CN111065425A - 免疫抑制性蛋白质吸附材料和吸附柱 - Google Patents
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Abstract
本公开的目的在于提供保持载体材料的物理强度、有效地吸附免疫抑制性蛋白质的吸附材料。本公开提供免疫抑制性蛋白质的吸附材料,其包含水不溶性载体,所述水不溶性载体键合有选自规定式表示的多胺和规定式表示的脂肪族胺中的1种以上含氮化合物,该水不溶性载体上的氨基的总量超过0μmol/g且为2500μmol/g以下,而且,该水不溶性载体上的伯氨基的量为450μmol/g以下。
Description
技术领域
本公开涉及免疫抑制性蛋白质的吸附材料和含有其的吸附柱。
背景技术
逐渐明确了癌与免疫密切相关,近年来报告了很多晚期癌症中免疫抑制性的血液成分的浓度上升。
免疫抑制性的血液成分中代表性的是TGF-β(Transforming Growth Factor-β,转化生长因子-β)。近年来,明确了由于与癌的进展相关的分子之一TGF-β参与的免疫抑制信号亢进,使得癌细胞免受免疫系统的攻击,结果癌进展。TGF-β是单独的分子量为25000左右的蛋白质,存在5种亚型(TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3、TGF-β4、TGF-β5)。TGF-β在血液中与分子量75000左右的称为Latency Associated Peptide(潜在相关肽,以下称为LAP)的蛋白质键合而存在(以下称为LAP键合型TGF-β)。
作为治疗癌的方法,开发了阻断由癌细胞释放的TGF-β参与的免疫抑制信号的药物,但还没有成为有效的治疗方法。
另一方面,如果除去TGF-β,癌细胞免受免疫系统攻击的信号解除,患者的免疫力提高,可以期待肿瘤的退化、癌进展的抑制。
作为吸附蛋白质的材料,开发了几种在水不溶性载体上固定有化合物的材料。例如,专利文献1中,作为吸附具有kringle序列的蛋白质或肽的材料,公开了在水不溶性载体上固定了赖氨酸的材料。另外,专利文献2中公开了导入了具有氨基的官能团的吸附载体,其吸附高迁移率族蛋白等的炎症性细胞因子。另外,专利文献3中公开了用于除去改性低密度脂蛋白和/或糖化终产物(終末糖化産物)的含有规定式表示的多胺衍生物作为有效成分的吸附剂。另外,专利文献4中作为吸附细胞因子和/或超抗原的材料,公开了包含具有多胺的基材的吸附材料。
进一步地,专利文献5和6中,作为吸附LAP键合型TGF-β的材料,公开了在水不溶性载体上固定有亲水性氨基(季铵基)的吸附材料。
专利文献7中公开了用于吸附或除去白血球和细胞因子的具有规定的孔径和孔容积率的键合了亲水性胺残基的吸附器。
现有技术文献
专利文献
专利文献1: 日本特开2012-062259号公报
专利文献2: 日本特开2012-005827号公报
专利文献3: 日本特开2011-139806号公报
专利文献4: 日本特开2006-272075号公报
专利文献5 :国际公开2003/101511号
专利文献6: 日本特开2003-339854号公报
专利文献7 :日本特开2007-202634号公报。
发明内容
发明要解决的课题
但是,专利文献1~4中没有公开提高TGF-β等的免疫抑制性蛋白质的吸附性的技术。另外,专利文献5~7中公开的材料上固定的季铵基、亲水性胺残基由于亲水性高,维持载体材料的物理强度的同时提高吸附效率是困难的。
因此,要求开发可在维持载体材料的物理强度的同时有效吸附血液中的TGF-β或LAP键合型TGF-β的吸附材料。
为此,本公开的目的在于提供保持载体材料的物理强度的同时,有效吸附免疫抑制性蛋白质的吸附材料。
用于解决课题的手段
本发明人发现通过使水不溶性载体含有多胺残基或脂肪族胺残基,吸附免疫抑制性蛋白质。进一步地,除了使水不溶性载体含有多胺残基或脂肪族胺残基以外,还使水不溶性载体上的氨基的总量和该水不溶性载体上的伯氨基的量为规定的范围时,能够保持载体材料的物理强度,且有效吸附免疫抑制性蛋白质(特别是TGF-β或LAP键合型TGF-β),从而完成了本发明。
本实施方式的方式例记载如下:
[1] 免疫抑制性蛋白质的吸附材料,其包含水不溶性载体,所述水不溶性载体键合有选自以下的式(1)表示的多胺、以下的式(2)表示的脂肪族伯胺和式(3)表示的脂肪族仲胺中的1种以上含氮化合物,
上述水不溶性载体上的氨基的总量为超过0μmol/g且为2500μmol/g以下,而且,上述水不溶性载体上的伯氨基的量为450μmol/g以下,
R1R2N-X-NR3R4 ・・・式(1)
[式(1)中,X为具有2~20个碳原子的饱和或不饱和的脂肪族烃基、或具有3~20个碳原子的饱和或不饱和的脂肪族烃基中1~5个碳原子被氮原子替代得到的含有杂原子的碳链,键合于该氮原子的氢原子可以被烷基替代,所述烷基可以具有氨基,R1~R4各自独立地为氢原子或烷基。]
NH2R5 ・・・式(2)
[式(2)中,R5为具有1~12个碳原子的饱和或不饱和的脂肪族烃基。]
NHR6R7 ・・・式(3)
[式(3)中,R6和R7各自独立地为具有1~12个碳原子的饱和或不饱和的脂肪族烃基]。
[2] [1]所述的吸附材料,其中,上述含氮化合物含有上述式(1)表示的多胺。
[3] [1]或[2]所述的吸附材料,其中,上述含氮化合物通过连接基团键合于上述水不溶性载体。
[4] [1]~[3]中任一项所述的吸附材料,其中,上述氨基的总量为30~2400μmol/g。
[5] [4]所述的吸附材料,其中,上述伯氨基的量相对于上述氨基的总量的比率(伯氨基的量/氨基的总量)为0.30以下。
[6] [1]~[5]中任一项所述的吸附材料,其中,
上述水不溶性载体为纤维形状或粒子形状,
上述纤维或上述粒子的直径为15~50μm,
上述水不溶性载体的表面的算术平均粗糙度为0.1~3.0μm。
[7] [1]~[6]中任一项所述的吸附材料,其中,上述免疫抑制性蛋白质为TGF-β或LAP键合型TGF-β。
[8] 吸附柱,其具有[1]~[7]中任一项所述的吸附材料。
[9] [8]所述的吸附柱,其用于血液净化疗法。
发明效果
通过本公开可以提供保持载体材料的物理强度、且有效吸附免疫抑制性蛋白质(特别是TGF-β或LAP键合型TGF-β)的吸附材料。
附图说明
图1是将二亚乙基三胺固定在水不溶性载体上时得到的结构例的概念图。
图2 是径向流动型的吸附柱的一例的纵向截面图。
具体实施方式
以下对本实施方式进行更详细地说明。本说明书整体中单数形式的表述在没有特别说明的情况下应理解为也包括其复数形式的概念。因此,单数形式的冠词(例如英语的情况下“a”、“an”、“the”等)在没有特别说明的情况下应理解为也包括其复数形式的概念。另外,本说明书中使用的术语在没有特别说明的情况下应理解为以该领域中通常使用的含义使用。因此,在没有另外定义的情况下,本说明书中使用的所有专业术语和科技术语具有与本公开所属领域的技术人员通常理解的含义相同的含义。矛盾的情况下,本说明书(包括定义)优先。
本实施方式的吸附材料涉及用于吸附免疫抑制性蛋白质的免疫抑制性蛋白质吸附材料。另外,本实施方式的吸附材料包含水不溶性载体,所述水不溶性载体键合有选自式(1)表示的多胺、式(2)表示的脂肪族伯胺和式(3)表示的脂肪族仲胺中的1种以上含氮化合物。另外,本实施方式的吸附材料中,水不溶性载体上的氨基的总量相对于1g吸附材料超过0μmol且为2500μmol以下,而且,水不溶性载体上的伯氨基的量相对于1g吸附材料为450μmol以下。
“水不溶性载体上的氨基”是指存在于水不溶性载体上的伯氨基(-NH2)、仲氨基、叔氨基和季铵基(季铵基)。含氮化合物键合于水不溶性载体时,根据含氮化合物中的键合位置,在键合后的含氮化合物中存在伯氨基、仲氨基、叔氨基和/或季铵基。例如,式(1)表示的多胺键合于水不溶性载体时,根据多胺中的键合位置,在键合后的多胺中存在伯氨基、仲氨基、叔氨基和/或季铵基。另外,含氮化合物优选通过该化合物中的氨基(或氮原子)键合于水不溶性载体。本说明书中,“水不溶性载体上的氨基” 是至少包括这样生成的源自含氮化合物的伯氨基、仲氨基、叔氨基和季铵基的概念。含氮化合物通过连接基团键合时,“水不溶性载体上的氨基”包括源自连接基团的伯氨基、仲氨基、叔氨基和季铵基。
另外,“氨基的总量”是指水不溶性载体上的伯氨基、仲氨基、叔氨基和季铵基的总量(μmol)。另外,“水不溶性载体上的伯氨基”是指水不溶性载体上存在的伯氨基。“水不溶性载体上的伯氨基”是至少包含含氮化合物(例如多胺)中的没有反应而残留的伯氨基的概念。
“含氮化合物残基”在本说明书中使用时,是指将含氮化合物直接或间接键合于水不溶性载体得到的基团。同样地,“多胺残基”是指将式(1)表示的多胺直接或间接键合于水不溶性载体得到的基团,“脂肪族胺残基”是指将式(2)或式(3)表示的脂肪族胺(也称为脂肪族胺)直接或间接键合于水不溶性载体得到的基团。
含氮化合物选自式(1)表示的多胺、式(2)表示的脂肪族伯胺和式(3)表示的脂肪族仲胺。含氮化合物可以单独使用1种,或将多种组合使用。
一个实施方式中,含氮化合物为式(1)表示的多胺。
R1R2N-X-NR3R4 ・・・式(1)
[式(1)中,X为具有2~20个碳原子的饱和或不饱和的脂肪族烃基、或具有3~20个碳原子的饱和或不饱和的脂肪族烃基中1~5个碳原子被氮原子替代得到的含有杂原子的碳链,键合于该氮原子的氢原子可以被烷基替代,所述烷基可以具有氨基,R1~R4各自独立地为氢原子或烷基。]。
式(1)中,X例如为具有2~20个(例如16个以下、14个以下、12个以下、10个以下、8个以下、6个以下、4个以下)碳原子的饱和或不饱和的脂肪族烃基。式(1)中,X例如为具有3~20个(例如16个以下、14个以下、12个以下、10个以下)碳原子的饱和或不饱和的脂肪族烃基中1~5个(例如1~3个)碳原子被氮原子替代得到的含有杂原子的碳链,键合于该氮原子的氢原子可以被可以具有氨基的烷基(例如具有1~6个(优选1~4个)碳原子)替代。R1~R4各自独立地为氢原子或烷基。烷基例如具有1~6个(优选1~4个)碳原子。脂肪族烃基可以为直链状,也可以为支链状。
式(1)表示的多胺优选为下式(1-1)~(1-6)的任一个表示的多胺。
H2N-(CH2)p1-NH2 ・・・式(1-1)
[式(1-1)中,p1为2~12(优选2~6、2~5或2~4)的整数,两末端的伯氨基的氢原子中的至少一个可以被烷基替代。]、
H2N-(CH2)p1-NH-(CH2)p2-NH2 ・・・式(1-2)
[式(1-2)中,p1和p2各自独立地为2~5(优选2~4、2~3、2)的整数,仲氨基的氢原子可以被可以具有氨基的烷基替代,两末端的伯氨基的氢原子中的至少一个可以被烷基替代。]、
H2N-(CH2)p1-NH-(CH2)p2-NH-(CH2)p3-NH2 ・・・式(1-3)
[式(1-3)中,p1、p2和p3各自独立地为2~5(优选2~4、2~3、2)的整数,仲氨基的氢原子可以各自独立地被可以具有氨基的烷基替代,两末端的伯氨基的氢原子中的至少一个可以被烷基替代。]、
H2N-(CH2)p1-NH-(CH2)p2-NH-(CH2)p3-NH-(CH2)p4-NH2 ・・・式(1-4)
[式(1-4)中,p1、p2、p3和p4各自独立地为2~5(优选2~4、2~3、2)的整数,p1、p2、p3和p4之和为17以下,仲氨基的氢原子可以各自独立地被可以具有氨基的烷基替代,两末端的伯氨基的氢原子中的至少一个可以被烷基替代。]、
H2N-(CH2)p1-NH-(CH2)p2-NH-(CH2)p3-NH-(CH2)p4-NH-(CH2)p5-NH2 ・・・式(1-5)
[式(1-5)中,p1、p2、p3、p4和p5各自独立地为2~5(优选2~4、2~3、2)的整数,p1、p2、p3、p4和p5之和为16以下,仲氨基的氢原子可以各自独立地被可以具有氨基的烷基替代,两末端的伯氨基的氢原子中的至少一个可以被烷基替代。]、
H2N-(CH2)p1-NH-(CH2)p2-NH-(CH2)p3-NH-(CH2)p4-NH-(CH2)p5-NH-(CH2)p6-NH2 ・・・式(1-6)
[式(1-6)中,p1、p2、p3、p4、p5和p6各自独立地为2~5(优选2~4、2~3、2)的整数,p1、p2、p3、p4、p5和p6之和为15以下,仲氨基的氢原子可以各自独立地被可以具有氨基的烷基替代,两末端的伯氨基的氢原子中的至少一个可以被烷基替代。]。
式(1-2)~(1-6)中,可以键合于仲氨基的氮原子的“可以具有氨基的烷基”的碳原子数例如为1~6个,优选为1~5个,优选为1~4个,优选为1~3个。式(1-1)~(1-6)中,可以键合于两末端的伯氨基的氮原子的“烷基”的碳原子数例如为1~6个,优选为1~5个,优选为1~4个,优选为1~3个。这些“烷基”优选为直链状或支链状。
作为式(1)表示的多胺,可列举例如乙二胺、N-乙基乙二胺、二亚乙基三胺、N-乙基二亚乙基三胺、三亚乙基四胺、四亚乙基五胺。另外,除此以外可列举以下的多胺。3,3'-二氨基二丙基胺;1,3-二氨基丙烷;去甲亚精胺;高亚精胺(homospermidine);氨基丙基尸胺;氨基丁基尸胺;去甲精胺;热精胺;氨基丙基高亚精胺;刀豆四胺;高精胺(homospermine);氨基戊基去甲亚精胺;N,N-双(氨基丙基)尸胺;嗜热性五胺(caldopentamine);高嗜热性五胺(homocaldopentamine);热五胺(thermopentamine);嗜热性六胺(caldohexamine);高嗜热性六胺(homocaldohexamine);热六胺(thermohexamine);高热六胺(homothermohexamine);N4-氨基丙基去甲亚精胺;N4-氨基丙基亚精胺;N4-氨基丙基去甲精胺。
一个实施方式中,含氮化合物为式(2)表示的脂肪族伯胺或式(3)表示的脂肪族仲胺。
NH2R5 ・・・式(2)
[式(2)中,R5为具有1~12个碳原子的饱和或不饱和的脂肪族烃基。]、
NHR6R7 ・・・式(3)
[式(3)中,R6和R7各自独立地为具有1~12个碳原子的饱和或不饱和的脂肪族烃基。]。
式(2)或(3)表示的脂肪族胺中,脂肪族烃基优选为直链状或支链状的脂肪族烃基,优选为直链状或支链状的饱和脂肪族烃基。脂肪族烃基的碳数优选为1~8个,优选为1~6个,优选为1~4个。
作为脂肪族胺的具体例,可列举乙胺、丙胺、丁胺、戊胺、己胺、庚胺、辛胺、壬胺、癸胺等的单烷基胺;二乙基胺、二丙基胺、二丁基胺、二庚基胺、二辛基胺、二环己基胺等的二烷基胺。
作为含氮化合物,可列举例如乙胺、乙二胺、二乙基胺、N-乙基乙二胺、二亚乙基三胺、N-乙基二亚乙基三胺、三亚乙基四胺或四亚乙基五胺。这些中,优选列举乙二胺、二亚乙基三胺、三亚乙基四胺或四亚乙基五胺。含氮化合物可以是市售的或通过公知的方法或以其为标准的方法制造。
键合了含氮化合物的水不溶性载体包括上述含氮化合物直接共价键合的水不溶性载体、或通过连接基团间接键合的水不溶性载体二者。另外,含氮化合物键合的水不溶性载体包括选自上述多胺和上述脂肪族胺中的各自不同的2种以上含氮化合物键合的载体。
作为含氮化合物使用式(1)表示的多胺时,可以是多个氨基键合于水不溶性载体,形成交联结构。即,作为含氮化合物将式(1)表示的多胺键合于水不溶性载体时,如果多胺中的氨基的至少2个键合于水不溶性载体,则形成交联结构。作为例子,将作为式(1)表示的多胺的代表性化合物的二亚乙基三胺(以下也称为DETA)固定于水不溶性载体上时得到的结构例子示于图1。图1的例子中,将N-羟甲基-α-氯乙酰胺(以下也称为NMCA)用作连接基团。如图1所示,二亚乙基三胺的氨基中,两末端伯氨基反应时、一个末端的伯氨基和仲氨基反应时、所有的氨基(两末端伯氨基和仲氨基)反应时,得到交联结构。
“免疫抑制性蛋白质”是指具有抑制免疫系统的作用的蛋白质,例如,TGF-β、LAP键合型TGF-β、免疫抑制酸性蛋白、癌胚抗原、吲哚胺氧化酶(Indoleamine 2,3-Dioxygenase:IDO)、诱导型一氧化氮合成酶(inducible nitric oxide synthase:iNOS)、精氨酸酶(arginase:ARG)、白细胞介素4、白细胞介素6、白细胞介素10、白细胞介素13、肿瘤坏死因子等。这些中,从以癌患者的肿瘤的退化、癌进展的抑制为目的的治疗效果最大化的角度考虑,本实施方式的吸附材料优选由血液中选择性地吸附TGF-β和LAP键合型TGF-β。要说明的是,“选择性地吸附”是指含有免疫抑制性蛋白质(例如TGF-β或LAP键合型TGF-β)的液体(例如血液或血液细胞混合液)通过填充了吸附材料的柱时,通过了的液体中的免疫抑制性蛋白质的浓度比通过前减少,所吸附的蛋白质中的免疫抑制性蛋白质的存在比率比通过前增加。
“水不溶性载体”是指浸渍于常温(25℃)的水中时不发生形状变化的载体,具体地,优选为在25℃的水中浸渍1小时时的重量变化为5%以下的载体。作为水不溶性载体的材料,没有特别限定,可优选列举以聚苯乙烯为代表的聚芳香族乙烯基化合物、聚醚砜、聚砜、聚芳基醚砜、聚醚酰亚胺、聚酰亚胺、聚酰胺、聚苯硫醚等。水不溶性载体的材料可以是市售的或者通过公知的方法或以其为标准的方法制造的。这些材料是实质上不具有据称与血液接触时容易活化补体的羟基的材料。这些中,单位重量的芳香环数越多则越容易固定氨基,因此优选聚苯乙烯。这些高分子材料可以单独使用或者组合多种使用。另外,水不溶性载体优选为含有聚芳香族乙烯基化合物(例如聚苯乙烯)的高分子材料。作为水不溶性载体,从容易向聚苯乙烯部分导入用于固定氨基的活性卤素基团等的连接基团的角度考虑,和从利用聚烯烃部分得到的强度补强所产生的操作容易性和耐化学药品性的角度考虑,优选聚苯乙烯与聚烯烃的共聚物(例如聚苯乙烯与聚乙烯的共聚物或聚苯乙烯与聚丙烯的共聚物)。另外,高分子材料可以为掺混或合金化的物质,特别是,聚苯乙烯与聚烯烃的聚合物合金(例如聚苯乙烯与聚乙烯的聚合物合金或聚苯乙烯与聚丙烯的聚合物的合金)具有耐化学药品性,从容易保持物理形状的角度考虑优选。其中,血液体外循环疗法中优选具有使用实效的聚苯乙烯与聚丙烯的聚合物合金。另外,所使用的水不溶性载体优选实质上不具有氨基。
含氮化合物可以直接键合于水不溶性载体,也可以通过连接基团间接键合于水不溶性载体。将含氮化合物键合于水不溶性载体的方法没有特别限定,例如可列举利用化学方法通过连接基团共价键合于水不溶性载体表面的方法。作为连接基团,可以使用例如反应性官能团。另外,作为连接基团,优选具有酰胺键、脲键、醚键或酯键等电中性的化学键的连接基团,优选具有酰胺键或脲键。对于作为连接基团的反应性官能团,可列举例如卤代甲基、卤代乙酰基、卤代乙酰胺基甲基或卤代烷基等活性卤素基团、环氧基、羧基、异氰酸酯基、异硫氰酸酯基或酸酐基等。这些中,活性卤素基团(特别时卤代乙酰基)制造容易,反应性适度地高,氨基的固定化反应可在温和的条件下完成,所产生的共价键化学上是稳定的,因此优选。作为导入了反应性官能团的聚合物的具体例子,可列举加成了氯乙酰胺基甲基的聚苯乙烯、加成了氯乙酰胺基甲基的聚砜、加成了氯乙酰胺基甲基的聚醚酰亚胺等。要说明的是,这些聚合物具有可以溶于有机溶剂,容易成型的优点。含氮化合物的添加量的目标因连接基团的结构的不同而不同,例如相对于水不溶性载体1g为10~10000μmol。另外,含氮化合物可以过量使用。
反应性官能团可以通过预先与水不溶性载体反应而导入。例如,水不溶性载体为聚苯乙烯、反应性官能团为氯乙酰胺基甲基时,通过聚苯乙烯与N-羟甲基-α-氯乙酰胺反应可以得到加成了氯乙酰胺基甲基的聚苯乙烯。
水不溶性载体上的氨基的总量相对于吸附材料1g为超过0μmol且为2500μmol以下。氨基的总量相对于吸附材料1g例如为10μmol以上、20μmol以上、30μmol以上、40μmol以上、50μmol以上、100μmol以上、200μmol以上、300μmol以上、400μmol以上、500μmol以上或600μmol以上。另外,氨基的总量相对于吸附材料1g例如为2400μmol以下、2300μmol以下、2200μmol以下、2100μmol以下、2000μmol以下、1700μmol以下或1500μmol以下。所例示的任意下限值可以与例示的任意上限值组合。例如,氨基的总量相对于吸附材料1g例如为超过0μmol且为2400μmol以下、10μmol以上2400μmol以下(10~2400μmol)、20μmol以上2400μmol以下(20~2400μmol)、30μmol以上2400μmol以下(30~2400μmol)。水不溶性载体上完全不存在可与免疫抑制性蛋白质有效地相互作用的氨基时,吸附性能降低。另外,氨基的总量相对于吸附材料1g超过2500μmol时,吸附性能也降低。这推测是由于以下的原因。蛋白质的表面电荷分布不均匀,蛋白质部分具有正电荷、负电荷。因此,如果液体中带正电的氨基的固定化密度高,则与带正电的蛋白质表面发生静电排斥,结果蛋白质难以吸附于表面。要说明的是,该推测不对本实施方式产生限定。
水不溶性载体上的氨基的总量例如可以通过酸碱逆滴定测定氨基,以伯氨基的量、仲氨基的量、叔氨基的量和季铵基(季铵基)的量之和的形式求出。即,首先,在聚丙烯制容器中,添加吸附材料和过量的氢氧化钠水溶液,在室温下充分搅拌,对吸附材料中的加成了盐的氨基进行脱盐。接着,将吸附材料用离子交换水充分洗涤至溶液成为中性,干燥至重量变化为1%以下。接着,使干燥了的吸附材料中的氨基与含有过量酸的一定量的标准溶液反应。接着,将未与氨基反应而残留的酸的量用含有碱的标准溶液滴定。通过该方法可以求出氨基的总量(μmol)。进一步具体地,水不溶性载体上的氨基的总量可以通过下述实施例记载的方法求出。
另外,水不溶性载体上的伯氨基的量相对于吸附材料1g为450μmol以下,优选为400μmol以下,优选为350μmol以下,优选为300μmol以下,优选为250μmol以下,优选为200μmol以下。如果伯氨基相对于吸附材料1g多于450μmol,则液体中的载体的亲水性变高,载体的物理强度降低,容易产生微粒。要说明的是,上述优选的水不溶性载体上的氨基的总量与上述优选的水不溶性载体上的伯氨基的量可以任意组合。
伯氨基的量例如可通过调节水不溶性载体上的反应性官能团的键合量、含氮化合物的种类、含氮化合物的使用量来控制。反应性官能团的键合量例如可通过反应性官能团的种类或溶剂的种类、浸渍温度或浸渍时间等反应条件控制。例如,水不溶性载体含有聚芳香族乙烯基化合物时,可使用交联剂控制可键合反应性官能团的位置。另外,含氮化合物的固定量除了含氮化合物的种类、反应性官能团的键合量以外,可通过溶剂的种类、浸渍温度、浸渍时间等反应条件控制。
水不溶性载体上的伯氨基的量例如可使用在硫醇化合物存在的条件下与伯氨基特异性反应而生成荧光分子的邻苯二甲醛(以下称为OPA)对吸附材料中的伯氨基进行逆滴定而测定。即,首先,在聚丙烯制容器中配置干燥了的吸附材料。另外,在80体积%甲醇和20体积%碳酸盐pH标准液(pH 10.01)中溶解过量的OPA和硫醇化合物的二硫苏糖醇(以下称为DTT),制备混合溶液。将该混合溶液添加到配置了上述吸附材料的聚丙烯制容器中,在室温下充分搅拌。搅拌后,回收溶液,作为测定样品。另外,作为校正曲线用样品,准备含有添加为已知浓度的OPA、DTT、80体积%甲醇和20体积%碳酸盐pH标准液(pH 10.01)的混合溶液。将测定样品和校正曲线用样品与含有正丙基胺和DTT的碳酸盐pH标准液(pH 10.01)混合,得到稀释后的测定样品和稀释后的校正曲线用样品。一定时间后,对稀释后的测定样品和稀释后的校正曲线用样品用分光光度计测定340nm下的吸光度,通过将两者进行比较,可以算出水不溶性载体上的伯氨基的量(μmol)。具体而言,水不溶性载体上的伯氨基的量可通过下述实施例中记载的方法求出。
每1g吸附材料的伯氨基的量相对于氨基的总量的比率(伯氨基的量/氨基的总量)优选为0.30以下,优选为0.25以下,优选为0.20以下。
“纤维的直径”可通过以下的方法求出。首先,随机采取纤维的样品100根,使用扫描型电子显微镜以1000~3000的倍率对每1根样品分别拍摄1张截面(垂直于纤维的伸长方向的截面)的照片。接着,测定各纤维截面的直径。然后,通过算出这些值的平均值(共计100根纤维截面的直径的平均值),求出“纤维的直径”。纤维截面不是圆时,将具有与该截面积相同面积的圆的直径作为纤维的直径。
“粒子的直径”可通过以下的方法求出。首先,随机采取粒子的样品组10个,使用扫描型电子显微镜以1000~3000的倍率对每个样品组分别拍摄1张照片。接着,每张照片测定10个粒子的直径。并且,通过算出这些值的平均值(共计100个粒子的直径的平均值),求出“粒子的直径”。粒子的照片形状不是圆时,将具有与该粒子面积相同面积的圆的直径作为粒子的直径。
通过使纤维或粒子的直径为15μm以上,可以适度降低吸附材料在柱中的填充密度,结果,血小板、白血球等各种细胞难以吸附于纤维或粒子。另外,白血球中粒细胞、单核细胞具有吞噬作用,因此通过使纤维或粒子的直径为15μm以上,纤维或粒子难以被识别为异物,结果白血球变得难以吸附于纤维或粒子。纤维或粒子的直径为50μm以下时,吸附材料在柱中的填充密度适度提高,因此吸附材料的单位体积的血液接触面积增大,结果,可提高免疫抑制性蛋白质的吸附量。基于以上的理由,构成水不溶性载体的纤维或粒子的直径优选为15μm以上50μm以下(15~50μm),优选为16μm以上40μm以下(16~40μm),优选为17μm以上35μm以下(17~35μm)。任意的优选下限值可与任意的优选上限值组合。
“算术平均粗糙度”是指从粗糙度曲线沿着其平均线方向仅抽取基准长度L,由该抽取部分的平均线到测定曲线的偏差的绝对值的平均值,是指JIS B 0601-2001的算术平均粗糙度(Ra)。算术平均粗糙度例如可用形状测定激光显微镜测定。作为测定环境,优选在水不溶性载体被水润湿的状态下进行。另外,如纤维那样具有取向性时,测定长度方向的值。
水不溶性载体的表面的算术平均粗糙度为3.0μm以下时,具有吞噬作用的粒细胞、单核细胞难以将水不溶性载体的凹凸识别为异物,因此难以吸附于表面。另外,引起的血小板的附着也少。因此,可提高免疫抑制性蛋白质的吸附性能。另一方面,水不溶性载体的表面的算术平均粗糙度为0.1μm以上时,也可提高免疫抑制性蛋白质的吸附性能。关于其理由,推测是由于免疫抑制性蛋白质可与材料表面接触的面积增大。由于以上的理由,水不溶性载体(或吸附材料)的表面的算术平均粗糙度优选为0.1μm以上3.0μm以下(0.1~3.0μm),优选为0.5μm以上2.0μm以下(0.5~2.0μm)。任意的优选的下限值可与任意的优选的上限值组合。要说明的是,上述纤维或上述粒子的优选直径与上述水不溶性载体的表面的优选算术平均粗糙度可任意组合。
水不溶性载体的表面的算术平均粗糙度例如可通过将水不溶性载体浸渍于有机溶剂中控制。作为控制水不溶性载体的表面的算术平均粗糙度的方法,例如可列举将作为水不溶性载体的聚芳香族乙烯基化合物和聚丙烯混炼得到的聚合物浸渍于可溶解一部分聚芳香族乙烯基化合物、且不溶解聚丙烯的溶剂中的方法。水不溶性载体的表面的算术平均粗糙度可通过聚合物的种类、聚合物的分子量、溶剂的种类、浸渍温度、浸渍时间等控制。进一步地,对于聚芳香族乙烯基,也可采用通过导入交联剂,控制在溶剂中的可溶性等的方法。进一步地,上述的反应可与含氮化合物的导入反应同时进行。
水不溶性载体的形状例如可列举纤维、粒子或它们的高次加工品。其中,纤维从可通过高次加工确保血液流路的同时增大与血液的接触面积的方面考虑优选。其中,优选海岛型复合纤维,从确保作为材料的强度的角度考虑,优选岛为补强材料、海为水不溶性聚合物与补强材料的合金的海岛型复合纤维,进一步地,优选岛为聚丙烯、海为聚苯乙烯与聚丙烯的合金的海岛型复合纤维。
作为补强材料,没有特别限定,可列举例如聚酰胺、聚丙烯腈、聚乙烯、聚丙烯、尼龙、聚甲基丙烯酸甲酯、聚四氟乙烯等。其中,优选聚丙烯。这些聚合物可单独使用,也可组合多种使用。
另外,水不溶性载体的形状为纤维时,水不溶性载体优选为作为高次加工品的针织物。针织物可通过控制其线圈确保血液流路,因此可通过使用针织物降低血液通过纤维时的压力损失。另外,将纤维合丝而形成针织物时,合丝根数优选为10根以上100根以下,优选为30根以上80根以下。通过使合丝根数为100根以下,血液容易高效地与纤维束深部的纤维接触,因此免疫抑制性蛋白质的吸附量提高。另外,通过使合丝根数为10根以上,针织物的保持性提高。任意的优选下限值可与任意的优选上限值任意组合。
本实施方式的吸附材料可用于免疫抑制性蛋白质(特别是TGF-β或LAP键合型TGF-β)的吸附用载体,可用作吸附柱的填充剂。
另外,本实施方式中,每1g吸附材料的TGF-β或LAP键合型TGF-β的吸附量优选为7.0ng以上,优选为10.0ng以上,优选为11.0ng以上。作为吸附材料的吸附量的试验系统,可列举例如采用TGF-β溶液的分批式吸附试验,作为评价系统,可列举通过Enzyme-LinkedImmunoSorbent Assay(以下称为ELISA法)的分析。
进一步地,考虑体外循环的用途时,期望吸附材料的一部分分离而产生的微粒子少。因此,由吸附材料产生的微粒子数优选尽可能地少。如果保持吸附材料的物理强度,则由吸附材料产生的微粒子数少。另一方面,吸附材料的物理强度如果降低,则由吸附材料产生的微粒子数增多。作为研究来自吸附材料的微粒子产生的试验系统,可列举例如第十五改正日本药局方收载(2006年3月31日厚生劳动省告示第285号)的一般试验法6.07注射剂的不溶性微粒子试验法,作为评价体系,可列举测定遮光型自动微粒子测定装置中的微粒子产生数(个)的方法。
另外,考虑体外循环的用途时,期望吸附于吸附材料的血液抗凝剂的量少。一般,进行体外循环前,为了防止体外循环时溶解于血液中的血液抗凝剂吸附于吸附材料而血液在柱内凝固,使溶解了血液抗凝剂的生理食盐水通过填充了吸附材料的血液净化柱,使血液抗凝剂预先吸附于吸附材料。预先吸附于吸附材料的血液抗凝剂的量少时,可降低血液抗凝剂的使用量的同时,可降低吸附于吸附材料的血液抗凝剂在血液中过量地漏出的可能性。作为血液抗凝剂,没有特别限定,可列举肝素、柠檬酸钠、甲磺酸、氟化钠、EDTA-2K等。其中,优选肝素。作为吸附材料的血液抗凝剂的吸附率的评价方法,可列举例如使用溶解了血液抗凝剂的生理食盐水的分批式吸附试验。血液抗凝剂为肝素时,可优选使用利用比色分析法的分析,所述比色分析法采用分光光度计。即,在聚丙烯制容器中添加吸附材料和溶解了肝素的生理食盐水,在37℃的培养器中颠倒混合2小时。混合后,回收溶液,作为测定样品。另外,作为校正曲线用样品,准备已知浓度的肝素生理食盐水。对于测定样品和校正曲线用样品,用分光光度计测定210nm下的吸光度,通过将两者进行比较,可算出测定样品中的肝素浓度。吸附材料的肝素的吸附率可作为由培养前的肝素浓度减去培养后的肝素浓度得到的值除以培养前的肝素浓度得到的值的百分率算出。具体而言,吸附材料的肝素的吸附率可通过以下的实施例中记载的方法求出。
从血液抗凝剂的吸附率的角度考虑,水不溶性载体上的氨基的总量相对于1g吸附材料优选为1800μmol以下,优选为1000μmol以下,优选为700μmol以下,优选为600μmol以下,优选为500μmol以下,优选为400μmol以下,优选为300μmol以下,优选为250μmol以下,优选为150μmol以下。另外,从血液抗凝剂的吸附率的角度考虑,水不溶性载体上的伯氨基的量相对于1g吸附材料优选为400μmol以下,优选为200μmol以下,优选为100μmol以下,优选为75μmol以下,优选为50μmol以下,优选为30μmol以下。
本实施方式的吸附柱包括本实施方式的吸附材料。
“吸附柱”是指至少具有血液入口部、壳体部、血液出口部,壳体部中填充了吸附材料的柱。作为吸附柱,可列举例如径向流动型的吸附柱。如上所述,作为吸附材料的形状,优选纤维,优选针织物。
按照图2说明吸附柱内部的结构的一例。图2中,1为容器本体,其长度方向的前端和后端具有流入口2和流出口3。流入口2的内侧设有过滤器4和圆板状的分隔板5,另外,流出口3的内侧设有过滤器6和圆板状的分隔板7。2片分隔板5、7中,前侧(流入口侧)的分隔板5在中心部设有开口5a,另外,后侧的分隔板7的中心部设有支撑突起7a。另外,分隔板7的外周沿着圆周方向间隔地设有多个透孔7b。进一步地,在分隔板5的开口5a和分隔板7的支撑突起7a之间搭着1根管8。管8在内侧形成引导血液的流路9,且周围壁具有多个贯通孔10。另外,管8的前端与分隔板5的开口5a连通,另外,其后端被分隔板7的支撑突起7a封闭。该管8的外周多重地缠绕多层吸附材料11。将该吸附柱用于循环法时,流入口2和流出口3连接与血液池之间形成循环回路的管,以下述方式循环:将由该血液池取出的血液供给至流入口2,通过内部的吸附材料11除去对象吸附物质(免疫抑制性蛋白质),由流出口3流出,再次返回到血液池的方式。柱内,由流入口2经过过滤器4侵入流路9的血液在流路9中移动的同时由贯通孔10依次浸入吸附材料11,向任意的半径方向移动的同时吸附细胞等。除去了细胞等的血液由分隔板7的外周的多个透孔7b流出,经过过滤器6由流出口3流出。上述例子中,血液由开口5a在管8内的流路9中流动的同时由贯通孔10流出,但是吸附柱中的血液的移动方向与上述相反,由流出口3供给血液,由流入口2流出也可以。
为了提高免疫抑制性蛋白质的吸附效率,柱内的血液线速度也是重要的。即,血液线速度快时,免疫抑制性蛋白质有时难以与吸附材料发生充分的相互作用。另一方面,血液线速度慢时,血小板、白血球等其他血液成分非特异性地附着于吸附材料,有时抑制吸附材料与免疫抑制性蛋白质的相互作用。因此,吸附柱入口的流速为50cm3/分钟时的吸附材料内的血液线速度的最大值优选为50cm/分钟以下,优选为25cm/分钟以下。另外,吸附柱入口的流速为50cm3/分钟时的吸附材料内的血液线速度的最小值优选为0.1cm/分钟以上,优选为0.3cm/分钟以上。在此,血液线速度可通过计算求出,例如,径向流动型的吸附柱的情况下,吸附材料内的血液线速度的最大值(Vmax)由中空圆柱形状的中心管的侧面开的开口部的合计面积(Sp)和吸附柱入口的流速(50cm3/分钟)通过下式1算出。
Vmax(cm/分钟)= 50(cm3/分钟)/Sp(cm2)・・・式1
另外,最小值(Vmin)由缠绕于中心管的吸附材料的最外周面的面积(So)和吸附柱入口的流速(50cm3/分钟)通过下式2算出。
Vmin(cm/分钟)= 50(cm3/分钟)/So(cm2)・・・式2
另一方面,吸附柱为粒子、单纯重合纤维得到的圆柱形状的吸附柱时,垂直于血液流的吸附材料的截面积的最小值和最大值相同,因此上述最大值(Vmax)与上述最小值(Vmin)为相同的值。
进一步地,作为吸附柱,优选径向流动型的吸附柱,其具有:在长度方向的侧面具有为了使所供给的血液流出而设置的贯通孔的中心管;在上述中心管的周围填充有吸附材料,以与上述中心管的上游端连通以使得流入的上述血液在上述中心管中通过、防止上述血液不通过上述中心管地与吸附材料接触的方式配置的板A;以封堵上述中心管的下游端、将吸附材料固定于上述中心管周围的空间的方式配置的板B。这是为了使血液在吸附材料中均匀地流动。要说明的是,上述中心管的贯通孔的开口率低时,在该部分容易产生压力损失,因此粒细胞、单核细胞和血小板活化,这些变得容易附着于吸附材料。因此,有时免疫抑制性蛋白质的吸附性能降低。另外,开口率高时,有可能出现管的强度降低、在血液入口部附近的贯通孔发生短路等的问题。因此,优选贯通孔的开口率为20~80%,优选为30~60%。
“径向流动型”是指柱内部的血液的流动方式。血液沿垂直于柱的入口和出口的方向流动时,柱内部存在水平方向的血液流时,称为径向流动型。
“贯通孔的开口率”是指用下式3求出的值。
贯通孔的开口率(%)=在管的长度方向的侧面形成的贯通孔的面积之和/管的侧面的面积×100・・・式3
血小板的附着如上所述是免疫抑制性蛋白质的吸附量降低的原因的同时,还引起柱的堵塞,因此期望血小板尽量不附着于吸附材料。因此,吸附材料上血小板的附着率优选为80%以下,优选为70%以下,优选为65%以下。血小板的附着率例如可通过分批式试验用血球计测器评价。
本实施方式的吸附柱可用于血液净化疗法。通过将本实施方式的吸附柱用作血液净化用柱,可高效地由血液除去免疫抑制性蛋白质。例如,使血液体外循环,通过本实施方式的吸附柱,可由血液高效地除去免疫抑制性蛋白质。即,本实施方式的吸附柱可用作体外循环用柱。更具体地,本实施方式的吸附柱可用于从癌患者的血液中选择性地除去免疫抑制性蛋白质的治疗中。即,本实施方式的吸附柱可用作癌治疗用柱。
本实施方式的吸附柱可以吸附免疫抑制性蛋白质,因此适用于癌治疗。另外,可与使树突状细胞、自然杀伤细胞等活化的细胞输注治疗并用。
实施例
以下列举实施例说明本实施方式,但是本实施方式不受这些例子的限定。
1.免疫抑制性蛋白质吸附材料的制作
作为水不溶性载体,纺丝得到具有16个包含聚丙烯(株式会社プライムポリマー;J105WT)的岛成分、海成分包含聚苯乙烯(重均分子量:181,000)90重量%和聚丙烯(株式会社プライムポリマー;J105WT)10重量%、岛与海的比率(重量比)为50:50的海岛型复合纤维(直径20μm)。将得到的纤维42根合丝形成针织物(以下称为原针织物1)。要说明的是,纤维表面的粗糙度受岛数、海岛比率、聚苯乙烯、聚丙烯的分子量等的影响。
在10℃在硝基苯20mL和硫酸13.3mL的混合溶液中溶解多聚甲醛(以下称为PFA)2g(以下称为PFA溶液)。进一步,在硝基苯259.3mL和硫酸169.3mL的混合溶液中在10℃溶解46.9g的N-羟甲基-α-氯乙酰胺(以下称为NMCA溶液)。将10g原针织物1溶解于PFA溶液后,迅速添加NMCA溶液,并搅拌。在搅拌下浸渍2小时后,取出针织物,用过量的硝基苯洗涤后,用甲醇置换・洗涤,进一步水洗,得到α-氯乙酰胺基甲基化了的针织物(以下称为中间体1)。由PFA溶液的制作到采用甲醇的针织物的洗涤的一系列操作在15℃以下实施。
(1) 免疫抑制性蛋白质吸附材料1-1的制作
在将二亚乙基三胺(46μL)和三乙基胺(28.6mL)溶解于二甲基亚砜(398mL)得到的溶液中浸渍中间体1(10g),在40℃搅拌3小时。然后,将用二亚乙基三胺处理了的中间体1水洗,干燥,得到免疫抑制性蛋白质吸附材料1-1。
(2)免疫抑制性蛋白质吸附材料1-2的制作
与免疫抑制性蛋白质吸附材料1-1同样地得到免疫抑制性蛋白质吸附材料1-2。
(3)免疫抑制性蛋白质吸附材料2-1的制作
除了使二亚乙基三胺的量为232μL以外,与免疫抑制性蛋白质吸附材料1-1同样地得到免疫抑制性蛋白质吸附材料2-1。
(4)免疫抑制性蛋白质吸附材料2-2的制作
与免疫抑制性蛋白质吸附材料2-1同样地得到免疫抑制性蛋白质吸附材料2-2。
(5)免疫抑制性蛋白质吸附材料3的制作
除了使二亚乙基三胺的量为464μL以外,与免疫抑制性蛋白质吸附材料1-1同样地得到免疫抑制性蛋白质吸附材料3。
(6)免疫抑制性蛋白质吸附材料4-1的制作
除了使二亚乙基三胺的量为929μL以外,与免疫抑制性蛋白质吸附材料1-1同样地得到免疫抑制性蛋白质吸附材料4-1。
(7)免疫抑制性蛋白质吸附材料4-2的制作
与免疫抑制性蛋白质吸附材料4-1同样地得到免疫抑制性蛋白质吸附材料4-2。
(8)免疫抑制性蛋白质吸附材料5的制作
使用乙二胺(929μL)代替二亚乙基三胺(46μL),除此以外,与免疫抑制性蛋白质吸附材料1-1同样地得到免疫抑制性蛋白质吸附材料5。
(9)免疫抑制性蛋白质吸附材料6的制作
使用四亚乙基五胺(1863μL)代替二亚乙基三胺(46μL),除此以外与免疫抑制性蛋白质吸附材料1-1同样地得到免疫抑制性蛋白质吸附材料6。
(10)免疫抑制性蛋白质吸附材料7-1的制作
除了使二亚乙基三胺的量为1863μL以外,与免疫抑制性蛋白质吸附材料1-1同样地得到免疫抑制性蛋白质吸附材料7-1。
(11)免疫抑制性蛋白质吸附材料7-2的制作
与免疫抑制性蛋白质吸附材料7-1同样地得到免疫抑制性蛋白质吸附材料7-2。
(12)免疫抑制性蛋白质吸附材料8-1的制作
除了使二亚乙基三胺的量为4687μL以外,与免疫抑制性蛋白质吸附材料1-1同样地得到免疫抑制性蛋白质吸附材料8-1。
(13)免疫抑制性蛋白质吸附材料8-2的制作
与免疫抑制性蛋白质吸附材料8-1同样地得到免疫抑制性蛋白质吸附材料8-2。
(14)免疫抑制性蛋白质吸附材料9的制作
除了使二亚乙基三胺的量为9479μL以外,与免疫抑制性蛋白质吸附材料1-1同样地得到免疫抑制性蛋白质吸附材料9。
(15)免疫抑制性蛋白质吸附材料10的制作
使用四亚乙基五胺(4687μL)代替二亚乙基三胺(46μL),除此以外,与免疫抑制性蛋白质吸附材料1-1同样地得到免疫抑制性蛋白质吸附材料10。
(16)免疫抑制性蛋白质吸附材料11的制作
除了使二亚乙基三胺的量为19388μL以外,与免疫抑制性蛋白质吸附材料1-1同样地得到免疫抑制性蛋白质吸附材料11。
(17)免疫抑制性蛋白质吸附材料12的制作
除了使二亚乙基三胺的量为32964μL以外,与免疫抑制性蛋白质吸附材料1-1同样地得到免疫抑制性蛋白质吸附材料12。
(18)免疫抑制性蛋白质吸附材料13的制作
在将数均分子量为约600的聚乙烯亚胺(8195μL)和三乙基胺(28.6mL)溶解于二甲基亚砜(398mL)中得到的溶液中浸渍10g中间体1,在40℃搅拌3小时。然后,将用聚乙烯亚胺处理了的中间体1水洗、干燥,得到免疫抑制性蛋白质吸附材料13。
(19)免疫抑制性蛋白质吸附材料14的制作
在将数均分子量为约750000的聚乙烯亚胺50重量%水溶液(16390μL)和三乙基胺(28.6mL)溶解在二甲基亚砜(398mL)得到的溶液中浸渍10g中间体1,在40℃搅拌3小时。然后,将用聚乙烯亚胺处理了的中间体1水洗、干燥,得到免疫抑制性蛋白质吸附材料14。
(20)免疫抑制性蛋白质吸附材料15的制作
在将数均分子量为约65000的聚烯丙基胺的20重量%水溶液(2876μL)和三乙基胺(28.6mL)溶解于二甲基亚砜(398mL)得到的溶液中浸渍10g中间体1,在40℃搅拌3小时。然后,将用聚烯丙基胺处理了的中间体1水洗、干燥,得到免疫抑制性蛋白质吸附材料15。
2.吸附材料所具有的氨基的总量的测定
对于所制作的吸附材料等,通过酸碱逆滴定测定水不溶性载体上的氨基的总量。在聚丙烯制容器中添加吸附材料(1.0g)和6M氢氧化钠水溶液(50mL),在室温搅拌1小时。接着在含有离子交换水(50mL)的其他聚丙烯制容器中添加上述吸附材料,在室温搅拌30分钟(洗涤)。反复洗涤直到添加了吸附材料的离子交换水的pH为7,由此得到进行了脱盐处理的吸附材料。将脱盐后的吸附材料在25℃的减压下静置48小时进行干燥。测定干燥后的吸附材料的重量,在新的聚丙烯制容器中加入该吸附材料和0.1M的盐酸40mL,在室温搅拌30分钟。搅拌后,仅取出溶液5mL转移至新的聚丙烯制容器中。接着,在得到的溶液中滴加0.1M的氢氧化钠水溶液0.1mL。滴加后搅拌10分钟,测定溶液的pH。氢氧化钠的滴加、10分钟的搅拌和pH测定同样地反复100次。将溶液的pH超过8.5时的氢氧化钠水溶液的滴加量作为滴定量。使用每1g吸附材料的滴定量和以下的式4算出每1g吸附材料的氨基的总量。
每1g吸附材料的氨基的总量(μmol)={添加的0.1M盐酸的液量(40mL)/抽取的盐酸的液量(5mL)}×滴定量(mL)÷干燥后的吸附材料的重量(g)×氢氧化钠水溶液浓度(0.1M)・・・式4。
3.吸附材料所具有的伯氨基的量的测定
水不溶性载体上的伯氨基的量利用与伯氨基特异性反应而生成荧光物质的邻苯二甲醛(以下称为OPA)进行测定。首先,将吸附材料用冲床冲裁成任意张数的直径6mm的圆形,在25℃的减压下静置48小时进行干燥。接着,测定干燥后的吸附材料的重量,在聚丙烯制容器中配置该吸附材料。另外,在80体积%甲醇和20体积%碳酸盐pH标准液(pH 10.01)中溶解OPA和DTT,使其浓度分别为1.5mM和5mM,制备混合溶液。将该混合溶液添加至配置了上述吸附材料的聚丙烯制容器中,在室温搅拌3小时。搅拌后,回收100μL的溶液,作为测定样品。作为校正曲线用样品,准备含有OPA(调整浓度分别为0mM、0.375mM、0.75mM、1.5mM)、5mM的DTT、80体积%甲醇和20体积%碳酸盐pH标准液(pH 10.01)的混合溶液。将测定样品100μL和校正曲线用样品100μL分别与含有6.1mM的正丙基胺和5mM的DTT的碳酸盐pH标准液(pH 10.01)1mL混合,得到稀释后的测定样品和稀释后的校正曲线用样品。90秒后,对稀释后的测定样品和稀释后的校正曲线用样品,用分光光度计测定340nm下的吸光度。由校正曲线求出稀释后的测定样品的OPA浓度,乘以希釈倍率换算为稀释前的测定样品的OPA浓度(以下称为样品的OPA浓度)。
使用以下的式5,算出每1g吸附材料的伯氨基的量。
每1g吸附材料的伯氨基的量(μmol)={添加的OPA浓度(1.5mM)-样品的OPA浓度}×与吸附材料搅拌反应的混合溶液的量(mL)/干燥后的吸附材料的重量(g)・・・式5
4.LAP键合型TGF-β1吸附性能试验
通过ELISA法对免疫抑制性蛋白质吸附材料中吸附反应前后的溶液中的LAP键合型TGF-β1浓度进行定量,按照以下的式6算出每1g材料的LAP键合型TGF-β1吸附量。即,将裁切成直径6mm的圆板状的免疫抑制性蛋白质吸附材料4张加入容量2mL的聚丙烯制容器中。向该容器中添加牛血清白蛋白3.5重量%、和将重组人LAP键合型TGF-β1(R&Dシステムズ公司)的浓度调节为25ng/mL的磷酸缓冲生理食盐水1.1mL,在37℃的培养器内颠倒混合2小时。由容器去除吸附纤维载体后,使用Quantikine Human LAP(TGF-β1) ELISA Kit(R&Dシステムズ社)测定溶液中的LAP键合型TGF-β1的残留浓度。另外,将裁切为直径6mm的圆板状的免疫抑制性蛋白质吸附材料4张在25℃的减压下静置48小时进行干燥。测定干燥后的水免疫抑制性蛋白质吸附材料4张的重量。按照以下的式6算出LAP键合型TGF-β1吸附量。
每1g吸附材料的LAP键合型TGF-β1吸附量={(培养前的LAP键合型TGF-β1浓度)-(培养后的LAP键合型TGF-β1浓度)}/(培养前的LAP键合型TGF-β1浓度)×磷酸缓冲生理食盐水量1.1mL÷(裁切为直径6mm的圆板状的吸附材料4张的干燥重量)・・・式6。
5.具有蛋白质吸附材料作为吸附载体的柱的制作
在每根聚丙烯-聚乙烯共聚物制径向流动型柱(直径:25mm×长度:133mm、吸附纤维填充部体积:14.7cm3)中填充原针织物1或免疫抑制性蛋白质吸附材料1-1、2-1、3、4-1、5、6、7-1、8-1、9~15各4g。然后,用生理食盐液充满柱内后,进行高压蒸汽灭菌,分别得到具有原针织物1作为吸附载体的柱(以下称为“原针织物1柱”)、和具有免疫抑制性蛋白质吸附材料1-1、2-1、3、4-1、5、6、7-1、8-1、9~15作为吸附载体的柱(以下称为“柱1~15”)。
6.不溶性微粒子数测定
参考第十五改正日本药局方收载(2006年3月31日厚生劳动省告示第285号)的一般试验法6.07注射剂的不溶性微粒子试验法(第1法:光遮蔽粒子计数法;pp.1-2)实施。参考包装货物和容器的振动试验方法(JIS Z 0232),将柱在水平和垂直方向各振动1小时。将振动后的柱与市售的人工肾脏用血液回路连接,使用生理食盐液2L以每分钟100mL的流速洗涤。要说明的是,所使用的生理食盐液用孔径0.3μm的过滤器过滤,确认10μm以上的微粒子为0.5个/mL以下且25μm以上的微粒子为0.2个/mL以下。将过滤的生理食盐液用泵以每分钟50mL的流速送入本品1小时,每20分钟采取1L该流出液,共计采取3次(共计3L)。将所得到的流出液向遮光型自动微粒子测定装置供给分别各300mL,测定微粒子,算出送液1小时时的微粒子数(个/mL)。
(实施例1~10)
对免疫抑制性蛋白质吸附材料1-1、2-1、3、4-1、5、6、7-1、8-1、9、10进行氨基的总量的测定、伯氨基的量的测定和LAP键合型TGF-β1吸附性能试验。另外,使用柱1~10,测定不溶性微粒子数。结果示于表1。
免疫抑制性蛋白质吸附材料1-1、2-1、3、4-1、5、6、7-1、8-1、9、10的不溶性微粒子的产生量少,且确认可有效吸附LAP键合型TGF-β1。
(比较例1)
对于原针织物1柱(原针织物1),进行氨基的总量的测定、伯氨基的量的测定和LAP键合型TGF-β1吸附性能试验。另外,使用原针织物1柱,测定不溶性微粒子数。结果示于表2。
原针织物1柱(原针织物1)中不溶性微粒子的产生量少,但是不能有效吸附LAP键合型TGF-β1。
(比较例2~6)
对于免疫抑制性蛋白质吸附材料11~15,进行氨基的总量的测定、伯氨基的量的测定和LAP键合型TGF-β1吸附性能试验。另外,使用柱11~15,测定不溶性微粒子数。结果示于表2。
免疫抑制性蛋白质吸附材料11(比较例2)中,不溶性微粒子的产生量少,但不能有效吸附LAP键合型TGF-β1。
免疫抑制性蛋白质吸附材料12(比较例3)中产生大量不溶性微粒子,不能有效吸附LAP键合型TGF-β1。
免疫抑制性蛋白质吸附材料13~15(比较例4~6)可有效吸附LAP键合型TGF-β1,但是产生大量不溶性微粒子。
后述表中使用以下的简称。
EDA:乙二胺
DETA:二亚乙基三胺
TEPA:四亚乙基五胺
PEI600:数均分子量为约600的聚乙烯亚胺
PEI750K:数均分子量为约750000的聚乙烯亚胺
PAA:数均分子量为约65000聚烯丙基胺。
【表1】
【表2】
7.表面的算术平均粗糙度的测定
使用形状测定激光显微镜(キーエンス公司制;彩色3D激光显微镜 VK-9700),以100倍的倍率在用水润湿使其不干燥的状态下观察吸附材料的表面,测定表面的算术平均粗糙度(按照JIS B 0601-2001)。使基准长度L为50μm,将在位置不同的10处测定的值的平均值作为表面的算术平均粗糙度的值。
8.血小板的附着试验
进行使用人血液的分批式试验,通过血球计测仪分析・算出吸附材料上的血小板的附着性。即,将裁切为直径10mm的圆板状的吸附材料5片放入聚丙烯制的容器中。在该容器中添加由健康人采取的血液3.07mL,在37℃的培养器内颠倒混合1小时。由容器去除吸附材料后,通过血球计测仪算出残留的血液中含有的血小板数(以下称为添加了免疫抑制性蛋白质吸附材料的血液的血小板数)。对未添加吸附材料的血液进行同样的操作(以下称为未添加免疫抑制性蛋白质吸附材料的血液的血小板数)。使用以上的值通过下式7算出血小板的附着率。
血小板的附着率(%)=(未添加免疫抑制性蛋白质吸附材料的血液的血小板数-添加了免疫抑制性蛋白质吸附材料的血液的血小板数)/未添加免疫抑制性蛋白质吸附材料的血液的血小板数×100・・・式7
(实施例11)
对免疫抑制性蛋白质吸附材料4-1,进行表面的算术平均粗糙度的测定和血小板附着试验。结果示于表3。在免疫抑制性蛋白质吸附材料4-1中,血小板的附着率低。
【表3】
9.血液抗凝剂吸附试验
通过使用分光光度计的比色分析法对免疫抑制性蛋白质吸附材料中吸附反应前后的溶液中的肝素浓度进行定量,按照以下的式8算出吸附材料的肝素吸附率。即,将裁切为直径10mm的圆板状的免疫抑制性蛋白质吸附材料4片放入容量2mL的聚丙烯制容器中。另外,准备未加入免疫抑制性蛋白质吸附材料的容量2mL的聚丙烯制的容器。在加入了吸附材料的容器和未加入吸附材料的容器中分别添加将肝素钠(エイワイファーマ公司)的浓度调节为50单位/mL的生理食盐水1.4mL,在37℃的培养器内颠倒混合2小时。颠倒混合后,回收1mL的溶液,作为测定样品(分别为加入了吸附材料的样品、未加入吸附材料的样品)。作为校正曲线用样品,准备浓度分别调节为0单位/mL、0.3125单位/mL、0.625单位/mL、1.25单位/mL、2.5单位/mL的生理食盐水。将各测定样品50μL与生理食盐水0.95mL混合,分别得到稀释后的测定样品。对稀释后的各测定样品和校正曲线用样品,用分光光度计测定210nm下的吸光度。由校正曲线求出稀释后的测定样品的肝素浓度,乘以稀释倍率,换算为稀释前的测定样品的肝素浓度(以下分别称为加入了吸附材料的样品的肝素浓度、未加入吸附材料的样品的肝素浓度)。按照以下的式8算出肝素吸附率。
吸附材料的肝素吸附率(%)={(未加入吸附材料的样品的肝素浓度)-(加入了吸附材料的样品的肝素浓度)}/(未加入吸附材料的样品的肝素浓度)×100・・・式8
(实施例12~16)
对免疫抑制性蛋白质吸附材料1-2、2-2、4-2、7-2、8-2进行血液抗凝剂吸附试验。结果示于表4。
免疫抑制性蛋白质吸附材料1-2、2-2、4-2、7-2、8-2(实施例12~16)中氨基的总量少者肝素的吸附率低。
【表4】
未测定实施例13、15和16的伯氨基的量,这些实施例中使用的吸附材料2-2、7-2和8-2是通过与上述吸附材料2-1、7-1和8-1同样的工艺制作的,因此推测实施例13、15和16中的伯氨基的量均为450μmol以下。
产业实用性
本实施方式的吸附材料和吸附柱可高效地吸附免疫抑制性蛋白质。因此,期待适用于癌治疗。另外,本实施方式的吸附材料和吸附柱可与使树突状细胞、自然杀伤细胞等活化的细胞输注治疗并用。
符号说明
1 容器本体
2 流入口
3 流出口
4 过滤器
5 分隔板
5a 分隔板的开口
6 过滤器
7 分隔板
7a 分隔板的支撑突起
7b 分隔板的透孔
8 管
9 流路
10 贯通孔
11 吸附材料
Q 血液流
Claims (9)
1.免疫抑制性蛋白质的吸附材料,其包含水不溶性载体,所述水不溶性载体键合有选自以下的式(1)表示的多胺、以下的式(2)表示的脂肪族伯胺和式(3)表示的脂肪族仲胺中的1种以上含氮化合物,
前述水不溶性载体上的氨基的总量为超过0μmol/g且为2500μmol/g以下,而且,前述水不溶性载体上的伯氨基的量为450μmol/g以下,
R1R2N-X-NR3R4 ・・・式(1)
式(1)中,X为具有2~20个碳原子的饱和或不饱和的脂肪族烃基、或具有3~20个碳原子的饱和或不饱和的脂肪族烃基中1~5个碳原子被氮原子替代得到的含有杂原子的碳链,键合于该氮原子的氢原子可以被烷基替代,所述烷基可以具有氨基,R1~R4各自独立地为氢原子或烷基,
NH2R5 ・・・式(2)
式(2)中,R5为具有1~12个碳原子的饱和或不饱和的脂肪族烃基,
NHR6R7 ・・・式(3)
式(3)中,R6和R7各自独立地为具有1~12个碳原子的饱和或不饱和的脂肪族烃基。
2.根据权利要求1所述的吸附材料,其中,前述含氮化合物含有前述式(1)表示的多胺。
3.根据权利要求1或2所述的吸附材料,其中,前述含氮化合物通过连接基团键合于前述水不溶性载体。
4.根据权利要求1~3中任一项所述的吸附材料,其中,前述氨基的总量为30~2400μmol/g。
5.根据权利要求4所述的吸附材料,其中,前述伯氨基的量相对于前述氨基的总量的比率(伯氨基的量/氨基的总量)为0.30以下。
6.根据权利要求1~5中任一项所述的吸附材料,其中,
前述水不溶性载体为纤维形状或粒子形状,
前述纤维或前述粒子的直径为15~50μm,
前述水不溶性载体的表面的算术平均粗糙度为0.1~3.0μm。
7.根据权利要求1~6中任一项所述的吸附材料,其中,前述免疫抑制性蛋白质为TGF-β或LAP键合型TGF-β。
8.吸附柱,其具有权利要求1~7中任一项所述的吸附材料。
9.根据权利要求8所述的吸附柱,其用于血液净化疗法。
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Families Citing this family (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2021066152A1 (ja) * | 2019-10-04 | 2021-04-08 | 東レ株式会社 | 血液処理材料 |
WO2023008489A1 (ja) * | 2021-07-29 | 2023-02-02 | ジャパン・ヘモテック株式会社 | 不織布基材、液体浄化用繊維材料、当該材料の製造方法および当該材料を備える洗浄器 |
JPWO2023008489A1 (zh) * | 2021-07-29 | 2023-02-02 | ||
WO2023074729A1 (ja) * | 2021-11-01 | 2023-05-04 | 東レ株式会社 | 細胞吸着材料、及び細胞吸着カラム |
Citations (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1053046A (zh) * | 1989-12-07 | 1991-07-17 | 黛丝化学工业株式会社 | 分离方法和分离剂 |
US20010021525A1 (en) * | 2000-02-14 | 2001-09-13 | Kaneka Corporation | Adsorbent for transforming growth factor-beta, method for removing the transforming growth factor-beta by adsorption and adsorber packed with the adsorbent |
JP2007202634A (ja) * | 2006-01-31 | 2007-08-16 | Toray Ind Inc | 吸着器 |
CN101151056A (zh) * | 2005-03-31 | 2008-03-26 | 东丽株式会社 | 吸附材料和体外循环柱 |
CN101522232A (zh) * | 2006-09-29 | 2009-09-02 | 东丽株式会社 | 细胞吸附柱 |
CN103167886A (zh) * | 2010-10-27 | 2013-06-19 | 东丽株式会社 | 血液成分吸附用载体和血液成分吸附柱 |
US20140017667A1 (en) * | 2011-03-29 | 2014-01-16 | Shiga University Of Medical Science | Immunosuppressive Cell-Capturing Material and Immunosuppressive Cell-Capturing Column |
JP2015074853A (ja) * | 2013-10-10 | 2015-04-20 | 東レ株式会社 | 海島複合繊維 |
Family Cites Families (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2003101511A (ja) | 2001-09-26 | 2003-04-04 | Yrp Mobile Telecommunications Key Tech Res Lab Co Ltd | マルチキャリアスペクトル拡散通信装置及びマルチキャリアスペクトル拡散通信システム |
JP4200689B2 (ja) | 2002-05-30 | 2008-12-24 | 東レ株式会社 | 癌治療用体外循環カラム |
KR100978169B1 (ko) | 2002-05-30 | 2010-08-25 | 도레이 카부시키가이샤 | 면역 억제 물질 흡착재, 체외 순환 컬럼 및 암의 치료방법 |
JP2006272075A (ja) | 2005-03-28 | 2006-10-12 | Toray Ind Inc | 吸着材料 |
JP2006288571A (ja) * | 2005-04-08 | 2006-10-26 | Toray Ind Inc | 癌治療用吸着材および体外循環カラム |
JP4957886B2 (ja) * | 2006-06-30 | 2012-06-20 | 東レ株式会社 | 免疫活性化能を有するカラム |
JP2009095436A (ja) * | 2007-10-16 | 2009-05-07 | Toray Ind Inc | 血液製剤浄化用材料および該材料を用いた浄化方法および浄化物 |
JP2011139806A (ja) | 2010-01-07 | 2011-07-21 | Pharmit Co Ltd | 生物由来塩基性物質およびその誘導体を利用した体液浄化装置 |
JP5824873B2 (ja) * | 2010-05-28 | 2015-12-02 | 東レ株式会社 | ハイモビリティーグループタンパク吸着担体 |
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Patent Citations (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1053046A (zh) * | 1989-12-07 | 1991-07-17 | 黛丝化学工业株式会社 | 分离方法和分离剂 |
US20010021525A1 (en) * | 2000-02-14 | 2001-09-13 | Kaneka Corporation | Adsorbent for transforming growth factor-beta, method for removing the transforming growth factor-beta by adsorption and adsorber packed with the adsorbent |
CN101151056A (zh) * | 2005-03-31 | 2008-03-26 | 东丽株式会社 | 吸附材料和体外循环柱 |
JP2007202634A (ja) * | 2006-01-31 | 2007-08-16 | Toray Ind Inc | 吸着器 |
CN101522232A (zh) * | 2006-09-29 | 2009-09-02 | 东丽株式会社 | 细胞吸附柱 |
CN103167886A (zh) * | 2010-10-27 | 2013-06-19 | 东丽株式会社 | 血液成分吸附用载体和血液成分吸附柱 |
US20140017667A1 (en) * | 2011-03-29 | 2014-01-16 | Shiga University Of Medical Science | Immunosuppressive Cell-Capturing Material and Immunosuppressive Cell-Capturing Column |
JP2015074853A (ja) * | 2013-10-10 | 2015-04-20 | 東レ株式会社 | 海島複合繊維 |
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