CN111116603B - 一种制备去氧地胆草内酯或异去氧地胆草内酯的方法 - Google Patents

一种制备去氧地胆草内酯或异去氧地胆草内酯的方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种制备去氧地胆草内酯或异去氧地胆草内酯的方法。本发明提供的方法采用AB‑8大孔树脂初步富集和HSCCC分离纯化，可以制备得到纯度分别为99.6％、99.5％的去氧地胆草内酯、异去氧地胆草内酯，回收率分别达1.05g去氧地胆草内酯/1kg地胆草药材、2.38g异去氧地胆草内酯/1kg地胆草药材，纯度高且回收率高。

Description

一种制备去氧地胆草内酯或异去氧地胆草内酯的方法
技术领域
本发明属于化学领域，涉及天然产物的制备方法，具体涉及一种制备去氧地胆草内酯或异去氧地胆草内酯的方法。
背景技术
去氧地胆草内酯和异去氧地胆草内酯是两种天然产物，二者为同分异构体，目前已有二者多种活性研究报道，且陆续有新的药理活性报道。
但是，目前尚无成熟可行的方法有针对性地制备去氧地胆草内酯或异去氧地胆草内酯。
发明内容
本发明是为了克服现有技术中存在的不足，提供一种制备去氧地胆草内酯或异去氧地胆草内酯的方法。
本发明技术方案如下：
一种制备去氧地胆草内酯或异去氧地胆草内酯的方法，包括：
步骤一：地胆草提取物的制备
将地胆草药材粉碎，加入醇水溶液，热回流提取，提取液减压浓缩得浸膏；取AB-8大孔树脂装于色谱柱中，用蒸馏水冲洗至无醇味，备用；将浸膏用去离子水溶解，过滤，滤液上样于AB-8大孔树脂柱，静态吸附适当时间，先用45％乙醇洗脱10个柱体积，再用75％乙醇洗脱，收集第8～9个柱体积洗脱液，减压浓缩得地胆草提取物。
步骤二：HSCCC分离纯化
将二氯甲烷、正丁醇、乙醇和水按照体积比5:2:1:4混合，于分液漏斗中充分振荡后静置分层，分别取上下相，超声脱气，以下相作为固定相，上相为流动相；将固定相注满高速逆流色谱仪的螺旋管，正转转速800r/min，温度25℃，以5mL/min的体积流量泵入流动相，当流动相流出主机且检测基线稳定后，取用流动相溶解的地胆草提取物样品溶液注入主机，根据色谱图收集去氧地胆草内酯或异去氧地胆草内酯色谱峰对应的洗脱液，回收溶剂即得去氧地胆草内酯或异去氧地胆草内酯。
优选地，步骤一中所述醇水溶液为95％乙醇。
优选地，步骤一中按照100g浸膏：5kg大孔树脂的比例取AB-8大孔树脂装于内径为10cm的色谱柱中。
优选地，步骤一中将浸膏用1倍柱体积的去离子水溶解，过滤，滤液上样于AB-8大孔树脂柱，静态吸附6h。
优选地，HSCCC分离纯化步骤中的检测波长220nm。
有益技术效果：
本发明提供的方法可以制备得到纯度分别为99.6％、99.5％的去氧地胆草内酯、异去氧地胆草内酯，回收率分别达1.05g去氧地胆草内酯/1kg地胆草药材、2.38g异去氧地胆草内酯/1kg地胆草药材，纯度高且回收率高。
附图说明
图1为HSCCC分离纯化色谱图；
图2为去氧地胆草内酯对照品及分离纯化品的HPLC色谱图；
图3为异去氧地胆草内酯对照品及分离纯化品的HPLC色谱图。
具体实施方式
下面通过具体的实施例详细介绍本发明实质性内容，但不能以此限定本发明的保护范围。
一、试验材料
地胆草药材购于安徽亳州中药材市场，为菊科地胆草属植物地胆草E.scaber的干燥全草。
AB-8大孔树脂购自天津浩聚树脂科技有限公司。
去氧地胆草内酯(CAS：29307-03-7)对照品的纯度为97.5％，异去氧地胆草内酯(CAS：38927-54-7)对照品的纯度为98.0％，均购自上海莼试生物技术有限公司。
TBE-300C型高速逆流色谱仪为上海同田生物技术有限公司产品。
二、试验方法
1、地胆草提取物的制备
将地胆草药材粉碎，按照1kg药材：20L溶剂的比例加入95％乙醇，85℃热回流提取3次，前两次每次2h，第三次1h。过滤合并提取液，减压浓缩得浸膏。按照100g浸膏：5kg大孔树脂的比例取已用95％乙醇活化的AB-8大孔树脂装于内径为10cm的色谱柱中，用蒸馏水冲洗至无醇味，备用。将浸膏用1倍柱体积的去离子水溶解，过滤，滤液上样于AB-8大孔树脂柱，静态吸附6h，先用45％乙醇洗脱10个柱体积，再用75％乙醇洗脱，收集第8～9个柱体积洗脱液，减压浓缩得地胆草提取物。
2、HSCCC分离纯化
将二氯甲烷、正丁醇、乙醇和水按照体积比5:2:1:4混合，于分液漏斗中充分振荡后静置12h分层，分别取上下相，超声脱气0.5h，以下相作为固定相，上相为流动相。将固定相以30mL/min的体积流量注满高速逆流色谱仪的螺旋管，正转转速800r/min，温度25℃，检测波长220nm，以5mL/min的体积流量泵入流动相，当流动相流出主机且检测基线稳定后，取20mL用流动相溶解的浓度为10mg/mL的地胆草提取物样品溶液注入主机，根据色谱图(图1)收集去氧地胆草内酯或异去氧地胆草内酯色谱峰对应的洗脱液，回收溶剂即得去氧地胆草内酯或异去氧地胆草内酯，干燥保存。
3、HPLC检测
分别取市售的去氧地胆草内酯对照品、异去氧地胆草内酯对照品，以及HSCCC分离纯化的去氧地胆草内酯、异去氧地胆草内酯，按照文献(地胆草中4个倍半萜内酯的含量测定，国际药学研究杂志2019年8月第46卷第8期)公开的HPLC条件进样分析，检测HSCCC分离纯化的去氧地胆草内酯、异去氧地胆草内酯的纯度。
三、试验结果
HSCCC分离纯化色谱图如图1所示，去氧地胆草内酯、异去氧地胆草内酯色谱峰对应的洗脱液回收溶剂后进行HPLC检测的色谱图如图2、图3(见图2、图3中C，图2、图3中A、B分别为去氧地胆草内酯、异去氧地胆草内酯单独对照品和混合对照品的HPLC色谱图)所示，纯度分别为99.6％、99.5％，1kg地胆草药材可制备得到1.05g去氧地胆草内酯、2.38g异去氧地胆草内酯，纯度高且回收率高。

Claims (4)

1.一种制备去氧地胆草内酯或异去氧地胆草内酯的方法，其特征在于，包括：
步骤一：地胆草提取物的制备
将地胆草药材粉碎，加入95%乙醇，热回流提取，提取液减压浓缩得浸膏；取AB-8大孔树脂装于色谱柱中，用蒸馏水冲洗至无醇味，备用；将浸膏用去离子水溶解，过滤，滤液上样于AB-8大孔树脂柱，静态吸附适当时间，先用45%乙醇洗脱10个柱体积，再用75%乙醇洗脱，收集第8~9个柱体积洗脱液，减压浓缩得地胆草提取物；
步骤二：HSCCC分离纯化
将二氯甲烷、正丁醇、乙醇和水按照体积比5:2:1:4混合，于分液漏斗中充分振荡后静置分层，分别取上下相，超声脱气，以下相作为固定相，上相为流动相；将固定相注满高速逆流色谱仪的螺旋管，正转转速800r/min，温度25℃，以5mL/min的体积流量泵入流动相，当流动相流出主机且检测基线稳定后，取用流动相溶解的地胆草提取物样品溶液注入主机，根据色谱图收集去氧地胆草内酯或异去氧地胆草内酯色谱峰对应的洗脱液，回收溶剂即得去氧地胆草内酯或异去氧地胆草内酯。
2.根据权利要求1所述的制备去氧地胆草内酯或异去氧地胆草内酯的方法，其特征在于：按照100g浸膏：5kg大孔树脂的比例取AB-8大孔树脂装于内径为10cm的色谱柱中。
3.根据权利要求1所述的制备去氧地胆草内酯或异去氧地胆草内酯的方法，其特征在于：将浸膏用1倍柱体积的去离子水溶解，过滤，滤液上样于AB-8大孔树脂柱，静态吸附6h。
4.根据权利要求1所述的制备去氧地胆草内酯或异去氧地胆草内酯的方法，其特征在于：HSCCC分离纯化步骤中的检测波长220nm。
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