CN111072664B - 一种纯化维生素b2的方法 - Google Patents
一种纯化维生素b2的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN111072664B CN111072664B CN201911396607.5A CN201911396607A CN111072664B CN 111072664 B CN111072664 B CN 111072664B CN 201911396607 A CN201911396607 A CN 201911396607A CN 111072664 B CN111072664 B CN 111072664B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- phase
- vitamin
- sample
- speed
- speed counter
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D475/00—Heterocyclic compounds containing pteridine ring systems
- C07D475/12—Heterocyclic compounds containing pteridine ring systems containing pteridine ring systems condensed with carbocyclic rings or ring systems
- C07D475/14—Benz [g] pteridines, e.g. riboflavin
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)
Abstract
本发明涉及一种快速纯化维生素B2的方法，将正丁醇、乙晴、(NH4)2SO4和水混合得到两相溶剂体系，待溶剂体系分成后，分离得到上相固定相和下相流动相，分别用上相固定相和下相流动相溶解样品，分别得到上相液和下相液；通入高速逆流色谱中进行洗脱，具体步骤为：将得到的上相液通入高速逆流色谱的分离管中，然后注入得到的下相液，将分离管中的溶解液利用高速逆流色谱仪进行监测并收集馏分，合并相同成分，得到纯化后的产品。纯化后的产品中维生素B2的纯度大于98％。
Description
技术领域
本发明属于分离纯化技术领域，具体涉及一种快速纯化维生素B2的方法。
背景技术
公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
维生素B2又叫核黄素，为体内黄酶类辅基的组成部分(黄酶在生物氧化还原中发挥递氢作用)，当缺乏时，就影响机体的生物氧化，使代谢发生障碍。其病变多表现为口、眼和外生殖器部位的炎症，如口角炎、唇炎、舌炎、眼结膜炎和阴囊炎等，故本品可用于上述疾病的防治。但是摄取过多，可能引起瘙痒、麻痹、流鼻血、灼热感、刺痛等。而且如果正在服用抗癌药，如氨甲喋呤(methotrexate)的话，则过量的B2会减低这些抗癌剂的效用。因此维生素B2的临床检测非常有必要。近年来随着色谱、质谱技术的发展，急需高纯度的维生素B2用于维生素B2的临床检测。
目前，维生素B2的生产方法主要是有植物体提取法、化学合成法、微生物发酵法和半微生物发酵法，提取方法主要有重金属盐沉淀法、酸溶法、碱溶法等，但是，采用上述方法得到的维生素B2的纯度较低(<98％)。高速逆流色谱技术是一种液-液分配色谱技术，无固态载体，因此，可以避免死吸附引起的样品损失，在天然产物的分离纯化领域得到广泛应用。该技术具有适用范围广、无不可逆吸附、制备量大和分离效率高等优点。
发明内容
针对上述现有技术中存在的问题，本发明的目的是提供一种快速纯化维生素B2的方法。
为了解决以上技术问题，本发明的技术方案为：
一种快速纯化维生素B2的方法，将正丁醇、乙晴、(NH4)2SO4和水混合得到两相溶剂体系，待溶剂体系分成后，分离得到上相固定相和下相流动相，用等体积的上相固定相和下相流动相混合溶解样品，得到样品溶液；
将得到的样品溶液通入高速逆流色谱中进行洗脱，具体步骤为：将得到的上相通入高速逆流色谱的分离管中，分离管中充满上相后注入下相流动相，当螺旋管中的上下相达到平衡时(有下相流出)，将样品溶液注入进样环中，将从分离管中流出的溶液利用紫外检测器进行监测并收集馏分，合并相同成分，得到纯化后的产品。
本发明中发明人对现有的维生素B2样品进行纯化，纯化后样品(与实施例中的市售维生素B2产品相对应)中维生素B2的纯度大于95％，优选的实施例中纯度98％。本发明制备的溶剂体系，对现有的维生素B2样品中维生素B2和杂质的分离具有较好的效果。
高速逆流色谱是固定相和流动相都是液体的分离方法，主要依据物质在两相中分配系数的不同对物质进行分离。两相溶剂体系与高速逆流色谱进行结合，使现有的维生素B2样品被洗脱，提高了分离效果。
在一些实施例中，正丁醇、乙晴、(NH4)2SO4溶液和水的体积比为3～5:0.5～1:1～3:2～4。本发明的溶剂体系形成的两相溶剂，各个组分相互配合，得到上相固定相和下相流动相，两相进行配合，分别作为固定相和流动相，提高了样品的分离效果。优选的，正丁醇、乙晴、(NH4)2SO4溶液和水的体积比为3:1:2.4:2。
在一些实施例中，溶解样品的两相溶剂体系的总体积与样品的质量比为2-3mL:10mg，上相固定相和下相固定相的体积相同。优选的，样品的维生素B2的纯度为85-95％。本发明中两相溶剂的体积与样品的质量比是效果最优的比例。
在一些实施例中，(NH4)2SO4溶液的浓度为20％-50％；优选的，(NH4)2SO4溶液的浓度为40-50％。
在一些实施例中，上相固定相和下相流动相进入高速逆流色谱仪前进行超声脱气。优选的，超声脱气的时间为8-12min。除去气泡以免影响维生素B2的分离。
在一些实施例中，上相固定相和下相流动相在高速逆流色谱中的洗脱过程的具体步骤为：上相液泵入高速逆流色谱仪的分离管中，直至有上相流出，保证固定相充满整个分离螺旋管，然后调节主机转速，色谱仪螺旋管柱按照顺时针的方向旋转，然后泵入下相，当螺旋管中的上下相达到平衡时(有下相流出)，将溶解的样品溶液用注射器进入进样环中，旋转六通阀使样品注入高速逆流色谱仪中。
优选的，上相进入高速逆流色谱仪的速度为15-25ml/min，下相进入高速逆流色谱仪的速度为1-3ml/min，高速逆流色谱的主机转速为800-900rpm。
优选的，固定相保留率：66-68％。
在一些实施例中，利用紫外线检测器进行监测，紫外线检测波长为254nm，每个三分钟收集一个馏分，将收集到的馏分利用HPLC进行检测并合并相同的成分。
在一些实施例中，HPLC进行检测的条件为：Unitary C18柱，4.6mm×250mm,i.d.,5μm流动相：甲醇(A)—水(含20mM磷酸二氢钠，B)；梯度洗脱程序：0-20min，23％A-75％A；流速：1.0mL/min；检测波长：254nm。
本发明的有益效果：
本发明的纯化方法能够快速的对维生素B2产品进行纯化，将含有90％左右维生素B2的样品纯化到纯度大于96％。
本发明利用高速逆流色谱技术，高速逆流色谱技术是一种液-液分配色谱技术，无固态载体，因此，可以避免死吸附引起的样品损失，在天然产物的分离纯化领域得到广泛应用。该技术具有适用范围广、无不可逆吸附、制备量大和分离效率高等优点。
附图说明
构成本发明的一部分的说明书附图用来提供对本申请的进一步理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。
图1为实施例1纯化后的产品的核磁共振氢谱图；
图2为实施例1纯化后的产品的核磁共振碳谱图；
图3为维生素B2的化学结构；
图4为实施例1维生素B2的高速逆流色谱图；
图5为实施例1维生素B2纯化前后的高效液相色谱图(A:市售的维生素B2,B:纯化后的维生素B2)。
具体实施方式
应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本发明提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本申请的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。
下面结合实施例对本发明进一步说明
实施例1
将正丁醇、乙腈、50％(NH4)2SO4、水按照体积比3:1:2.4:2的比例配置成两相溶剂系统((NH4)2SO4的浓度为50％)，放置在分液漏斗中，摇匀，静置分层后，分成上相固定相和下相流动相，使用前超声脱气10min，除气泡待用。
取上海源叶生物科技有限公司的纯度90％的维生素B2100mg，用10ml的下相和10ml上相溶解样品。
将两相溶剂体系中已经超声脱气的上相以20ml/min的速度泵入高速逆流色谱仪的分离管中，直至有上相流出，保证固定相充满整个分离螺旋管，然后调节主机转速到850rpm，色谱仪螺旋管柱按照顺时针的方向旋转。然后以2ml/min的速度泵入下相，当螺旋管中的上下相达到平衡时(有下相流出)，固定相保留率：67.1％，将溶解的样品用注射器进入进样环中，旋转六通阀使样品注入高速逆流色谱仪中，调节紫外检测器的波长在254nm，对流出来的组分进行监测。每隔三分钟收集一个馏分，高速逆流色谱图如图4所示，收集到的馏分用HPLC进行检测并合并相同成分。
采用高效液相色谱仪对分离得到的成分进行测定，实验条件：Unitary C18柱(4.6mm×250mm,i.d.,5μm)；流动相：甲醇(A)—水(含20mM磷酸二氢钠，B)；梯度洗脱程序：0-20min，23％A-75％A；流速：1.0mL/min；检测波长：254nm。结果如图5B所示，按照峰面积归一化法分析纯度，结果显示，分离得到的维生素B2纯度均大于96％。
采用核磁共振波谱对化合物的结构进行鉴定，得到如图1、图2所示，推得维生素B2的结构式如图3所示，通过与已报道的文献比较，确定此化合物为维生素B2。
本发明所提供的方法效率高、耗时短、环境友好，能够在8个小时一次性制备得到纯度大于98％的维生素B2，明显优于现有的重金属盐沉淀法、酸溶法等技术。
实施例1中将购买自上海源叶生物科技有限公司所售的纯度98％的维生素B2产品放置在烘箱中，80℃放置24小时，得到纯度90％的维生素B2粗样，高效液相色谱如图5A所示，通过图5A和图5B的对比可知，本发明的两相溶剂体系能够对维生素B2产品进行更好的分离和纯化，减少杂质峰，提高纯度。
实施例2
将正丁醇、乙腈、40％(NH4)2SO4、水按照体积比3.5:0.8:2:2.5的比例配置成两相溶剂系统，放置在分液漏斗中，摇匀，静置分层后，分成上相固定相和下相流动相，使用前超声脱气12min，除气泡待用。
取上海源叶生物科技有限公司所售的纯度90％的维生素B2100mg(与实施例1的样品相同)，用10ml的下相和10ml上相溶解样品。
将两相溶剂体系中已经超声脱气的上相以20ml/min的速度泵入高速逆流色谱仪的分离管中，直至有上相流出，保证固定相充满整个分离螺旋管，然后调节主机转速到850rpm，色谱仪螺旋管柱按照顺时针的方向旋转。然后以2ml/min的速度泵入下相，当螺旋管中的上下相达到平衡时(有下相流出)，将溶解的样品用注射器进入进样环中，旋转六通阀使样品注入高速逆流色谱仪中，调节紫外检测器的波长在254nm，对流出来的组分进行监测。每隔三分钟收集一个馏分，收集到的馏分用HPLC进行检测并合并相同成分。
采用高效液相色谱仪对分离得到的成分进行测定，按照峰面积归一化法分析纯度，结果显示，分离得到的维生素B2纯度均大于96％。
采用核磁共振波谱对化合物的结构进行鉴定，推得维生素B2的结构式如图3所示，通过与已报道的文献比较，确定此化合物为维生素B2。
本发明所提供的方法效率高、耗时短、环境友好，能够在8个小时一次性制备得到纯度大于98％的维生素B2，明显优于现有的重金属盐沉淀法、酸溶法等技术。
采用高效液相色谱仪对分离得到的成分进行测定，按照峰面积归一化法分析纯度，结果显示，分离得到的维生素B2纯度均大于96％。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (9)
1.一种纯化维生素B2的方法，其特征在于：将正丁醇、乙腈、(NH4)2SO4和水混合得到两相溶剂体系，待溶剂体系分层后，分离得到上相固定相和下相流动相，用等体积的上相固定相和下相流动相混合溶解样品，得到样品溶液；
将得到的样品溶液通入高速逆流色谱中进行洗脱，具体步骤为：将得到的上相通入高速逆流色谱的分离管中，分离管中充满上相后注入下相流动相，当螺旋管中的上下相达到平衡时，将样品溶液注入进样环中，将从分离管中流出的溶液利用紫外检测器进行监测并收集馏分，合并相同成分，得到纯化后的产品；
其中，正丁醇、乙腈、(NH4)2SO4溶液和水的体积比为3～5:0.5～1:1～3:2～4；
(NH4)2SO4溶液的浓度为40-50％；
样品的维生素B2的纯度为85-95％。
2.根据权利要求1所述的纯化维生素B2的方法，其特征在于：溶解样品的两相溶剂体系的总体积与样品的质量比为2-3mL:10mg，上相固定相和下相固定相的体积相同。
3.根据权利要求1所述的纯化维生素B2的方法，其特征在于：上相固定相和下相流动相进入高速逆流色谱仪前进行超声脱气。
4.根据权利要求3所述的纯化维生素B2的方法，其特征在于：超声脱气的时间为8-12min。
5.根据权利要求1所述的纯化维生素B2的方法，其特征在于：上相固定相和下相流动相在高速逆流色谱中的洗脱过程的具体步骤为：上相液泵入高速逆流色谱仪的分离管中，直至有上相流出，保证固定相充满整个分离螺旋管，然后调节主机转速，色谱仪螺旋管柱按照顺时针的方向旋转，然后泵入下相，当螺旋管中的上下相达到平衡时，将溶解的样品溶液用注射器进入进样环中，旋转六通阀使样品注入高速逆流色谱仪中。
6.根据权利要求5所述的纯化维生素B2的方法，其特征在于：上相进入高速逆流色谱仪的速度为15-25ml/min，下相进入高速逆流色谱仪的速度为1-3ml/min，高速逆流色谱的主机转速为800-900rpm。
7.根据权利要求1所述的纯化维生素B2的方法，其特征在于：固定相保留率：66-68％。
8.根据权利要求1所述的纯化维生素B2的方法，其特征在于：利用紫外线检测器进行监测，紫外线检测波长为254nm，每个三分钟收集一个馏分，将收集到的馏分利用HPLC进行检测并合并相同的成分。
9.根据权利要求8所述的纯化维生素B2的方法，其特征在于：HPLC进行检测的条件为：Unitary C18柱，4.6mm×250mm,i.d.,5μm，流动相A：甲醇，流动相B：含20mM磷酸二氢钠的水；梯度洗脱程序：0-20min，23％A-75％A；流速：1.0mL/min；检测波长：254nm。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201911396607.5A CN111072664B (zh) | 2019-12-30 | 2019-12-30 | 一种纯化维生素b2的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201911396607.5A CN111072664B (zh) | 2019-12-30 | 2019-12-30 | 一种纯化维生素b2的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN111072664A CN111072664A (zh) | 2020-04-28 |
| CN111072664B true CN111072664B (zh) | 2021-03-23 |
Family
ID=70319812
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201911396607.5A Active CN111072664B (zh) | 2019-12-30 | 2019-12-30 | 一种纯化维生素b2的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN111072664B (zh) |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1826342B (zh) * | 2003-07-22 | 2010-06-16 | 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 | 对核黄素进行纯化的方法 |
| CN101941974B (zh) * | 2010-09-15 | 2012-09-26 | 赤峰制药股份有限公司 | 核黄素纯化精制方法 |
| CN109851619B (zh) * | 2019-02-02 | 2021-04-23 | 赤峰制药股份有限公司 | 一种核黄素提纯工艺 |
| CN110283175A (zh) * | 2019-06-29 | 2019-09-27 | 赤峰制药股份有限公司 | 一种高纯度核黄素的制备工艺 |
-
2019
- 2019-12-30 CN CN201911396607.5A patent/CN111072664B/zh active Active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN111072664A (zh) | 2020-04-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN109942380B (zh) | 一种利用高速逆流色谱分离纯化制备大麻二酚的方法 | |
| CN108314608B (zh) | 一种大麻二酚的提取分离方法 | |
| EP2842957B1 (en) | Method for extracting and separating ginkgolides | |
| CN102579612B (zh) | 一种准噶尔乌头总生物碱的提取方法 | |
| EP3009429B1 (en) | R type resveratrol dimer, preparation method therefor and use thereof in reducing blood sugar | |
| CN111039762B (zh) | 一种大麻二酚的纯化方法 | |
| CN102936275B (zh) | 一种丹参酮iia磺酸钠原料药中杂质的分离纯化方法 | |
| CN107805270A (zh) | 一种人参皂苷Rh2的提取方法 | |
| CN111072664B (zh) | 一种纯化维生素b2的方法 | |
| CN106226426A (zh) | 一种高效液相色谱拆分卡格列净五元环杂质对映体的方法 | |
| CN109406685B (zh) | 一种分离卡非佐米和其异构体的高效液相色谱方法 | |
| CN110194758B (zh) | 一种从关木通中分离纯化马兜铃酸类化合物的方法 | |
| CN110746302A (zh) | 一种紫锥菊中酚酸类化合物的分离制备方法 | |
| CN103145722B (zh) | 一种高速逆流色谱分离提纯埃博霉素的方法 | |
| CN102617656B (zh) | 从对萼猕猴桃叶中分离制备高纯度黄酮苷类化合物的方法 | |
| CN105218645A (zh) | 一种高纯度高收率的卡泊芬净杂质c0的制备方法 | |
| CN1908005B (zh) | 一种复合蛋白沉淀剂 | |
| CN114349824A (zh) | 一种纯化利那洛肽的方法 | |
| CN101723927A (zh) | 一种儿茶素单体egcg工厂化生产分离纯化方法 | |
| CN106939028A (zh) | 炔苷类化合物及其提取分离方法和应用 | |
| CN113549061A (zh) | 一种从生物碱浸膏中分离纯化的樟柳碱及其制备方法 | |
| CN102491926B (zh) | 一种硫普罗宁二硫化物的制备和纯化方法 | |
| CN101491647A (zh) | 一种从中药麦角提取液中分离麦角总生物碱的方法 | |
| CN114720576B (zh) | 一种贝母属药材中甾体生物碱富集纯化的方法 | |
| CN113402489A (zh) | 一种高效制备丹酚酸b和紫草酸的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |