CN111134174A - 一种季也蒙酵母用于西兰花采后病害的控制及贮藏保鲜的方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于采后病害生物防治领域，涉及一种季也蒙酵母用于西兰花采后病害的控制及贮藏保鲜的方法；该酵母经鉴定为季也蒙酵母Y1，保藏编号为：CCTCC NO：M 2019933；方法为：将酵母菌悬液喷洒于消毒西兰花表面，使其均匀覆盖于西兰花表面；待西兰花自然晾干后将其置于容器中，用纱布密封后，于20℃下存放，即可实现对采后西兰花病害防治及贮藏保鲜；经该酵母处理的西兰花病情指数显著降低，且可延缓其黄化，并可缓解可溶性糖、维生素C和叶绿素含量的下降和可滴定酸含量的升高，对其贮藏品质无明显不良影响，且可在一定程度上减缓其品质的下降；另一方面可减少化学杀菌剂的使用，安全环保，具有良好的经济效益和社会效益。

Description

一种季也蒙酵母用于西兰花采后病害的控制及贮藏保鲜的 方法

技术领域

本发明属于蔬菜采后病害生物防治领域，具体涉及一种季也蒙酵母用于西兰花采后病害的控制及贮藏保鲜的方法。

背景技术

西兰花，学名Brassica oleracea L.var.botrytis L.，又名绿菜花、青花菜意大利芥蓝，属十字花科芸薹属甘蓝变种，一二年生草本植物。西兰花营养丰富，富含蛋白质、碳水化合物、脂肪、矿物质、维生素和胡萝卜素等，营养成份位居同类蔬菜之首，被誉为“蔬菜皇冠”。西兰花还具有防癌抗癌、抗氧化、提高机体免疫力、预防及调节高血压和心脏病、有效控制糖尿病等功效，是具有极高市场价值的蔬菜品种，也是我国主要出口蔬菜之一。

采后西兰花呼吸代谢旺盛，在贮运和销售过程中容易受到机械损伤及病原菌侵染，花体迅速衰老黄化，品质下降，失去商品性。在西兰花采后病害中，黑斑病是最常见且发病率最高的真菌性病害之一，其发病速度快，传播范围广，病原菌具有很强的潜伏性，病害在贮藏期大量发生，造成严重的经济损失。因此，采取合适、有效的方法控制西兰花采后病害是十分必要且亟待解决的。

目前，国内外控制果蔬采后病害的方法主要有物理防治、化学防治和生物防治三种方法。物理方法的优点是安全无害，对人体及自然环境无不良影响，但对设备及成本的要求往往较高，控制效果有局限性，如有些致病菌耐低温，低温下仍可生长，造成果蔬腐败，且可能造成冷害。化学杀菌剂因其高效、低价、使用方便的优点，是现今使用仍最为广泛、且最为常见的一种防治方法。但由于长期使用化学杀菌剂会导致病原菌产生抗药性，降低化学药剂的杀菌效果，且长时间、高浓度地使用化学杀菌剂会造成其在果蔬产品上残留，威胁人类健康。因而，积极寻找可替代化学杀菌剂的高效、安全的果蔬采后病害防治方法显得尤为重要。

生物控制法因具有安全无毒、对环境无污染、高效、经济和不引起病原菌产生抗药性等优点，逐渐成为控制果蔬采后病害研究的热点，并有望在未来取代化学杀菌剂。已经研究的可作为果蔬采后病害接抗菌的微生物包括：细菌、霉菌和酵母菌等。由于酵母菌遗传稳定，抑菌谱广、效价高，并且具有较强的抗逆能力，在防治过程能够迅速的适应果蔬表面干燥恶劣的生存环境，在表面定殖并快速的生长繁殖，同病原菌竞争营养和空间，因而具有广泛的应用前景。Chautz等从柠檬的果实体表面上分离得到的汉逊德巴利酵母(Debaryomyces hansenii)，对柑桔青霉病和绿霉病以及酸腐病等均有较显著的防治效果；范青等研究发现：从桃果的伤口上分离的到的膜醭毕赤酵母(Pichiamembranefaciens Hansen)对核果类果实的软腐病，呈现较好的抑制效果；Zhao等研究表明，采前喷施拮抗酵母Pichiaguilliermondii可以显著减少樱桃番茄贮藏期间自然病害的发生；Meng等研究表明，采前喷施酵母Cryptococcus laurentii能够显著降低葡萄采后的腐烂指数；但是，目前针对西兰花采后黑斑病病害防治的酵母菌较少，而且还没有季也蒙酵母在西兰花应用上的报道。

本发明中的季也蒙酵母被认为是安全的酵母之一。研究结果表明，该酵母能显著降低西兰花的病情指数，有效控制西兰花采后病害的发生，延缓其生理品质的下降，从而达到西兰花贮藏保鲜的目的。

发明内容

针对现有技术的缺陷与不足，本发明提供一株分离筛选自西兰花上的季也蒙酵母(Meyerozyma guilliermondii)Y1，该酵母能够有效控制西兰花采后黑斑病和自然腐烂的发生，减少采后病害造成的损失，具有潜在的应用价值。

为了实现以上目的，本发明采用的技术方案如下：

本发明所提供的防治西兰花采后病害的季也蒙酵母菌株Y1，现保存于中国湖北省武汉市武汉大学的中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为：CCTCC NO：M 2019933，保藏日期为2019年11月15日，建议的分类命名为季也蒙酵母(Meyerozymaguilliermondii)Y1。

首先，本发明的季也蒙酵母Y1用于控制西兰花的黑斑病，具体步骤为：选取新鲜的西兰花，分割成大小均一的小朵，消毒后晾干；所述消毒是用75％的酒精喷洒其表面，使西兰花完全被酒精覆盖，杀菌处理时间1～5min；然后用清水将其冲洗干净，放入无菌环境内晾干；晾干后将1.0×10⁸cells/mL的酵母菌悬液喷洒于消毒西兰花表面，使其均匀覆盖于西兰花表面；2h后，在西兰花的表面接种黑斑病的致病菌芸苔生链格孢菌孢子悬浮液(1×10⁵spores/mL)；待西兰花自然晾干后，将其置于容器中，用八层纱布密封后，于20℃下存放；结果表明，季也蒙酵母Y1对感染芸苔生链格孢菌孢子西兰花病害具有良好的防治效果。

利用季也蒙酵母Y1对采后西兰花进行病害防治及贮藏保鲜的方法，按照下述步骤进行：

(1)首先将季也蒙酵母Y1接种在NYDA培养基上、28℃培养48h进行活化；然后，转接入NYDB培养基中，在28～30℃培养20～24h；活化后的酵母培养液8000r/min、离心15min，得到菌体，用无菌生理盐水洗涤数次后，配置成1.0×10⁸cells/mL的菌悬液；

(2)控制西兰花自然腐烂：选取新鲜的西兰花，不做消毒处理，保持西兰花的自然状况；直接将酵母菌悬液喷洒于西兰花表面，使其均匀覆盖于西兰花表面；待西兰花自然晾干后将其置于容器中，进行密封，密封后，置于恒温培养箱中贮藏，恒温培养箱的湿度为90％、温度为20℃；即可实现对采后西兰花病害防治及贮藏保鲜的效果。

优选的，所述的NYDA培养基成分如下：牛肉膏8g，酵母浸出物5g，葡萄糖10g，琼脂20g，121℃湿热灭菌20min。

优选的，所述的NYDB培养基成分如下：牛肉膏8g，酵母浸出物5g，葡萄糖10g，蒸馏水1000mL，pH自然，121℃湿热灭菌20min。

优选的，所述用无菌生理盐水洗涤数次具体为2～3次。

优选的，所述密封时采用消毒并烘干的纱布密封；所述纱布密封时纱布的层数为6～8层。

优选的，所述西兰花采后病害具体为黑斑病。

本发明的优点：

(1)本发明所使用的季也蒙酵母(Meyerozyma guilliermondii)Y1是从西兰花上分离、筛选到的酵母菌，经动物急性毒性试验确认其安全无毒，对人体健康无危害。

(2)本发明所使用的季也蒙酵母(Meyerozyma guilliermondii)Y1可以有效控制西兰花采后黑斑病和自然腐烂，从而降低西兰花采后病害所造成的损失。

(3)本发明所使用的季也蒙酵母(Meyerozyma guilliermondii)Y1对采后西兰花主要品质指标，可溶性糖、维生素C和叶绿素含量无不良影响，且可以减缓可溶性糖、维生素C和叶绿素含量的降低以及有机酸含量的增加，从而控制西兰花品质下降。

(4)本发明所使用的季也蒙酵母(Meyerozyma guilliermondii)Y1目前尚未有在西兰花采后病害防治上应用的报道，具有独创性。

本发明使用季也蒙酵母(Meyerozyma guilliermondii)Y1，既可以代替化学杀菌剂防治西兰花采后病害，减少化学杀菌剂对人体及环境的潜在危害，亦可减少使用物理方法贮藏保鲜时所产生的经济和能源负担，具有显著的经济效益和社会效益。

附图说明

图1为根据菌株Y1 5.8S rDNA-ITS区序列构建的进化树。

图2为不同浓度季也蒙酵母Y1对西兰花黑斑病的控制作用；其中：CK为无菌生理盐水处理组，即对照组；10^6、10^7、10^8和10^9分别表示酵母浓度分别为1×10⁶，1×10⁷，1×10⁸和1×10⁹cells/mL的拮抗酵母处理的西兰花；所使用霉菌浓度均为1×10⁵spores/mL；不同字母代表差异显著(P<0.05)。

图3为季也蒙酵母Y1对西兰花自然腐烂的控制作用；注：CK为无菌生理盐水处理组，即对照组；M.guilliermondii为1×10⁸cells/mL酵母菌悬液处理组；不同字母代表差异显著(P<0.05)。

图4为季也蒙酵母Y1对西兰花色度的影响；注：A为对西兰花L*值的影响，B为对西兰花a*值的影响，C为对西兰花b*值的影响；CK为无菌生理盐水处理组，即对照组；M.guilliermondii为浓度1×10⁸cells/mL的季也蒙酵母Y1菌悬液处理组；不同字母代表差异显著(P<0.05)。

图5为季也蒙酵母Y1对西兰花主要品质指标的影响；其中，A为季也蒙酵母Y1对可溶性糖含量的影响；B为季也蒙酵母Y1对叶绿素含量的影响；C为季也蒙酵母Y1对维生素C含量的影响；D为季也蒙酵母Y1对可滴定酸含量的影响；注：CK为无菌生理盐水处理组，即对照组；M.guilliermondii表示浓度1×10⁸cells/mL的季也蒙酵母Y1菌悬液处理组；不同字母代表差异显著(P<0.05)。

具体实施方式

通过借助以下实施实例更加详细的诠释本发明。以下实施例仅是说明性的，本发明并不受这些实施例的限制。

季也蒙酵母Y1培养程序为：(1)固体活化：将所用酵母菌株接种于NYDA培养基中，在28℃培养48h，进行活化；(2)液体培养：在250mL的三角瓶中装入50mL的NYDB种子培养基，用接种环接入一环活化好的酵母，在28℃，180rpm条件下培养24h；(3)离心分离再悬浮：将上述酵母培养液在8000r/min条件下，离心15min，并用无菌生理盐水洗涤2次，以去除培养基质，最后用无菌生理盐水重新再悬浮，最终调节至所需的酵母细胞浓度。

本发明所用到的病原菌—芸苔生链格孢菌(Alternaria brassicicola)系从感病西兰花上分离筛选得到，在PDA培养基上25℃培养8d，刮取孢子于无菌生理盐水中得到悬浮液，最终调至1.0×10⁵spores/mL。

实施例1：

Y1菌株微生物学特性如下：

一)形态学特征

(1)NYDA培养基(牛肉膏8g，酵母浸出物5g，葡萄糖10g，琼脂20g，115℃湿热灭菌20min)上28℃培养48h，菌落呈圆形、乳白色、稍隆起、边缘光滑、较湿润、易挑起。细胞形态呈椭圆形或卵圆形，一端或两端芽殖。

(2)在NYDB液体培养基中培养24h后，菌液浑浊，有沉淀，有特殊气味。

二)分子生物学鉴定

对分离筛选出的酵母菌株Y1的5.8S rDNA-ITS区序列进行分析，在NCBI检索，确定为季也蒙酵母(Meyerozyma guilliermondii)。根据检索到的同源菌株，应用MEGA7软件，构建生物进化关系树如图1所示。

本发明所提供的防治西兰花采后病害的拮抗酵母菌株Y1，现保存于湖北省武汉市武昌区八一路珞珈山，中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为：CCTCC NO：M2019933，保藏日期为2019年11月15日，建议的分类命名为季也蒙酵母(Meyerozymaguilliermondii)Y1。

实施例2：

季也蒙酵母Y1安全性实验

一)实验方案

酵母菌泥的制备：

季也蒙酵母Y1在NYDB中的液体培养液，离心并用无菌生理盐水洗涤两次后获得菌泥，再用无菌生理盐水稀释成所需浓度。每次小鼠灌胃的菌液均来自新鲜的菌泥稀释。

试验品种为ICR小鼠，购买于江苏大学动物实验中心合格证编号NO.201613561，许可证号SCXK(苏)2013-0011，执行标准GB15193.3-1994。选择体重范围18g～22g清洁级的ICR小鼠40只，雌雄各半。试验前，小鼠放置于动物实验中心正常喂食3d，并在试验前禁食4h，将小鼠分为4组，每组10只，雌雄各5只。将无菌水与配制好的10g/kg，21.5g/kg，46.4g/kg剂量的酵母菌菌液进行一次经口灌胃，随后观察14d，整个实验过程中，观察并记录小鼠的活动情况、有无异常行为及中毒或死亡的现象。若出现死亡现象，必要时可延长到28d。求出半数致死量，并确定急性毒性分级。

二)实验结果

按照上述试验步骤，统计季也蒙酵母Y1安全性实验结果如下：

灌入季也蒙酵母Y1的小白鼠14d内未出现死亡现象，整个实验过程中小白鼠未出现中毒和其它异常现象。由表1可以看出，该实验小鼠雌、雄性经口LD 50均大于46.4g/kg体重，根据急性毒性分级标准可知，季也蒙酵母Y1属于安全无毒类酵母。

表1季也蒙酵母Y1对小鼠经口急性毒性实验结果

实施例3：

用于防治西兰花采后病害季也蒙酵母Y1浓度的筛选

一、试验方案

挑选色泽一致、表面无机械损伤及病虫伤害的西兰花，先用清水冲洗净西兰花表面的泥土及杂质，接着将其处理成大小均一的小朵，自然晾干后，用75％的酒精喷洒其表面，使其完全被酒精覆盖1min进行杀菌处理，结束后用清水将其冲洗干净，放入超净工作台内晾干。分别用1×10⁶cells/mL、1×10⁷cells/mL、1×10⁸cells/mL、1×10⁹cells/mL浓度的季也蒙酵母Y1及无菌生理盐水喷洒于西兰花表面，2h后，在西兰花花球上固定的灭菌滤纸片上接种30μL的1×10⁵spores/mL的病原菌孢子悬浮液。自然晾干后，将西兰花放入消毒后的饭盒中，用消毒并烘干的八层纱布密封，置于20℃恒温恒湿培养箱(湿度90％)中贮藏一定时间后统计西兰花病情指数。每个处理重复三次，每次重复16朵花球。整个试验重复2次。

病情分级标准如下：

0：西兰花新鲜，有特有清香，颜色翠绿

1：无清香，花球开始黄化

2：无清香，花球稍松散，黄化面积加大

3：轻微异味，病斑处开始长菌丝

4：有异味，菌丝进一步生长、增加

5：明显异味，完全黄化，腐烂严重

病情指数的计算公式如下：

病情指数＝∑(病情级别×病情样品数百分比)

二、试验结果

由图2可知，在整个贮藏期间，1×10⁸cells/mL和1×10⁹cells/mL酵母菌悬液处理的西兰花病情指数显著低于对照组(p<0.05)且保持较稳定的控制效果。因此，1×10⁸cells/mL和1×10⁹cells/mL酵母菌悬液对西兰花采后黑斑病均具有显著的控制作用，考虑成本问题，采用1×10⁸cells/mL浓度用于后续试验。

实施例4：

季也蒙酵母Y1对西兰花采后自然腐烂的控制作用

一、实验方案

挑选色泽一致、表面无机械损伤及病虫伤害的西兰花。在未清洗和消毒的西兰花表面均匀喷洒1×10⁸cells/mL的季也蒙酵母Y1悬液，喷洒无菌生理盐水的西兰花作为对照组。自然晾干后，将西兰花放入消毒后的饭盒中，用消毒并烘干的八层纱布密封，置于20℃恒温恒湿培养箱(湿度90％)中贮藏一定时间后统计西兰花病情指数。每个处理重复三次，每次重复16朵花球。整个试验重复2次。

病情指数的计算公式如下：

病情指数＝∑(病情级别×病情样品数百分比)

二、试验结果

由图3所示，经季也蒙酵母Y1处理过的西兰花的病情指数始终显著(p<0.05)低于对照组西兰花，由此表明，季也蒙酵母Y1对采后西兰花的自然腐烂有显著的控制作用。

实施例5：

季也蒙酵母Y1对西兰花采后色度的控制作用

一、实验方案

挑选色泽一致、表面无机械损伤及病虫伤害的西兰花。在未清洗和消毒的西兰花表面均匀喷洒1×10⁸cells/mL的季也蒙酵母Y1悬液，喷洒无菌生理盐水的西兰花作为对照组。自然晾干后，将西兰花放入消毒后的饭盒中，用消毒并烘干的八层纱布密封，置于20℃恒温恒湿培养箱(湿度90％)中贮藏一定时间后测定西兰花色度值。每个处理重复三次，每次重复16朵花球。色度值利用手持色差仪进行测量，整个试验重复2次。

二、试验结果

由图4可以看出，两组处理的西兰花在贮藏过程中明度值L*(A)和色度值b*(C)均是先升高然后基本维持不变，表明两组西兰花的颜色均是先变浅、变黄，然后不再有明显变化。但是季也蒙酵母Y1处理组的L*和b*却始终显著低于对照组(p<0.05)，说明Y1处理的西兰花比对照组的颜色深和绿。Y1处理的西兰花的色度值a*(B)在整个贮藏过程中均显著低于对照组(p<0.05)，且贮藏3d后才开始显著增加，表明拮抗酵母处理的西兰花贮藏至3d后，颜色才逐渐由绿变红。由此可见，季也蒙酵母Y1可以有效控制采后西兰花的黄化。

实施例6：

季也蒙酵母Y1对西兰花采后可溶性糖、叶绿素、维生素C和可滴定酸含量的影响一、实验方案

挑选色泽一致、表面无机械损伤及病虫伤害的西兰花。。在未清洗和消毒的西兰花表面均匀喷洒1×10⁸cells/mL的季也蒙酵母Y1悬液，喷洒无菌生理盐水的西兰花作为对照组。自然晾干后，将西兰花放入消毒后的饭盒中，用消毒并烘干的八层纱布密封，置于20℃恒温恒湿培养箱(湿度90％)中贮藏一定时间后取样测定西兰花可溶性糖、叶绿素、维生素C和可滴定酸含量。每个处理重复三次，每次重复16朵花球，整个试验重复2次。

具体测定方法如下：

1、可溶性糖：采用蒽酮比色法，称取2g西兰花组织，共三份，分别置于25mL刻度试管中，加10mL蒸馏水，塑料薄膜封口，于沸水浴中提取30min，将提取液过滤定容至100mL。吸取上清液1mL于试管中，加1mL蒸馏水，0.5mL蒽酮乙酸乙酯和5mL浓硫酸，充分震荡混匀后立即放入沸水浴保温1min，取出后自然冷却至室温，以空白作参比，在630nm波长下测定吸光度。

可溶性糖含量计算如下：

其中c为根据标曲查到的糖含量(μg)，V是提取液体积(ml)，a是吸取样品液体积(ml)，n是稀释倍数，W是样品重量(g)。

2、叶绿素：称取0.5g样品，共三份，分别放入研钵中，加少量石英砂和碳酸钙及2-3ml95％乙醇，研磨成匀浆，再加95％乙醇10ml，继续研磨至组织变白，静置3-5分钟；取滤纸一张，置漏斗中，用乙醇湿润，沿玻璃棒将提取液倒入漏斗中，过滤到25ml棕色容量瓶中，用少量95％乙醇冲洗研钵，钵棒及残渣数次，最后连同残渣一起倒入漏斗中；用滴管吸取乙醇，将滤纸上的叶绿体色素全部洗入容量瓶中，直至滤纸和残渣中无绿色为止，最后用乙醇定容至25ml，摇匀；将叶绿体色素提取液倒入比色杯内，以95％乙醇为空白，在波长665nm、649nm和470nm下测定吸光值。

叶绿素含量计算如下：

C_a＝13.95D₆₆₅-6.88D₆₄₉

C_b＝24.96D₆₄₉-7.32D₆₆₅

其中C为色素含量(mg/dm³)；V为提取液体积(ml)，N为稀释倍数，w为样品质量(g)。

3、维生素C：2,6-二氯靛酚钠法，取1g西兰花组织样品置于研钵中，加入10mL 2％草酸溶液，在冰浴避光条件下研磨，研磨呈浆状后，转入50mL离心管中，用草酸溶液冲洗研钵，倒入离心管中，4℃、9000r/min下离心20min，吸取上清液于50mL容量瓶中，定容至刻度，摇匀，过滤溶液备用(0.45μm滤膜)。取10mL滤液置于25mL的锥形瓶中，用经标定的2,6-二氯靛酚溶液滴定滤液，至出现微红色且30s不褪色。记下用量，同时以10mL 2％的草酸溶液做空白，按照同样的方法进行滴定，重复三次。根据2,6-二氯靛酚的用量，计算西兰花中抗坏血酸的含量，以每100g样品(鲜重)中含有的抗坏血酸的质量表示，即mg/100g。

抗坏血酸含量计算如下：

其中V₁是样品滴定消耗的染料体积(ml)，V₀是空白滴定消耗的染料体积(ml)，V_T是样品提取液总体积(ml)，V_s是滴定时所取样品溶液体积(ml)，A是1ml染料溶液相当于抗坏血酸的质量，单位mg/ml，W是样品质量(g)。

4、可滴定酸：称取1g西兰花组织，共三份，分别放入研钵中，加入5mL蒸馏水研磨成匀浆，转移到50mL离心管中，再加10mL分次洗涤研钵，洗涤液收集于同一离心管中，室温放置1h以充分提取，然后4℃、10000r/min离心20min，弃去沉淀，上清过滤于100mL容量瓶，以蒸馏水定容至刻度线，摇匀。取提取液50mL于试管中，在80℃的恒温水浴锅内加热30min，期间摇动数次。取上清液10mL于锥形瓶内，并加入2滴酚酞试剂，用0.01mol/L NaOH滴定至淡红色为止，进行三次重复试验。

样品可滴定酸含量计算如下：

其中V为滴定样品所用的NaOH体积(mL)，N为NaOH的浓度(mmol/mL)，W为样品重量(g)。

二、试验结果

按照上述步骤试验，统计的试验结果如图5所示。由图可知，Y1处理可以缓解叶绿素(A)、维生素C(B)、可溶性糖(C)含量的降低和可滴定酸(D)含量的升高。贮藏过程中，西兰花叶绿素、维生素C和可溶性糖含量降低以及可滴定酸含量升高会降低西兰花品质。因此，Y1处理对西兰花品质无显著不良影响，且可以一定在程度上缓解其品质降低。

说明：以上实施例仅用以说明本发明而并非限制本发明所描述的技术方案；因此，尽管本说明书参照上述的各个实施例对本发明已进行了详细的说明，但是本领域的普通技术人员应当理解，仍然可以对本发明进行修改或等同替换；而一切不脱离本发明的精神和范围的技术方案及其改进，其均应涵盖在本发明的权利要求范围内。

Claims (6)

1.季也蒙酵母(Meyerozyma guilliermondii)Y1，保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为：CCTCC NO：M 2019933。

2.根据权利要求1所述的季也蒙酵母Y1用于西兰花采后病害的控制及贮藏保鲜的方法，其特征在于，具体步骤如下：

(1)首先将季也蒙酵母Y1进行活化，然后接种在NYDB培养基中、于28～30℃发酵培养20～24h，离心获得菌体，用无菌生理盐水洗涤数次后，再用无菌生理盐水制备成1×10⁸cells/mL的菌悬液；

(2)选取新鲜的西兰花，不做消毒处理，保持西兰花的自然状况；直接将步骤(1)得到的酵母菌悬液喷洒于西兰花表面，室温下晾干，将西兰花放入消毒后的容器中，进行密封，密封后，置于恒温培养箱中贮藏，恒温培养箱的湿度为90％、温度为20℃；实现对西兰花采后病害的控制及贮藏保鲜。

3.根据权利要求2所述的季也蒙酵母Y1用于西兰花采后病害的控制及贮藏保鲜的方法，其特征在于，所述密封时采用消毒并烘干的纱布密封。

4.根据权利要求3所述的季也蒙酵母Y1用于西兰花采后病害的控制及贮藏保鲜的方法，其特征在于，所述纱布密封时纱布的层数为6～8层。

5.根据权利要求2所述的季也蒙酵母Y1用于西兰花采后病害的控制及贮藏保鲜的方法，其特征在于，所述西兰花采后病害具体为黑斑病。

6.根据权利要求2所述的季也蒙酵母Y1用于西兰花采后病害的控制及贮藏保鲜的方法，其特征在于，所述的NYDB培养基为：酵母膏5g，葡萄糖10g，牛肉浸膏8g，蒸馏水1000ml，pH自然，115℃灭菌20min。

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