CN111110605A - 含有植物提取物的组合物及其制备方法与应用 - Google Patents

含有植物提取物的组合物及其制备方法与应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及防腐技术领域，公开了一种含有植物提取物的组合物及其制备方法与应用，其中，该组合物含有香辛料提取物、菊科植物的提取物和漆树科植物的提取物；本发明通过将香辛料提取物、菊科植物的提取物和漆树科植物的提取物按照特定重量比进行复配，并辅以特定重量份的低级醇和水，通过各组分的协同作用，制备得到的含有植物提取物的组合物溶于水，且在较低的浓度下即对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单孢杆菌、白色念珠菌和黑曲霉具有良好的抑制作用，该组合物应用到日化产品中对产品颜色无影响，且对上述五种菌防腐挑战均可通过，因此可广泛应用于日化产品。

Description

含有植物提取物的组合物及其制备方法与应用
技术领域
本发明涉及防腐技术领域，具体涉及一种含有植物提取物的组合物及其制备方法与应用。
背景技术
随着社会的发展，人们对化妆品的需求越来越大，然而化妆品中因含有丰富的有机质和水分，而成为微生物生长与繁殖的温床，在条件适宜情况下，微生物大量繁殖，危害人们的健康。
为保证化妆品的使用质量，各公司将防腐剂用于化妆品中。目前市面上较流行的防腐剂有咪唑烷基脲、重氮咪唑烷基脲、卡松、尼泊金酯类防腐剂等。但是咪唑烷基脲、重氮咪唑烷基脲等防腐剂的使用对人体健康以及环境都会造成影响；卡松防腐剂因其为化学合成而日渐受到人们的质疑，使用量每年也呈下降趋势；而目前化妆品中使用频率最高的尼泊金酯类防腐剂近年来也饱受安全方面的争议。因此，研究具有“绿色”、“天然”、“安全”的特性防腐剂以替代具有安全问题的防腐剂受到越来越多的人们的关注。
发明内容
本发明的目的是为了克服现有技术存在的上述问题，提供一种含有植物提取物的组合物及其制备方法与应用，实现抑菌、抗炎且安全、环保的目的。
为了实现上述目的，本发明一方面提供一种含有植物提取物的组合物，其中，该组合物含有香辛科提取物、菊科植物的提取物和漆树科植物的提取物；其中，相对于100重量份的香辛料提取物，菊科植物的提取物的用量为2.5-50重量份，漆树科植物的提取物的用量为0.5-60重量份。
本发明第二方面提供一种含有植物提取物的组合物的制备方法。
本发明第三方面提供一种上述的组合物在有色水剂产品中的应用。
本发明第四方面提供一种上述的组合物在抑制细菌和/或真菌中的应用。
本发明通过将香辛料提取物、菊科植物的提取物和漆树科植物的提取物以特定的比例进行配合得到含有植物提取物的组合物。本发明提供的含有植物提取物的组合物具有抑菌、抗炎、安全、环保、无刺激性的优势，并且香辛料提取物、菊科植物提取物和漆树科植物提取物三种提取物与溶剂混合后能够形成透明的溶液，无沉淀，稳定性好，且水溶性良好。
具体实施方式
以下对本发明的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本发明，并不用于限制本发明。
在本发明中，所述香辛料指的是可以用来提取芳香和辛香等典型风味的天然植物性制品或可以作为具有芳香和辛香等典型风味用品的植物本身或某些部分。
第一方面，本发明提供了一种含有植物提取物的组合物，其中，该组合物含有香辛料提取物、菊科植物的提取物、漆树科植物的提取物；其中，相对于100重量份的香辛料提取物，菊科植物的提取物的用量为2.5-50重量份，漆树科植物的提取物的用量为0.5-60重量份。
根据本发明，为了进一步提高所述组合物的抑菌和抗炎效果以及分散性，优选地，相对于100重量份的香辛料提取物，菊科植物的提取物的用量为5-25重量份，漆树科植物的提取物的用量为0.5-50重量份。
根据本发明，所述组合物还可以含有低级醇和水，为了使所述组合物中的组分分散均匀且使该组合物呈现透明无沉淀的溶液状态，优选地，相对于100重量份的香辛料提取物，低级醇的用量为4.5-60重量份，水的用量为320-850重量份。
根据本发明，所述组合物还可以含有低级醇和水，为了进一步使所述组合物中的组分分散均匀且使该组合物呈现透明无沉淀的溶液状态，优选地，相对于100重量份香辛料提取物，低级醇的用量为5-50重量份，水的用量为500-700重量份。
本发明的发明人在研究中发现，香辛料提取物、菊科植物的提取物和漆树科植物的提取物三者有明显的协同抑菌和抗炎作用，尤其是相对于100重量份的香辛料提取物，菊科植物的提取物的用量为2.5-50重量份，漆树科植物的提取物的用量为0.5-60重量份的优选情况下，该组合物的抑菌及抗炎作用更佳，且安全、无刺激性，并且与所述低级醇和水混合后且相对于100重量份的香辛料提取物，低级醇的的用量为4.5-60重量份，水的用量为320-850重量份的情况下呈现透明无沉淀的溶液状态。其中，所述组合物呈现透明无沉淀的溶液状态时，可以与任意比例的水混溶。
根据本发明，为了提高所述组合物的抑菌和抗炎效果，优选地，所述香辛料提取物选自樟属植物的提取物、茴香属植物的提取物和八角属植物的提取物中的至少一种；优选地，所述樟属植物的提取物选自肉桂树皮提取物，所述茴香属植物的提取物选自茴香提取物，所述八角属植物的提取物选自八角茴香提取物。
优选地，所述茴香提取物选自茴香籽的提取物。
优选地，所述八角茴香提取物选自八角茴香果的提取物。
根据本发明，为了提高所述组合物的抑菌和抗炎效果，优选地，所述菊科植物的提取物选自蒿属植物的提取物和菊属植物的提取物中的至少一种；更优选地，所述菊科植物的提取物选自艾叶提取物、菊花提取物和野菊花提取物中的至少一种。
根据本发明，为了提高所述组合物的抑菌和抗炎效果，优选地，所述漆树科植物的提取物为盐肤木属植物的提取物；更优选地，所述漆树科植物的提取物为五倍子提取物。
根据本发明，对所述低级醇的种类没有特别的限制，为了提高所述组合物的分散性，优选地，所述低级醇为碳原子数为1-6的二元醇，更优选选自1,3-丁二醇、1,3-丙二醇、异戊二醇、1,2-戊二醇和1,2-己二醇中的至少一种。
根据本发明，对所述水的种类没有特别的限制，只要不影响所述组合物的分散性即可，优选地，所述水为去离子水。
根据本发明，对所述香辛料提取物的活性成分没有特别的限制，只要能够具有抑菌和/或抗炎效果即可，为了提高协同抑菌和抗炎效果，优选地，所述香辛料提取物的活性成分为肉桂酸、茴香酸、山奈酚-3-O-半乳糖苷和山奈酚芦丁苷中的至少一种，其中所述香辛料提取物中活性成分的含量为1-60重量％。
根据本发明，所述肉桂树皮提取物的活性成分主要为肉桂酸，茴香提取物的活性成分主要为茴香酸，八角茴香提取物的活性成分主要为山奈酚-3-O-半乳糖苷和山奈酚芦丁苷。
根据本发明，为了进一步提高协同抑菌和抗炎效果，优选地，所述肉桂树皮提取物中肉桂酸的含量为40-60重量％，所述茴香提取物中茴香酸的含量40-60重量％，所述八角茴香提取物中山奈酚-3-O-半乳糖苷和山奈酚芦丁苷的含量分别为2-8重量％和1-5重量％。
根据本发明，对所述菊科植物的提取物的活性成分没有特别的限制，只要能够具有抑菌和/或抗炎效果即可，为了提高协同抑菌和抗炎效果，优选地，所述菊科植物的提取物的活性成分为菊花黄酮。
根据本发明，为了进一步提高协同抑菌和抗炎效果，优选地，所述菊科植物的提取物中菊花黄酮的含量为1-5重量％。
根据本发明，为了进一步提高协同抑菌和抗炎效果，优选地，所述艾叶提取物、菊花提取物和野菊花提取物中的菊花黄酮的含量分别为1-5重量％、1-4重量％和1-5重量％。
根据本发明，对所述漆树科植物的提取物的活性成分没有特别的限制，只要能够具有抑菌和/或抗炎效果即可，为了提高协同抑菌和抗炎效果，优选地，所述漆树科植物的提取物的活性成分为单宁酸。
根据本发明，为了进一步提高协同抑菌和抗炎效果，优选地，所述漆树科植物的提取物中单宁酸的含量为5-15重量％。
根据本发明，优选地，所述香辛料提取物为香辛料的乙醇水溶液提取物；
优选地，所述菊科植物的提取物为菊科植物的乙醇水溶液提取物；
优选地，所述漆树科植物的提取物为漆树科植物的乙醇水溶液提取物；
优选地，所述香辛料提取物、菊科植物的提取物和漆树科植物的提取物的提取方法包括以下步骤；
(1)将所述香辛料的粉碎物、菊科植物的粉碎物或漆树科植物的粉碎物与乙醇水溶液(乙醇含量优选为65-85体积％)进行混合；
(2)将混合后的物料进行回流提取，得到提取液；
(3)将步骤(2)所得的提取液进行固液分离，得到液相；
(4)将步骤(3)所得的液相进行浓缩、干燥。
根据本发明，为了使得提取的香辛料提取物中的肉桂酸、茴香酸、山奈酚-3-O-半乳糖苷和/或山奈酚芦丁苷的含量为1-60重量％，优选地，所述肉桂树皮提取物中肉桂酸的含量为40-60重量％，茴香提取物中茴香酸的含量为40-60重量％和/或八角茴香提取物中山奈酚-3-O-半乳糖苷和山奈酚芦丁苷的含量分别为2-8重量％和1-5重量％，以及能够提高协同抑菌和抗炎效果，一种优选的提取方法包括以下步骤：
(1)将粒度为40-60目的所述肉桂树皮的粉碎物、茴香籽的粉碎物或八角茴香果的粉碎物与65-85体积％浓度的乙醇水溶液以1:45-55的重量比进行混合；
(2)将混合后的物料在65-85℃下回流提取2-4小时，得到提取液；
(3)将步骤(2)所得提取液采用600-1000目滤布进行第一次过滤，所得一次滤液再采用0.45μm孔径的滤膜进行第二次过滤，得到二次滤液；
(4)将步骤(3)所得二次滤液进行减压蒸馏除去乙醇，然后进行冷冻干燥。
根据本发明，为了使得菊科植物的提取物中菊花黄酮的含量为1-5重量％，优选地，提取的艾叶提取物中菊花黄酮的含量为1-5重量％，菊花提取物中菊花黄酮的含量为1-4重量％和野菊花提取物中菊花黄酮的含量为1-5重量％，以及能够提高协同抑菌和抗炎效果，一种优选的提取方法包括以下步骤：
(1)将粒度为40-60目的所述艾叶的粉碎物、菊花花的粉碎物或野菊花花的粉碎物与65-75体积％浓度的乙醇水溶液以1:50-60的重量比进行混合；
(2)将混合后的物料在50-60℃下回流提取2-4小时，得到提取液；
(3)将步骤(2)所得提取液采用600-1000目滤布进行第一次过滤，所得一次滤液再采用0.45μm孔径的滤膜进行第二次过滤，得到二次滤液；
(4)将步骤(3)所得二次滤液进行减压蒸馏除去乙醇，然后进行冷冻干燥。
根据本发明，为了使得提取的漆树科植物的提取物中单宁酸的含量为5-15重量％，以及能够提高协同抑菌和抗炎效果，一种优选的提取方法包括以下步骤：
(1)将粒度为40-60目的所述漆树科植物的粉碎物与65-75体积％浓度的乙醇水溶液以1:50-60的重量比进行混合；
(2)将混合后的物料在55-65℃下回流提取2-4小时，得到提取液；
(3)将步骤(2)所得提取液采用600-1000目滤布进行第一次过滤，所得一次滤液再采用0.45μm孔径的滤膜进行第二次过滤，得到二次滤液；
(4)将步骤(3)所得二次滤液进行减压蒸馏除去乙醇，然后进行冷冻干燥。
优选地，所述漆树科植物为盐肤木属植物，更优选为五倍子。
第二方面，本发明提供了一种含有植物提取物的组合物的制备方法，其中，该方法包括将上述的香辛料提取物、菊科植物的提取物和漆树科植物的提取物进行混合。
根据本发明，为了提高所述组合物的分散性且使该组合物呈现透明溶液状态，优选地，所述方法还包括将香辛料提取物、菊科植物的提取物、漆树科植物的提取物在低级醇和水的存在下进行混合。
根据本发明，对所述进行混合的方式没有特别的限制，为了进一步提高所述组合物的分散性并且使该组合物呈现透明溶液状态，优选地，先将组合物与所述低级醇进行接触混合得到预混液，超声振荡预混液至澄清、透明后，缓慢加入水。
第三方面，本发明提供了一种上述的组合物在有色水剂产品中的应用。
根据本发明，优选地情况下，所述有色水剂产品为日化用品。
根据本发明，优选地情况下，有色水剂产品包括喷雾、透明面膜液、凝胶、爽肤水、面霜、眼霜、面膜、洗发水、洗面奶等，对所述组合物在有色水剂产品中的用量没有特别的限制，优选地，相对于1千克有色水剂产品，所述香辛料提取物、菊科植物的提取物和漆树科植物的提取物的总用量为3-5g。
更优选地，相对于1千克有色水剂产品，所述香辛料提取物、菊科植物的提取物、漆树科植物的提取物、低级醇和水的总用量为15-25g。
第四方面，本发明还提供了一种上述的组合物在抑制细菌和/或真菌中的应用。
本发明的组合物特别适用于抑制大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单孢杆菌、白色念珠菌和黑曲霉中的至少一种。
实施例
以下将通过实施例对本发明进行详细描述。以下实施例中，
肉桂树皮提取物通过提取得到，该方法包括：先将粒度为50目的肉桂树皮的粉碎物与70体积％浓度的乙醇水溶液(采用10％氢氧化钾溶液调节PH至8.8)以1:50的重量比进行混合，然后将混合后的物料在80℃下回流提取3小时，再然后将所得提取液采用800目滤布进行第一次过滤，所得一次滤液再采用0.45μm孔径的滤膜进行第二次过滤，然后将所得二次滤液在0.005MPa，40℃条件下减压蒸馏除去乙醇，最后将除去乙醇后的二次滤液在8Pa，-30℃条件下冷冻干燥至恒重，得到肉桂树皮提取物，所得肉桂树皮提取物中肉桂酸含量为50.5重量％；
茴香籽提取物通过提取得到，该方法包括：先将粒度为40目的茴香籽的粉碎物与80体积％浓度的乙醇水溶液以1:50的重量比进行混合，然后将混合后的物料在70℃下回流提取3小时，再然后将所得提取液采用800目滤布进行第一次过滤，所得一次滤液再采用0.45μm孔径的滤膜进行第二次过滤，然后将所得二次滤液在0.005MPa，40℃条件下减压蒸馏除去乙醇，最后将除去乙醇后的二次滤液在10Pa，-30℃条件下冷冻干燥至恒重，得到茴香提取物，所得茴香提取物中茴香酸的含量为50.7重量％；
八角茴香果提取物通过提取得到，该方法包括：先将粒度为40目的八角茴香果的粉碎物与75体积％浓度的乙醇水溶液以1:50的重量比进行混合，然后将混合后的物料在65℃下回流提取3小时，再然后将所得提取液采用800目滤布进行第一次过滤，所得一次滤液再采用0.45μm孔径的滤膜进行第二次过滤，然后将所得二次滤液在0.005MPa，40℃条件下减压蒸馏除去乙醇，最后将除去乙醇后的二次滤液在10Pa，-30℃条件下冷冻干燥至恒重，得到八角茴香果提取物，所得八角茴香果提取物中山奈酚-3-0-半乳糖苷和山奈酚芦丁苷的含量分别为5.06重量％和3重量％；
艾叶提取物通过提取得到，该方法包括：先将粒度为50目的艾叶的粉碎物与70体积％浓度的乙醇水溶液以1:50的重量比进行混合，然后将混合后的物料在50℃下回流提取3小时，再然后将所得提取液采用800目滤布进行第一次过滤，所得一次滤液再采用0.45μm孔径的滤膜进行第二次过滤，然后将所得二次滤液在0.005MPa，40℃条件下减压蒸馏除去乙醇，最后将除去乙醇后的二次滤液在8Pa，-30℃条件下冷冻干燥至恒重，得到艾叶提取物，所得艾叶提取物中菊花黄酮的含量为3.03重量％；
菊花提取物通过提取得到，该方法包括：先将粒度为50目的菊花的粉碎物与75体积％浓度的乙醇水溶液以1:45的重量比进行混合，然后将混合后的物料在50℃下回流提取3小时，再然后将所得提取液采用800目滤布进行第一次过滤，所得一次滤液再采用0.45μm孔径的滤膜进行第二次过滤，然后将所得二次滤液在0.005MPa，40℃条件下减压蒸馏除去乙醇，最后将除去乙醇后的二次滤液在8Pa，-30℃条件下冷冻干燥至恒重，得到菊花提取物，所得菊花提取物中菊花黄酮的含量为3.08重量％；
野菊花提取物通过提取得到，该方法包括：先将粒度为50目的野菊花的粉碎物与75体积％浓度的乙醇水溶液以1:45的重量比进行混合，然后将混合后的物料在50℃下回流提取3小时，再然后将所得提取液采用800目滤布进行第一次过滤，所得一次滤液再采用0.45μm孔径的滤膜进行第二次过滤，然后将所得二次滤液在0.005MPa，40℃条件下减压蒸馏除去乙醇，最后将除去乙醇后的二次滤液在8Pa，-30℃条件下冷冻干燥至恒重，得到野菊花提取物，所得野菊花提取物中菊花黄酮的含量为3.05重量％；
五倍子提取物通过提取得到，该方法包括：先将粒度为50目的五倍子的粉碎物与70体积％浓度的乙醇水溶液以1:55的重量比进行混合，然后将混合后的物料在50℃下回流提取3小时，再然后将所得提取液采用800目滤布进行第一次过滤，所得一次滤液再采用0.45μm孔径的滤膜进行第二次过滤，然后将所得二次滤液在0.005MPa，40℃条件下减压蒸馏除去乙醇，最后将除去乙醇后的二次滤液在8Pa，-30℃条件下冷冻干燥至恒重，得到五倍子提取物，所得五倍子提取物中单宁酸的含量为10.1重量％；
马齿苋提取物通过提取得到，该方法包括：先粒度为50目的马齿苋(全株)的粉碎物与70体积％浓度的乙醇水溶液以1:55的重量比进行混合，然后将混合后的物料在60℃下回流提取3小时，再然后将所得提取液采用800目滤布进行第一次过滤，所得一次滤液再采用0.45μm孔径的滤膜进行第二次过滤，然后将所得二次滤液在0.005MPa，40℃条件下减压蒸馏除去乙醇，最后将除去乙醇后的二次滤液在8a，-30℃条件下冷冻干燥至恒重，得到马齿苋提取物，所得马齿苋提取物中黄酮、皂苷、氨基酸和多糖的含量分别为1.02重量％、0.51重量％、0.2％重量％和0.3％重量％；
CCK-8购自东京同仁化学研究所，牌号为LJ621；
HaCaT细胞购自购自武汉普诺赛生物科技有限公司，牌号为CL-0090；
牛角膜取自健康的成年牛牛眼；
鸡胚购自北京勃林格殷格翰维通生物技术有限公司SPF级白莱杭鸡蛋，生产许可证号：SCXK(京)2014-0002；
无酚红MEM培养基购自北京百奥莱博科技有限公司，牌号为GS0189；
含酚红MEM培养基购自汉普诺赛生物科技有限公司，牌号为PM150410；
细菌培养基(卵磷脂-吐温80营养琼脂)购自广东环凯微生物科技有限公司027020；
真菌培养基(孟加拉红(虎红)琼脂)购自广东环凯微生物科技有限公司021010；
实施例1-7和对比例1-6
按照表1和表1(续表)的各组分比例(重量份)制备实施例1-7和对比例1-6的组合物。具体步骤为：将香辛料提取物、菊科提取物、漆树科提取物和低级醇进行混合得到预混液，超声振荡预混液至澄清、透明，然后将水缓慢加入所得澄清、透明预混液中。
测试例1
观察组合物的外观，以及评估组合物的气味。
将实施例和对比例的组合物分别进行性能测试，测试结果见表5至表9(续表)；
对组合物的性能测试项目及测试方法如下：
(A)稳定性：检测步骤为(1)将制备的组合物在常温下放置24h，对理化指标如pH、电导率进行检测，记录pH值为A，电导率为B，然后常温下放置24h的组合物等分成3份样品，(2)第一份样品在高温40℃放置一个月，对理化指标如pH、电导率进行检测，记录pH值为A1，电导率为B1；第二份样品在低温4℃放置一个月，对理化指标如pH、电导率、进行检测，记录pH值为A2，电导率为B2；第三份样品在常温放置一个月，对理化指标如pH、电导率进行检测，记录pH值为A3，电导率为B3；(3)当|A-Ai|/A<0.5％和|B-Bi|/B<0.5％时，稳定性为“优”，当|A-Ai|/A>0.5％或|B-Bi|/B>0.5％时，稳定性为“差”，i＝1，2或3；实施例1-7和对比例1-6均进行了稳定性测试并进行了评估，评估结果见表5和表5(续表)，测试结果见表6和表6(续表)；
(B)细胞毒性：HaCaT细胞为人永生表皮细胞系，对HaCaT细胞的细胞毒性，可作为对皮肤安全性的参考数据。正常细胞代谢旺盛，其线粒体内的琥珀酸脱氢酶，可将四唑盐类物质还原为带颜色的结晶状物质，沉积在细胞周围，该变化可通过酶标仪读取OD(光密度)值，通过与空白对照组的OD值进行比较，可以得知细胞的相对生长情况(OD值大小与细胞生存率成正比)；用含有2重量％组合物的水溶液处理样品后，用CCK-8测定HaCaT细胞的存活率；细胞存活率在75％以上认定为“无”毒性；实施例1-7和对比例1-6均进行了细胞毒性测试并进行了评估，评估结果见表5和表5(续表)；
(C)斑贴无刺激测试：将组合物配制成浓度为2重量％的水溶液，滴加于斑贴纸上，采用封闭斑贴24h方法将斑贴粘于胳膊上部内臂，按压多次，确保不会脱落，24h后，揭开斑贴，记录斑贴红肿、痒、痛等感觉；无红肿、氧、痛的感觉认定为“无”刺激性，有红肿、痒和/或痛的感觉认定为“有”刺激性；实施例1-7和对比例1-6均进行了斑贴无刺激测试并进行了评估，评估结果见表5和表5(续表)；
(D)牛角膜刺激性测试：选择无损伤的角膜沿巩膜边缘2.5mm处剪下，将剪下的角膜分成实验组和对照组共两组，每组3个角膜，将角膜固定在预热的角膜夹持器上，表面朝上，前后室用预热的无酚红MEM培养基填满，32±1℃培养箱中平衡1.5h，平衡结束后将角膜从培养箱中取出，以新鲜无酚红MEM培养基更换前后室旧培养基，用浊度仪测定所有角膜基础浊度值；移除前室液体，在实验组和对照组中所有角膜上皮侧均加入0.75mL组合物，并放置于32±1℃培养箱中孵育10±1min；孵育结束后，将前室中的孵育后的角膜用含酚红MEM培养基清洗至少3次至样品无残留，清洗后用新鲜的无酚红MEM培养基填充前后室，并置于32±1℃培养箱后孵育120min。以新鲜无酚红MEM培养基更换前后室旧培养基，再次用浊度仪测定所有角膜的浊度值。移除前室培养基并加入1mL的4mg/mL的荧光素钠溶液，夹持器竖直放回培养箱中孵育90min后，收集后室中的培养基并转移到96孔板中，每孔转入360μL，在490nm下测定吸光度值，计算体外评分(体外评分(IVS)＝平均校正浊度值+15×平均校正OD值)，按照OECD指南和联合国全球化学品统一分类和标识制度(UN GHS)对实验结果进行分类，具体分类原则见表2；体外评分数据中负数值优于正数值，且数值越接近0刺激性越低；实施例1-7和对比例1-6均进行了牛角膜刺激性测试并进行了体外评分，体外评分结果见表5和表5(续表)；
(E)鸡胚绒毛膜尿囊膜(CAM)血管测试：配制2重量％组合物水溶液待测样品，使用10只鸡胚，取待测样品40μL加入环内。鸡胚置于孵箱环境中30±5min。孵育后，将鸡胚从孵箱中取出，观察并比较环内与环外CAM血管的变化，评估环内血管损伤；毒性效应包括出血、毛细血管充血和鬼影血管，评估标准见表3；实施例1-7和对比例1-6均进行了鸡胚绒毛膜尿囊膜(CAM)血管测试并进行了评估，评估结果见表5和表5(续表)；
(F)3D皮肤模型刺激性测试：参照SN/T 4577-2016(化妆品皮肤刺激性检测重建人体表皮模型体外测试方法)的方法进行测试，配制含2重量％组合物的水溶液作为待测样品。测试终点是使用MTT法(又称MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法)测定细胞活性，MTT是一种黄色染料，活细胞线粒体中琥珀酸脱氢酶还原MTT，在细胞色素C的作用下，生成蓝色(或蓝紫色)不溶于水的甲臜(Formazan)，用酶标仪在570nm处测定甲臜的量，死细胞中不含琥珀酸脱氢酶，不与MTT反应；通常情况下，甲臜生成量与活细胞数成正比，根据570nm处OD值推算活细胞数，活细胞数占总细胞数50％以上，则认定为非刺激性，活细胞数占总细胞数50％以下，则认定为具有刺激性，实施例1-7和对比例1-6均进行了3D皮肤模型刺激性测试并进行了刺激性评估，评估结果见表5和表5(续表)。
(G)临床眼周刺激性测试：1)将两组样品(一组空白纯水对照，一组为含有2重量％组合物的水溶液)置于25℃的恒温水浴箱中；2)受试者保持面部洁净在恒温恒湿室静坐15min后，取两支干净的棉签，分别同时放进两款样品中浸泡1min，取出棉签，将浸泡过空白样品的棉签在左下眼周部位轻轻涂抹两次(从内眼角到外眼角方向)，将浸泡过含有组合物的样品的棉签在右下眼周部位轻轻涂抹两次(从内眼角到外眼角方向)；3)分别在第0min，5min，10min时询问受试者刺激反应并观察皮肤反应，评分标准见表4；实施例1-7和对比例1-6均进行临床眼周刺激性测试并进行了刺激性评估，评估结果见表5和表5(续表)；
(H)临床含组合物面膜刺激性测试：1)将两组样品(一组为空白面膜液不含组合物的半脸面膜；一组为面膜液含2重量％组合物含量的半脸面膜)置于25℃的恒温水浴箱中；2)受试者保持面部洁净在恒温恒湿室静坐15min后，将不含组合物的半脸面膜敷在受试者左脸部，将含2重量％组合物的半脸面膜敷在受试者右脸部；3)分别在第0min，5min，10min时询问受试者刺激反应并观察皮肤反应，评分标准见表4；实施例1-7和对比例1-6均进行临床含组合物面膜刺激性测试并进行了刺激性评估，评估结果见表5和表5(续表)；
(I)抑菌圈测试方法：采用D＝8mm滤纸片法进行抑菌圈实验。滴加1μL组合物于滤纸片中，待滤纸片挥干，将滤纸片轻轻贴在分别涂布黑曲霉、白色念珠菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和铜绿假单胞杆菌的固体培养基上。细菌置于37℃培养箱中过夜培养，第二天可进行抑菌圈直径测量；真菌置于28℃培养箱中培养三天，测量抑菌圈直径；实施例1-7和对比例1-6均进行了抑菌圈测试，抑菌圈测试结果见表7和表7(续表)，抑菌圈直径单位为mm；
(J)最低抑菌浓度(MIC)测试方法：将组合物稀释不同倍数后分别加入到灭菌的96孔板中，同时留一孔加入10μL灭菌蒸馏水作为空白对照。将浓度相当于0.5麦氏比浊标准的菌悬液与LB培养基以体积比1:1000方式混合，得到稀释液，每孔中加入90μL稀释液，加入细菌的96孔板密封后置于37℃摇床孵育18h判断结果，加入真菌的96孔板密封后置于25℃摇床孵育48h判断结果。当空白对照内菌体明显生长的情况下，以其余小孔内完全抑制菌体生长的最低样品浓度为MIC(用酶标仪测得OD600，MIC的单位为：重量％)；实施例1-7和对比例1-6均进行了最低抑菌浓度(MIC)测试，测试结果见表8和表8(续表)；优秀、良好等的评估标准是：MIC值低于0.5％为“优秀”，MIC值在0.5％-1％之间为“良好”，MIC值高于1％为“差”；
(K)应用产品中防腐挑战测试方法：配制含2重量％组合物的水溶液，从中取样50g样品，等分成两份待测样品，一份待测样品接种混合细菌(大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞杆菌，活菌数比值为1:1:1)，另一份待测样品接种混合真菌(白色念珠菌和黑曲霉，活菌数比值为1:1)，接种细菌的样品置于35℃的培养箱，接种真菌的样品置于25℃的培养箱。接种后的样品在挑战过程内按一定时间间隔取样检测活菌数。取样时间定为：接种后立即(0天)、7天、14天、21天、28天。取样检测时选择相应培养基进行检测。检测方法可参照《检验操作规程(霉菌和酵母菌)》和《检验操作规程(菌落总数)》进行；评判标准为：(1)从接种(第0天)开始到第14天，细菌总数的减少量的lg值不能小于2，并且从14天到28天细菌数不能增加；2、真菌总数从接种(第0天)开始到第14天，真菌总数不能增加，从第14天和第28天，真菌总数不能增加；3、第28天后，测试样品中的的活菌浓度应小于10cfu/g或10cfu/mL。实施例1-7和对比例1-6均进行了防腐挑战测试，防腐挑战测试结果见表9和表9(续表)，单位为cfu/mL。
表1
Figure BDA0002383602420000151
Figure BDA0002383602420000161
表1(续表)
组分 对比例1 对比例2 对比例3 对比例4 对比例5 对比例6
肉桂提取物 22 22 9 9 16 16
艾叶提取物 6 6 0.2 0.4 4 3
五倍子提取物 0.1 0.05 1 6
马齿苋提取物 1
1,3-丙二醇 1 0.5 3 6 3 3
去离子水 70.9 71.45 86.8 78.6 77 77
表2
IVS UN GHS
≤3 不分类
＞3，＜55 不可预测类
≥55 分类
表3
评分 血管效应 代码 观察描述
0 正常 N 观察不到反应,CAM正常
1 鬼影血管 G 血管白色无血流，管壁清晰
2 毛细血管充血 C 充血，或CAM小血管血流增加
3 极轻微出血 MH 细小出血点覆盖环内区域不足25％
4 轻度出血 SL 环内出血点覆盖面积25-50％
5 中度出血 Mod 环内大量出血点或小区域出血范围覆盖50-75％
6 严重出血 Sev 环内出血点区域＞75％；深色结痂可能形成
表4
Figure BDA0002383602420000171
表5
Figure BDA0002383602420000172
表5(续表)
Figure BDA0002383602420000173
Figure BDA0002383602420000181
表6
Figure BDA0002383602420000182
表6(续表)
Figure BDA0002383602420000183
Figure BDA0002383602420000191
表7
Figure BDA0002383602420000192
表7(续表)
菌株 对比例1 对比例2 对比例3 对比例4 对比例5 对比例6
大肠杆菌 17±0.5 14±0.5 8.5±0.2 15±0.5 9±0.1 8.2±0.1
金黄色葡萄球菌 16.5±0.5 13.5±0.5 8±0.1 14.5±0.5 8±0.1 8±0.1
铜绿假单孢杆菌 11±0.5 9±0.5 9±0.5 8.5±0.5 8±0.1 8±0.5
白色念珠菌 17±0.5 8±1 8.4±0.5 13.3±0.5 8.2±0.1 9±0.1
黑曲霉 16.7±0.5 8±1 8±0.2 14±0.5 8.4±0.5 8.5±0.5
表8
Figure BDA0002383602420000193
Figure BDA0002383602420000201
表8(续表)
Figure BDA0002383602420000202
表9
Figure BDA0002383602420000203
Figure BDA0002383602420000211
表9(续表)
混合细菌 对比例1 对比例2 对比例3 对比例4 对比例5 对比例6
第0天 6.7×10<sup>5</sup> 6.7×10<sup>5</sup> 6.7×10<sup>5</sup> 6.7×10<sup>5</sup> 6.7×10<sup>5</sup> 6.7×10<sup>5</sup>
第1周 1.2×10<sup>4</sup> 2×10<sup>4</sup> 4.1×10<sup>4</sup> 6.2×10<sup>3</sup> 3.3×10<sup>4</sup> 6.2×10<sup>4</sup>
第2周 2.2×10<sup>3</sup> 3.1×10<sup>3</sup> 2.6×10<sup>3</sup> 87 1.7×10<sup>3</sup> 5×10<sup>3</sup>
第3周 1.2×10<sup>3</sup> 1.5×10<sup>3</sup> 600 ＜10 1×10<sup>3</sup> 2.2×10<sup>3</sup>
第4周 570 950 100 ＜10 900 1.6×10<sup>3</sup>
混合真菌 对比例1 对比例2 对比例3 对比例4 对比例5 对比例6
第0天 5.4×10<sup>5</sup> 5.4×10<sup>5</sup> 5.4×10<sup>5</sup> 5.4×10<sup>5</sup> 5.4×10<sup>5</sup> 5.4×10<sup>5</sup>
第1周 2×10<sup>3</sup> 900 3.7×10<sup>3</sup> 5.4×10<sup>5</sup> 1.2×10<sup>4</sup> 1.5×10<sup>4</sup>
第2周 80 85 1.7×10<sup>3</sup> 2.2×10<sup>3</sup> 2.5×10<sup>3</sup> 1.3×10<sup>4</sup>
第3周 ＜10 ＜10 550 1100 1×10<sup>3</sup> 6.1×10<sup>3</sup>
第4周 ＜10 ＜10 200 300 680 1.2×10<sup>3</sup>
通过以上结果可以看出，使用本发明的方法制备的含有植物提取物的组合物的抑菌和抗炎效果良好，安全、环保、无刺激性，并且该组合物呈现透明无沉淀的溶液状态，可以很好的用于有色水剂中。从实施例1与对比例5和对比例6的实验结果可以看出，在本发明优选范围内的组合物的抑菌抗炎效果更好，组合物中各组分发挥了协同抑菌抗炎的效果；使用本发明的方法制备的含有植物提取物的组合物的防腐效果良好，且使用少量浓度即能达到优异的抑菌效果。
以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于此。在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，包括各个技术特征以任何其它的合适方式进行组合，这些简单变型和组合同样应当视为本发明所公开的内容，均属于本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种含有植物提取物的组合物，其特征在于，该组合物含有香辛料提取物、菊科植物的提取物和漆树科植物的提取物；其中，相对于100重量份香辛料提取物、菊科植物的提取物的用量为2.5-50重量份，漆树科植物的提取物的用量为0.5-60重量份；
优选地，相对于100重量份香辛料提取物，菊科植物的提取物的用量为5-25重量份，漆树科植物的提取物的用量为0.5-50重量份。
2.根据权利要求1所述的组合物，其中，所述组合物还含有低级醇和水，其中，相对于100重量份香辛料提取物，低级醇的用量为4.5-60重量份，水的用量为320-850重量份；
优选地，相对于100重量份香辛料提取物，低级醇的用量为5-50重量份，水的用量为500-700重量份；
优选地，所述低级醇为碳原子数为1-6的二元醇，更优选选自1,3-丁二醇、1,3-丙二醇、异戊二醇、1,2-戊二醇和1,2-己二醇中的至少一种。
3.根据权利要求1或2所述的组合物，其中，所述香辛料提取物选自樟属植物的提取物、茴香属植物的提取物和八角属植物的提取物中的至少一种；优选地，所述樟属植物的提取物选自肉桂树皮提取物，所述茴香属植物的提取物选自茴香提取物，所述八角属植物的提取物选自八角茴香提取物；
优选地，所述菊科植物的提取物选自蒿属植物的提取物和/或菊属植物的提取物；更优选地，所述菊科植物的提取物选自艾叶提取物、菊花提取物和野菊花提取物中的至少一种；
优选地，所述漆树科植物的提取物为盐肤木属植物的提取物；更优选地，所述漆树科植物的提取物为五倍子提取物。
4.根据权利要求1-3中任意一项所述的组合物，其中，所述香辛料提取物的活性成分为肉桂酸、茴香酸、山奈酚-3-O-半乳糖苷和山奈酚芦丁苷中的至少一种，其中所述香辛料提取物中活性成分的含量为1-60重量％；
优选地，所述肉桂树皮提取物的活性成分为肉桂酸，茴香提取物的活性成分为茴香酸、八角茴香提取物的活性成分为山奈酚-3-O-半乳糖苷和山奈酚芦丁苷，更优选地，所述肉桂树皮提取物中肉桂酸的含量为40-60重量％，所述茴香提取物中茴香酸的含量为40-60重量％，所述八角茴香提取物中山奈酚-3-O-半乳糖苷和山奈酚芦丁苷的含量分别为2-8重量％和1-5重量％；
优选地，所述菊科植物的提取物的活性成分为菊花黄酮，更优选地，所述菊科植物的提取物中菊花黄酮的含量为1-5重量％；
优选地，所述漆树科植物的提取物的活性成分为单宁酸，更优选地，所述漆树科植物的提取物中单宁酸的含量为5-15重量％。
5.根据权利要求1-4中任意一项所述的组合物，其中，所述香辛料提取物为香辛料的乙醇水溶液提取物；
所述菊科植物的提取物为菊科植物的乙醇水溶液提取物；
所述漆树科植物的提取物为漆树科植物的乙醇水溶液提取物；
优选地，所述香辛料提取物、菊科植物的提取物或漆树科植物的提取物的提取方法包括以下步骤；
(1)将所述香辛料的粉碎物、菊科植物的粉碎物或漆树科植物的粉碎物与乙醇水溶液进行混合；
(2)将混合后的物料进行回流提取，得到提取液；
(3)将步骤(2)所得的提取液进行固液分离，得到液相；
(4)将步骤(3)所得的液相进行浓缩、干燥。
6.一种含有植物提取物的组合物的制备方法，其特征在于，该方法包括将权利要求1-5中任意一项所述的香辛料提取物、菊科植物的提取物和漆树科植物的提取物进行混合。
7.根据权利要求6所述的方法，其中，所述方法包括将香辛料提取物、菊科提取物、漆树科提取物在低级醇和水的存在下进行混合。
8.权利要求1-5中任意一项所述的组合物在有色水剂产品中的应用；
优选地，所述有色水剂产品为日化用品；
优选地，相对于1千克有色水剂产品，所述香辛料提取物、菊科植物的提取物、漆树科植物的提取物、低级醇和水的总用量为15-25g。
9.权利要求1-5中任意一项所述的组合物在抑制细菌和/或真菌中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其中，所述细菌为大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和铜绿假单孢杆菌中的至少一种；所述真菌为白色念珠菌和/或黑曲霉。
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SE01 Entry into force of request for substantive examination
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RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20200508

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