CN111110853B - 生物粘附性的温敏材料及其制备方法和药物载体的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种生物粘附性的温敏材料及其制备方法和药物载体的应用，该材料不需外加交联剂或其他处理，其水溶液随着温度升高聚氧乙烯‑聚氧丙烯‑聚氧乙烯链脱水胶凝，具有较好的温敏性，同时其儿茶酚端基可自身或与生物表面氨基自发化学交联，产生超强生物粘附力。该生物粘附性的温敏材料结合温敏凝胶基质以及稳定剂，可以作为生物活性因子的递送载体。生物粘附性的温敏载药水凝胶可以直接供腔道内灌注给药，既能快速响应体温变化胶凝，同时又能均匀粘附于腔道黏膜表面，缓慢释放生物活性因子，促进溃疡性黏膜的修复。

Description

生物粘附性的温敏材料及其制备方法和药物载体的应用
技术领域
本发明涉及高分子生物材料领域，具体是指生物粘附性的温敏材料、生物粘附性的温敏载药水凝胶及其制备方法。
背景技术
黏膜损害系发生于口腔、舌、阴道、子宫和肛门黏膜等部位的损害，以黏膜炎症和溃疡形成为主要病理特征。其发病机制目前不十分清楚，论为与遗传、环境等综合因素导致的黏膜屏障损伤有关。持续或反复出现的黏膜炎症容易导致腔道黏膜纤维化狭窄，甚至黏膜癌的产生。已有报道多种生长因子如血管内皮生长因子、角质生长因子、表皮生长因子、血管活性肠肽、成纤维细胞生长因子能有效促进黏膜修复。与小分子药物相比，生长因子类药物具有的特异性强、疗效高、副作用小等优点，在治疗腔道黏膜类疾病具有明显优势。然而，生长因子由于稳定性差、半衰期短、跨膜渗透性差等问题，其临床给药方式与给药剂型设计还存在困难。
黏膜给药是使用合适的载体将药物与人体黏膜表面紧密接触，通过上皮细胞进入循环系统发挥作用或直接渗透病变黏膜直接作用的给药方式。临床已有小分子药物的液体灌肠剂，半固体栓剂以及泡沫剂通过直肠或阴道给药治疗结肠或妇科疾病。但这些传统剂型给药后，难以在黏膜部位滞留，给药后药物易排出流失，黏膜部位药物浓度低等缺陷。而且这些剂型大多都需要较大体积多次给药，易造成二次黏膜损伤。
温敏凝胶是一种室温下可流动的液体，在接近体温的温度条件下发生相转变，粘度急剧增大，相转变为凝胶，具有给药方便、易于黏膜均匀分布等特点。泊洛沙姆407为聚氧乙烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯的共聚物，为常用的制备温敏凝胶药用辅料。
中国专利公开《一种治疗皮肤溃疡用复方温敏凝胶剂及其制备方法》，参见专利公开号为103055304A，该技术方案利用泊洛沙姆407、泊洛沙姆188和壳聚糖为凝胶材料，结合人重组表皮生长因子和胰岛素等活性因子，公开了一种治疗皮肤溃疡用复方温敏凝胶剂及制备方法。但是，该复方温敏凝胶对组织因缺乏粘附性，同时配方中缺少稳定剂，生物活性因子容易降解失活。
中国专利公开《美沙拉嗪温敏凝胶灌肠液及其制备方法》，参见专利公开号CN105878177A，该技术方案以泊洛沙姆407和泊洛沙姆188为温敏性凝胶基质，结合壳聚糖、透明质酸、羟丙基纤维素或卡波姆等高分子粘附材料，公开了一种美沙拉嗪温敏凝胶灌肠液及制备方法。该专利公开高分子粘附材料与肠道黏膜间通过微弱氢键作用，产生微弱的生物粘附，药物腔道内滞留容易受结肠黏膜粘液化学组成、pH值、结肠内容物以及结肠蠕动等因素影响。
Xu等以合成的儿茶酚-接枝-壳聚糖(Cat-CS)为黏附材料，经京尼平交联，制备了可直肠给药的水凝胶。该凝胶骨架内儿茶酚残基可与腔道黏膜表面的氨基发生可逆化学结合，产生高强度的黏膜黏附，提高柳氮磺胺吡啶在结肠内滞留时间，改善溃疡性结肠炎治疗效果(参见Acta Biomater:2017,48:247-257)，但该粘附材料需预先加入交联剂才能胶凝，而且需要较长的成胶时间，腔道内应用依然存在易流失的缺陷。
发明内容
为解决现有技术存在的问题和不足，本发明的第一个目的是提供一种生物粘附性的温敏材料。该温敏材料为儿茶酚端基化的聚氧乙烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯共聚物，该材料不需外加交联剂或其他处理，其水溶液随着温度升高聚氧乙烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯链脱水胶凝，具有较好的温敏性，同时其儿茶酚端基可自身或与生物表面氨基自发化学交联，产生超强生物粘附力。
本发明的第二个目的是提供一种上述温敏材料作为药物载体的用途，即生物粘附性的温敏载药水凝胶，该用途从而可以直接供腔道内灌注给药，既能快速响应体温变化胶凝，同时又能均匀粘附于腔道黏膜表面，缓慢释放生物活性因子，促进溃疡性黏膜的修复。
本发明的第三个目的是提供一种上述温敏材料的制备方法。
为实现本发明的第一个目的，其技术方案是其化学式为式(Ⅰ)或/和式(Ⅱ)所示的化合物：
Figure BDA0002319653570000031
或
Figure BDA0002319653570000032
其中，X为聚氧乙烯聚合度，10≤X≤150；Y为聚氧丙烯聚合度，20≤Y≤80。
进一步设置是包括以下步骤：
(1)制备端氨基化的聚氧乙烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯共聚物；
(2)将所述的端氨基化的聚氧乙烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯共聚物加入到经过活化处理的咖啡酸乙醇反应体系中反应得到儿茶酚端基化的聚氧乙烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯共聚物，即为所述的温敏材料。
进一步设置是所述的在步骤(1)具体为：以摩尔分数计，称取1份聚氧乙烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯共聚物溶解在二氯甲烷中，将5份4-硝基苯基氯甲酸酯加入上述溶液中，待其完全溶解后加入0.5份三乙胺，室温反应4h之后，将5份乙二胺加入反应体系，继续室温搅拌反应24h，旋转蒸发除去二氯甲烷，残留物加入10份蒸馏水溶解，以5000rpm/min，离心5min除去沉淀，上清液用截留分子量为3500Da的透析膜去离子水透析3-5天，冷冻干燥24h，得制得端氨基化的聚氧乙烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯共聚物。
进一步设置是所述的在步骤(2)具体为：以摩尔分数计，称取1份端氨基化的聚氧乙烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯共聚物溶于无水乙醇；另取咖啡酸溶于无水乙醇，经盐酸调节pH为3～6，分别加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺，室温避光活化4-8h；将上述端氨基化的聚氧乙烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯共聚物缓慢滴加入活化的咖啡酸乙醇反应体系中，室温反应48h，用25％乙醇溶液透析3-5天除去未反应的咖啡酸以及缩合剂，冷冻干燥24h，得到儿茶酚端基化的聚氧乙烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯共聚物。
本发明还提供一种生物粘附性的温敏载药水凝胶，包括以下组分：主药、如所述的生物粘附性的温敏材料、温敏凝胶基质、稳定剂和水。
进一步设置是所述的主药为表皮生长因子、角质生长因子、酸性成纤维细胞生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、血管内皮生长因子、胰岛素样生长因子一种或多种组合。
进一步设置是所述生物粘附性的温敏材料在所述的凝胶组合物中所占重量百分比为1％～30％。
进一步设置是所述温敏型凝胶基质由泊洛沙姆407和泊洛沙姆188组成，泊洛沙姆407在所述水凝胶组合物中所占重量百分比为0.5％～30％，泊洛沙姆188在所述水凝胶组合物中所占重量百分比为0.5％～5％。
进一步设置是所述稳定剂选自人血白蛋白、肝素、丝素蛋白、精氨酸、谷氨酸、甘氨酸、异亮氨酸、山梨醇、右旋糖酐、海藻糖、棉籽糖和甘露醇中的至少一种。
进一步设置是稳定剂与主药的重量比为100:0.1～100。
生物粘附性的温敏载药水凝胶可直接供腔道内灌注给药，用于结直肠粘膜、阴道黏膜、鼻腔粘膜、口腔粘膜的损伤修复。
另外，本发明还提供所述的温敏载药水凝胶的制备方法：
a：将所述的生物粘附性的温敏材料和温敏凝胶基质分散在冷水中，放置在4～8℃冰箱内过夜，缓慢溶解形成凝胶基质溶液；
b：将稳定剂溶解于水中制备稳定液，缓慢加入药物轻轻搅拌溶解，制备药物溶液；
c：将上述步骤b所制备的药物溶液加入步骤a所制备的凝胶基质水溶液中，2～10℃轻轻搅拌均匀，制得透明澄清载药水凝胶溶液；
d：所述步骤c制备的载药水凝胶溶液暴露于27～35℃温度下，迅速胶凝成生物粘附性的载药水凝胶。
优选的，步骤(2)所制备的药物溶液中稳定剂与药物重量比为100:0.1～100。
本发明的创新机理和有益效果是：本发明提供一种生物粘附性的温敏材料，该材料不需外加交联剂或其他处理，在水中其分子中的聚氧乙烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯链脱水交联形成水凝胶网络，其分子中的儿茶酚基团可与生物组织表面氨基自发化学键合，产生超强粘附力。该生物粘附性的温敏材料结合温敏凝胶基质，可以制备生物粘附性的温敏水凝胶，可以作为生物活性因子的递送载体。该生物粘附性的温敏水凝胶作为药物载体时，只需将生物活性药物预先与稳定剂混合，在低温下加入至上述生物粘附性的温敏水凝胶载体中，搅拌均匀即可；制备的生物粘附性的温敏载药水凝胶可以直接供腔道内灌注给药，既能快速响应体温变化胶凝，同时又能均匀粘附于腔道黏膜表面，缓慢释放生物活性因子，促进溃疡性黏膜的修复。具体地，本发明制备的一种具有较强的生物黏附性的温敏凝胶载体，可以用于蛋白/多肽类生物大分子药物递送，改善传统剂型的缺点，增强药物在损伤黏膜部位的滞留，并且能够重构缺损的粘液层屏障，用于快速修复溃疡性黏膜。
本发明相比同类生物粘附的温敏凝胶产品存在如下优势：1)该水凝胶依赖化学粘附机制，黏膜粘附性强，不受腔道粘液化学组成、pH值、结肠内容物以及结肠蠕动等因素影响；2)该水凝胶体系无需外加交联剂或其他处理，仅需在水溶液中简单混合其组分便可制备出性能稳定的凝胶基质；3)该水凝胶基质与生物活性因子具有很好的生物相容性，不影响蛋白药物的活性，具有较好的药物控释性能。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，根据这些附图获得其他的附图仍属于本发明的范畴。
图1为实施例1中组7合成的儿茶酚端基化的聚氧乙烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯共聚物结构表征，(A)1H-NMR和(B)FT-IR；
图2为实施例4中对照组-3，组11，组12以及组17制备的生物粘附性的温敏载药水凝胶扫描电镜；
图3为实施例4中组12，组16以及对照组-3制备的生物粘附性的温敏载药水凝胶释放曲线；
图4为实施例4中对照组-3，组11，组17以及组12制备的生物粘附性的温敏载药水凝胶对DSS诱导的结肠炎小鼠治疗过程中肠镜结果；
图5为实施例4中对照组-3，组11，组17以及组12制备的生物粘附性的温敏载药水凝胶对DSS诱导的结肠炎小鼠治疗14天后结肠组织HE染色以及组织评价。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合附图对本发明作进一步地详细描述。
实施例1儿茶酚端基化的聚氧乙烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯共聚物
称取1份聚氧乙烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯共聚物溶解在二氯甲烷中，将5份4-硝基苯基氯甲酸酯加入上述溶液中，待其完全溶解后加入0.5份三乙胺，室温反应4h之后，将5份乙二胺加入反应体系，继续室温搅拌反应24h，旋转蒸发除去二氯甲烷，残留物加入10份蒸馏水溶解，以5000rpm/min，离心5min除去沉淀，上清液用透析膜(截留分子量为3500Da)去离子水透析3-5天，冷冻干燥24h，得制得端氨基化的聚氧乙烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯共聚物；
称取1份端氨基化的聚氧乙烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯共聚物溶于无水乙醇；按照表1所列投料，另取3,4-二羟基苯基丙酸(咖啡酸)溶于无水乙醇，经盐酸调节pH为3～6，分别加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，室温避光活化4-8h；将上述端氨基化的聚氧乙烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯共聚物缓慢滴加入活化的咖啡酸乙醇反应体系中，室温反应48h，用25％乙醇溶液透析3-5天除去未反应的咖啡酸以及缩合剂，冷冻干燥24h，得到儿茶酚端基化的聚氧乙烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯共聚物。
(1)结构确证：分别将儿茶酚端基化的聚氧乙烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯共聚物、氨基化的聚氧乙烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯共聚物冻干粉末、聚氧乙烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯共聚物冻干粉末溶于D2O中，3,4-二羟基苯基丙酸(咖啡酸)粉末溶于DMSO，1H-NMR(AVANCEIII600mhz,Bruker,Fallanden,Switzerland)确认儿茶酚端基化的聚氧乙烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯共聚物与聚氧乙烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯共聚物两者之间化学结构的差异，结果见图1(A)。如图1(A)显示：3,4-二羟基苯基丙酸中苯环上的氢核的共振峰分别位6.68ppm,6.83ppm,6.85ppm,而3,4-二羟基苯基丙酸与泊洛沙姆共聚物中苯环上的氢核的共振峰移至6.6ppm,6.68ppm,6.72ppm。此外，3,4-二羟基苯基丙酸中-CH2-CH2-氢核的共振峰分别位2.65ppm,2.85ppm,而3,4-二羟基苯基丙酸与泊洛沙姆共聚物中-CH2-CH2-氢核的共振峰转移至2.38ppm,2.54ppm。FT-IR(670FT-IR,Nicolet,Madison,WI,USA)对儿茶酚端基化的聚氧乙烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯共聚物的结构进行进一步表征，结果见图1(B)。
(2)儿茶酚基接枝效率测定(紫外分光光度法)：精密称取3,4-二羟基苯基丙酸(咖啡酸)于50mL容量瓶，无水乙醇配置浓度为10μg/mL的储备液。精密量取上述储备液0.50，1.00，2.00，2.50，4.00，5.00mL至5mL容量瓶，乙醇定容，配置系列标准溶液。UV分光光度计(Cary Win UV，Varian，Inc.，Palo Alto，CA)在250-450nm进行紫外光谱扫描，并记录325nm处测定吸光度，制作标准曲线(标准曲线：C＝91.5A-0.008，C为咖啡酸浓度，A为吸光度)。另精密称取儿茶酚端基化的聚氧乙烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯共聚物粉末W克于10mL容量瓶，无水乙醇溶解定容，测定325nm处测定吸光度，根据标准曲线计算出接枝咖啡酸浓度(C1)，通过如下公式计算聚合物中咖啡酸百分率：咖啡酸百分率＝C1×10/W。
表1儿茶酚端基化的聚氧乙烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯共聚物合成及性质
Figure BDA0002319653570000081
实施例2生物粘附性测定
儿茶酚端基化的聚氧乙烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯共聚物分散于冷的水，放置过夜完全溶解，配置浓度为20％的溶液，至37℃水浴放置30min胶凝，制备得到生物粘附性凝胶。维持37℃温度，将生物黏附性凝胶置于两个POM(聚氧亚甲基或聚甲醛)盘之间，利用万能实验仪，测量生物黏附性温敏凝胶的黏附力。
从表1可以知，儿茶酚端基化的聚氧乙烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯共聚物相比对照组-1或对照组-2中的聚氧乙烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯共聚物具有更强的生物粘附力，而且随着聚合物中咖啡酸百分率的增大，生物粘附力明显增强，成胶温度降低。
实施例3胶凝温度测定
儿茶酚端基化的聚氧乙烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯共聚物分散于冷的水，放置过夜完全溶解，配置浓度为20％的溶液，放入西林瓶，至恒温烘箱孵育30min，倾斜倒置西林瓶，直至未观察到可以流动液体时的温度，即为胶凝温度。
实施例4生物粘附性的温敏载药水凝胶的制备
按照表2所列配方，称量生物粘附性的温敏材料和温敏凝胶基质分散在冷水中，放置在4～8℃冰箱内过夜，缓慢溶解形成凝胶基质溶液；另称取稳定剂溶解于一定量的水中制备稳定液，缓慢加入药物轻轻搅拌溶解，制备药物溶液；将上述所制备的药物溶液加入至凝胶基质水溶液中，2～10℃轻轻搅拌均匀，制得透明澄清载药水凝胶溶液；载药水凝胶溶液暴露于27～35℃温度下，迅速胶凝成生物粘附性的载药水凝胶。
1.生物粘附性的温敏载药水凝胶药物活性测定：
透明澄清载药水凝胶溶液，置37℃培养箱胶凝后，重新4℃转变成溶液，经凝胶-溶液转变10次后，ELISA检测生长因子活性相对于未经凝胶-溶液转变的生长因子活性百分数，用于评价生长因子与凝胶成分间的相容性。
2.应用扫描电镜(SEM)观察凝胶的微观形态，观察其表面微观形态、三维结构，孔径分布等特征。将制备好的水凝胶进行冷冻干燥，取冻干后的胶粉末置于铜板上，抽真空并喷金，通过SEM观察葡萄糖敏感水凝胶的微观形态。
表2生物粘附性的温敏载药水凝胶配方及性能
Figure BDA0002319653570000091
Figure BDA0002319653570000101
表2结果可以知，对照组-3或对照组-4配方中因不含生物粘附性温敏材料，展现较低的生物粘附力，组11～组20随着配方中生物粘附性温敏材料的增加，凝胶的生物粘附力增强，成胶温度降低，而且蛋白药物活性不受生物粘附性温敏材料加入量的影响。而对照组-5～对照组-8因配方中不含稳定剂，所装载的蛋白药物具有较低的生物活性。图2扫描电镜表明，随着配方中生物粘附性的温敏材料增加，凝胶交联度提高，出现多孔网状结构，尤其是组11和组12出现明显的网状孔隙骨架，但组17因交联太高出现致密凝胶孔隙网络，而对照组-3因不含生物粘附性的温敏材料，不具有交联能力，少见多孔状微观结构。图3体外释放结果表明，对照图-3中的EGF较快释放行为，而存在生物粘附性温敏材料的组12与组17展现出较缓慢的释放速率，而且随着交联程度增加，释放速率与释放程度降低。
实施例5生物粘附性的温敏载药水凝胶直肠灌注治疗溃疡性结肠炎
建立TNBS诱导的溃疡性结肠炎大鼠模型，取0.8mL生物黏附性的温敏载药水凝胶通过灌肠装置灌注到距大鼠肛门0.4-0.6cm处，每天一次，于1，5，9，14天通过内窥镜(00内窥镜，2.7mm×175mm,ShenDa,Chinese)观察受损结肠组织的恢复情况。给药14天后，处死大鼠，取结肠组织于4％多聚甲醛中固定，并包埋于石蜡中，将组织蜡块切成5μm薄片，并用Masson三色染色法进行染色。分析切片并用Nikon Eclipse80i(Nikon,Japan)拍摄图像，观察组织形态与纤维化情况，并对结肠肠腔(dL:最长距离；dW:最短距离)与肠壁厚度进行统计。
治疗过程中结肠镜结果见图4所示，与疾病组相比，给药组结肠黏膜溃疡与出血情况明显减轻。通过内窥镜观察，给药14天后的EGF凝胶组的结肠黏膜溃疡及出血状况已恢复正常，而EGF溶液组可见明显的出血情况。治疗14天后，结肠组织HE染色结果如图5所示，与TNBS疾病组相比，给药治疗后，结肠黏膜下层及固有层的炎症浸润情况明显减轻，隐窝结构明显恢复正常。其中，相比对照组-3，生物粘附性的温敏凝胶组(组11，组12，组17)具有明显的修复效果，而且组12结肠修复效果最佳。
以上所揭露的仅为本发明较佳实施例而已，当然不能以此来限定本发明之权利范围，因此依本发明权利要求所作的等同变化，仍属本发明所涵盖的范围。

Claims (4)

1.一种生物粘附性的温敏材料，其特征在于：其化学式为式(Ⅰ)或/和式(Ⅱ)所示的化合物：
其中，X为聚氧乙烯聚合度，10≤X≤150；Y为聚氧丙烯聚合度，20≤Y≤80。
2.根据权利要求1所述的生物粘附性的温敏材料的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
(1)制备端氨基化的聚氧乙烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯共聚物；
(2)将所述的端氨基化的聚氧乙烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯共聚物加入到经过活化处理的咖啡酸乙醇反应体系中反应得到儿茶酚端基化的聚氧乙烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯共聚物，即为所述的温敏材料；
所述的步骤(1)具体为：以摩尔分数计，称取1份聚氧乙烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯共聚物溶解在二氯甲烷中，将5份4-硝基苯基氯甲酸酯加入上述溶液中，待其完全溶解后加入0.5份三乙胺，室温反应4h之后，将5份乙二胺加入反应体系，继续室温搅拌反应24h，旋转蒸发除去二氯甲烷，残留物加入10份蒸馏水溶解，以5000rpm/min，离心5min除去沉淀，上清液用截留分子量为3500Da的透析膜去离子水透析3-5天，冷冻干燥24h，得制得端氨基化的聚氧乙烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯共聚物；
所述的步骤(2)具体为：以摩尔分数计，称取1份端氨基化的聚氧乙烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯共聚物溶于无水乙醇；另取咖啡酸溶于无水乙醇，经盐酸调节pH为3～6，分别加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺，室温避光活化4-8h；将上述端氨基化的聚氧乙烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯共聚物缓慢滴加入活化的咖啡酸乙醇反应体系中，室温反应48h，用25％乙醇溶液透析3-5天除去未反应的咖啡酸以及缩合剂，冷冻干燥24h，得到儿茶酚端基化的聚氧乙烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯共聚物。
3.一种生物粘附性的温敏载药水凝胶，其特征在于包括以下组分：主药、如权利要求1所述的生物粘附性的温敏材料、温敏凝胶基质、稳定剂和水；
所述的主药为表皮生长因子、角质生长因子、酸性成纤维细胞生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、血管内皮生长因子、胰岛素样生长因子一种或多种组合；
所述生物粘附性的温敏材料在所述的凝胶组合物中所占重量百分比为1％～30％；
所述温敏型凝胶基质由泊洛沙姆407和泊洛沙姆188组成，泊洛沙姆407在所述水凝胶组合物中所占重量百分比为0.5％～30％，泊洛沙姆188在所述水凝胶组合物中所占重量百分比为0.5％～5％；
所述稳定剂选自人血白蛋白、肝素、丝素蛋白、精氨酸、谷氨酸、甘氨酸、异亮氨酸、山梨醇、右旋糖酐、海藻糖、棉籽糖和甘露醇中的至少一种，且所述稳定剂与主药的重量比为100:0.1～100。
4.一种如权利要求3所述的温敏载药水凝胶的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
a：将所述的生物粘附性的温敏材料和温敏凝胶基质分散在冷水中，放置在4～8℃冰箱内过夜，缓慢溶解形成凝胶基质溶液；
b：将稳定剂溶解于水中制备稳定液，缓慢加入药物轻轻搅拌溶解，制备药物溶液；
c：将上述步骤b所制备的药物溶液加入步骤a所制备的凝胶基质水溶液中，2～10℃轻轻搅拌均匀，制得透明澄清载药水凝胶溶液；
d：所述步骤c制备的载药水凝胶溶液暴露于27～35℃温度下，迅速胶凝成生物粘附性的载药水凝胶。
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