CN111150843A - 一种防治小鹅瘟的口服缓释抗体的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种防治小鹅瘟的口服缓释抗体的制备方法，该口服缓释抗体的有效组分及其体积份数比为：含小鹅瘟卵黄抗体的卵黄匀浆70‑90份、抗酸剂0.1‑0.2份、正辛酸0.05‑0.15份、甲醛0.05‑0.15份、蔗糖0.1‑0.2份、海藻酸钠0.1‑0.2份。本发明中抗酸剂可以使抗体口服后仍能通过消化道和胃粘膜刺激免疫应答，保持活性；同时本发明中加入了蔗糖和海藻酸钠，保证了口服卵黄抗体适口性和缓释作用，提高了抗体效率持续时间。

Description

一种防治小鹅瘟的口服缓释抗体的制备方法
技术领域
本发明属于兽用生物制品技术领域，具体涉及一种防治小鹅瘟的口服缓释抗体的制备方法。
背景技术
在非洲猪瘟和禽流感的风口下，人类生活中水禽动物源性食品备受青睐，水禽养殖量也在逐日增多，并呈集约化发展，养殖量直线上升的同时其疫病的防控也极为关键。长期以来水禽方面，小鹅瘟的危害最大，其为鹅细小病毒引起的雏鹅急性败血性传染病，发病雏鹅或雏番鸭的死亡率高达90％-100％，对养鹅业的发展影响极大，尤其是小鹅瘟不仅可以感染鹅，在一定程度上也可感染番鸭等其他禽类，因此搞好小鹅瘟的预防和治疗工作尤为关键。目前，小鹅瘟疫病的防治主要是采用疫苗免疫及母源被动免疫，其保护期较短(仅2个月左右)，存在空窗期，同时注射免疫应激大，减食、生长受抑等严重，造成目前养殖者生物防控意识不强。
卵黄抗体具有性质稳定、特异性强、制备成本低、口服安全等优点在家禽、家畜传染病的防治中已得到广泛的应用。产品的开发也在生态农业和食品安全方面产生了良好的经济效益和社会效益。在诊断、预防和治疗人类和动物各种疾病中具有良好的应用价值。
鉴于此，二者的有效结合成为水禽养殖业的新希望。
发明内容
本发明的目的在于提供一种防治小鹅瘟的口服缓释抗体的制备方法，该方法可以解决常规卵黄抗体注射免疫应激大而引起减食、生长受抑等弊端。
本发明另一个目的在于解决了现有技术下卵黄抗体口服活性和稳定性差，抗体效力时间短的问题，本发明中加入抗酸剂、蔗糖和海藻酸钠后，保护了消化道酸性环境对抗体的破坏，同时实现了有效物质的缓释，延长了抗体的效力时间。
为达到上述目的，本发明是通过以下技术方案实现的：
1、一种防治小鹅瘟的口服缓释抗体的制备方法，其有效组分及其体积份数比为：含小鹅瘟卵黄抗体的卵黄匀浆70-90份、抗酸剂0.1-0.2份、正辛酸0.05-0.15份、甲醛0.05-0.15份、蔗糖0.1-0.2份、海藻酸钠0.1-0.2份。
而且，所述的抗酸剂为抗酸剂为柠檬酸盐，可以为柠檬酸钠和柠檬酸钾的其中一种。
2、一种防治小鹅瘟的口服缓释抗体的制备方法，包括以下步骤：
(1)采用小鹅瘟灭活疫苗对200日龄蛋鸭进行首次免疫，用量1ml/只，首次免疫7天后进行二次免疫1ml/只，二免后14天进行再次加强免疫1ml/只，检测小鹅瘟血清抗体效价至1:512～1:1024时收集高免蛋；
(2)取步骤(1)中所收集的高免蛋洗净消毒，而后收集蛋黄，充分搅拌，使蛋黄呈均匀膏状，加入与蛋黄等体积的灭菌注射水，搅拌混匀后，60～65℃保温灭活30分钟，得卵黄匀浆备用；
(3)向步骤(2)分离的卵黄匀浆边搅拌边加入浓度为0.1％的正辛酸，充分搅拌0.5～1.5小时，室温放置2～6小时后，以4200～5500r/min的转速离心15min，弃沉淀；用孔径5μm和1μm的筒式滤芯过滤上清液，再经截留分子量为10kD的中空纤维超滤柱进行浓缩3～4倍后再用NaOH调整PH值为6.8～7.0，并以0.45μm和0.22μm筒式滤芯过滤除菌。
(4)取步骤(3)所述滤液，按体积比依次加入甲醛、蔗糖、抗酸剂和1％-1.5％海藻酸钠，37℃-45℃控温搅拌1～2h后于37℃灭活2h，定量分装，加盖密封，2～8℃保存，即得到所述一种防治小鹅瘟的口服缓释抗体。
而且，步骤(2)中所述的消毒高免蛋和收集卵黄的方法为：取步骤1)所得高免蛋，用清水冲洗干净后浸入0.1％新洁尔灭水溶液中消毒15分钟，取出晾干，再用环氧乙烷气雾消毒30分钟后，送入蛋清蛋黄分离机分离得到卵黄，搅拌得到卵黄匀浆。
而且，步骤(2)中所得的含小鹅瘟卵黄抗体的卵黄匀浆：步骤(3)所述正辛酸体积量为(70-90份)：(0.05-0.15份)。
而且，步骤(2)中所得的含小鹅瘟卵黄抗体的卵黄匀浆：步骤(4)所述抗酸剂、甲醛、蔗糖和海藻酸钠体积量为(70-90份)：(0.1-0.2份)：(0.05-0.15份)：(0.1-0.2份)：(0.01-0.02份)。
本发明的优点及有益效果在于：
1.本发明的目的在于解决了注射免疫的应激刺激，避免了免疫应激大而引起减食、生长受抑等弊端。
2、本发明的目的在于提供一种防治小鹅瘟的口服缓释抗体的制备方法，加入抗酸剂、蔗糖和海藻酸钠后，保护了消化道酸性环境对抗体的破坏，同时实现了有效物质的缓释，延长了抗体的效力时间。
具体实施方式
本发明通过以下实施例进一步详述。需要说明的是：下述实施例是说明性的，不是限定性的，不能以下述实施例来限定本发明的保护范围。
本发明所涉及的小鹅瘟灭活疫苗、正辛酸、甲醛、蔗糖、抗酸剂、蔗糖和海藻酸钠均可以从市场购买得到。
实施例1
一种防治小鹅瘟的口服缓释抗体的制备方法，其有效组分及其体积份数比为：含小鹅瘟卵黄抗体的卵黄匀浆70份、柠檬酸钠0.1份、正辛酸0.05份、甲醛0.05份、蔗糖0.1份、海藻酸钠0.1份。
一种防治小鹅瘟的口服缓释抗体的制备方法，其制备方法的步骤为：
(1)采用小鹅瘟灭活疫苗对200日龄蛋鸭进行首次免疫，用量1ml/只，首次免疫7天后进行二次免疫1ml/只，二免后14天进行再次加强免疫1ml/只，检测小鹅瘟血清抗体效价至1:512时收集高免蛋；
(2)取步骤(1)中所收集的高免蛋用清水冲洗干净后浸入0.1％新洁尔灭水溶液中消毒15分钟，取出晾干，再用环氧乙烷气雾消毒30分钟后，送入蛋清蛋黄分离机分离得到卵黄，搅拌得到卵黄匀浆，充分搅拌，使蛋黄呈均匀膏状，加入与蛋黄等体积的灭菌注射水，搅拌混匀后，60℃保温灭活30分钟，得卵黄匀浆备用；
(3)向步骤(2)分离的卵黄匀浆边搅拌边加入浓度为0.1％的正辛酸(卵黄匀浆与正辛酸体积份数比为70：0.05)，充分搅拌0.5小时，室温放置2小时后，以4200r/min的转速离心15min，弃沉淀；用孔径5μm和1μm的筒式滤芯过滤上清液，再经截留分子量为10kD的中空纤维超滤柱进行浓缩3倍后再用NaOH调整PH值为6.8，并以0.45μm和0.22μm筒式滤芯过滤除菌。
(4)取步骤(3)所述滤液，按体积份数比依次加入甲醛、蔗糖、抗酸剂和1％海藻酸钠，37℃控温搅拌1h后于37℃灭活2h，定量分装，加盖密封，2℃保存，即得到所述一种防治小鹅瘟的口服缓释抗体。
实施例2
一种防治小鹅瘟的口服缓释抗体的制备方法，其有效组分及其体积份数比为：含小鹅瘟卵黄抗体的卵黄匀浆90份、柠檬酸钾0.2份、正辛酸0.15份、甲醛0.15份、蔗糖0.2份、海藻酸钠0.2份。
一种防治小鹅瘟的口服缓释抗体的制备方法，其制备方法的步骤为：
(1)采用小鹅瘟灭活疫苗对200日龄蛋鸭进行首次免疫，用量1ml/只，首次免疫7天后进行二次免疫1ml/只，二免后14天进行再次加强免疫1ml/只，检测小鹅瘟血清抗体效价至1:1024时收集高免蛋；
(2)取步骤(1)中所收集的高免蛋用清水冲洗干净后浸入0.1％新洁尔灭水溶液中消毒15分钟，取出晾干，再用环氧乙烷气雾消毒30分钟后，送入蛋清蛋黄分离机分离得到卵黄，搅拌得到卵黄匀浆，充分搅拌，使蛋黄呈均匀膏状，加入与蛋黄等体积的灭菌注射水，搅拌混匀后，65℃保温灭活30分钟，得卵黄匀浆备用；
(3)向步骤(2)分离的卵黄匀浆边搅拌边加入浓度为0.1％的正辛酸，充分搅拌1.5小时，室温放置6小时后，以5500r/min的转速离心15min，弃沉淀；用孔径5μm和1μm的筒式滤芯过滤上清液，再经截留分子量为10kD的中空纤维超滤柱进行浓缩4倍后再用NaOH调整PH值为7.0，并以0.45μm和0.22μm筒式滤芯过滤除菌。
(4)取步骤(3)所述滤液，按体积份数比依次加入甲醛、蔗糖、抗酸剂和1.5％海藻酸钠，45℃控温搅拌2h后于37℃灭活2h，定量分装，加盖密封，8℃保存，即得到所述一种防治小鹅瘟的口服缓释抗体。
实施例3
一种防治小鹅瘟的口服缓释抗体的制备方法，其有效组分及其体积份数比为：含小鹅瘟卵黄抗体的卵黄匀浆80份、柠檬酸钠0.15份、正辛酸0.1份、甲醛0.1份、蔗糖0.15份、海藻酸钠0.1份。
一种防治小鹅瘟的口服缓释抗体的制备方法，包括以下步骤：
(1)采用小鹅瘟灭活疫苗对200日龄蛋鸭进行首次免疫，用量1ml/只，首次免疫7天后进行二次免疫1ml/只，二免后14天进行再次加强免疫1ml/只，检测小鹅瘟血清抗体效价至1:512时收集高免蛋；
(2)取步骤(1)中所收集的高免蛋用清水冲洗干净后浸入0.1％新洁尔灭水溶液中消毒15分钟，取出晾干，再用环氧乙烷气雾消毒30分钟后，送入蛋清蛋黄分离机分离得到卵黄，搅拌得到卵黄匀浆，充分搅拌，使蛋黄呈均匀膏状，加入与蛋黄等体积的灭菌注射水，搅拌混匀后，65℃保温灭活30分钟，得卵黄匀浆备用；
(3)向步骤(2)分离的卵黄匀浆边搅拌边加入浓度为0.1％的正辛酸，充分搅拌1小时，室温放置4小时后，以5000r/min的转速离心15min，弃沉淀；用孔径5μm和1μm的筒式滤芯过滤上清液，再经截留分子量为10kD的中空纤维超滤柱进行浓缩4倍后再用NaOH调整PH值为7.0，并以0.45μm和0.22μm筒式滤芯过滤除菌。
(4)取步骤(3)所述滤液，按体积比依次加入甲醛、蔗糖、抗酸剂和1.5％海藻酸钠，40℃控温搅拌1～2h后于37℃灭活2h，定量分装，加盖密封，2～8℃保存，即得到所述一种防治小鹅瘟的口服缓释抗体。
临床应用
1、一种防治小鹅瘟的口服缓释抗体效果试验
2018年4月在山东潍坊诸城某鹅场，选取6日龄已确诊的小鹅瘟雏鹅60只，随机分为4组(A\B\C\D)，每组15只，按下表进行试验处理，相同环境下4组隔离饲养，汇总20天的饲料转化率及日增重情况，并于6周后检测抗体效价水平，试验结果如下表。
表本发明效果试验
Figure BDA0002343828830000051
从上表可见本发明组成活率93.33％，市售普通抗体组66.67％，化药和对照组均低于35％；平均日增重本发明41.11g/d，高于普通抗体组33.33g/d，与化药组和对照组相比也差异显著；料肉比方面，本发明组最低1.65，也显著优于其他三组；抗体效价水平，本发明组在6周龄后抗体效价仍维持在1:128，持续效力明显好于普通抗体组的1:32。
结论
可见，本发明防治小鹅瘟的口服缓释抗体治疗养殖生产中治疗小鹅瘟临床病症效果明显，成活率高，口服使用方便，适口性好，抗体效价持续时间长，可以有效提高饲料转化率。

Claims (6)

1.一种防治小鹅瘟的口服缓释抗体的制备方法，其特征在于：该口服缓释抗体的有效组分及其体积份数比为：含小鹅瘟卵黄抗体的卵黄匀浆70-90份、抗酸剂0.1-0.2份、正辛酸0.05-0.15份、甲醛0.05-0.15份、蔗糖0.1-0.2份、海藻酸钠0.1-0.2份。
2.根据权利要求1所述的一种防治小鹅瘟的口服缓释抗体的制备方法，其特征在于：其制备方法包括以下步骤：
(1)采用小鹅瘟灭活疫苗对200日龄蛋鸭进行首次免疫，用量1ml/只，首次免疫7天后进行二次免疫1ml/只，二免后14天进行再次加强免疫1ml/只，检测小鹅瘟血清抗体效价至1:512～1:1024时收集高免蛋；
(2)取步骤(1)中所收集的高免蛋洗净消毒，而后收集蛋黄，充分搅拌，使蛋黄呈均匀膏状，加入与蛋黄等体积的灭菌注射水，搅拌混匀后，60～65℃保温灭活30分钟，得卵黄匀浆备用；
(3)向步骤(2)分离的卵黄匀浆边搅拌边加入浓度为0.1％的正辛酸，充分搅拌0.5～1.5小时，室温放置2～6小时后，以4200～5500r/min的转速离心15min，弃沉淀；用孔径5μm和1μm的筒式滤芯过滤上清液，再经截留分子量为10kD的中空纤维超滤柱进行浓缩3～4倍后再用NaOH调整PH值为6.8～7.0，并以0.45μm和0.22μm筒式滤芯过滤除菌。
(4)取步骤(3)所述滤液，按体积比依次加入甲醛、蔗糖、抗酸剂和1％-1.5％海藻酸钠，37℃-45℃控温搅拌1～2h后于37℃灭活2h，定量分装，加盖密封，2～8℃保存，即得到所述一种防治小鹅瘟的口服缓释抗体。
3.根据权利要求1所述的一种防治小鹅瘟的口服缓释抗体的制备方法，其特征在于步骤2)中所述的消毒高免蛋和收集卵黄的方法为：取步骤1)所得高免蛋，用清水冲洗干净后浸入0.1％新洁尔灭水溶液中消毒15分钟，取出晾干，再用环氧乙烷气雾消毒30分钟后，送入蛋清蛋黄分离机分离得到卵黄，搅拌得到卵黄匀浆。
4.根据权利要求1所述的一种防治小鹅瘟的口服缓释抗体的制备方法，其特征在于步骤(2)中所得的含小鹅瘟卵黄抗体的卵黄匀浆：步骤(3)所述正辛酸体积量为(70-90份)：(0.05-0.15份)。
5.根据权利要求1所述的一种防治小鹅瘟的口服缓释抗体的制备方法，其特征在于步骤(2)中所得的含小鹅瘟卵黄抗体的卵黄匀浆：步骤(4)所述抗酸剂、甲醛、蔗糖和海藻酸钠体积量为(70-90份)：(0.1-0.2份)：(0.05-0.15份)：(0.1-0.2份)：(0.01-0.02份)。
6.根据权利要求1所述的一种防治小鹅瘟的口服缓释抗体的制备方法，其特征在于步骤(4)中所用抗酸剂为柠檬酸盐，可以为柠檬酸钠或柠檬酸钾的其中一种。
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