐和干旱的模拟，用1.2M NaCl模拟盐胁迫。运用以上两种模拟条件处理酵母转化子，通过酵母的生长情况对比，从而评价该基因在酵母中诱导表达后对酵母抗逆性的影响，以对该基因在酵母中的抗逆功能进行初探。
NaCl处理：将上述备用菌体分别以不稀释和稀释10、100、1 000、10 000倍的菌体，吸取2μL菌液接种到含2%半乳糖的SC-U固体培养基上，30℃培养两天后，比较两种酵母转化菌的菌落生长状态。
实施例5：SaPOD在拟南芥中的表达及对耐盐性的分析
构建植物表达载体pCHF3300-SaPOD。采用农杆菌介导法转化将植物表达载体pCHF3300-SaPOD转化野生型拟南芥，并对转基因拟南芥进行basta筛选，同时检测阳性植株中目的基因表达量，并对转基因拟南芥的耐盐性进行分析。具体方法如下：
将T3代转基因拟南芥种子和野生型WT（哥伦比亚野生型）种子用10%次氯酸钠消毒3min，利用灭菌水洗5次，播种在含0.8%琼脂的1/2MS固体培养基中，发芽处理和成苗处理是在含0.8%琼脂的1/2MS固体培养基中加入相应比例的NaCl（终浓度100mM）和PEG（终浓度6%），最后统计发芽率和根长，以及根据拟南芥表型变化来初步探究目的基因的功能。
序列表
SEQ ID NO.1的序列
（i）序列特征：（A）长度：1058bp；（B）类型：核苷酸；（C）链性：单链；
（ii）分子类型：核苷酸
（iii）序列描述：SEQ ID NO.1
1 TGCATCACAG TTTGTACAAA AGTTGGACAC ACGGTTCTAA CACCAGAAAG GAAAAAAATG
61 AGGTCCATTG GTCTCAGTGT GGCAGCTCTG TGCTGTGTAG TGGTTGTGTT TGGAGGACTA
121 CCTTCCTCCT CAGATGCACA ACTAGATCCC TCGTTTTACA GGGATACTTG TCCCAAGGTG
181 CATTCTATAG TGCGTGAAGT CGTAAGGAAT GTTTCTAAAA AGGATCCCCG TATGCTTGCA
241 AGTCTCATCA GGCTTCACTT TCATGACTGT TTTGTTCAAG GTTGTGATGC ATCAATTTTG
301 TTGAACAACA CTGCTACGAT AGTGAGTGAA CAACAAGCTG CGCCAAATGA TAATTCAATA
361 AGAGGTTTGG ATGTTGTGAA CCAGATCAAA ACAGCAGTGG AAAATGCTTG TCCTGGAATA
421 GTTTCTTGTG CCGATATTCT TACCCTTGCA TCCGAAATAT CTTCTATTCT GGGTGGTGGT
481 CCTGATTGGA AAGTTCCTTT AGGAAGAAGG GATAGTTTAA CAGCAAATCG GACTCTTGCT
541 AATCAAAAGC TTCCATCTCC CAGATCCACT CTGGATCAAC TTAAATCCGC TTTTGCTGCT
601 CAAGGCCTCA ACACTACTGA CCTAGTTGCC CTCTCAGGTG CTCATACATT TGGAAGATCT
661 CGTTGTTCTT TGTTTGTGGA TCGATTATAC AACTTCAGCA ACAGTGGCAA ACCTGATCCA
721 ACTCTCAATA CAACTTACTT ACAGCAATTG CGCCAGTTAT GCCCCAACAA TGGACCTGGG
781 ACTACCCTTG TCAATTTTGA CCCAACCACC CCTGATACAC TCGACAAGAA CTACTACTCC
841 AATCTTCAGA TTCGAAAGGG GTTGCTTCAG AGTGACCAAG AGTTGTTCTC AACAACTGGT
901 GCAGATACCA TTAGCATCGT CAACAGGTTC AGTAGTAACC AAGATGCTTT CTTTGAGAGC
961 TTCAAGGCTT CCATGATAAA ATGGGTAATA TTGGAGTGTT AACAGGTAAA CAAGGAGAAA
1021 TTCGAAAACA TTGTAATTTT GTTAACACGA AATCTGCT
SEQ ID NO.2的序列
（i）序列特征：（A）长度：314个氨基酸；(B)类型：氨基酸；（C）链性：单链。
（ii）分子类型：多肽
（iii）序列描述：SEQ ID NO.2
1 MRSIGLSVAA LCCVVVVFGG LPSSSDAQLD PSFYRDTCPK VHSIVREVVR NVSKKDPRML
61 ASLIRLHFHD CFVQGCDASI LLNNTATIVS EQQAAPNDNS IRGLDVVNQI KTAVENACPG
121 IVSCADILTL ASEISSILGG GPDWKVPLGR RDSLTANRTL ANQKLPSPRS TLDQLKSAFA
181 AQGLNTTDLV ALSGAHTFGR SRCSLFVDRL YNFSNSGKPD PTLNTTYLQQ LRQLCPNNGP
241 GTTLVNFDPT TPDTLDKNYY SNLQIRKGLL QSDQELFSTT GADTISIVNR FSSNQDAFFE
301 SFKASMIKWV ILEC
序列表
申 请 人：吉林大学
发明名称：一种苦豆子SaPOD基因的克隆及应用
SEQ ID NO.1的序列
（i）序列特征：（A）长度：1058bp；（B）类型：核苷酸；（C）链性：单链；
　　（ii）分子类型：核苷酸
　　（iii）序列描述：SEQ ID NO.1
1 TGCATCACAG TTTGTACAAA AGTTGGACAC ACGGTTCTAA CACCAGAAAG GAAAAAAATG
61 AGGTCCATTG GTCTCAGTGT GGCAGCTCTG TGCTGTGTAG TGGTTGTGTT TGGAGGACTA
121 CCTTCCTCCT CAGATGCACA ACTAGATCCC TCGTTTTACA GGGATACTTG TCCCAAGGTG
181 CATTCTATAG TGCGTGAAGT CGTAAGGAAT GTTTCTAAAA AGGATCCCCG TATGCTTGCA
241 AGTCTCATCA GGCTTCACTT TCATGACTGT TTTGTTCAAG GTTGTGATGC ATCAATTTTG
301 TTGAACAACA CTGCTACGAT AGTGAGTGAA CAACAAGCTG CGCCAAATGA TAATTCAATA
361 AGAGGTTTGG ATGTTGTGAA CCAGATCAAA ACAGCAGTGG AAAATGCTTG TCCTGGAATA
421 GTTTCTTGTG CCGATATTCT TACCCTTGCA TCCGAAATAT CTTCTATTCT GGGTGGTGGT
481 CCTGATTGGA AAGTTCCTTT AGGAAGAAGG GATAGTTTAA CAGCAAATCG GACTCTTGCT
541 AATCAAAAGC TTCCATCTCC CAGATCCACT CTGGATCAAC TTAAATCCGC TTTTGCTGCT
601 CAAGGCCTCA ACACTACTGA CCTAGTTGCC CTCTCAGGTG CTCATACATT TGGAAGATCT
661 CGTTGTTCTT TGTTTGTGGA TCGATTATAC AACTTCAGCA ACAGTGGCAA ACCTGATCCA
721 ACTCTCAATA CAACTTACTT ACAGCAATTG CGCCAGTTAT GCCCCAACAA TGGACCTGGG
781 ACTACCCTTG TCAATTTTGA CCCAACCACC CCTGATACAC TCGACAAGAA CTACTACTCC
841 AATCTTCAGA TTCGAAAGGG GTTGCTTCAG AGTGACCAAG AGTTGTTCTC AACAACTGGT
901 GCAGATACCA TTAGCATCGT CAACAGGTTC AGTAGTAACC AAGATGCTTT CTTTGAGAGC
961 TTCAAGGCTT CCATGATAAA ATGGGTAATA TTGGAGTGTT AACAGGTAAA CAAGGAGAAA
1021 TTCGAAAACA TTGTAATTTT GTTAACACGA AATCTGCT
SEQ ID NO.2的序列
　　（i）序列特征：（A）长度：314个氨基酸；(B)类型：氨基酸；（C）链性：单链。
　　（ii）分子类型：多肽
　　（iii）序列描述：SEQ ID NO.2
1 MRSIGLSVAA LCCVVVVFGG LPSSSDAQLD PSFYRDTCPK VHSIVREVVR NVSKKDPRML
61 ASLIRLHFHD CFVQGCDASI LLNNTATIVS EQQAAPNDNS IRGLDVVNQI KTAVENACPG
121 IVSCADILTL ASEISSILGG GPDWKVPLGR RDSLTANRTL ANQKLPSPRS TLDQLKSAFA
181 AQGLNTTDLV ALSGAHTFGR SRCSLFVDRL YNFSNSGKPD PTLNTTYLQQ LRQLCPNNGP
241 GTTLVNFDPT TPDTLDKNYY SNLQIRKGLL QSDQELFSTT GADTISIVNR FSSNQDAFFE
301 SFKASMIKWV ILEC
序 列 表

Claims (1)

1. 一种苦豆子过氧化物酶基因SaPOD，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，其特征在于，在植物耐盐和耐干旱方面的应用。
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