CN111138401B - 一种从荔枝皮中制备低聚原花青素的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种从荔枝皮中制备低聚原花青素的方法。本发明将荔枝皮粉末、水以及糖源混合，得到发酵原料，接种酵母菌和乳酸菌，密闭静置并一道发酵；接种醋酸杆菌，静置并二道发酵；过滤，浓缩，萃取，得到低聚原花青素粗提液；纯化，干燥，获得低聚原花青素。本发明利用酵母菌所产乙醇增加大荔枝皮中原花青素的有效溶出；利用乳酸菌提供的酸性环境维持原花青素的稳定，提高提取效率；利用醋酸杆菌产生的乙酸和生物发酵产生的酶，使得高聚原花青素的解聚效率更高，原花青素的提取得率更高，得到的低聚原花青素纯度更高。本发明的方法通过酵母产乙醇，降低成本，利用乙醇低浓度减少脂类成分的溶出，后续纯化无需脱脂处理，减少工序，节约成本。

Description

一种从荔枝皮中制备低聚原花青素的方法
技术领域
本发明涉及天然植物提取加工技术领域，特别涉及一种从荔枝皮中制备低聚原花青素的方法。
背景技术
原花青素(Proanthocyanidin，PC)是一种类黄烷醇物质，具有超强抗氧化性能，已被证实有助于预防和治疗由自由基引发的衰老现象，同时对治疗心脏病和癌症效果良好。然而，由于PC中具有大量的酚羟基，极易被氧化成花青素。同时，PC是由不同的单体聚合而成的混合物，其中含有大量的高聚体(PPC，聚合度大于4)，难以透过生物膜，因此不能被人体吸收。此外，PPC由于其结构的特殊性，生物利用率低，在提取分离过程中往往与多糖、蛋白等结合留在水相，从而被当成杂质除去，即便PPC随食物进入人体，又会因其分子量过大而不被吸收，最后随排泄物排出体外。低聚原花青素(OPC)无论是在结构、活性还是应用上都具有明显的优势。原花青素主要通过肠道微生物的分解作用而被吸收，研究发现，微生物的这种分解作用只针对单体和二聚体，当分子量变大时，这种分解作用将大大降低。因此，只有低聚的PC能够被人体吸收并发挥其抗氧化活性，聚合度更大一点的原花青素由于分子量太大而无法吸收从而不能发挥其作用。因此，制备高纯度低聚原花青素具有极大的应用价值。研究表明，荔枝皮中含有大量的原花青素，且聚合度高，用于制备低聚原花青素具有一定的经济价值。
原花青素易溶于水和有机溶剂，可通过水和有机溶剂进行提取。水提取所需温度较高，容易对PC的结构造成破坏，且提取出的杂质也较多，常用的提取溶剂就是一定比例的乙醇水溶液，具有较好提取效率，但需要量大，成本高。目前国内外降解高聚原花青素的方法主要是化学法，如酸水解法，酸水解法虽然工艺简单，但降解得率较低，浪费原料，增加后续纯化难度。
发明内容
本发明的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种从荔枝皮中制备低聚原花青素的方法。
本发明的另一目的在于提供通过上述方法制备得到的低聚原花青素。
本发明的目的通过下述技术方案实现：一种从荔枝皮中制备低聚原花青素的方法，具体包括如下步骤：
(1)将荔枝皮粉末、水以及糖源混合，得到发酵原料，接种酵母菌和乳酸菌，搅拌均匀，密闭静置并进行一道发酵；
(2)接种醋酸杆菌，封口，静置并进行二道发酵；
(3)将步骤(2)二道发酵得到的发酵液过滤，浓缩，萃取，溶解，得到低聚原花青素粗提液；
(4)将步骤(3)得到的低聚原花青素粗提液纯化，干燥，获得低聚原花青素。
步骤(1)中所述的水的用量优选为按其与所述的荔枝皮粉末的质量比为15～25：1配比计算。
步骤(1)中所述的糖源优选为蔗糖。
步骤(1)中所述的糖源的用量优选为按其在发酵原料中的质量为16～22％配比计算。
步骤(1)中所述的酵母菌优选为酿酒酵母。
步骤(1)中所述的酵母菌是经过活化得到的酵母菌液，具体步骤：将酵母菌粉与质量比为2％的蔗糖溶液按照1：100的质量比混合溶解，37℃水浴培养30min制得。
步骤(1)中所述的酵母菌的接种量为按其在发酵原料中的质量为0.5～1‰配比计算。
步骤(1)中所述的乳酸菌为植物乳杆菌、副干酪乳杆菌和发酵乳杆菌中的至少一种。
步骤(1)中所述的乳酸菌的接种量为按其在发酵原料中的质量为0.01～0.06‰配比计算。
步骤(1)中所述的一道发酵的时间为24～72h。
步骤(1)中所述的一道发酵的温度为室温；优选为30～35℃。
步骤(1)中所述的一道发酵为乙醇浓度达到140～180mg/mL、pH降至3.8～4.2时结束发酵。
步骤(2)中所述的醋酸杆为巴氏醋杆菌(GIM1.67)和醋酸菌(GIM1.848)中的至少一种。
步骤(2)中所述的醋酸杆菌的接种量为按其在发酵原料中的质量为0.2～0.8‰配比计算；
步骤(2)中所述的醋酸杆菌的菌粉中活菌数为6.2*109～6.5*109CFU/g。
步骤(2)中所述的接种醋酸杆菌是将醋酸杆菌的菌粉泼洒于步骤(1)中一道发酵后的发酵原料表层。
步骤(2)中所述的封口为采用4层纱布封口。
步骤(2)中所述的二道发酵的时间为3～5天。
步骤(2)中所述的二道发酵的温度为室温；优选为30～35℃。
步骤(2)中所述的二道发酵为乙醇浓度降至45～80mg/mL、pH值降至3.2～3.5时结束发酵。
步骤(3)中所述的浓缩为减压浓缩，将所述的发酵液减压浓缩至发酵液原体积的15％～ 30％。
步骤(3)中所述的萃取为采用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯采用减压浓缩去除。
所述的乙酸乙酯的用量为浓缩后发酵液体积的3倍；萃取次数为3次。
步骤(3)中所述的溶解为采用水溶解，水的用量为萃取后的发酵液质量的20～30％。
步骤(4)中所述的纯化为采用葡聚糖凝胶LH-20进行纯化，然后进行洗脱。
所述的洗脱为采用体积比为10％的甲醇进行洗脱，收集体积比为50％的甲醇洗脱部分，之后减压浓缩去除甲醇。
步骤(4)中所述的干燥为冷冻干燥。
一种低聚原花青素，通过上述方法制备得到。
本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：
(1)现有提取原花青素的方法都会消耗大量乙醇，造成浪费或增加回收成本，本方法通过酵母发酵产乙醇，降低成本。且本发明的提取过程中乙醇低浓度，可减少脂类成分的溶出，后续纯化过程不需要脱脂处理，减少工序，节约成本。
(2)本发明利用酵母菌所产乙醇增加大荔枝皮中原花青素的有效溶出；利用乳酸菌提供的酸性环境维持原花青素的稳定，提高提取效率，一次提取，减少溶剂消耗，节约成本；利用醋酸杆菌产生的乙酸和生物发酵产生的酶的作用，使得高聚原花青素的解聚效率更高，原花青素的提取得率更高，可达到6.56％～7.27％，得到的低聚原花青素纯度更高，可达到90％以上。
(3)本发明的方法简单易操作，且能在荔枝皮回收过程中开始处理，分批次小量处理，节约时间。
具体实施方式
下面将结合实施方式对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施方式和实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
本发明的方法使用的酵母菌、乳酸菌和醋酸杆菌具有通用性。实施例和对比例中所使用的酵母菌和乳酸菌为市售菌粉，其中，酵母菌为酿酒酵母，商品名为梅山干酵母(Saccharomyces cerevisiae，梅山15g干酵母)，购自英联马利公司；植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum，产品货号LP-600)，购自仙农生物科技(上海)有限公司。醋酸杆菌菌种购自广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号分别为：巴氏醋杆菌(GIM1.67)、醋酸菌(GIM1.848)，经实验室小试规模发酵制得醋酸杆菌菌粉，活菌数为巴氏醋杆菌(6.2*109CFU/g)、醋酸菌(6.5*109CFU/g)。实施例中所使用的葡聚糖凝胶LH-20购自上海源叶生物科技有限公司。
实施例1
(1)一道发酵：收集荔枝皮，风干后粉碎，取荔枝皮粉末3kg，置于铁桶内，加入15倍质量的水，加蔗糖10kg，混合，制得发酵原料。将50g酿酒酵母菌粉加入5kg含2wt％蔗糖的无菌水中，37℃水浴培养30min进行活化。活化后的酵母菌液倒入发酵原料中，接种2.8g 植物乳杆菌菌粉，搅拌混匀，室温密闭静置发酵，每隔24h取样测乙醇浓度和pH值，发酵 24h后，乙醇浓度达到142.71mg/mL、pH降至4.17，结束一道发酵。
(2)二道发酵：将12g巴氏醋杆菌菌粉泼洒接种于经过一道发酵的发酵原料表层，无需搅拌。4层纱布封口室温静置发酵。每隔24h取样测乙醇浓度和pH值。发酵5d后，乙醇浓度达到52.77mg/mL、pH降至3.21，结束二道发酵，过滤除渣，得到发酵液。
(3)低聚原花青素纯化：将步骤(2)中的发酵液减压浓缩至原体积的15％，用3倍乙酸乙酯萃取3次，乙酸乙酯部分减压浓缩除去乙酸乙酯，后用20％发酵液质量的水溶解。溶解液用葡聚糖凝胶LH-20进一步纯化，10％(v/v)甲醇洗脱除杂，收集50％(v/v)甲醇洗脱部分，减压浓缩除去甲醇，冻干，即获得低聚原花青素粉末。
实施例2
(1)一道发酵：收集荔枝皮，风干后粉碎，取荔枝皮粉末3kg，置于铁桶内，加入20倍质量水，加蔗糖11kg，混合，制得发酵原料。将50g酿酒酵母菌粉加入5kg含2wt％蔗糖的无菌水中，37℃水浴培养30min进行活化。活化后的酵母菌液倒入发酵原料中，接种1.8g 植物乳杆菌菌粉，搅拌混匀，室温密闭静置发酵。每隔24h取样测乙醇浓度和pH值，发酵48h后，乙醇浓度达到158.79mg/mL、pH降至4.02，结束一道发酵。
(2)二道发酵：将30g巴氏醋杆菌菌粉泼洒接种于经过一道发酵的发酵原料表层，无需搅拌。4层纱布封口室温静置发酵。每隔24h取样测乙醇浓度和pH值。发酵3d后，乙醇浓度达到45.43mg/mL、pH降至3.47，结束二道发酵，过滤除渣，得到发酵液。
(3)低聚原花青素纯化：将步骤(2)中的发酵液减压浓缩至原体积的20％，用3倍乙酸乙酯萃取3次，乙酸乙酯部分减压浓缩除去乙酸乙酯，后用25％发酵液质量的水溶解。溶解液用葡聚糖凝胶LH-20进一步纯化，10％(v/v)甲醇洗脱除杂，收集50％(v/v)甲醇洗脱部分，减压浓缩除去甲醇，冻干，即获得低聚原花青素粉末。
实施例3
(1)一道发酵：收集荔枝皮，风干后粉碎，取荔枝皮粉末3kg，置于铁桶内，加入25倍质量水，加蔗糖12kg，混合，制得发酵原料。将45g酿酒酵母菌粉加入4.5kg含2wt％蔗糖的无菌水中，37℃水浴培养30min进行活化。活化后的酵母菌液倒入发酵原料中，接种0.9g 植物乳杆菌菌粉，搅拌混匀，室温密闭静置发酵，每隔24h取样测乙醇浓度和pH值，发酵 72h后，乙醇浓度达到172.43mg/mL、pH降至3.87，结束一道发酵。
(2)二道发酵：将25g巴氏醋杆菌菌粉泼洒接种于经过一道发酵的发酵原料表层，无需搅拌。4层纱布封口室温静置发酵。每隔24h取样测乙醇浓度和pH值。发酵4d后，乙醇浓度达到78.90mg/mL、pH降至3.4，结束二道发酵，过滤除渣，得到发酵液。
(3)低聚原花青素纯化：将步骤(2)中发酵液减压浓缩至原体积的15％，用3倍乙酸乙酯萃取3次，乙酸乙酯部分减压浓缩除去乙酸乙酯，后用20％发酵液质量的水溶解。溶解液用葡聚糖凝胶LH-20进一步纯化，10％甲醇(v/v)洗脱除杂，收集50％(v/v)甲醇洗脱部分，减压浓缩除去甲醇，冻干，即获得低聚原花青素粉末。
对比例1(酵母接种量少)
(1)一道发酵：收集荔枝皮，风干后粉碎，取荔枝皮粉末3kg，置于铁桶内，加入15倍质量水，加糖源10kg，混合，制得发酵原料。将20g酿酒酵母菌粉加入2kg含2wt％蔗糖的无菌水中，37℃水浴培养30min进行活化。活化后的酵母菌液倒入发酵原料中，接种2.8g 植物乳杆菌菌粉，搅拌混匀，室温密闭静置发酵，每隔24h取样测乙醇浓度和pH值，发酵 24h后，乙醇浓度达到62.55mg/mL、pH降至4.04，结束一道发酵。
(2)二道发酵：将9.6g巴氏醋杆菌菌粉泼洒接种于经过一道发酵的发酵原料表层，无需搅拌。4层纱布封口室温静置发酵。每隔24h取样测乙醇浓度和pH值。发酵5d后，乙醇浓度达到12.45mg/mL、pH降至3.31，结束二道发酵，过滤除渣，得到发酵液。
(3)低聚原花青素纯化：将步骤(2)中的发酵液减压浓缩至原体积的15％，用3倍乙酸乙酯萃取3次，乙酸乙酯部分减压浓缩除去乙酸乙酯，后用20％发酵液质量的水溶解。溶解液用葡聚糖凝胶LH-20进一步纯化，10％(v/v)甲醇洗脱除杂，收集50％(v/v)甲醇洗脱部分，减压浓缩除去甲醇，冻干，即获得低聚原花青素粉末。
对比例2(不接种乳酸菌)
(1)一道发酵：收集荔枝皮，风干后粉碎，取荔枝皮粉末3kg，置于铁桶内，加入15倍质量水，加糖源10kg，混合，制得发酵原料。将48g酿酒酵母菌粉加入4.8kg含2wt％蔗糖的无菌水中，37℃水浴培养30min进行活化。活化后的酵母菌液倒入发酵原料中，室温密闭静置发酵，每隔24h取样测乙醇浓度和pH值，发酵24h后，乙醇浓度达到146.63mg/mL、 pH降至5.19，结束一道发酵。
(2)二道发酵：将9.6g巴氏醋杆菌菌粉泼洒接种于经过一道发酵的发酵原料表层，无需搅拌。4层纱布封口室温静置发酵。每隔24h取样测乙醇浓度和pH值。发酵5d后，乙醇浓度达到55.49mg/mL、pH降至3.27，结束二道发酵，过滤除渣，得到发酵液。
(3)低聚原花青素纯化：将步骤(2)中的发酵液减压浓缩至原体积的15％，用3倍乙酸乙酯萃取3次，乙酸乙酯部分减压浓缩除去乙酸乙酯，后用20％发酵液质量的水溶解。溶解液用葡聚糖凝胶LH-20进一步纯化，10％(v/v)甲醇洗脱除杂，收集50％(v/v)甲醇洗脱部分，减压浓缩除去甲醇，冻干，即获得低聚原花青素粉末。
对比例3(不接种醋酸杆菌、酵母接种量少)
(1)一道发酵：收集荔枝皮，风干后粉碎，取荔枝皮粉末3kg，置于铁桶内，加入15倍质量水，加糖源10kg，混合，制得发酵原料。将20g酿酒酵母菌粉加入2kg含2wt％蔗糖的无菌水中，37℃水浴培养30min进行活化。活化后的酵母菌液倒入发酵原料中，室温密闭静置发酵，每隔24h取样测乙醇浓度和pH值，发酵24h后，乙醇浓度达到143.51mg/mL、 pH降至4.2，结束一道发酵。
(2)二道发酵：将步骤(1)中的铁桶开盖，用4层纱布封口，室温静置继续发酵。每隔24h取样测乙醇浓度和pH值。发酵5d后，乙醇浓度达到179.52mg/mL、pH降至3.69，结束二道发酵，过滤除渣，得到发酵液。
(3)低聚原花青素纯化：将步骤(2)中的发酵液减压浓缩至原体积的15％，用3倍乙酸乙酯萃取3次，乙酸乙酯部分减压浓缩除去乙酸乙酯，后用20％发酵液质量的水溶解。溶解液用葡聚糖凝胶LH-20进一步纯化，10％(v/v)甲醇洗脱除杂，收集50％(v/v)甲醇洗脱部分，减压浓缩除去甲醇，冻干，即获得低聚原花青素粉末。
对比例4(乳酸菌接种量大)
(1)一道发酵：收集荔枝皮，风干后粉碎，取荔枝皮粉末3kg，置于铁桶内，加入15倍质量水，加糖源10kg，混合，制得发酵原料。将48g酿酒酵母菌粉加入4.8kg含2wt％蔗糖的无菌水中，37℃水浴培养30min进行活化。活化后的酵母菌液倒入发酵原料中，接种4.8g 植物乳杆菌菌粉，搅拌混匀，室温密闭静置发酵，每隔24h取样测乙醇浓度和pH值，发酵 24h后，乙醇浓度达到119.43mg/mL、pH降至3.56，结束一道发酵。
(2)二道发酵：将9.6g巴氏醋杆菌菌粉泼洒接种于发酵原料表层，无需搅拌。4层纱布封口室温静置发酵。每隔24h取样测乙醇浓度和pH值。发酵5d后，乙醇浓度达到41.57mg/mL、pH降至3.24，结束二道发酵，过滤除渣，得到发酵液。
(3)低聚原花青素纯化：将步骤(2)中发酵液减压浓缩至原体积的15％，用3倍乙酸乙酯萃取3次，乙酸乙酯部分减压浓缩除去乙酸乙酯，后用20％发酵液质量的水溶解。溶解液用葡聚糖凝胶LH-20进一步纯化，10％(v/v)甲醇洗脱除杂，收集50％(v/v)甲醇洗脱部分，减压浓缩除去甲醇，冻干，即获得低聚原花青素粉末。
对比例5(不发酵)
(1)提取：收集荔枝皮，风干后粉碎，取荔枝皮粉末3kg，置于铁桶内，加入15倍质量水，加入6.4kg乙醇，调节pH至4.0，室温密闭静止24h。加入2kg乙酸，调节pH至3.2，用4层纱布封口，室温静置5d，过滤除渣，得到提取液。
(2)纯化：将步骤(2)中的发酵液减压浓缩至原体积的15％，用3倍乙酸乙酯萃取3次，乙酸乙酯部分减压浓缩除去乙酸乙酯，后用20％发酵液质量的水溶解。溶解液用葡聚糖凝胶LH-20进一步纯化，10％(v/v)甲醇洗脱除杂，收集50％(v/v)甲醇洗脱部分，减压浓缩除去甲醇，冻干，即获得低聚原花青素粉末。
表1一道发酵后发酵液中pH、乙醇含量(mg/mL)
实施例1 实施例2 实施例3 对比例1 对比例2 对比例3 对比例4
乙醇 142.71 158.79 172.43 62.55 146.63 143.51 119.43
pH 4.17 4.02 3.87 4.04 5.19 4.20 3.56
表1结果显示，一道发酵后得到的发酵液中乙醇含量能达到142.71～172.43mg/mL，pH 值为3.87～4.17，一定浓度的乙醇和弱酸环境有利于荔枝皮粉末中原花青素的溶出，并保持稳定。对比例1中酵母接种量少，乙醇含量低；对比例2没接种乳酸菌，pH略高，不利于原花青素的稳定和溶出；对比例4中乳酸菌接种量大，影响酵母菌发酵产乙醇，乙醇含量略低，不利于原花青素溶出。
表2二道发酵后发酵液中pH、乙醇、乙酸含量(mg/mL)
Figure RE-GDA0002404183090000071
表2结果显示，二道发酵过程中，醋酸杆菌转化乙醇生产乙酸，实施例中乙酸含量达到 44.08～47.69mg/mL，ph值为3.21～3.47。一定浓度的乙酸能催化溶出的高聚原花青素解聚为低聚原花青素，并维持低聚原花青素稳定，不会再次聚合为高聚原花青素。对比例3中未接种醋酸杆菌，乙酸浓度低，不利于高聚原花青素解聚。
实施例和对比例中样品的提取得率和纯度检测
(1)低聚原花青素含量(M1)检测
将实施例1-3和对比例1-5的低聚原花青素样品稀释10倍，各取1mL于试管，加入3mL 4％(v/v)香草醛甲醇溶液充分摇匀，于20℃下反应5min，再加入1.5mL浓盐酸，反应10min，测定OD500nm。样品空白组用去离子水代替样品液，试剂空白组用甲醇溶液代替4％(v/v) 香草醛甲醇溶液。
标准曲线：准确称量10mg表儿茶素标准品，加水定容至10mL，得到1mg/mL标准溶液。将标准溶液稀释至不同浓度：0.1mg/mL、0.08mg/mL、0.06mg/mL、0.04mg/mL、0.02mg/mL、0.01mg/mL，测定并绘制物质浓度-吸光值标准曲线。经回归拟合，标准方程为：y＝3.385x+0.1535R2＝0.9945。
(2)提取得率和纯度
Figure RE-GDA0002404183090000081
Figure RE-GDA0002404183090000082
M：荔枝皮粉末质量(g)
C1：乙酸乙酯萃取液中原花青素浓度(g/L)
V1：乙酸乙酯萃取液体积(L)
M1：低聚原花青素粉末中低聚原花青素含量(g)
M2：低聚原花青素粉末质量(g)
表3低聚原花青素的提取得率和纯度
Figure RE-GDA0002404183090000083
表3结果显示，实施例中提取得率达6.56％～7.27％，现有文献中荔枝皮原花青素提取率低于2％；并且本发明实施例中低聚原花青素纯度可达90％以上。对比例1中酵母接种量少，发酵液中乙醇含量低，原花青素溶出少，因此提取得率低；由于含原花青素结构上含多个酚羟基，使得其在弱酸环境下较为稳定，对比例2没接种乳酸菌，pH略高，不利于原花青素的稳定和溶出；对比例3中不接种醋酸杆菌进行二道发酵，发酵液中乙酸含量低，不利于高聚原花青素降解，使得制备的低聚原花青素得率低；对比例4中乳酸菌接种量大，pH值进一步降低，并且乳酸菌产生的单宁酶易将原花青素单体进一步降解为酚酸，使得提取得率和纯度都较低；对比例5提供了乙醇、乙酸和弱酸环境，没有经过发酵，提取过程中提取液微环境为静止过程，原花青素溶出达到一定程度即会减弱或停止，同时缺少微生物发酵产生的酶和其他影响，单独的乙酸催化，使得高聚原花青素的解聚效率较低，最终提取得率较低，纯度也不高。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (8)

1.一种从荔枝皮中制备低聚原花青素的方法，其特征在于具体包括如下步骤：
（1）将荔枝皮粉末、水以及糖源混合，得到发酵原料，接种酵母菌和乳酸菌，搅拌均匀，密闭静置并进行一道发酵；
（2）将醋酸杆菌接种于步骤（1）中一道发酵后的发酵原料，封口，静置并进行二道发酵；
（3）将步骤（2）二道发酵得到的发酵液过滤，浓缩，萃取，溶解，得到低聚原花青素粗提液；
（4）将步骤（3）得到的低聚原花青素粗提液纯化，干燥，获得低聚原花青素；
步骤（1）中所述的酵母菌为酿酒酵母，所述的酵母菌的接种量为按其在发酵原料中的质量为0.5~1‰配比计算；
步骤（1）中所述的乳酸菌为植物乳杆菌、副干酪乳杆菌和发酵乳杆菌中的至少一种，所述的乳酸菌的接种量为按其在发酵原料中的质量为0.01~0.06‰配比计算；
步骤（1）中所述的一道发酵的时间为24~72h、温度为30~35℃；
步骤（2）中所述的醋酸杆为巴氏醋杆菌和醋酸菌中的至少一种，所述的醋酸杆菌的接种量为按其在发酵原料中的质量为0.2~0.8‰配比计算，所述的醋酸杆菌的菌粉中活菌数为6.2*109~6.5*109CFU/g；
步骤（2）中所述的二道发酵的时间为3~5天、温度为30~35℃。
2.根据权利要求1所述的从荔枝皮中制备低聚原花青素的方法，其特征在于：
步骤（1）中所述的糖源为蔗糖。
3.根据权利要求1所述的从荔枝皮中制备低聚原花青素的方法，其特征在于：
步骤（1）中所述的水的用量优选为按其与所述的荔枝皮粉末的质量比为15~25：1配比计算。
4.根据权利要求1所述的从荔枝皮中制备低聚原花青素的方法，其特征在于：
步骤（1）中所述的酵母菌是经过活化得到的酵母菌液，具体步骤：将酵母菌粉与质量比为2%的蔗糖溶液按照1：100的质量比混合溶解，37℃水浴培养30min制得。
5.根据权利要求1所述的从荔枝皮中制备低聚原花青素的方法，其特征在于：
步骤（1）中所述的一道发酵为乙醇浓度达到140~180 mg/mL、pH降至3.8~4.2时结束发酵。
6.根据权利要求1所述的从荔枝皮中制备低聚原花青素的方法，其特征在于：
步骤（2）中所述的二道发酵为乙醇浓度降至45~80 mg/mL、pH值降至3.2~3.5时结束发酵。
7.根据权利要求1所述的从荔枝皮中制备低聚原花青素的方法，其特征在于：
步骤（2）中所述的接种醋酸杆菌是将醋酸杆菌的菌粉泼洒于步骤（1）中一道发酵后的发酵原料表层；
步骤（2）中所述的封口为采用4层纱布封口；
步骤（3）中所述的浓缩为减压浓缩，将所述的发酵液减压浓缩至发酵液原体积的15%～30%；
步骤（3）中所述的萃取为采用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯采用减压浓缩去除；
步骤（3）中所述的溶解为采用水溶解，水的用量为萃取后的发酵液质量的20~30%；
步骤（4）中所述的纯化为采用葡聚糖凝胶LH-20进行纯化，然后进行洗脱；
步骤（4）中所述的干燥为冷冻干燥。
8.根据权利要求7所述的从荔枝皮中制备低聚原花青素的方法，其特征在于：
所述的乙酸乙酯的用量为浓缩后发酵液体积的3倍；萃取次数为3次；
所述的洗脱为采用体积比为10%的甲醇进行洗脱，收集体积比为50%的甲醇洗脱部分，之后减压浓缩去除甲醇。
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