CN111592514B - 一种从鹅不食草中分离制备山金车内酯c的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种从鹅不食草中分离制备山金车内酯C的方法，步骤包括D101型大孔吸附树脂制备鹅不食草粗提物和高速逆流色谱从鹅不食草粗提物中分离纯化山金车内酯C。本发明具有如下优势：首先，本发明以廉价易得的鹅不食草为原料分离制备山金车内酯C，成本低；其次，本发明以高速逆流色谱进行纯化，回收率高，目标化学成分的损失率低；再次，在高速逆流色谱发展不是很成熟，很难一次制备得到高纯度化合物的现有技术条件下，本发明提供的溶剂系统和分离参数可以一次纯化得到纯度＞98％的山金车内酯C，步骤精简，目标化合物的纯度高。

Description

一种从鹅不食草中分离制备山金车内酯C的方法
技术领域
本发明属于化学领域，涉及天然产物的分离制备，具体涉及一种从鹅不食草中分离制备山金车内酯C的方法。
背景技术
山金车内酯C是一种倍半萜内酯类化合物，CAS号为34532-67-7，其化学结构式如下。
Figure BDA0002528416230000011
研究表明，山金车内酯C具有抗肿瘤等多种生物活性，更多的生物活性还在研究中。
山金车内酯C在鹅不食草等多种植物中均有分布。中药鹅不食草Centipedaminima Lour.系菊科植物石胡荽的全草，具有通窍散寒、止咳的功效，用于治疗急慢性鼻炎、过敏性鼻炎、头痛、百日咳、慢性气管炎、结膜炎、风湿关节炎、疟疾、湿疮肿毒、跌打肿痛等。
以廉价易得的鹅不食草为原料分离制备山金车内酯C具有极大优势。目前，现有技术中还没有从鹅不食草中分离制备山金车内酯C的方法。
发明内容
本发明旨在克服现有技术不足，提供一种从鹅不食草中分离制备山金车内酯C的方法。
本发明上述目的通过如下技术方案实现：
一种从鹅不食草中分离制备山金车内酯C的方法，包括步骤：
步骤S1，粗提物的制备：
(1)取切断的鹅不食草，加入95％乙醇热回流提取，提取液过滤，减压浓缩至无醇味；
(2)将浓缩液动态上样于装有D101型大孔吸附树脂的层析柱，全部上样后，关闭层析柱阀门，静置吸附适当时间；
(3)用45％乙醇淋洗10个柱体积去除强极性杂质；
(4)用80％乙醇淋洗，收集第7个柱体积的80％乙醇淋洗液；
(5)将第7个柱体积的80％乙醇淋洗液减压浓缩、冷冻干燥即得粗提物，备用。
步骤S2，高速逆流色谱分离：
(1)配制溶剂体系，溶剂体系为体积比为7:4:5:1:7的二氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-乙腈-水，静置分层后的上相为固定相，下相为流动相；
(2)将固定相泵入高速逆流色谱仪的主机管路，待固定相充满管路后，再以850r/min转速正向旋转，柱温箱25℃，将流动相以2.5mL/min的流速泵入，检测波长225nm；
(3)平衡后取上述粗提物适量，用流动相溶解，进样，采集色谱图，根据图2色谱图收集山金车内酯C色谱峰对应的流份，减压浓缩、冷冻干燥即得山金车内酯C。
优选地，鹅不食草和95％乙醇的比例为1kg:10L。
优选地，步骤S1中热回流提取3次，每次2h。
优选地，步骤S1中层析柱规格为10cm×100cm。
优选地，步骤S1中大孔树脂上样流速为30mL/min。
优选地，步骤S1中静置吸附0.5h。
优选地，45％乙醇淋洗流速为30mL/min。
优选地，80％乙醇淋洗流速为30mL/min。
优选地，步骤S2中固定相泵入流速为20mL/min。
有益效果：
1、本发明以廉价易得的鹅不食草为原料分离制备山金车内酯C，成本低；
2、本发明以高速逆流色谱进行纯化，回收率高，目标化学成分的损失率低；
3、在高速逆流色谱发展不是很成熟，很难一次制备得到高纯度化合物的现有技术条件下，本发明提供的溶剂系统和分离参数可以一次纯化得到纯度＞98％的山金车内酯C，步骤精简，目标化合物的纯度高。
附图说明
图1为山金车内酯C的化学结构式；
图2为高速逆流色谱分离色谱图。
具体实施方式
下面结合附图和实施例具体介绍本发明实质性内容，但并不以此限定本发明的保护范围。
一、原料和试剂
原料为鹅不食草，经鉴定为菊科植物石胡荽的干燥全草，切段备用。
AB-8型大孔吸附树脂购自天津波鸿树脂科技有限公司。
TBE-300A型高速逆流色谱仪(内径1.6mm、柱容积280mL)购自上海同田。
提取分离使用的有机溶剂为常规的分析纯溶剂。
二、分离和分析
步骤S1，粗提物的制备：
(1)取切断的鹅不食草1kg，加入95％乙醇(体积百分浓度，下同)10L，热回流提取3次，每次2h，合并提取液，过滤，减压浓缩至无醇味；
(2)将浓缩液动态上样于装有800mL D101型大孔吸附树脂的层析柱，层析柱规格为10cm×100cm，上样流速为30mL/min，全部上样后，关闭层析柱阀门，静置吸附0.5h；
(3)用45％乙醇淋洗10个柱体积去除强极性杂质，流速为30mL/min；
(4)用80％乙醇淋洗，流速为30mL/min，收集第7个柱体积的80％乙醇淋洗液；
(5)将第7个柱体积的80％乙醇淋洗液减压浓缩、冷冻干燥即得粗提物，备用；
步骤S2，高速逆流色谱分离：
(1)配制溶剂体系，溶剂体系为体积比为7:4:5:1:7的二氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-乙腈-水，静置分层后的上相为固定相，下相为流动相；
(2)将固定相以20mL/min的流速泵入主机管路，待固定相充满管路后，再以850r/min转速正向旋转，柱温箱25℃，将流动相以2.5mL/min的流速泵入，检测波长225nm；
(3)平衡后取上述粗提物200mg，用20mL流动相溶解，进样，采集色谱图，根据色谱图(图2)收集山金车内酯C色谱峰对应的流份，减压浓缩、冷冻干燥即得山金车内酯C。
产物分析：白色固体375mg，HPLC纯度98.6％，HR-EI-MS m/z335.1792[M+H]+，确定化学结构式为C19H26O5。1H-NMR(600MHz,CDCl3)δ:3.02(1H,m,1-H),7.65(1H,dd,2-H),6.12(1H,dd,3-H),5.45(1H,s,6-H),2.77(1H,m,7-H),4.74(1H,m,8-H),2.43,1.65(2H,m,9-H),2.21(1H,m,10-H),3.08(1H,m,11-H),1.54(3H,d,13-H),1.23(3H,d,14-H),1.05(3H,s,15-H),2.40(1H,m,2’-H),1.08(3H,d,3’-H),1.05(3H,d,4’-H)。13C-NMR(150MHz,CDCl3)δ:53.4(C-1),162.0(C-2),129.6(C-3),209.0(C-4),54.6(C-5),72.5(C-6),49.6(C-7),79.5(C-8),41.0(C-9),25.8(C-10),40.5(C-11),178.9(C-12),18.4(C-13),17.5(C-14),10.7(C-15),175.6(C-1’),33.9(C-2’),19.7(C-3’),18.9(C-4’)。
综上可见：
1、本发明以廉价易得的鹅不食草为原料分离制备山金车内酯C，成本低；
2、本发明以高速逆流色谱进行纯化，回收率高，目标化学成分的损失率低；
3、在高速逆流色谱发展不是很成熟，很难一次制备得到高纯度化合物的现有技术条件下，本发明提供的溶剂系统和分离参数可以一次纯化得到纯度＞98％的山金车内酯C，步骤精简，目标化合物的纯度高。
上述实施例的作用在于具体介绍本发明的实质性内容，但本领域技术人员应当知道，不应将本发明的保护范围局限于该具体实施例。

Claims (9)

1.一种从鹅不食草中分离制备山金车内酯C的方法，其特征在于，包括步骤：
步骤S1，粗提物的制备：
(1)取切断的鹅不食草，加入95％乙醇热回流提取，提取液过滤，减压浓缩至无醇味；
(2)将浓缩液动态上样于装有D101型大孔吸附树脂的层析柱，全部上样后，关闭层析柱阀门，静置吸附适当时间；
(3)用45％乙醇淋洗10个柱体积去除强极性杂质；
(4)用80％乙醇淋洗，收集第7个柱体积的80％乙醇淋洗液；
(5)将第7个柱体积的80％乙醇淋洗液减压浓缩、冷冻干燥即得粗提物，备用；
步骤S2，高速逆流色谱分离：
(1)配制溶剂体系，溶剂体系为体积比为7:4:5:1:7的二氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-乙腈-水，静置分层后的上相为固定相，下相为流动相；
(2)将固定相泵入高速逆流色谱仪的主机管路，待固定相充满管路后，再以850r/min转速正向旋转，柱温箱25℃，将流动相以2.5mL/min的流速泵入，检测波长225nm；
(3)平衡后取上述粗提物适量，用流动相溶解，进样，采集色谱图，根据图2色谱图收集山金车内酯C色谱峰对应的流份，减压浓缩、冷冻干燥即得山金车内酯C。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：鹅不食草和95％乙醇的比例为1kg:10L。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤S1中热回流提取3次，每次2h。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤S1中层析柱规格为10cm×100cm。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤S1中大孔树脂上样流速为30mL/min。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤S1中静置吸附0.5h。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：45％乙醇淋洗流速为30mL/min。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：80％乙醇淋洗流速为30mL/min。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤S2中固定相泵入流速为20mL/min。
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