CN111032870A - 用于口腔护理应用的适配体 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种适配体组合物，其具有一种或多种寡核苷酸，所述寡核苷酸包括脱氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、脱氧核糖核苷酸的衍生物、核糖核苷酸的衍生物、或它们的混合物中的至少一种。所述适配体组合物具有对牙齿、牙釉质、牙本质、碳酸化缺钙羟基磷灰石、或它们的混合物中的至少一种材料的结合亲和力。

Description

用于口腔护理应用的适配体

技术领域

本发明一般涉及对牙齿具有高结合亲和力和特异性的核酸适配体。本发明还涉及此类适配体作为活性成分递送载体至口腔的用途。

背景技术

适配体是特异性且复杂的三维形状的短单链寡核苷酸，其结合至靶标分子。适配体的分子识别基于结构相容性和分子间相互作用，包括芳环与靶标物质的静电力、范德华相互作用、氢键合和π-π堆积相互作用。适配体的靶标包括但不限于肽、蛋白质、核苷酸、氨基酸、抗生素、低分子量有机或无机化合物、甚至全细胞。适配体的解离常数通常在微摩尔水平和皮摩尔水平之间变化，这与抗体对它们的抗原的亲和力相当。适配体也可被设计成具有高特异性，使得能够区分靶标分子与密切相关的衍生物。

通常通过指数富集的配体系统进化技术(SELEX)从随机核酸的大文库中体外设计适配体。当针对低分子量染料选择单链RNA时，在1990年首次引入了SELEX方法(Ellington,A.D.,Szostak,J.W.,1990.Nature 346:818- 822)。几年后，还描述了单链DNA适配体和包含化学修饰的核苷酸的适配体(Ellington,A.D.,Szostak,J.W.,1992.Nature 355:850-852；Green,L.S.等人, 1995.Chem.Biol.2:683–695)。自那时起，已选择用于数百个微观靶标诸如阳离子、小分子、蛋白质、细胞或组织的适配体。来自文献的实例汇编包括在以下网站的数据库中：http://www.aptagen.com/aptamer-index/aptamer- list.aspx。然而，仍然需要选择性结合到口腔中的表面(包括牙齿)的适配体。

发明内容

在本发明中，我们已证明了SELEX在针对牙齿选择适配体中的用途以及使用此类适配体将活性成分递送至口腔的用途。

在本发明的某些实施方案中，提供了适配体组合物。所述适配体组合物包含至少一种寡核苷酸，所述寡核苷酸可包括：脱氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、脱氧核糖核苷酸的衍生物、核糖核苷酸的衍生物、或它们的混合物；其中所述适配体组合物具有对选自牙齿、牙釉质、牙本质、碳酸化缺钙羟基磷灰石、或它们的混合物中的材料的结合亲和力。

在本发明的另一个实施方案中，提供了适配体组合物。所述适配体组合物包括至少一种寡核苷酸，所述寡核苷酸包含SEQ ID NO 1、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO 25、SEQ ID NO112、SEQ ID NO 120、SEQ ID NO 136、或 SEQ ID NO 223至SEQ ID NO 234。

在本发明的另一个实施方案中，适配体组合物包括至少一种具有一个或多个基序的寡核苷酸，所述基序包含SEQ ID NO 235、SEQ ID NO 236、 SEQ ID NO 237、SEQ ID NO238、SEQ ID NO 239、SEQ ID NO 240、SEQ ID NO 241、SEQ ID NO 242、SEQ ID NO 243或SEQ ID NO 244。

在本发明的另一个实施方案中，提供了口腔护理组合物。所述口腔护理组合物包含至少一种核酸适配体；其中所述至少一种核酸适配体具有对口腔部分的结合亲和力。在本发明的另一个实施方案中，所述口腔部分包含以下中的至少一种：牙齿、牙釉质、牙本质或口腔中的任何其他表面。在仍另一个实施方案中，所述口腔部分是牙齿。

在本发明的另一个实施方案中，提供了向口腔递送一种或多种口腔护理活性成分的方法。所述方法包括施用包含至少一种核酸适配体和一种或多种口腔护理活性成分的口腔护理组合物；其中所述至少一种核酸适配体和所述一种或多种口腔护理活性成分是共价或非共价附接的；并且其中所述至少一种核酸适配体具有对口腔部分的结合亲和力。

在本发明的另一个实施方案中，提供了向口腔递送一种或多种口腔护理活性成分的方法。所述方法包括施用口腔护理组合物，所述组合物包含：至少一种核酸适配体和一种或多种纳米材料；其中所述至少一种核酸适配体和所述一种或多种纳米材料是共价或非共价附接的；并且其中所述至少一种核酸适配体具有对口腔部分的结合亲和力。

附图说明

为了更全面地理解本公开，应当参考以下发明详述和附图。

图1示出了实验A在不同选择轮的拷贝数方面的前二十个序列的富集轨迹。

图2示出了实验B在不同选择轮的拷贝数方面的前二十个序列的富集轨迹。

图3A示出了阴性对照。

图3B示出了鉴定为“OC1R-B1”的适配体与牙齿的结合。

图3C示出了鉴定为“OC1R-B9”的适配体与牙齿的结合。

图3D示出了鉴定为“OC1R-B25/OC1R-A9”的适配体与牙齿的结合。

图4例证了通过聚群(Ward.D2方法)对实验B的拷贝数方面的前100个序列的富集轨迹排序的相关性矩阵。

图5例证了适配体OC1R-B1的随机区的基序分析的结果。

图6例证了适配体OC1R-B1的预测二级结构及其保守基序。

图7例证了适配体OC1R-B9的随机区的基序分析的结果。

图8例证了适配体OC1R-B9的预测二级结构及其保守基序。

图9例证了适配体OC1R-A9的随机区的基序分析的结果。

图10例证了适配体OC1R-A9的预测二级结构及其保守基序。

图11例证了适配体OC1D-A9的预测二级结构。

图12例证了在选择过程中鉴定的具有至少90％的核苷酸序列同一性的示例性序列的比对。

图13例证了在选择过程中鉴定的具有至少70％的核苷酸序列同一性的示例性序列的比对。

图14例证了在选择过程中鉴定的具有至少50％的核苷酸序列同一性的示例性序列的比对。

图15例证了结合到牙齿上的DNA适配体的量。

图16例证了在每次洗涤后结合到牙齿上的DNA适配体的量。

图17例证了结合的(剩余的)、洗涤的(洗脱的)和未从牙齿回收的(损失的)DNA适配体总量。

图18A例证了适配体OC1D-B1的预测二级结构。

图18B例证了适配体OC1D-B1.1的预测二级结构。

图18C例证了适配体OC1D-B1.2的预测二级结构。

图18D例证了适配体OC1D-B1.3的预测二级结构。

图19A例证了适配体OC1D-B9的预测二级结构。

图19B例证了适配体OC1D-B9.1的预测二级结构。

图19C例证了适配体OC1D-B9.2的预测二级结构。

图20A例证了适配体OC1D-A9的预测二级结构。

图20B例证了适配体OC1D-A9.1的预测二级结构。

图21A-C例证了截短的DNA适配体与牙齿的结合。

具体实施方式

本发明包括口腔护理组合物，所述组合物包含一种或多种适配体，其中所述适配体被设计成结合到口腔内的特定靶标，诸如牙齿表面或粘膜组织。口腔护理活性物质可结合到适配体，从而允许所述活性物质被递送至特定口腔靶标，从而获得更高的效率和影响。

定义

如本文所用，术语“适配体”是指对特定靶标具有结合亲和力的单链寡核苷酸或肽。

如本文所用，术语“核酸”是指核苷酸的聚合物或低聚物。当核苷酸的糖部分是D-核糖时，核酸也被称为“核糖核酸”，当糖部分为2-脱氧-D- 核糖时，核酸也被称为“脱氧核糖核酸”。

如本文所用，术语“核苷酸”通常是指由下述核苷组成的化合物，所述核苷通过糖部分的5-碳上的羟基酯化成单磷酸酯、多磷酸酯或磷酸酯衍生物基团。当糖部分是D-核糖时，核苷酸也被称为“核糖核苷酸”，当糖部分为2-脱氧-D-核糖时，核苷酸也被称为“脱氧核糖核苷酸”。

如本文所用，术语“核苷”是指由核酸碱基诸如嘌呤或嘧啶组成的糖胺，其通常通过β-糖苷键连接至5-碳糖(例如，D-核糖或2-脱氧-D-核糖)。当糖部分是D-核糖时，核苷也被称为“核糖核苷”，当糖部分为2-脱氧-D- 核糖时，核苷也被称为“脱氧核糖核苷”。

如本文所用，术语“核酸碱基”是指具有碱基的化学性质的包含氮原子的化合物。核酸碱基的非限制性示例是包含吡啶、嘌呤或嘧啶部分的化合物，包括但不限于腺嘌呤、鸟嘌呤、次黄嘌呤、胸腺嘧啶、胞嘧啶和尿嘧啶。

如本文所用，术语“寡核苷酸”是指由核苷酸组成的低聚物。

如本文所用，涉及两个或更多个寡核苷酸、核酸或适配体的术语“相同的”或“序列同一性”是指，当比较和比对最大匹配时，如使用序列比较算法或通过目视检测所测量的，两个或更多个序列是相同的或具有指定百分比的相同核苷酸。

如本文所用，涉及两个或更多个寡核苷酸、核酸或适配体的“基本上同源的”或“基本上相同的”一般是指，当比较和比对最大匹配时，如使用序列比较算法或目视检测所测量的，两个或更多个序列或亚序列具有至少40％、60％、80％、90％、95％、96％、97％、98％或99％的核苷酸同一性。

如本文所用，术语“表位”是指靶标的与适配体相互作用的区域。表位可为靶标内的连续延伸，或可以靶标的折叠形式由在物理上邻近的多个点表示。

如本文所用，术语“基序”是指存在于具有与特定靶标(例如，牙齿)的结合亲和力的适配体库中的连续的或一系列连续的核苷酸序列，并且与随机寡核苷酸库相比表现出比预期的统计学显著更高的发生概率。基序序列通常是适配体选择过程的结果或驱动因素。

如本文所用，术语“结合亲和力”可使用以下等式计算：结合亲和力＝结合至一颗或多颗牙齿的适配体的量/与一颗或多颗牙齿一起温育的适配体总量。

如本文所用，所谓“口腔护理组合物”是指在普通使用过程中不是被故意吞咽以用于治疗剂的系统给药的目的，而是在口腔中保留足够长的时间以接触牙齿表面或口腔组织的产品。口腔护理组合物的示例包括牙粉、牙胶、龈下凝胶、漱口水、摩丝、泡沫、口喷剂、锭剂、咀嚼片、口香糖、牙齿美白条、牙线和牙线涂层、口气清新可溶性条、或者义齿护理或粘合剂产品。口腔护理组合物还可掺入条或膜上以用于直接施用或附接到口腔表面。

除非另外指明，否则如本文所用，术语“牙粉”包括牙齿或龈下糊剂、凝胶、或液体制剂。洁齿剂组合物可以是单相组合物，或可以是两种或更多种单独洁齿剂组合物的组合。洁齿剂组合物可呈任何期望的形式，如深条纹的、浅条纹的、多层的、糊剂周围有凝胶的、或它们的任意组合。在包括两种或更多种单独洁齿剂组合物的洁齿剂中，每种洁齿剂组合物均可被包含于物理上独立的分配器隔室中，并且并排分配。

除非另外指明，否则下文中所用的所有百分比和比率均按总组合物的重量计。除非另外指明，否则本文提及的所有成分的百分比、比率和水平均基于该成分的实际量，并且不包括在可商购获得的产品中可与这些成分一起使用的溶剂、填料或其它物质。

除非另外指明，否则本文所涉及的所有测量均在25℃下进行。

如本文所用，术语“口腔”是指口的一部分，其包括牙齿和牙龈以及在牙齿和牙龈后的腔，该腔在上方由硬腭和软腭界定并且在下方由舌和黏膜界定。

适配体组合物

核酸适配体是具有特定二级和三级结构的单链寡核苷酸，其能够以高亲和力和特异性结合到靶标。在本发明的某些实施方案中，适配体组合物包含至少一种寡核苷酸，所述寡核苷酸包含：脱氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、脱氧核糖核苷酸的衍生物、核糖核苷酸的衍生物、或它们的混合物；其中所述适配体组合物具有对牙齿、牙釉质、牙本质、羟基磷灰石、碳酸化缺钙羟基磷灰石、或它们的混合物中的至少一种材料的结合亲和力。在另一个实施方案中，所述适配体组合物具有对牙齿的结合亲和力。

在另一个实施方案中，适配体组合物包括至少一种寡核苷酸，所述寡核苷酸包含与SEQ ID NO 1至SEQ ID NO 234中的至少一者的序列具有至少50％核苷酸序列同一性的寡核苷酸。在另一个实施方案中，适配体组合物包括至少一种寡核苷酸，所述寡核苷酸包含与包括SEQ ID NO 1至SEQ ID NO 234的序列具有至少70％核苷酸序列同一性的寡核苷酸。在仍另一个实施方案中，适配体组合物包括至少一种寡核苷酸，所述寡核苷酸与SEQ ID NO1至SEQ ID NO 234中的至少一者具有至少90％核苷酸序列同一性。在另一个实施方案中，适配体组合物包括至少一种寡核苷酸，所述寡核苷酸具有来自SEQ ID NO 1至SEQ ID NO222中的至少一者的至少20个连续核苷酸。在另一个实施方案中，适配体组合物包括至少一种寡核苷酸，所述寡核苷酸具有来自SEQ ID NO 1至SEQ ID NO 222中的至少一者的至少40个连续核苷酸。在另一个实施方案中，适配体组合物包括至少一种寡核苷酸，所述寡核苷酸具有来自SEQ ID NO 1至SEQ ID NO 222中的至少一者的至少60个连续核苷酸。在另一个实施方案中，适配体组合物包括至少一种寡核苷酸，所述寡核苷酸具有来自SEQ ID NO 1至SEQ ID NO 222中的至少一者的至少70个连续核苷酸。在另一个实施方案中，适配体组合物包括至少一种寡核苷酸，所述寡核苷酸具有来自SEQ ID NO 1至 SEQ ID NO 222中的至少一者的至少80个连续核苷酸。

在另一个实施方案中，适配体组合物包含至少一种寡核苷酸，所述寡核苷酸包含SEQ ID NO 1、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO 25、SEQ ID NO 112、SEQ ID NO 120、SEQ ID NO136、或SEQ ID NO 223至SEQ ID NO 234。在另一个实施方案中，适配体组合物包含至少一种寡核苷酸，所述寡核苷酸与SEQ ID NO 1、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO 25、SEQ ID NO 112、SEQ ID NO 120、SEQ ID NO 136、或SEQ ID NO 223至SEQ ID NO 234中的至少一者具有至少50％核苷酸序列同一性。在另一个实施方案中，适配体组合物包含至少一种寡核苷酸，所述寡核苷酸与SEQ ID NO 1、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO 25、SEQ ID NO 112、SEQ ID NO 120、SEQ ID NO 136、或SEQ ID NO 223至SEQ ID NO 234中的至少一者具有至少70％核苷酸序列同一性。在另一个实施方案中，适配体组合物包含至少一种寡核苷酸，所述寡核苷酸与SEQ ID NO 1、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO 25、SEQ ID NO 112、SEQ ID NO 120、SEQ ID NO136、或SEQ ID NO 223至SEQ ID NO 234中的至少一者具有至少90％核苷酸序列同一性。与SEQ ID NO 1 具有至少90％核苷酸序列同一性的寡核苷酸的非限制性示例是SEQ ID NO49、SEQ ID NO 69和SEQ ID NO 75。与SEQ ID NO 9具有至少50％核苷酸序列同一性的寡核苷酸的一个非限制性示例是SEQ ID NO 14。

在另一个实施方案中，寡核苷酸包含SEQ ID NO 235、SEQ ID NO 236、SEQ ID NO237、SEQ ID NO 238、SEQ ID NO 239、SEQ ID NO 240、SEQ ID NO 241、SEQ ID NO 242、SEQID NO 243或SEQ ID NO 244 的至少一个或多个基序。在另一个实施方案中，适配体组合物包含至少一种寡核苷酸，所述寡核苷酸与SEQ ID NO 235、SEQ ID NO 236、SEQ ID NO 237、SEQ ID NO 238、SEQ ID NO 239、SEQ ID NO 240、SEQ ID NO 241、SEQ ID NO 242、SEQ IDNO 243或SEQ ID NO 244中的至少一者具有至少70％核苷酸序列同一性。在另一个实施方案中，适配体组合物包含至少一种寡核苷酸，所述寡核苷酸与SEQ ID NO 235、SEQ ID NO236、SEQ ID NO 237、SEQ ID NO 238、SEQ ID NO 239、SEQ ID NO 240、SEQ ID NO 241、SEQID NO 242、SEQ ID NO 243或SEQ ID NO 244中的至少一者具有至少80％核苷酸序列同一性。在另一个实施方案中，适配体组合物包含至少一种寡核苷酸，所述寡核苷酸与SEQ IDNO 235、SEQ ID NO 236、SEQ ID NO 237、SEQ ID NO 238、SEQ ID NO 239、SEQ ID NO 240、SEQ ID NO 241、SEQ ID NO 242、SEQ ID NO 243或SEQ ID NO 244 中的至少一者具有至少90％核苷酸序列同一性。

在另一个实施方案中，SEQ ID NO 1至SEQ ID NO 111和SEQ ID NO 223至228的氟化嘧啶核苷酸被相应的天然非氟化嘧啶核苷酸取代。

化学修饰可在适配体中引入新的特征，诸如与靶标的不同分子相互作用、改善的结合能力、增强的寡核苷酸构象稳定性、或提高的对核酸酶的抗性。在某些实施方案中，适配体组合物的寡核苷酸包含天然或非天然的核酸碱基。天然的核酸碱基为腺嘌呤、胞嘧啶、鸟嘌呤、胸腺嘧啶和尿嘧啶。非天然核酸碱基的非限制性示例为次黄嘌呤、黄嘌呤、7-甲基鸟嘌呤、5,6-二氢尿嘧啶、5-5-甲基胞嘧啶、5-羟甲基胞嘧啶、硫尿嘧啶、1-甲基次黄嘌呤、6-甲基异喹啉-1-硫酮-2-基、3-甲氧基-2-萘基、5-丙炔基尿嘧啶-1-基、5-甲基胞嘧啶-1-基、2-胺基腺嘌呤-9-基、7-去氮-7-碘腺嘌呤-9- 基、7-去氮-7-丙炔基-2-胺基腺嘌呤-9-基、吩噁嗪基、吩噁嗪基-G-clam、溴尿嘧啶、5-碘尿嘧啶、以及它们的混合物。

寡核苷酸的磷酸酯主链的修饰也可增加对核酸酶消化的抗性。在某些实施方案中，寡核苷酸的核苷通过化学基序链接，所述化学基序是下列中的至少一种：天然磷酸二酯、手性硫逐磷酸酯、手性膦酸甲酯、手性氨基磷酸酯、手性磷酸酯手性三酯、手性硼磷酸酯(boranophosphate)、手性硒代磷酸酯(phosphoroselenoate)、二硫代磷酸酯、硫代氨基磷酸酯、亚甲基甲基亚胺基、3’-酰胺、3’非手性氨基磷酸酯、3’非手性亚甲基膦酸酯、硫缩醛、乙硫醚、氟磷酸酯、或它们的混合物。在另一个实施方案中，寡核苷酸的核苷可通过天然磷酸二酯链接。

在另一个实施方案中，寡核苷酸的核苷的糖部分可为以下至少一种：核糖、脱氧核糖、2’-氟脱氧核糖、2’-O-甲基核糖、2’-O-(3-氨基)丙基核糖、2’-O-(2-甲氧基)乙基核糖、2’-O-2-(N,N-二甲基胺基氧)乙基核糖、2’-O- 2-[2-(N,N-二甲基胺基)乙氧基]乙基核糖、2’-O-N,N-二甲基乙酰胺基核糖、N-吗啉基膦酰二胺、α-脱氧呋喃核糖基(α-deoxyribofuranosyl)、其他戊糖、己糖、或它们的混合物。

在另一个实施方案中，所述核糖核苷酸的衍生物或脱氧核糖核苷酸的衍生物可以是下列中的至少一种：锁定的寡核苷酸、肽寡核苷酸、二醇寡核苷酸、苏阿糖寡核苷酸、己糖醇寡核苷酸、阿卓糖醇寡核苷酸、丁基寡核苷酸、L-核糖核苷酸、阿拉伯糖寡核苷酸、2’-氟阿拉伯糖寡核苷酸、环己烯寡核苷酸、膦酰二胺吗啉代寡核苷酸(phosphorodiamidatemorpholino oligonucleotides)、或它们的混合物。

在另一个实施方案中，寡核苷酸的5’端和3'端的核苷酸是反向的。在另一个实施方案中，寡核苷酸的至少一个核苷酸在戊糖基团的2'位置上被氟化。在另一个实施方案中，寡核苷酸的嘧啶核苷酸在戊糖基团的2'位置上被氟化。在另一个实施方案中，所述适配体组合物还包含至少一种聚合物材料，其中所述聚合物材料可共价链接至寡核苷酸；其中所述聚合物材料可以是聚乙二醇。

在另一个实施方案中，寡核苷酸的长度可为介于约10个与约200个核苷酸之间。在另一个实施方案中，寡核苷酸的长度可小于约100个核苷酸。在仍另一个实施方案中，寡核苷酸的长度可小于约50个核苷酸。

在另一个实施方案中，寡核苷酸可共价或非共价地附接至一种或多种口腔护理活性成分。合适的口腔护理活性成分包括任何用于口腔内通常被认为是安全的，并能提供口腔整体健康改变；并且具体地讲，提供此类口腔护理活性成分与之相互作用的口腔表面状况的改变的物质。这些活性物质解决的口腔症状的示例包括但不限于，牙齿的外观和结构变化、增白、牙垢预防和去除、牙垢漂白、牙斑预防和去除、牙石预防和去除、龋齿预防和治疗、发炎和/或牙龈出血、粘膜受伤、损害、溃疡、口疮性溃疡、感冒疮和牙齿脓肿。

在另一个实施方案中，所述一种或多种口腔护理活性成分选自：增白剂、亮白剂、防污剂、抗龋剂、抗蚀剂、抗牙石剂、抗牙结石剂、抗牙斑剂、牙齿再矿化剂、抗破碎剂、强化剂、耐磨损剂、抗齿龈炎剂、抗微生物剂、抗细菌剂、抗真菌剂、抗酵母剂、抗病毒剂、防口臭剂、口气清新剂、芳香剂、凉爽剂、口味增强剂、味道增强剂、抗附着剂、平滑剂、表面修饰剂、抗牙齿疼痛剂、抗敏感剂、抗炎剂、牙龈保护剂、牙周活性剂、组织再生剂、抗凝血剂、抗凝块稳定剂、唾液刺激剂、唾液流变改性剂、保留增强剂、软/硬组织靶向剂、牙齿/软组织清洁剂、抗氧化剂、pH 调节剂、H-2拮抗剂、止痛剂、天然提取物和精油、染料、光学亮白剂、阳离子、磷酸盐、氟离子源、肽、营养物质、酶、口喉产品、和它们的混合物。口腔护理活性成分的非限制性具体示例列于章节IV中。

在另一个实施方案中，寡核苷酸通过分子相互作用被非共价地附接至一种或多种口腔护理活性成分。分子相互作用的示例是芳环的静电力、范德华相互作用、氢键合和π—π堆积作用。

在另一个实施方案中，可使用一种或多种链接剂或间隔剂将寡核苷酸共价附接到所述一种或多种口腔护理活性成分。链接剂的非限制性示例是化学上不稳定的链接剂、酶不稳定的链接剂和不可裂解的链接剂。化学上不稳定的链接剂的示例是酸可裂解的链接剂和二硫化物链接剂。酸可裂解的链接剂利用低pH来触发酸可裂解的键诸如腙键的水解，以释放活性成分或有效载荷。二硫化物链接剂可在还原环境下释放活性成分。酶不稳定的链接剂的示例是肽链接剂，其可在蛋白酶的存在下裂解，和β葡糖醛酸苷链接剂，其可被释放有效载荷的葡糖醛酸苷酶裂解。如果适配体通过核酸酶降解，则不可裂解的链接剂也可释放活性成分。

在另一个实施方案中，寡核苷酸可共价或非共价地附接至一种或多种纳米材料。在另一个实施方案中，寡核苷酸和一种或多种口腔活性成分可共价或非共价地附接至一种或多种纳米材料。在另一个实施方案中，一种或多种口腔护理活性成分由一种或多种纳米材料承载。纳米材料的非限制性示例为金纳米粒子、纳米级铁氧化物、碳纳米材料(诸如单壁碳纳米管和石墨烯氧化物)、介孔二氧化硅纳米粒子、量子点、脂质体、聚(丙交酯-共- 乙醇酸)纳米粒子、聚合物胶束、树枝状聚合物、血清白蛋白纳米粒子和基于DNA的纳米材料。这些纳米材料可用作大体积口腔护理活性成分的载体，而适配体可有利于将具有活性物质的纳米材料递送至预期靶标。

纳米材料可具有多种形状或形态。形状或形态的非限制性示例为球体、矩形、多边形、盘、环状、圆锥体、棱锥、杆/圆柱体和纤维。在本发明的上下文中，纳米材料可具有至少一个小于约100μm，并且更优选地小于约10μm的空间尺寸。纳米材料包括固相、半固相或液相的材料。

适配体也可以是以高亲和力和特异性结合靶标的肽。这些肽适配体可以是支架蛋白的一部分。肽适配体可从组合库分离，并通过定向突变或多轮可变区诱变和选择来改善。在本发明的某些实施方案中，适配体组合物可包含至少一种肽或蛋白质；其中所述适配体组合物具有对选自牙齿、牙釉质、牙本质、羟基磷灰石、碳酸化缺钙羟基磷灰石、和它们的混合物中的材料的结合亲和力。

设计适配体组合物的方法

已广泛研究并改进了被称为“指数富集配体系统进化技术(SELEX)”的核酸适配体设计方法，以针对小分子和蛋白质选择适配体(WO 91/19813)。简而言之，在常规型式的SELEX中，该过程从合成由随机生成的固定长度序列组成的寡核苷酸大库开始，该序列侧翼存在作为引物的恒定5’端和3'端。然后将库中的寡核苷酸暴露于靶标配体，并且移除不结合靶标的那些。洗脱结合的序列并通过PCR扩增，以准备随后的选择轮，其中通常增加洗脱条件的严格性以鉴定最紧密结合的寡核苷酸。除了常规的 SELEX之外，还存在改善的型式，诸如毛细管电泳SELEX、基于磁珠的 SELEX、细胞SELEX、自动化的SELEX、复合靶标SELEX等。对适配体筛选方法的综述见于“Kim,Y.S.and M.B.Gu(2014).Advances in AptamerScreening and Small Molecule Aptasensors.Adv.Biochem.Eng./Biotechnol.140(Biosensors based on Aptamers and Enzymes):29-67”和“Stoltenburg,R.,et al.(2007).SELEX-A(r)evolutionary method to generate high-affinity nucleic acidligands.Biomol.Eng.24(4):381-403”，其内容通过引用并入本文。虽然已广泛应用SELEX方法，但对于每个靶标，它既非预测型的也非标准化的。相反，必须为每个特定靶标开发一种方法，以使该方法产生可行的适配体。

尽管有大量的选择的适配体，SELEX仍未被常规地用于选择对宏观材料和表面具有结合亲和力的适配体。为了成功地选择对宏观材料具有高结合亲和力和特异性的适配体，表位应当以足够的量和纯度存在，以使未特异性结合的寡核苷酸的富集最小化并且提高选择的特异性。另外，带正电基团(例如，伯氨基)的存在、氢键供体和受体的存在、以及平面性(芳族化合物)有利于适配体的选择。相比之下，带负电的分子(例如，包含磷酸酯基团)使得选择过程更困难。出乎意料的是，尽管牙齿的有害化学特征使适配体选择具有挑战性，但本发明人发现，SELEX可用于设计对牙齿具有高结合亲和力和特异性的适配体。

选择库

在SELEX中，初始候选库通常为化学合成的DNA寡核苷酸的混合物，对于该库的所有候选，每个寡核苷酸包含在3’端和5'端处侧翼具有保守区或引物识别区的n个核苷酸的长可变区。这些引物识别区允许在 SELEX期间，具体地讲通过PCR手段来操纵中心可变区。

可变区的长度决定库的多样性，其等于4ⁿ，因为每个位置可由四个核苷酸A、T、G或C中的一个占据。对于长可变区，会产生巨大的库复杂性。例如，当n＝50时，理论多样性为4⁵⁰或10³⁰，这在实践中是不可访问的值，因为它对应于库中超过10⁵吨的材料，其中每个序列表示一次。实验极限为约10¹⁵个不同的序列，这是其中表示具有25个核苷酸的可变区的所有候选序列的库。如果选择操纵包含理论多样性为约10¹⁸的30个核苷酸的可变区的库，则将仅探索1/1000的可能性。实际上，这通常足以获得具有所需性质的适配体。此外，由于所使用的聚合酶不可靠并且以大约10^-4的速率引入错误，它们有助于显著丰富整个SELEX过程中序列池的多样性：对于具有长度为100个核苷酸的随机区的库，在每个扩增循环中，100个候选中的一个将被修饰，从而导致整个库出现10¹³个新的候选。

在本发明的某些实施方案中，寡核苷酸的起始混合物可包含多于约10⁶个不同的寡核苷酸或介于约10¹³个至约10¹⁵个之间的不同寡核苷酸。在本发明的另一个实施方案中，可变区的长度介于约10个和约100个核苷酸之间。在另一个实施方案中，可变区的长度介于约20个和约60个核苷酸之间。在另一个实施方案中，可变区的长度为约40个核苷酸。可使用短于10 个核苷酸的随机区，但其形成二级结构或三级结构的能力以及它们与靶分子结合的能力可能受到约束。也可使用长于100个核苷酸的随机区，但在合成的成本方面可能存在困难。可变区的随机性不是对本发明的约束。例如，如果存在与结合到给定靶标的寡核苷酸有关的先前知识，则具有此类序列的库也可用作或优于完全随机的库。

设计引物识别序列时，应注意最小化序列间的潜在退火、序列内的折叠后区或相同序列本身的退火。在本发明的某些实施方案中，引物识别序列的长度可介于约10个和约40个核苷酸之间。在另一个实施方案中，引物识别序列的长度可介于约12个和约30个核苷酸之间。在另一个实施方案中，引物识别序列的长度可为约18个至约26个核苷酸之间，即约18 个、19个、20个、21个、22个、23个、24个、25个或26个核苷酸。引物识别序列的长度和序列决定了它们的退火温度。在某些实施方案中，寡核苷酸的引物识别序列可具有介于约60℃和约72℃之间的退火温度。

适配体可以是核糖核苷酸(RNA)、脱氧核苷酸(DNA)、或它们的衍生物。当适配体是核糖核苷酸时，第一SELEX步骤可包括经由引物识别序列在5'端转录化学合成的DNA寡核苷酸的初始混合物。选择后，在扩增前通过逆转录将候选物转化回DNA。已针对相同的靶标选择了具有相当特性的 RNA和DNA适配体，并且在本领域中已有报道。另外，这两种类型的适配体可以是彼此的竞争性抑制剂，这暗示相互作用位点的潜在重叠。

可通过在选择之前或之后修饰核酸碱基而将新的功能诸如疏水性或光反应性并入寡核苷酸中。在嘧啶的C-5位置或在嘌呤的C-8或N-7位置处的修饰尤其常见，并且与SELEX的扩增步骤期间使用的某些酶相容。在本发明的某些实施方案中，所述寡核苷酸包含天然或非天然的核酸碱基。天然的核酸碱基为腺嘌呤、胞嘧啶、鸟嘌呤、胸腺嘧啶和尿嘧啶。非天然核酸碱基的非限制性示例为次黄嘌呤、黄嘌呤、7-甲基鸟嘌呤、5,6-二氢尿嘧啶、5-5-甲基胞嘧啶、5-羟甲基胞嘧啶、硫尿嘧啶、1-甲基次黄嘌呤、6-甲基异喹啉-1-硫酮-2-基、3-甲氧基-2-萘基、5-丙炔基尿嘧啶-1-基、5-甲基胞嘧啶-1-基、2-胺基腺嘌呤-9-基、7-去氮-7-碘腺嘌呤-9-基、7-去氮-7-丙炔基- 2-胺基腺嘌呤-9-基、吩噁嗪基、吩噁嗪基-G-clam、5-溴尿嘧啶、5-碘尿嘧啶、以及它们的混合物。一些非天然的核酸碱基诸如5-溴尿嘧啶或5-碘尿嘧啶可用于产生可光交联的适配体，其可通过UV光活化以与靶标形成共价连接。

在另一个实施方案中，所述寡核苷酸的核苷通过选自下列的化学基序链接：天然磷酸二酯、手性硫逐磷酸酯、手性膦酸甲酯、手性氨基磷酸酯、手性磷酸酯手性三酯、手性硼磷酸酯、手性硒代磷酸酯、二硫代磷酸酯、硫代氨基磷酸酯、亚甲基甲基亚胺基、3’-酰胺、3’非手性氨基磷酸酯、3’非手性亚甲基膦酸酯、硫缩醛、乙硫醚、氟磷酸酯、及它们的混合物。在仍另一个实施方案中，所述寡核苷酸的核苷通过天然磷酸二酯链接。

在另一个实施方案中，所述寡核苷酸的核苷的糖部分可选自：核糖、脱氧核糖、2’-氟脱氧核糖、2’-O-甲基核糖、2’-O-(3-氨基)丙基核糖、2’-O- (2-甲氧基)乙基核糖、2’-O-2-(N,N-二甲基胺基氧)乙基核糖、2’-O-2-[2- (N,N-二甲基胺基)乙氧基]乙基核糖、2’-O-N,N-二甲基乙酰胺基核糖、N-吗啉基膦酰二胺、α-脱氧呋喃核糖基、其他戊糖、己糖、和它们的混合物。

在另一个实施方案中，所述核糖核苷酸的衍生物或脱氧核糖核苷酸的衍生物可选自：锁定的寡核苷酸、肽寡核苷酸、二醇寡核苷酸、苏阿糖寡核苷酸、己糖醇寡核苷酸、阿卓糖醇寡核苷酸、丁基寡核苷酸、L-核糖核苷酸、阿拉伯糖寡核苷酸、2’-氟阿拉伯糖寡核苷酸、环己烯寡核苷酸、膦酰二胺吗啉代寡核苷酸、和它们的混合物。

当在SELEX过程中使用经修饰的核苷酸时，它们应当与扩增步骤期间使用的酶相容。与商业酶相容的修饰的非限制性示例包括在RNA库中糖的 2'位置处的修饰。嘧啶核苷酸的核糖2'-OH基团可替换为2'-氨基、2'-氟、 2'-甲基或2'-O-甲基，这些基团保护RNA不被核酸酶降解。磷酸酯链接剂中的另外的修饰如硫逐磷酸酯和硼磷酸酯也与聚合酶相容并且赋予核酸酶抗性。

在本发明的某些实施方案中，所述寡核苷酸的至少一个核苷酸在戊糖基团的2'位置上被氟化。在另一个实施方案中，所述寡核苷酸的嘧啶核苷酸在戊糖基团的2'位置上被至少部分地氟化。在另一个实施方案中，所述寡核苷酸的嘧啶核苷酸全部在戊糖基团的2'位置上被氟化。在另一个实施方案中，所述寡核苷酸的至少一个核苷酸在戊糖基团的2'位置上被胺化。

另一种方法，最近描述为二维SELEX，同时应用体外寡核苷酸选择和动态组合化学(DCC)，例如寡核苷酸的某些基团(胺基)与醛化合物库之间的可逆反应。该反应产生以与常规SELEX相同的原理选择的亚胺寡核苷酸。因此，可以鉴定与天然适配体不同的靶向发夹RNA修饰的适配体。

一种非常不同的方法涉及光学异构体的使用。天然寡核苷酸是D-异构体。L-类似物具备核酸酶抗性，但不能由聚合酶合成。根据光学异构的规则，L-系列适配体可与其靶标(T)形成复合物，所述复合物具有与由D-系列异构体和靶标(T)的对映体(T')形成的复合物相同的特性。因此，如果化合物 T'可被化学合成，则其可用于执行天然适配体(D)的选择。一旦鉴定，该适配体可化学合成为L-系列。这一L-适配体是天然靶标(T)的配体。

选择步骤

单链寡核苷酸可折叠以产生二级结构和三级结构，类似于碱基对的形成。因此，初始序列库是三维形状的库，每个形状对应于可触发静电相互作用、生成氢键等的单元的分布。选择成为在库中鉴定适合靶标的形状的问题，即允许最大相互作用次数和形成最稳定的适配体-靶复合物的形状。对于小靶标(染料、抗生素等)，所鉴定的适配体的特征在于微摩尔范围内的平衡解离常数，而对于蛋白质靶标，低于10^-9M的K_d值并不罕见。

在每一轮中的选择通过从游离寡核苷酸物理分离与靶标相关的寡核苷酸进行。可以应用多种技术(色谱法、过滤保留、电泳等)。调节选择条件 (靶标/候选物的相对浓度、离子浓度、温度、洗涤等)，使得在寡核苷酸之间发生靶结合竞争。一般来讲，严格性随着轮检的进行而增加，以便促进捕获具有最高亲和力的寡核苷酸。此外，进行反向选择或阴性选择以消除识别载体或不需要的靶标(例如，过滤器、小珠等)的寡核苷酸。

用于选择靶标特异性适配体的SELEX方法的特征在于重复五个主要步骤：将寡核苷酸结合到靶标，分配或移除具有低结合亲和力的寡核苷酸，洗脱具有高结合亲和力的寡核苷酸，扩增或复制具有高结合亲和力的寡核苷酸，以及调节或制备用于下一个循环的寡核苷酸。这一选择过程被设计用于鉴定对靶标材料具有最大亲和力和特异性的寡核苷酸。

在本发明的某些实施方案中，设计适配体组合物的方法包括使a)寡核苷酸混合物、b)选择缓冲液和c)选自牙齿、牙釉质、牙本质、羟基磷灰石、碳酸化缺钙羟基磷灰石、以及它们的混合物的靶标材料接触的步骤。在另一个实施方案中，所述靶标材料是牙齿。在另一个实施方案中，在所述接触步骤之前，所述牙齿至少部分地涂覆有唾液。在本发明的另一个实施方案中，所述寡核苷酸的混合物包含选自脱氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、脱氧核糖核苷酸的衍生物、核糖核苷酸的衍生物、和它们的混合物的寡核苷酸。

通常重复SELEX循环几次，直到鉴定出具有高结合亲和力的寡核苷酸。循环次数取决于多个变量，包括靶标特征和浓度、起始随机寡核苷酸库的设计、选择条件、靶标结合位点与寡核苷酸的比率、以及分配步骤的效率。在某些实施方案中，所述接触步骤进行至少5次。在另一个实施方案中，所述接触步骤进行6次至15次。在另一个实施方案中，所述方法还包括移除在所述接触步骤期间不结合所述靶标材料的寡核苷酸的步骤。

寡核苷酸是寡阴离子，每个单元在特定pH下具有电荷和氢键供体/受体位点。因此，选择缓冲液的pH和离子强度很重要，并且应代表预期适配体应用的条件。在本发明的某些实施方案中，所述选择缓冲液的pH为介于约2和约9之间。在另一个实施方案中，所述选择缓冲液的pH介于约6和约8之间。在仍另一个实施方案中，所述选择缓冲液的pH介于约2和约5 之间。如果期望适配体在酸性环境中具有良好的结合亲和力，则具有低pH 的选择缓冲液可能是重要的。

阳离子可促进寡核苷酸的正确折叠并在口腔中提供有益效果。在本发明的某些实施方案中，所述选择缓冲液包含阳离子。阳离子的非限制性示例是Ca²⁺、Sn²⁺、Sn⁴⁺、Zn²⁺、Al^{3 +}、Cu²⁺、Fe²⁺和Fe³⁺。在仍另一个实施方案中，所述选择缓冲液包含选自Sn²⁺和Ca²⁺的二价阳离子。

为了使适配体在它们的施用期间保持其结构和功能，体外选择过程可在与研发它们所采用的那些条件类似的条件下进行。在本发明的某些实施方案中，所述选择缓冲液包含口腔护理组合物的溶液或悬浮液，所述口腔护理组合物选自洁齿剂、洁齿剂、牙粉、漱口水、口腔清洗剂、牙线、牙刷、条带、喷剂、贴剂、涂剂、可溶物、可食用物、含片、口香糖、咀嚼剂、可溶纤维、不可溶纤维、油灰、蜡、义齿粘合剂、义齿清洁剂、以及它们的混合物。在本发明的另一个实施方案中，所述选择缓冲液包含洁齿剂的溶液。在本发明的另一个实施方案中，所述选择缓冲液包含唾液的溶液。

在本发明的某些实施方案中，所述选择缓冲液包含至少一种表面活性剂。在另一个实施方案中，所述至少一种表面活性剂选自月桂基硫酸钠、甜菜碱、氯己定、肌氨酸盐、普朗尼克(pluronics)和三氯生。在另一个实施方案中，所述至少一种表面活性剂为月桂基硫酸钠。在另一个实施方案中，所述选择缓冲液包含至少一种选自下列的磨料：氢氧化铝、碳酸钙、磷酸氢钙、焦磷酸钙、焦磷酸钙(β相)、硅酸盐、硅铝酸盐、羟基磷灰石、以及它们的混合物。在仍另一个实施方案中，所述选择缓冲液包含：a)至少一种表面活性剂；b)至少一种选自下列的磨料：氢氧化铝、碳酸钙、磷酸氢钙、焦磷酸钙、焦磷酸钙(β相)、硅酸盐、硅铝酸盐、羟基磷灰石、以及它们的混合物；c)至少一种磷酸盐；以及d)至少一种氟化物盐。

阴性选择或反向选择步骤可最小化与不期望的靶标或靶标内的不期望表位结合的寡核苷酸的富集。就口腔护理应用而言，可能不期望将适配体结合到牙齿变色材料上。在本发明的某些实施方案中，所述设计适配体组合物的方法还包括使a)寡核苷酸混合物、b)选择缓冲液和c)一种或多种牙齿变色材料接触的步骤。在另一个实施方案中，所述一种或多种牙齿变色材料包含一种或多种天然或合成染料或颜料，所述染料或颜料选自类黄酮、类胡萝卜素、焦糖、单宁、其他色原、以及它们的混合物。在仍另一个实施方案中，所述一种或多种牙齿变色材料选自：葡萄酒、咖啡、茶、碳酸苏打水、以及它们的混合物。在阴性选择或反向选择期间，牙齿变色材料或可未结合到载体上或可固定到载体上。用于针对未结合靶标对适配体进行阴性选择或反向选择的方法已于WO201735666公布，其内容以引用方式并入本文。

在本发明的某些实施方案中，设计适配体组合物的方法可包括以下步骤：a)合成寡核苷酸的混合物；b)使i.所述寡核苷酸的混合物、ii.选择缓冲液和iii.选自牙齿、牙釉质、牙本质、羟基磷灰石、碳酸化缺钙羟基磷灰石、以及它们的混合物的靶材料接触，以产生靶标悬浮液；c)从所述靶标悬浮液中去除液相以产生靶标-寡核苷酸混合物；d)使所述靶标-寡核苷酸混合物与洗涤缓冲液接触，并且移除液相以产生靶标-适配体混合物；以及e)使所述靶标-适配体混合物与洗脱缓冲液接触，并且回收液相以产生适配体混合物。在另一个实施方案中，所述步骤重复进行至少5次。在另一个实施方案中，所述步骤进行6次至15次。

在另一个实施方案中，设计适配体组合物的方法包括以下步骤：a)合成包含寡核苷酸的脱氧核糖核苷酸的随机混合物，所述寡核苷酸由下列组成：i.位于5'端的T7启动子序列、ii.位于中部的可变40-核苷酸序列、和iii. 位于3'端的保守反向引物识别序列；b)使用在戊糖基的2'位氟化的嘧啶核苷酸和天然嘌呤核苷酸以及突变型T7聚合酶来转录所述脱氧核糖核苷酸的随机混合物，以产生氟化核糖核苷酸的混合物；c)使i.所述氟化核糖核苷酸的混合物、ii.选择缓冲液和iii.牙齿接触以产生靶标悬浮液，其中所述牙齿至少部分地涂覆有唾液；d)从所述靶标悬浮液中去除液相以产生牙齿-寡核苷酸混合物；e)使所述牙齿-寡核苷酸混合物与洗涤缓冲液接触，并且移除液相以产生牙齿-适配体混合物；f)使所述牙齿-适配体混合物与洗脱缓冲液接触，并且回收液相以产生RNA适配体混合物；g)逆转录并扩增所述RNA 适配体混合物以产生所述RNA适配体混合物的DNA拷贝；以及h)对所述RNA适配体混合物的所述DNA拷贝进行测序。

选择后的修饰

为了提高适配体的稳定性，可在选择过程之后在适配体中引入化学修饰。例如，核糖部分的2'-OH基团可替换为2'-氟、2'-氨基或2'-O-甲基。此外，适配体的3'端和5'端可用不同的基团封端，诸如链霉亲和素生物素、反向胸苷、胺、磷酸酯(盐)、聚乙二醇、胆固醇、脂肪酸、蛋白质、酶、荧光团等，使得寡核苷酸抗外切酶或提供一些附加有益效果。其他修饰描述于本公开的先前章节中。

与可能导致适配体-靶标相互作用特性损失的主链修饰不同，有可能在寡核苷酸的3'端或5'端之一处缀合各种基团，以便将其转化为递送媒介、工具、探针或传感器而不破坏其特性。这种通用性构成适配体的显著优点，尤其是对于它们在本发明中的应用而言。在本发明的某些实施方案中，将一种或多种口腔护理活性成分共价连接至寡核苷酸的3'端。在另一个实施方案中，将一种或多种口腔护理活性成分共价连接至寡核苷酸的5' 端。在另一个实施方案中，将一种或多种口腔护理活性成分共价连接至寡核苷酸的随机位置。

对适配体的修饰的并入可使用酶法或化学方法进行。用于修饰适配体的酶的非限制性示例是末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)、T4 RNA连接酶、T4 多核苷酸激酶(PNK)、DNA聚合酶、RNA聚合酶、以及本领域技术人员已知的其他酶。TdT是模板独立(template-independent)的聚合酶，其可将经修饰的脱氧核苷酸添加到脱氧核糖核苷酸的3'末端。T4RNA连接酶可用于通过使用经适当修饰的核苷3',5'-双膦酸酯来标记3'端的核糖核苷酸。PNK 可用于磷酸化合成寡核苷酸的5'端，从而令其能够进行其他化学转化(参见下文)。DNA聚合酶和RNA聚合酶通常用于在整个序列中随机并入修饰的核苷酸，前提条件是此类核苷酸与酶相容。

用于修饰适配体的化学方法的非限制性示例是核糖核苷酸的高碘酸盐氧化、5'-磷酸的EDC活化、随机化学标记方法、以及本领域技术人员已知的其他化学方法，这些方法作为本发明的实施方案并入本文。

在高碘酸盐氧化期间，间位和邻位过二酸盐裂解3'-核糖核苷酸的邻近二醇之间的C-C键，从而产生两个醛部分，它们使得标签或活性成分能够在RNA适配体的3'端缀合。所得的醛可容易地与含肼或含伯胺的分子反应。当使用胺时，可用氰基硼氢化钠(NaBH₄)将制得的席夫碱还原成更稳定的仲胺。

当使用5'-磷酸酯的EDC活化时，寡核苷酸的5'-磷酸酯经常用EDC(1- 乙基-3-[3-二甲基胺基丙基]碳二亚胺盐酸盐)和咪唑活化，以产生反应性咪唑鎓中间体，然后与伯胺反应生成在5'端处修饰的适配体。因为反应需要 5'磷酸酯基团，所以可首先用激酶(例如，PNK)处理合成寡核苷酸。

可以用不同的方法进行随机化学标记。因为它们允许在沿着适配体的随机位点处进行标记，所以与末端标记方法相比可获得更高程度的修饰。然而，由于核酸碱基被修饰，因此可破坏适配体与其靶标的结合。最常见的无规化学修饰方法涉及使用光反应性试剂，诸如基于叠氮基苯的试剂。当叠氮基苯基团暴露于UV光时，其形成不稳定的氮烯，该氮烯与双键和适配体的C-H和N-H位点反应。

关于修饰适配体的方法的附加信息汇总于“Hermanson G.T. (2008).Bioconjugate Techniques.第二版，第969-1002页，Academic Press, San Diego.”中，其内容通过引用并入本文。

在选择之后，除了化学修饰之外，还可进行序列截短以移除对结合或对于折叠到结构中不是必需的区域。此外，可将适配体连接在一起以提供不同的特征或更好的亲和力。因此，本文所述的适配体的任何截短或组合均作为本发明的一部分并入。

适配体组合物在口腔护理产品中的应用

本发明的适配体可用于口腔护理组合物中以提供一种或多种有益效果。在本发明的某些实施方案中，口腔护理组合物包含至少一种核酸适配体；其中所述至少一种核酸适配体具有对口腔部分的结合亲和力。在另一个实施方案中，口腔护理组合物包含至少一种核酸适配体；其中所述至少一种核酸适配体具有对口腔部分的结合亲和力，所述口腔部分选自：牙齿、牙釉质、牙本质和口腔中的任何其他表面。在另一个实施方案中，口腔护理组合物包含至少一种核酸适配体；其中所述至少一种核酸适配体具有对牙齿的结合亲和力。

本发明的口腔护理组合物可为不同的形式。所述形式的非限制性示例为：洁齿剂(包括洁齿剂和牙粉)、漱口水、口腔清洗剂、牙线、牙刷、条带、喷剂、贴剂、涂剂、可溶物、可食用物、含片、口香糖、咀嚼剂、可溶纤维、不可溶纤维、油灰、蜡、义齿粘合剂、义齿清洁剂、液体、糊剂、牛顿流体或非牛顿流体、凝胶和溶胶。

本发明的口腔护理组合物可包括以下一种或多种成分：

适用于本发明的流变改性剂包括有机和无机流变改性剂、以及它们的混合物。无机流变改性剂包括锂蒙脱石和衍生物、二氧化硅水合物、三元和四元硅酸镁衍生物、膨润土、以及它们的混合物。优选的无机流变改性剂是锂蒙脱石和衍生物、二氧化硅水合物、以及它们的混合物。有机流变改性剂包括黄原胶、角叉菜胶和衍生物、结冷胶、羟丙基甲基纤维素、菌类植物胶和衍生物、支链淀粉、鼠李聚糖胶、文莱胶、魔芋、凝胶多糖、卡波姆、褐藻胶、藻酸、藻酸盐和衍生物、羟乙基纤维素和衍生物、羟丙基纤维素和衍生物、磷酸淀粉衍生物、瓜尔胶和衍生物、淀粉和衍生物、马来酸酐与烯烃的共聚物和衍生物、纤维素胶和衍生物、乙二醇/丙二醇共聚物、泊洛沙姆和衍生物、聚丙烯酸酯和衍生物、甲基纤维素和衍生物、乙基纤维素和衍生物、琼脂和衍生物、阿拉伯树胶和衍生物、果胶和衍生物、脱乙酰壳多糖和衍生物、聚乙二醇树脂如PEG-XM(其中X>＝1)、刺梧桐树胶、刺槐豆胶、纳豆胶、乙烯基吡咯烷酮与烯烃的共聚物、黄蓍胶、聚丙烯酰胺、甲壳质衍生物、明胶、β-葡聚糖、糊精、葡聚糖、环糊精、甲基丙烯酸酯、微晶纤维素、聚季铵盐、呋喃泡沫树脂、茄替胶、车前子胶、温柏树胶、罗望子胶、落叶松胶、刺云实胶、以及它们的混合物。优选黄原胶、角叉菜胶和衍生物、结冷胶、羟丙基甲基纤维素、菌类植物胶和衍生物、支链淀粉、鼠李聚糖胶、文莱胶、魔芋、凝胶多糖、卡波姆、褐藻胶、藻酸、藻酸盐和衍生物、羟乙基纤维素和衍生物、羟丙基纤维素和衍生物、磷酸淀粉衍生物、瓜尔胶和衍生物、淀粉和衍生物、马来酸酐与烯烃的共聚物和衍生物、纤维素胶和衍生物、乙二醇/丙二醇共聚物、泊洛沙姆和衍生物、以及它们的混合物。

在某些实施方案中，流变改性剂的量可在按所述总组合物，诸如牙粉的重量计约0.1％至约15％或约0.5％至约3％的范围内。

除了上文组分以外，还可按需要加入甜味剂、风味剂、防腐剂、有效成分、磨料、氟化物离子源、螯合剂、抗微生物剂、硅油和其它助剂，如防腐剂和着色剂等。

可使用按所述总组合物的重量计0.05％至5％的量的糖精钠、蔗糖、麦芽糖、乳糖、蛇菊苷、新橙皮苷二氢查耳酮、甘草素、紫苏葶、对甲氧基肉桂醛等作为甜味剂。可使用精油如留兰香油、胡椒薄荷油、鼠尾草油、桉树油、柠檬油、酸橙油、冬青油和肉桂油、其它香料和水果香料以及分离和合成的调味料如l-薄荷醇、香芹酮、茴香脑、丁子香酚等，作为风味剂。所述风味剂可以按所述总组合物的重量计0.1％至5％的量共混。可使用过氧苯甲酸乙酯、过氧苯甲酸丁酯等作为防腐剂。甜味剂可与研磨剂一起加入。风味剂和防腐剂可在制备轻微溶胀的流变改性剂的液体时加入，或与湿润剂混合后与流变改性剂混合。可使用酶如葡聚糖酶、溶解酶、溶菌酶、淀粉酶和抗纤溶酶剂如EPSILON-氨基己酸和氨甲环酸，含氟化合物如单氟磷酸钠、氟化钠和氟化亚锡，氯己定盐，季铵盐，氯化羟铝尿囊素，甘草次酸，叶绿素，氯化钠和含磷化合物作为有效成分。此外，可按需要将硅胶、铝硅胶、有机酸和它们的盐共混。当制备轻微溶胀的流变改性剂的液体时，可加入具有低粘度的有机有效成分。

本发明的口腔护理组合物可包含大于约0.1重量％的表面活性剂或表面活性剂的混合物。本文引用的表面活性剂含量基于100％活性物质计，即使常见原材料如月桂基硫酸钠可以较低活性的水溶液形式提供。

适宜的表面活性剂含量为按所述总组合物的重量计约0.1％至约15％，约0.25％至约10％，或约0.5％至约5％。适用于本文的表面活性剂包括阴离子表面活性剂、两性表面活性剂、非离子表面活性剂、两性离子表面活性剂和阳离子表面活性剂，然而优选阴离子表面活性剂、两性表面活性剂、非离子表面活性剂和两性离子表面活性剂(以及它们的混合物)。

本文可用的阴离子表面活性剂包括在烷基基团中具有10至18个碳原子的水溶性烷基硫酸盐和烷基醚硫酸盐，和具有10至18个碳原子的脂肪酸磺化单酸甘油酯的水溶性盐。月桂基硫酸钠和椰油基单甘油酯磺酸钠是这类阴离子表面活性剂的示例。

适用于本发明中的阳离子表面活性剂可广泛地定义为具有一条包含约 8至18个碳原子的长烷基链的脂族季铵化合物衍生物，诸如月桂基三甲基氯化铵；十六烷基氯化吡啶鎓；苯扎氯铵；十六烷基三甲基溴化铵；二异丁基苯氧乙基二甲基苄基氯化铵；椰油基烷基三甲基亚硝酸铵；十六烷基氟化吡啶鎓；等等。在本文所公开的组合物中，某些阳离子表面活性剂也可用作杀菌剂。

可用于本发明组合物中的适宜非离子表面活性剂可被广义地定义为由环氧烷基团(本身亲水的)与本身可为脂族和/或芳族的有机疏水化合物缩合而生成的化合物。适合的非离子表面活性剂的示例包括泊洛沙姆；脱水山梨糖醇衍生物，诸如脱水山梨糖醇二异硬脂酸酯；氢化蓖麻油的环氧乙烷缩合物，诸如PEG-30氢化蓖麻油；脂族醇或烷基酚的环氧乙烷缩合物；衍生自环氧乙烷与由环氧丙烷和乙二胺反应所得的产物的缩合的产物；长链叔胺氧化物；长链叔膦氧化物；长链二烷基亚砜以及此类材料的混合物。这些材料可用于稳定泡沫，而不促进过度的口腔护理组合物粘度增加。

两性离子表面活性剂可被广泛描述为脂族季铵、鏻鎓和锍化合物的衍生物，其中脂族基团可以为直链或支链，并且其中脂族取代基之一包含约8 至18个碳原子，并且一个脂族取代基包含阴离子水增溶性基团，例如羧基、磺酸根、硫酸根、磷酸根或膦酸根。

由本发明的口腔护理组合物可包含大于约50％的液体载体材料。水可占按所述总组合物的重量计约20％至约70％，或约30％至约50％。这些量的水包括加入的游离水和由其它物质(如由山梨醇和表面活性剂溶液)引入的水。

一般来讲，液体载体还可包括一种或多种湿润剂。适宜的湿润剂包括甘油、山梨醇、和其它可食用的多元醇如含量为约15％至约50％的低分子量聚乙二醇。为提供发泡特性和抗干之间的最佳平衡，总水与总湿润剂的比率可为约0.65:1至约1.5:1，或约0.85:1至约1.3:1。

本文的口腔护理组合物的粘度可受所述组合物存在的牛顿液体粘度的影响。这些可为纯液体如甘油或水，或溶质在溶剂中的溶液如山梨醇的水溶液。牛顿液体对非牛顿口腔护理组合物粘度的贡献度将取决于牛顿液体所掺入的量。水可以显著量存在于口腔护理组合物中，并且在25℃下具有大约1mPa.s的牛顿粘度。湿润剂诸如甘油和山梨醇溶液通常具有显著高于水的牛顿粘度。因此，湿润剂的总含量、水与湿润剂的比率、和湿润剂的选择有助于确定口腔护理组合物的高剪切速率粘度。

可使用常见的湿润剂如山梨醇、甘油、聚乙二醇、丙二醇、以及它们的混合物，但是所用具体含量和比率将根据湿润剂的选择而不同。可使用山梨醇，但是由于其较高的牛顿粘度，在某些实施方案中不能以按所述组合物的重量计高于45％的含量掺入，因为它显著有助于口腔护理组合物的高剪切速率粘度。相反，丙二醇可以更高含量使用，因为它具有比山梨醇低的牛顿粘度，从而不大幅促进口腔护理组合物的高剪切速率粘度。甘油具有介于山梨醇和聚乙二醇之间的中间牛顿粘度。

乙醇也可存在于口腔护理组合物中。这些量按所述总组合物的重量计可在约0.5至约5％，或约1.5至约3.5％的范围内。乙醇可为可用的溶剂，并且还可用于增强调味剂的影响，然而在该后一方面，通常仅使用低含量。也可使用非乙醇溶剂如丙二醇。也可用于本文的是低分子量聚乙二醇。

本发明的口腔护理组合物可包含牙齿磨料，诸如牙粉中使用的那些。研磨剂用于抛光牙齿，移除表面沉积物，或二者。设想可用于本文的磨料可以是任何不会过度磨损牙质的物质。适宜的研磨剂包括不溶性磷酸盐磨光剂，如磷酸二钙、磷酸三钙、焦磷酸钙、β-相焦磷酸钙、二水合磷酸二钙、无水磷酸钙、不溶性偏磷酸钠等。还适宜的是白垩型研磨剂，如碳酸钙和碳酸镁、二氧化硅(包括干凝胶、水凝胶、气凝胶和沉淀)、氧化铝及其水合物(如α-三水合氧化铝)、硅铝酸盐(如煅烧硅酸铝和硅酸铝)、硅酸镁和硅酸锆(如三硅酸镁)以及热固性聚合树脂(如脲和甲醛的颗粒状缩合产物)、聚甲基丙烯酸甲酯、粉末状聚乙烯等，如美国专利 3,070,510中所公开的。还可使用研磨剂的混合物。磨料抛光材料一般具有约0.1至约30μm，或约1至约15μm的平均粒度。

多种类型的二氧化硅牙齿研磨剂可提供杰出的牙齿清洁和抛光性能，而不会过度地磨损牙釉或牙质。所述二氧化硅研磨剂可以是沉淀二氧化硅或硅胶，诸如美国专利3,538,230和美国专利3,862,307中所述的二氧化硅干凝胶。可使用具有30g/100g至100g/100g二氧化硅的油吸收度的二氧化硅。已发现，具有低油吸收水平的二氧化硅是较低结构化的，因此不将口腔护理组合物的粘度增加至与较高度结构化，从而具有较高油吸收水平的那些二氧化硅相同的程度。如本文所用，通过测定二氧化硅在25摄氏度下可吸收的亚麻籽油的最大量，测量油吸收度。

适宜研磨剂的含量按所述总组合物的重量计可为约0％至约20％，在某些实施方案中小于10％，如1％至10％。在某些实施方案中，可使用按所述总组合物的重量计3％至5％的研磨剂含量。

为防龋保护，口腔护理组合物中一般存在氟离子源。氟化物源包括氟化钠、氟化钾、氟化钙、氟化亚锡、一氟磷酸亚锡和一氟磷酸钠。适宜的量提供按所述口腔护理组合物的重量计25ppm至2500ppm的可用氟离子。

适宜的螯合剂包括有机酸和它们的盐，如酒石酸及其可药用的盐、柠檬酸和柠檬酸碱金属盐、以及它们的混合物。螯合剂能络合存在于细菌细胞壁中的钙。螯合剂也可通过从钙桥中除去钙而破坏牙斑，所述钙桥有助于保持该生物质完整。然而，可使用对钙具有过高亲和力，造成牙齿脱矿质的螯合剂。在某些实施方案中，所述螯合剂具有约101至约105的钙结合常数以提供减少牙斑和结石形成的改善的清洁作用。可用于本发明制剂中的螯合剂的量为约0.1％至约2.5％，约0.5％至约2.5％，或约1.0％至约 2.5％。酒石酸盐螯合剂可单独使用或与其它任选螯合剂组合使用。

尤其适用作本发明中螯合剂的另一类试剂是可用作抗牙结石剂的水溶性多磷酸盐、聚膦酸盐和焦磷酸盐。本发明组合物中所用的焦磷酸盐可以是任何焦磷酸碱金属盐。可用于本发明组合物中的有效量的焦磷酸盐一般足以提供至少1.0％的焦磷酸根离子，或约1.5％至约6％的此类离子。焦磷酸盐更详细地描述于Kirk&Othmer的“Encyclopedia ofChemical Technology”第二版第15卷中(Interscience Publishers，1968)。

可使用水溶性多磷酸盐如三聚磷酸钠、三聚磷酸钾和六偏磷酸钠。此类型的其它长链抗牙结石剂描述于WO98/22079中。还优选水溶性二膦酸盐。适宜的可溶性二膦酸盐包括乙烷-1-羟基-1,1-二膦酸盐(EHDP)和氮杂 -环庚烷-二膦酸盐(AHP)。三聚磷酸盐和二膦酸盐是尤其有效的，因为它们提供抗牙垢活性和去污活性，而不及低水溶性化学去污剂那样增加粘度，并且在水解方面是稳定的。可溶的多磷酸盐和二膦酸盐有利地作为脱色活性物质。不受理论的束缚，据信这些成分通过使染污薄膜从牙齿釉质表面上解吸来移除污渍。水溶性多磷酸盐和二膦酸盐的适宜含量为按所述口腔护理组合物的重量计约0.1％至约10％，约1％至约5％，或约1.5％至约3％。

还适用于本发明的其它可能类的螯合剂是阴离子聚合的聚羧酸酯。此类材料是本领域众所周知的，它们以其游离酸或部分中和或优选完全中和的水溶性碱金属(例如钾，并且优选钠)盐或铵盐的形式应用。附加的聚合多羧酸盐公开于美国专利4,138,477和美国专利4,183,914中，并包括马来酸酐与苯乙烯、异丁烯或乙基乙烯基醚的共聚物；聚丙烯酸、聚衣康酸和聚马来酸；和商品名为Uniroyal ND-2的MW低到1,000的磺基丙烯酸低聚物。

抗微生物剂也可用于本发明。可使用多种抗微生物剂，包括亚锡盐诸如焦磷酸亚锡和葡萄糖酸亚锡；锌盐，诸如乳酸锌和柠檬酸锌；铜盐，诸如双甘氨酸铜；季铵盐，诸如十六烷基吡啶鎓氯化物和十四烷基乙基吡啶鎓氯化物；双-缩二胍盐；以及非离子抗微生物剂诸如三氯生。某些调味油如百里酚也可具有抗微生物活性。此类试剂公开于美国专利2,946,725和美国专利4,051,234中。还可用的是亚氯酸钠，描述于WO 99/43290中。

如果存在抗微生物剂的话，其通常以约0.01％至约10％的包含在内。可使亚锡和阳离子抗微生物剂的含量保持小于约5％，或小于约1％，以避免牙齿变色问题。

在某些实施方案中，抗微生物剂是非阳离子抗微生物剂，诸如美国专利5,037,637中描述的那些。尤其有效的抗微生物剂是2',4,4'-三氯-2-羟基二苯醚(三氯生)。

本发明组合物中的任选成分为硅油。硅油可用作牙斑阻挡层，如WO 96/19191中所公开的。适宜的硅油种类包括但不限于聚二甲基硅氧烷、聚二甲基硅氧烷醇、聚二甲基硅氧烷共聚多元醇和氨基烷基硅氧烷。硅油通常以约0.1重量％至约15重量％，约0.5重量％至约5重量％，或约0.5重量％至约3重量％的含量存在。

甜味剂如糖精钠、环己氨基磺酸钠、丁磺氨钾、天冬甜素、蔗糖等可以约0.1至5重量％的含量包含在内。也可掺入其它添加剂，包括调味剂、防腐剂、遮光剂和着色剂。典型的着色剂为D&C黄10号、FD&C蓝1 号、FD&C红40号、D&C红33号、以及它们的组合。着色剂的含量可在约0.0001至约0.1％的范围内。

所述口腔护理组合物优选包含至少一种在定向使用时促进一种或多种有益效果而不损害其施用到的口腔部分的含量的核酸适配体。在本发明的某些实施方案中，所述口腔护理组合物包含介于约0.00001％至约10％之间的至少一种核酸适配体。在另一个实施方案中，所述口腔护理组合物包含介于约0.00005％至约5％之间的至少一种核酸适配体。在另一个实施方案中，所述口腔护理组合物包含介于约0.0001％至约1％之间的至少一种核酸适配体。

在另一个实施方案中，口腔护理组合物包含至少一种肽适配体；其中所述至少一种肽适配体具有对口腔部分的结合亲和力，所述口腔部分选自：牙齿、牙釉质、牙本质和口腔中的任何其他表面。在另一个实施方案中，所述至少一种肽适配体具有对牙齿的结合亲和力。

当结合到口腔部分上时，本发明的适配体可提供若干有益效果，包括但不限于牙齿再矿化(例如，通过改善牙齿上的钙沉积)、牙齿耐酸、牙齿外观和结构改变、防污(例如，通过排斥牙齿变色材料如染料或颜料)、牙斑预防、牙垢预防和腔体预防和治疗。例如，如果包含氟化核苷酸的适配体在结合后降解或分解，则它们可有效地向牙齿递送氟离子，这可提供对腔体的有益预防效果。氟化核苷酸的非限制性示例包括氟磷酸酯核苷酸、2'-氟脱氧核糖核苷酸和具有氟化核酸碱基的核苷酸。

结合到特定靶标(例如，牙齿)的不同表位上的适配体的组合使用可在不同个体之间提供更大的总体靶标覆盖率和/或功效。与不同表位结合的适配体的鉴定可通过对如在实施例3中所述的SELEX选择轮期间的寡核苷酸频率变化进行协方差分析来实现。在本发明的某些实施方案中，口腔护理组合物包含至少两种不同的核酸适配体；其中所述至少两种不同的核酸适配体对牙齿的不同表位具有结合亲和力。在另一个实施方案中，所述至少两种不同的核酸适配体选自SEQ ID NO 1、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO 25、 SEQ ID NO 112、SEQID NO 120、SEQ ID NO 136、和SEQ ID NO 223至 SEQ ID NO 234。

本发明的适配体也可配制在口腔护理产品中以将活性成分有效递送至口腔部分。在本发明的某些实施方案中，一种用于将一种或多种口腔护理活性成分递送至口腔的方法包括施用包含至少一种核酸适配体和一种或多种口腔护理活性成分的口腔护理组合物；其中所述至少一种核酸适配体和所述一种或多种口腔护理活性成分是共价或非共价附接的；并且其中所述至少一种核酸适配体具有对口腔部分的结合亲和力。这些口腔护理活性成分解决的口腔症状的示例包括但不限于，牙齿的外观和结构变化、增白、牙垢预防和去除、牙垢漂白、牙斑预防和去除、牙石预防和去除、龋齿预防和治疗、发炎和/或牙龈出血、粘膜受伤、损害、溃疡、口疮性溃疡、感冒疮和牙齿脓肿。

在另一个实施方案中，所述递送一种或多种口腔护理活性成分的方法中的口腔部分选自：牙齿、牙釉质、牙本质和口腔中的任何其他表面。在另一个实施方案中，所述口腔部分是牙齿。

在另一个实施方案中，一种用于将一种或多种口腔护理活性成分递送至口腔的方法包括施用包含至少一种肽适配体和一种或多种口腔护理活性成分的口腔护理组合物；其中所述至少一种肽适配体和所述一种或多种口腔护理活性成分是共价或非共价附接的；并且其中所述至少一种肽适配体具有对口腔部分的结合亲和力。

在另一个实施方案中，所述一种或多种口腔护理活性成分选自：增白剂、亮白剂、防污剂、抗龋剂、抗蚀剂、抗牙石剂、抗牙结石剂、抗牙斑剂、牙齿再矿化剂、抗破碎剂、强化剂、耐磨损剂、抗齿龈炎剂、抗微生物剂、抗细菌剂、抗真菌剂、抗酵母剂、抗病毒剂、防口臭剂、口气清新剂、芳香剂、凉爽剂、口味增强剂、味道增强剂、抗附着剂、平滑剂、表面修饰剂、抗牙齿疼痛剂、抗敏感剂、抗炎剂、牙龈保护剂、牙周活性剂、组织再生剂、抗凝血剂、抗凝块稳定剂、唾液刺激剂、唾液流变改性剂、保留增强剂、软/硬组织靶向剂、牙齿/软组织清洁剂、抗氧化剂、pH 调节剂、H-2拮抗剂、止痛剂、天然提取物和精油、染料、光学亮白剂、阳离子、磷酸盐、氟离子源、肽、营养物质、酶、口喉产品、和它们的混合物。本发明还包括本领域先前公开的其他口腔护理活性成分。在另一个实施方案中，所述口腔护理活性成分选自染料和光学亮白剂。在另一个实施方案中，所述口腔护理活性成分选自染料和光学亮白剂，并且所述至少一种核酸适配体具有对牙齿的结合亲和力。

亮白剂的非限制性示例为染料、光学亮白剂、过氧化物、金属亚氯酸盐、过硼酸盐、过碳酸盐、过氧酸、以及它们的混合物。适合的过氧化物包括过氧化氢、过氧化钙、过氧化脲、以及它们的混合物。最优选过氧化脲。适宜的金属亚氯酸盐包括亚氯酸钙、亚氯酸钡、亚氯酸镁、亚氯酸锂、亚氯酸钠和亚氯酸钾。附加的增白活性组分可以是次氯酸盐和二氧化氯。优选的亚氯酸盐是亚氯酸钠。

染料和光学亮白剂可在牙齿上提供所期望的美白效果和其他美容效果。染料的非限制性示例是三芳基甲烷染料，包括亮蓝FCF(FD&C蓝1或 D&C蓝4)、快速绿FCF(FD&C绿色3)和专利蓝V；靛蓝染料，包括靛蓝胭脂红(FD&C蓝2)；蒽醌染料，包括日落紫13(D&C紫2)；偶氮染料；呫吨染料；天然染料，包括叶绿素、螺旋藻和花青素；它们的衍生物；以及它们的混合物。

光学亮白剂，也称为荧光增白剂，为有机化合物，其在溶液中为无色至浅色，吸收紫外光(例如，来自日光，约300-430nm)，并且将大部分吸收的能量重新发射为蓝色荧光(400-500nm)。因此，在日光中，光学亮白剂可补偿存在于牙齿和其他材料中的通常不期望的黄色调。此外，由于白天UV 光(未被眼睛感知)被转换为可见光，因此可增强牙齿的亮度以产生亮白光彩。光学亮白剂的非限制性示例为碳环(carbocyles)、芪和4,4'-二氨基芪的衍生物，包括4,4'-二氨基-2,2'-芪二磺酸；二苯乙烯基苯、二苯乙烯基联苯和二乙烯基芪的衍生物；三嗪基胺基芪的衍生物；芪基-2H-三唑的衍生物；苯并噁唑、芪基苯并噁唑和双(苯并噁唑)的衍生物；呋喃、苯并[b]呋喃、苯并咪唑、双(苯并[b]呋喃-2-基)联苯、和阳离子苯并咪唑的衍生物； 1,3-二苯基-2-吡唑啉的衍生物；香豆素的衍生物；萘甲酰亚胺的衍生物； 1,3,5-三嗪-2-基的衍生物；双(苯并噁唑-2-基)的衍生物；以及它们的混合物。通常使用的光学亮白剂的综述见于《光学亮白剂》(Siegrist,A.E., Eckhardt,C.,Kaschig,J.和Schmidt,E.；Ullmann’s Encyclopedia of Industrial Chemistry,Wiley and Sons,2003)，其内容通过引用并入本文。在本发明的某些实施方案中，所述口腔护理活性成分为4,4'-二氨基-2,2'-芪二磺酸。

抗龋剂的非限制性示例为：a)含磷剂，包括多磷酸盐诸如焦磷酸盐、三聚磷酸盐、三偏磷酸盐和六偏磷酸酯；有机磷酸盐，诸如甘油磷酸盐、植酸盐、1,6-二磷酸果糖、乳磷酸钙、酪蛋白-磷肽无定形磷酸钙(CPP-ACP) 和酪蛋白酸钠；磷蛋白；膦酸酯，诸如乙烷羟基二膦酸酯；和磷硅酸盐；b) 含钙剂，包括乳酸钙；c)抗微生物剂；d)金属及其阳离子，包括锌、锡、铝、铜、铁和钙；e)其他有机试剂，包括柠檬酸盐；和f)氟离子源试剂，包括氟化钠、氟化亚锡、胺类氟化物诸如olaflur(氟化胺297)和地克他氟 (dectaflur)、单氟磷酸钠、氟硅酸盐、氟代锆酸盐、氟锡酸盐 (fluorostannites)、氟硼酸盐、氟钛酸盐和氟锗酸盐。阳离子的非限制性示例是Ca²⁺、Sn²⁺、Sn⁴⁺、Zn²⁺、Al³⁺、Cu²⁺、Fe²⁺和Fe³⁺。

已知用于牙齿护理产品中的抗牙垢剂还包括磷酸盐，诸如焦磷酸盐、多磷酸盐、多膦酸盐以及它们的混合物。焦磷酸盐是最熟知用于牙齿护理产品的物质之一。递送至牙齿的焦磷酸根离子衍生自焦磷酸盐。本发明组合物中所用的焦磷酸盐包括焦磷酸碱金属盐、焦磷酸四碱金属盐，以及它们的混合物。优选的物类为焦磷酸二氢二钠(Na₂H₂P₂O₇)、焦磷酸四钠 (Na₄P₂O₇)和焦磷酸四钾(K₄P₂O₇)，它们均为未水合以及水合形式。虽然可使用上述任何焦磷酸盐，但优选焦磷酸四钠盐。

所述焦磷酸盐更详细地描述于Kirk-Othmer的Encyclopedia of ChemicalTechnology，第三版，第17卷，Wiley-Interscience Publishers(1982)中。附加的抗牙结石剂包括焦磷酸盐或多磷酸盐，其公开于1986年5月20日授予Parran和Sakkab的美国专利4,590,066中；聚丙烯酸酯和其他聚羧酸盐，诸如1969年2月25日授予Shedlovsky的美国专利3,429,963、1981年 12月8日授予Chang的美国专利4,304,766和1987年4月28日授予Benedict和Sunberg的美国专利4,661,341中所公开的那些；聚环氧琥珀酸盐，诸如1989年7月11日授予Benedict、Bush和Sunberg的美国专利 4,846,650中公开的那些；1937年2月15日的英国专利490,384中公开的乙二胺四乙酸；1972年7月18日授予Widder和Briner的美国专利3,678,154 中公开的次氮基三乙酸和相关化合物；1973年6月5日授予Francis的美国专利3,737,533、1976年10月26日授予Ploger、Schmidt-Dunker和 Gloxhuber的美国专利3,988,443和1989年10月31日授予Degenhardt和 Kozikowski的美国专利4,877,603中公开的多磷酸盐。抗牙结石磷酸盐包括焦磷酸钾和焦磷酸钠；三聚磷酸钠；二膦酸盐，诸如乙烷-1-羟基-1,1-二膦酸盐、1-氮杂环庚烷-1,1-二膦酸盐以及直链烷基二膦酸盐；直链羧酸；以及柠檬酸锌钠。

可用于代替焦磷酸盐或者与焦磷酸盐组合使用的试剂包括下述这些已知的材料，如合成的阴离子聚合物，包括聚丙烯酸盐和马来酸酐或马来酸与甲基乙烯基醚的共聚物(例如Gantrez)(例如在授予Gaffer等人的美国专利4,627,977中所述的)，以及例如聚氨基丙磺酸(AMPS)、三水合柠檬酸锌、多磷酸盐(例如，三磷酸盐；六偏磷酸盐)、二膦酸盐(例如EHDP；AHP)、多肽(如聚天冬氨酸和聚麸胺酸)、以及它们的混合物。

氟离子源在口腔护理组合物中用作防龋剂是为人们所熟知的。氟离子包含在用于此目的的许多口腔护理组合物尤其是洁齿剂中。公开此类洁齿剂的专利包括授予Pader等人的美国专利3,538,230；授予Pader的美国专利 3,689,637；授予Colodney等人的美国专利3,711,604；授予Harrison的美国专利3,911,104；授予Roberts等人的美国专利3,935,306；和授予Wason的美国专利4,040,858。

将氟离子施用到牙釉质上可用于防止蛀牙。多种氟离子产生材料可被用作即用组合物(instant compositions)中的可溶的氟化物源。合适的产生氟离子的材料的示例可见于Briner等人的美国专利3,535,421；1970年10 月20日授权；以及Widder等人的美国专利3,678,154；1972年7月18日授权。可用于本文的优选的氟离子来源包括氟化钠、氟化钾和氟化铵。尤其优选氟化钠。

抗微生物剂也可存在于本发明的口腔护理组合物或物质中。此类试剂可包括但不限于三氯生；5-氯-2-(2,4-二氯苯氧基)-苯酚，如《默克索引 (The Merck Index)，第11版，(1989)》第1529页(编目流水号 9573)(The Merck Index,11th ed.(1989),pp.1529(entryno.9573))、美国专利3,506,720、以及1988年1月7日公布的Beecham Group,PLC的欧洲专利申请0,251,591中所述；氯己定(Merck Index号2090)、阿来西定 (Merck Index号222)；合克替啶(Merck Index号4624)；血根碱 (Merck Index号8320)；苯扎氯铵(Merck Index号1066)；水杨酰苯胺 (Merck Index号8299)；杜灭芬(Merck Index号3411)；十六烷基氯化吡啶鎓(CPC)(Merck Index号2024)；氯化十四烷基吡啶(TPC)；氯化N-十四烷基-4-乙基吡啶(TDEPC)；癸双辛胺啶；地莫匹醇、辛哌乙醇和其它哌啶子基衍生物；乳链菌肽制剂；锌/亚锡离子试剂；细菌素；抗生素诸如沃格孟汀、阿莫西林、四环素、强力霉素、米诺环素以及甲硝唑；以及上述抗微生物抗牙斑剂的类似物和盐；精油，包括百里酚、香叶醇、香芹酚、柠檬醛、桧木醇、桉叶脑、儿茶酚(具体地，4-烯丙基儿茶酚) 以及它们的混合物；水杨酸甲酯；过氧化氢；亚氯酸金属盐，以及它们的混合物。

芳香剂和凉爽剂的非限制性示例是薄荷醇、薄荷酮、乙酸甲酯、薄荷基呋喃、1,8-桉油醇、R-(-)-香芹酮、柠檬烯、二氢香芹酮、水杨酸甲酯、糖醇或多元醇(例如，木糖醇、山梨糖醇和赤藓糖醇)、以及它们的衍生物。牙齿再矿化剂的非限制性示例是羟基磷灰石纳米晶体。

抗炎剂也可存在于本发明的口腔护理组合物或物质中。此类试剂可以包括但不限于非甾族抗炎剂或NSAID，例如酮咯酸、氟比洛芬、布洛芬、萘普生、消炎痛、阿斯匹林、酮洛芬、吡罗昔康和甲氯芬那酸。NSAID如酮咯酸的使用，受1997年5月6日公布的美国专利5,626,838权利要求书的保护。其中公开了通过向口腔或口咽局部施用有效量的NSAID来预防和/或治疗口腔或口咽中原发性和复发性鳞状细胞癌的方法。

营养物质可改善口腔状况。营养物质包括矿物质、维生素、口腔营养增补剂、肠内营养增补剂，以及它们的混合物。可包含在本发明组合物中的矿物质包括钙、磷、氟化物、锌、锰、钾以及它们的混合物。这些矿物质公开于“Drug Facts and Comparisons”(活页医药品信息服务)，Wolters Kluer Company,St.Louis,Mo.,(c)1997,第10-17页中。维生素可与矿物质一起被包含或者分别使用。维生素包括维生素C和D、硫胺素、核黄素、泛酸钙、烟酸、叶酸、烟酰胺、吡哆素、氰钴胺、对-氨基苯甲酸、生物类黄酮、以及它们的混合物。此类维生素公开于“Drug Facts and Comparisons” (活页医药品信息服务)，Wolters KluerCompany，St.Louis,Mo.， (c)1997，第3-10页中。口腔营养补充剂包括氨基酸、抗脂肪肝剂、鱼油、以及它们的混合物，如“Drug Facts and Comparisons”(活页医药品信息服务)，Wolters Kluer Company，St.Louis,Mo.，(c)1997，第54-54e页中所公开的。氨基酸包括L-色氨酸、L-赖氨酸、甲硫氨酸、苏氨酸、左旋肉毒碱或L-肉毒碱、以及它们的混合物。抗脂肪肝剂包括但不限于胆碱、肌醇、甜菜碱、亚油酸、亚麻酸，以及它们的混合物。鱼油含有大量ω-3(N- 3)多不饱和脂肪酸、二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸。肠内营养补充剂包括但不限于蛋白质产品、葡萄糖聚合物、玉米油、红花油、中链甘油三酯，如“Drug Facts andComparisons”(活页医药品信息服务)，Wolters Kluer Company，St.Louis,Mo.，(c)1997，第55-57页中所公开的。

当用于清洁口腔时，酶可提供若干有益效果。蛋白酶分解吸收于牙齿表面并形成薄膜(所得牙斑的第一层)的唾液蛋白质。蛋白酶连同脂肪酶，通过裂解形成细菌胞壁和胞膜结构组分的蛋白质和类脂，来破坏细菌。葡聚糖酶破坏由形成基质以粘附细菌的细菌所产生的有机骨架结构。蛋白酶和淀粉酶通过分解与钙结合的碳水化合物-蛋白质复合物，防止矿化，不仅可防止牙斑形成，而且可防止牙结石生长。适用于本发明的酶包括任何市售的蛋白酶、葡聚糖水解酶、内糖苷酶、淀粉酶、突变酶、脂肪酶和粘蛋白酶或它们相容的混合物。优选的为蛋白酶、葡聚糖酶、内糖苷酶和突变酶，最优选为木瓜蛋白酶、内糖苷酶或葡聚糖酶和突变酶的混合物。适用于本发明的附加的酶公开于以下专利中：授予Dring等人的美国专利5,000,939；授予Neeser的4,992,420；授予Rabussay的4,355,022；授予 Pader的4,154,815；授予Colodney的4,058,595；授予Virda等人的 3,991,177和授予Weeks的3,696,191。

可与本发明一起使用的其他物质包括通常所知的口腔和喉部产品。此类产品公开于“Drug Facts and Comparisons”(活页医药品信息服务)， Wolters Kluer Company，St.Louis,Mo.，(c)1997，第520b-527页中。这些产品包括抗真菌剂、抗生素和止痛药剂。

抗氧化剂一般被认为可用于组合物中，如本发明中的那些。抗氧化剂公开于教科书中，如Cadenas和Packer的“The Handbook of Antioxidants” (c)1996(Marcel Dekker，Inc.)。可包含于本发明的口腔护理组合物或物质中的抗氧化剂包括但不限于维生素E、抗坏血酸、尿酸、类胡萝卜素、维生素A、类黄酮和多酚、草本植物抗氧化剂、褪黑激素、氨基吲哚、硫辛酸、以及它们的混合物。

在另一个实施方案中，一种用于将一种或多种口腔护理活性成分递送至口腔的方法包括施用包含至少一种核酸适配体和一种或多种纳米材料的口腔护理组合物；其中所述至少一种核酸适配体和所述一种或多种纳米材料是共价或非共价附接的；并且其中所述至少一种核酸适配体具有对口腔部分的结合亲和力。

在另一个实施方案中，一种用于将一种或多种口腔护理活性成分递送至口腔的方法包括施用包含a)至少一种核酸适配体；b)一种或多种纳米材料；和c)一种或多种口腔护理活性成分的口腔护理组合物；其中所述至少一种核酸适配体和所述一种或多种纳米材料是共价或非共价附接的；并且其中所述至少一种核酸适配体具有对口腔部分的结合亲和力。在另一个实施方案中，所述一种或多种口腔活性成分共价或非共价地附接至所述一种或多种纳米材料。在仍另一个实施方案中，所述一种或多种口腔护理活性成分由所述一种或多种纳米材料承载。

纳米材料的非限制性示例为金纳米粒子、纳米级铁氧化物、碳纳米材料(诸如单壁碳纳米管和石墨烯氧化物)、介孔二氧化硅纳米粒子、量子点、脂质体、聚(丙交酯-共-乙醇酸)纳米粒子、聚合物胶束、树枝状聚合物、血清白蛋白纳米粒子和基于DNA的纳米材料。

除了至少一种核酸适配体之外，本发明的口腔护理组合物还可包括表面活性剂和/或洗涤剂、抛光剂、磨料、粘合剂、载体、增稠剂、湿润剂、盐和其他成分。表面活性剂或洗涤剂可提供所期望的起泡品质。适宜的表面活性剂为在整个宽的pH值范围内具有适度稳定性和泡沫的那些。表面活性剂可为阴离子的、非离子的、两性的、两性离子的、阳离子的、或它们的混合物。可用于本文的阴离子表面活性剂包括烷基中具有8至20个碳原子的烷基硫酸的水溶性盐(如烷基硫酸钠)和具有8至20个碳原子的脂肪酸的磺化单酸甘油酯的水溶性盐。这类阴离子表面活性剂的示例是月桂基硫酸钠和椰子基单酸甘油酯磺酸钠。其他适宜的阴离子表面活性剂为肌氨酸盐如月桂酰肌氨酸钠、牛磺酸盐、月桂基磺基乙酸钠、月桂酰羟乙基磺酸钠、月桂基聚氧乙烯醚羧酸钠和十二烷基苯磺酸钠。也可使用阴离子表面活性剂的混合物。许多适宜的阴离子表面活性剂公开于全文以引用方式并入本文的1976年5月25日公布的Agricola等人的美国专利号3,959,458 中。可用于本发明组合物中的非离子表面活性剂，可广义地定义为由环氧烷基团(本身亲水的)与本身可为脂族或烷基芳族的有机疏水化合物缩合而生成的化合物。适宜的非离子表面活性剂的例子包括泊洛沙姆(以商品名Pluronic出售)、聚氧乙烯、聚氧乙烯脱水山梨糖醇酯(以商品名 Tweens出售)、脂肪醇乙氧基化物、烷基酚与聚环氧乙烷的缩合物、衍生自环氧乙烷与环氧丙烷和乙二胺的反应产物的缩合产物、脂肪醇的环氧乙烷缩合物、长链叔胺氧化物、长链叔膦氧化物、长链二烷基亚砜、以及此类物质的混合物。可用于本发明的两性表面活性剂可被广泛描述为脂族仲胺和叔胺的衍生物，其中脂族基团可以是直链或支链的，并且其中一个脂族取代基包含约8至约18个碳原子，并且一个包含阴离子水增溶基团，例如羧酸根、磺酸根、硫酸根、磷酸根或膦酸根。其他合适的两性表面活性剂是甜菜碱，具体地讲为椰油酰胺基丙基甜菜碱。也可使用两性表面活性剂的混合物。这些适宜的非离子和两性表面活性剂中的很多公开于全文以引用方式并入本文的1977年9月27日授权的Gieske等人的美国专利号 4,051,234中。本发明组合物通常包含一种或多种表面活性剂，每一种的含量按所述组合物的重量计为约0.25％至约12％，优选约0.5％至约8％，并且最优选约1％至约6％。

所述粘合剂体系通常是决定所述口腔护理组合物流变学特性的主要因素。所述粘合剂也用来使口腔护理组分中的任何固相保持悬浮，因此防止所述口腔护理组分中的固相部分从液相部分中分离出来。此外，所述粘合剂还可为所述口腔护理组合物提供稠度或浓度。因此，在一些情况下，粘合剂也可为口腔护理组合物提供增稠功能。粘合剂的示例包括羧甲基纤维素钠、纤维素醚、黄原胶、角叉菜胶、藻酸钠、丙烯酸聚合物或硅酸盐诸如水合硅酸锂镁钠。适宜粘合剂的其它实施例包括聚合物如羟丙基甲基纤维素、羟乙基纤维素、瓜耳胶、黄蓍胶、刺梧桐树胶、阿拉伯树胶、爱尔兰苔、淀粉和藻酸盐。可供选择地，所述粘合剂可包括粘土，例如，合成粘土如锂蒙脱石，或天然粘土。每种粘合剂可单独使用或与其它粘合剂组合使用。

增稠剂的非限制性示例包括增稠二氧化硅、聚合物、粘土、以及它们的组合。按重量计含量介于约4％至约8％(例如约6％)的增稠二氧化硅，例如SILODENT 15水合二氧化硅，提供了所期望的口腔特性。本文所述短语“口腔特性”是指，当洁齿剂在使用者口腔中起泡时，它的稠度和浓度。

抛光剂的非限制性示例包括研磨材料诸如碳酸盐(例如碳酸氢钠、碳酸钙)、水-胶态二氧化硅、沉淀二氧化硅(例如二氧化硅水合物)、硅铝酸钠、包含氧化铝的各等级二氧化硅、水合氧化铝、磷酸二钙、磷酸氢钙、焦磷酸钙、焦磷酸钙(β相)、羟基磷灰石、不溶性偏磷酸钠和镁(例如磷酸三镁)。抛光剂的适宜量是可安全提供良好抛光性和清洁性，并且当与其它成分混合时，可提供光滑、可流动且无过多砂粒质组合物的量。一般而言，当包含抛光剂时，它们的含量按重量计为约5％至约50％(例如约 5％至约35％，或约7％至约25％)。

载体的示例包括水、聚乙二醇、甘油、聚丙二醇、淀粉、蔗糖、醇 (如，甲醇、乙醇、异丙醇等)，或它们的组合。组合的示例包括各种水与醇组合和各种聚乙二醇与聚丙二醇组合。一般而言，载体含量根据所述粘合剂体系的浓度，以及溶解的盐、表面活性剂和分散相的量来确定。

通常，湿润剂是多元醇。湿润剂的示例包括甘油、山梨醇、丙二醇、木糖醇、乳糖醇、聚丙二醇、聚乙二醇、氢化玉米糖浆以及它们的混合物。一般来讲，当包含湿润剂时，它们的含量按重量计为约10％至约 60％。

缓冲剂和盐的示例包括伯、仲或叔碱金属磷酸盐、柠檬酸、柠檬酸钠、糖精钠、焦磷酸四钠、氢氧化钠等。本发明的口腔护理组合物还可包含活性成分，例如以防止龋齿、增白牙齿、清新口气、递送口服药物、以及提供其他治疗和美容有益效果诸如上述那些。活性成分的示例包括下列：防龋剂(例如，水溶性氟化物盐、氟硅酸盐、氟锆酸盐、氟亚锡酸盐、氟硼酸盐、氟钛酸盐、氟锗酸盐、混合的卤化物和酪蛋白)；抗牙垢剂；抗牙结石剂(例如碱金属焦磷酸盐、包含次磷酸根的聚合物、有机磷酸柠檬酸盐、磷酸柠檬酸盐、多磷酸盐)；抗菌剂(例如细菌素、抗体、酶)；抗菌增强剂；抗微生物剂(例如三氯生，氯己定，铜盐、锌盐和亚锡盐诸如柠檬酸锌、硫酸锌、甘氨酸锌，血根碱提取物、甲硝唑、季铵化合物诸如氯化十六烷基吡啶鎓；双胍诸如葡萄糖酸氯己定、合克替啶、癸双辛胺啶、阿来西定；以及卤化双酚化合物，诸如2,2'亚甲基二-(4-氯-6-溴酚))；脱敏剂(例如柠檬酸钾、氯化钾、酒石酸钾、碳酸氢钾、草酸钾、硝酸钾和锶盐)；美白剂(例如漂白剂，诸如过氧化合物，例如过氧二磷酸钾)；抗牙斑剂；齿龈保护剂(例如植物油，诸如葵花籽油、油菜籽油、大豆油和红花油，以及其他油，诸如硅油和烃油)。所述齿龈保护剂可以是能够改善齿龈的渗透性屏障的物质。其它活性成分包括创伤康复剂(例如脲、尿囊素、泛醇、碱金属硫氰酸盐、基于春黄菊的活性物质和乙酰水杨酸衍生物、布洛芬、氟比洛芬、阿司匹林、吲哚美辛等)；牙齿缓冲剂；脱矿质剂；抗炎剂；除恶臭剂；口气清新剂；以及用于治疗口腔病症诸如齿龈炎或牙周炎的试剂。

本发明的口腔护理组合物还可包含一种或多种其他成分，包括：酚类化合物(例如，苯酚及其同系物，包括2-甲基苯酚、3-甲基苯酚。4-甲基苯酚、4-乙基苯酚、2,4-二羟甲基苯酚、和3,4-二羟甲基苯酚)；甜味剂(例如糖精钠、环己氨基磺酸钠、蔗糖、乳糖、麦芽糖和果糖)；风味剂(例如薄荷油、留兰香油、桉树油、大茴香子油、小茴香油、藏茴香油、乙酸甲酯、肉桂醛、茴香脑、香草醛、百里酚以及其它天然或天然等同精油或合成风味剂)；防腐剂(例如对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯或对羟基苯甲酸丙酯、山梨酸钠、苯甲酸钠、溴氯芬、三氯生、合克替啶、水杨酸苯酯、双胍和过氧化物)；遮光剂和着色剂，诸如二氧化钛或FD&C 染料；以及维生素，诸如视黄醇、生育酚或抗坏血酸。

下文示出了合成可用于口腔护理组合物诸如洁齿剂的适配体的一个实施例。

适配体制备：

使用15mM的2’-氟CTP、15mM的2’-氟UTP、5mM的ATP、5mM 的GTP的混合物、T7突变型聚合酶(T7 R&DNA)和其他标准试剂的混合物，通过从相应双链DNA模板的酶促转录，合成了适配体SEQ ID NO 1、 SEQ ID NO 9和SEQ ID NO 25。然后根据制造商的使用说明书用ZymoRNA净化柱净化适配体，并用反应缓冲液(例如，具有EDTA的磷酸盐缓冲盐水(PBS)，其含有10mM磷酸钠、0.15M NaCl、10mM EDTA，pH 7.2)洗脱。

缀合反应：

首先，制备4,4’-二氨基-2,2’-芪二磺酸(0.25M)和咪唑(0.1M)在水中的溶液(pH6)。然后，在反应小瓶中称量EDC(1-乙基-3-[3-二甲基胺基丙基] 碳二亚胺盐酸盐)，并与如上制备的适配体溶液等分试样混合。将胺/咪唑溶液的等分试样立即加入该反应小瓶中并涡旋，直至所有组分溶解。将另外的咪唑溶液等分试样(0.1M，pH 6)加入该反应小瓶中，并且将反应混合物在室温下温育至少2小时。温育后，通过透析或通过使用旋转脱盐柱和合适的缓冲液(例如，10mM磷酸钠、0.15M NaCl、10mM EDTA，pH 7.2)将未反应的EDC及其副产物和咪唑与修饰的适配体分离。关于缀合方案的其他细节描述于“Hermanson G.T.(2008).Bioconjugate Techniques.第二版，第 969-1002页，Academic Press,San Diego.”中，其内容通过引用并入本文。

所制备的修饰适配体与4,4’-二胺基-2,2’-芪二磺酸在5'端缀合，并且可配制在口腔护理组合物(例如，洁齿剂)中，以在与牙齿接触时提供牙齿美白有益效果。

包含一种或多种本发明的适配体的潜在洁齿剂制剂的示例示于下表1 中。可使用本领域已知的标准方法，使用表1中列出的组分制备样品洁齿剂制剂。

表1

组分	组合物的重量％
		山梨醇溶液(70％)	32.577
氢氧化钠(50％溶液)	1.740
		水	适量
糖精钠	0.450
		黄原胶	0.300
氟化钠	0.243
		羧甲基纤维素	1.050
酸式焦磷酸钠	3.190
		卡波姆	0.300
风味剂	1.4
		月桂基硫酸钠(28％溶液)	6.000
云母二氧化钛	0.400
		适配体	0.1-0.01
二氧化硅	22
		总计	100

实施例

实施例1.适配体设计。

A.固定场的制备

通过合成在5'端上具有二硫基的八个核苷酸寡核苷酸的随机库(固定场库)来制备固定场，如其他地方所述(PLoS One.2018年1月5日； 13(1):e0190212)。简而言之，将8-mer硫醇化随机寡核苷酸库以10μM的最终浓度溶解于50μL的1X PBS缓冲液(pH 7.4)中。用连续五个10μL液滴的固定场库处理具有7mm×10mm×0.3mm尺寸的镀金载玻片表面(徳国西门铁克(Xantec,Germany))。然后使载片在室温下在暗处温育1小时，以便促进固定场库与金表面的缀合。

在这一温育期之后，认为固定场库已缀合到金表面上。移除剩余的溶液，并且使表面在室温下干燥。

然后用分子式为CH₃O-(CH₂CH₂O)_n-CH₂CH₂SH且平均分子量为550道尔顿的硫醇封端的短聚乙二醇(PEG-SH)封闭剩余表面。将浓度为286μM的 PEG-SH在1X PBS缓冲液中的溶液的50μL等分试样施用到芯片上，并且使其在室温下轻柔振荡温育过夜。在第二封闭步骤中重复这一过程，在室温下轻柔振荡温育30分钟。

在芯片封闭之后，在室温轻柔振荡下，用600μL的1X HEPES缓冲液 (10mM HEPES，pH 7.4，120mM NaCl、5mM KCl、5mM MgCl₂)洗涤后者5 分钟。

B.库准备

使用3:1的2’-氟嘧啶核苷酸与天然嘌呤核苷酸的混合物和T7突变型聚合酶(T7R&DNA)，将含有侧翼具有两个保守区即位于5’端的T7启动子序列(5’-GGGAAGAGAAGGACATATGAT-3’)和3’反向引物识别序列(5’- TTGACTAGTACATGACCACTT-3’)的40个核苷酸随机区的约10¹⁵个不同序列的DNA库转录为RNA。

将包含约10¹⁵个RNA序列的转录选择库的等分试样稀释在50μL的 1X选择缓冲液(10mM二甲胂酸盐缓冲液、120mM NaCl、5mM KCl、50μM SnF₂)中。添加等摩尔数目的与库序列的保守区互补的寡核苷酸(T7启动子引物和3'反向引物)或封闭剂，并以100μL的总体积与选择库一起温育。将这一溶液在45℃下加热10分钟，以确保去除可能干扰封闭剂对选择库的适当退火的任何二级或三级结构。然后通过使混合物平衡至室温15分钟，使封闭剂对选择库退火。

然后将这一封闭的选择库以连续五个10μL液滴暴露于固定场。将封闭的选择库在室温下在培养箱中缓慢振荡下在固定场上温育30分钟。移除并抛弃在这一时间段后留在顶部的溶液。通过加入50μL的选择缓冲液，将芯片洗涤两次。用移液管吸取芯片上的缓冲液，然后丢弃。

通过施用50μL的60％DMSO并在室温下温育10分钟，从芯片中回收结合到固定场的封闭选择库序列。将溶液移至新试管中，并且将该过程再重复两次。合并三次的洗脱溶液(总共150μL)。然后根据制造商的使用说明书，用Zymo RNA净化柱(Zymo Research,Irvine,CA)净化RNA序列。用35μL水洗脱纯化的选择库，并与10μL的5X选择缓冲液和5μL的500μMSnF₂合并。

C：适配体选择

用三次连续施用的1mL水洗涤干净的未萌出的第三臼齿，并且将其浸入收集自若干个体的人唾液样品中。将唾液吸到看起来未被涂覆的牙齿区域上。将如上所述制备的50μL库溶液(章节B)移液到显微镜载片(凹面载片，3.2mm厚；United Scientific)上的凹陷中，并将牙齿置于这一凹陷中。然后将载片在50rpm、37℃的振荡培养箱中放置1小时。移除牙齿并用选择缓冲液洗涤两次，每次1mL。然后将牙齿置于新鲜的凹陷载片上，并且加入50μL的60％DMSO以洗脱结合序列。重复这一洗脱过程，合并两次的洗脱溶液(总共100μL)。按照制造商的使用说明书，用Zymo RNA净化柱净化洗脱的RNA库。用Protoscript RT II酶将该库逆转录为DNA，并以两步法进行PCR扩增。首先，用不同数目的顺序PCR循环(例如，4、6、8和10个循环)进行四次单独的PCR反应。然后，通过凝胶电泳分析这些PCR 反应中的每一次的产物，以确定扩增所需的最佳循环次数，即尽可能高的收率而不会出现PCR产物的任何多连体。然后，将这一数目的PCR循环用于库扩增以完成选择轮。

将库分成两个等分试样以在相同条件下进行两个实验(实验A和实验 B)。将该选择过程再重复三次。在6、9和12选择轮期间，以0.322％的浓度将洁齿剂(佳洁士防龋齿型)加入选择缓冲液中。

还进行了针对咖啡和葡萄酒的阴性选择。在7和10选择轮期间，将 5μ速溶咖啡的等分试样加入库溶液中(最终稀释度为1:10)，并且将混合物与固定场一起在培养箱中在室温下振荡温育30分钟。对存在于咖啡中的分子具有特异性的寡核苷酸预期不会结合该固定场。因此，移除并抛弃这一时间段后留在顶部的溶液。加入50μL的选择缓冲液，将芯片洗涤两次。将缓冲液移液到表面上，然后丢弃。通过施用50μL的60％DMSO并在室温下温育10分钟，从芯片中回收结合到固定场的库序列。将溶液移除至新试管中，并且将该过程再重复两次。合并三次的洗脱溶液(总共150μL)。然后根据制造商的使用说明书，用Zymo RNA净化柱净化RNA序列。如上所述，用Protoscript RT II酶将该库逆转录为DNA，并以两步法进行PCR扩增以完成选择循环。在8和11选择轮期间，用葡萄酒进行相同的过程。

D.适配体测序

对于两个实验，均制备7至12选择轮的等分试样进行下一代测序 (NGS)分析。分析了总共超过2,300万个序列。对于11和12选择轮而言，随着选择的严格性增加，所捕获的序列数要低得多。选择成功的一个指示是观察到某些序列的拷贝数随着选择轮而增加(参见图1和图2)。在图1和图2所示的曲线图中，对基于12轮选择过程的频率的前20个序列作图。例如，对于图1，该序列从顶部线至底部线依次为OC1R-A1至OC1R-A20 (基于12轮)。图1示出了实验A的不同选择轮的拷贝数方面的前二十个序列的富集轨迹。图2示出了在实验B的不同选择轮的拷贝数方面的前二十个序列的富集轨迹。表2中列出了每个选择实验的拷贝数的居前序列。有趣的是，在选择实验B的前40个序列中还鉴别出了选择实验A中基于拷贝数的前15个序列。此外，两个实验中的前2个序列是相同的，但排名相反。

实施例2.RNA适配体的结合。

使用1mM的生物素化UTP、15mM的2’-氟CTP、14mM的2’-氟 UTP、5mM的ATP、5mM的GTP、T7突变型聚合酶(T7 R&DNA)和其他标准试剂的混合物，将编码所选择的适配体(OC1R-B1/OC1R-A2、OC1R- B9和OC1R-B25/OC1R-A9)的DNA寡核苷酸和编码阴性对照适配体(Neg)的DNA寡核苷酸转录为RNA。然后根据制造商的使用说明书，用Zymo RNA净化柱净化修饰的RNA寡核苷酸。将1μM的修饰RNA在1X结合缓冲液(10mM二甲胂酸盐缓冲液、120mM NaCl、5mMKCl、50μM SnF₂和 0.322％洁齿剂)中的250μL等分试样放置在显微镜载片(凹面载片，3.2mm 厚；United Scientific,Waukegan,IL)的凹陷中。分开地，用水洗涤干净的未萌出的第三臼齿，干燥，并且用从几人新鲜收集的人唾液涂覆。然后将牙齿置于包含修饰RNA的载片的凹陷中，并且在室温下温育30分钟。从载片中移除牙齿并用250μL的结合缓冲液洗涤两次。

制备链霉亲和素-辣根过氧化物酶(HRP)在结合缓冲液中的溶液，并且将250μL的等分试样置于干净载片的凹陷中(凹面载片，3.2mm厚；United Scientific)。还将牙齿置于相同的凹陷中，并且在室温下温育30分钟。温育后，用2mL的结合缓冲液洗涤牙齿。最后，为了检测适配体结合，将牙齿浸入10X

(Cell Signaling Technology,Danvers,MA)和10X过氧化氢的溶液(20X原液的50：50混合物)中。只有与牙齿结合的适配体在黒暗中产生化学发光(参见图3A-3D)。图3A-3D示出了不同适配体与牙齿的结合，如通过黒暗中牙齿的化学发光所证明的。图3A示出了阴性对照。图 3B示出了鉴定为“OC1R-B1”的适配体与牙齿的结合。图3C示出了鉴定为“OC1R-B9”的适配体与牙齿的结合。图3D示出了鉴定为“OC1R- B25/OC1R-A9”的适配体与牙齿的结合。

实施例3.序列的协方差分析。

对实验B的前100个适配体进行序列频率变化的协方差分析。首先，对于每个选择轮，通过所观察到的每个适配体的频率除以前100个适配体的频率的平均值而归一化频率数据。这一归一化允许消除在不同选择轮之间的NGS分析之前由PCR扩增引起的潜在差异。然后，从选择轮8至12 中对应适配体的归一化值减去选择轮7中的每一个适配体的归一化值。使用所得到的矩阵进行相关性分析。

执行选择轮间的Pearson相关性。由于在每个选择轮中使用了不同的牙齿，因此可以合理地假定，适配体频率之间的协方差将是由于它们所结合的牙齿内的表位丰度的协方差。因此，每群组共变适配体对应于一组与牙齿内不同表位结合的适配体。从该相关性矩阵生成Euclidean距离矩阵，并将其用作使用Ward.D2算法进行聚群的基础(参见图4)。图4示出了通过对实验B的前100个适配体的富集轨迹进行聚群(Ward.D2方法)排序的相关性矩阵。用软件R执行这些分析。

基于图4，五个不同表位可能是所选择的适配体的结合位点。对于每个群组/表位，此类适配体的序列编号(SEQ ID NO)如下所示：

群组A：29、66、4、89、3、31、1、49、69、75、81、5、41、37、6、 8、14、21、61

群组B：16、24、33、76、45、36、52、51、15、93

群组C：87、9、62、77、79、35、73、7、78、98、55、59、71、18、 95、53、13、20、23、30、84、22、34

群组D：12、17、11、39、82、27、10、26、38、92、65、56、88、42、 47、28、63、91、32、96、46、60

群组E：99、43、80、100、44、97、58、67、74、85、86、19、90、50、25、83、54、40、48、72、64、57、68、94、2、70

协方差分析表明，适配体OC1R-B1(SEQ ID NO：1)、OC1R-B9(SEQ ID NO：9)和OC1R-B25/OC1R-A9(SEQ ID NO：25)结合到牙齿内的不同表位。此外，群组A内的适配体可能结合到与OC1R-B1相同的表位，群组C 内的适配体可能结合到与OC1R-B9相同的表位，并且群组E内的适配体可能结合到与OC1R-B25(或OC1R-A9)相同的表位。群组B和D中的适配体可能结合到与上述适配体不同的表位。

应当指出的是，观察到群组之间的显著负相关，这可由本研究中使用的牙齿的牙釉质的化学组成的变化引起。这种变化可能是由于从中提取牙齿的个体之间的天然变化或牙齿提取后处理上的差异造成的。

组合使用来自不同群组的适配体，可在不同个体之间提供更大的总牙齿覆盖范围和/或功效，并且它被包括为本发明的一个实施方案。结合到不同牙齿表位的适配体可使用来自本实施例的信息进行选择。此外，这些适配体的使用可用于在体内诊断牙釉质的化学组成。

实施例4.基序和预测结构分析。

适配体基于它们形成的自由能最低的形状结合到靶标分子。自由能最低的形状随着单链序列内的区域之间的同源性而变。这些同源性区域相互折叠，从而产生对于能够结合而言至关重要的适配体的二级和三级形状。我们通过对保守基序序列及其对整个适配体的预测结构的效应的组合分析来表征这些适配体的核心特性。在此上下文中，基序被定义为限定长度的核苷酸的连续序列。对于这一实施例，我们考虑了表征的每个适配体的随机区内的每种可能的重叠六核苷酸基序。

测定来自适配体OC1R-B1、OC1R-B9和OC1R-A9的随机区的六个或更多个核苷酸的基序在选择库的子集内的频率(就拷贝数而言，前1,000个寡核苷酸)。由于这些适配体全部被选择用于结合到相同的靶标(牙齿)，因此该库中以比随机分布更高的频率存在的基序将代表所选择的适配体内的关键序列。此外，应合理地预期，包含这些序列的预测结构表示已选择的结构。因此，对基序序列的选择及其形成的预测结构的分析，为更全面地理解具有与牙齿结合的能力的适配体所需的必要条件提供了基础。

对适配体的二级结构的预测是用RNA结构(https： //rna.urmc.rochester.edu/RNAstructureWeb/Servers/Predict1/Predict1.html)进行的。

A.保守基序在适配体OC1R-B1内的结构上扮演的角色的分析：

基序分析的结果在图5中示出。包括适配体随机区的重叠六个核苷酸基序在本图中沿x轴连续提供。y轴为库中的每个基序提供统计学显著性(Z 值)。将Z值计算为观察到的这一基序在库中的频率减去库中所有基序的频率平均值，并且将所得之差除以库中所有基序的标准偏差以提供Z值。因此，Z值为2表示该基序在库中的频率比所有基序的平均值大两个标准偏差。

在图5中，清楚的是序列UUCCUA和序列UUUAUCUU以表示比平均值多两个标准偏差的水平进行保守。这两个保守序列被连续的非保守的 G和U分开。可通过将这些非保守核苷酸视为N'来连接这两个共有序列。

SEQ ID NO 235：5’UUCCUANNUUUAUCUU 3’。

图6中示出了OC1R-B1适配体的自由能最低的预测结构。图6、图 8、图10、图11、图12、图18A-18D、图19A-19C、图20A和图20B中的数字指示沿着序列从5'端到3'端的位置；并且可用于寡核苷酸的示踪和比对。看来，共有基序是产生茎间小环以及接合适配体两端的关键。茎(双链区)本身的序列是重要的，因为在保持双链结构的同时改变该序列可破坏结合能力。据认为，双链区的序列性质在碱基的堆叠能量方面是重要的，并且该堆叠能量受诸如在适配体别处结合的事件的影响。标注为SEQ ID NO 235的保守基序在框中突出显示。SEQ ID NO 235至244在表5中示出。

考虑到我们已经显示这一适配体的DNA型态也有效地结合到牙齿(参见实施例7)，因此在本实施例中得出的关于RNA序列中保守基序的结论也将适用于DNA序列。因此，还可预期包含对应脱氧核糖核苷酸基序

SEQ ID NO 236：5’-TTCCTANNTTTATCTT-3’的任何序列

能与牙齿结合，并且作为本发明的实施方案包括在内。

B.保守基序在适配体OC1R-B9内的结构上扮演的角色的分析：

以与针对OC1R-B1所述相同的方式，对保守基序在适配体OC1R-B9 内的结构上扮演的角色进行分析。图7提供了对适配体OC1R-B9的基序分析的总结。在适配体的5'端附近存在十个核苷酸基序，其以超过所选库中的总平均基序频率两个标准偏差的频率存在，

SEQ ID NO 237：5’-UUCGCANAAG-3’。

这一序列在其中具有单个简并核苷酸。在随机序列的3'端附近存在另外的高度保守的14个核苷酸的基序，

SEQ ID NO 238：5’-UGCGGCANGCGCGU-3’。

这一序列还包含一个简并核苷酸。OC1R-B9的预测二级结构及其保守基序在图8中例示。在该图中清楚的是，两个共有基序彼此相关，每个基序包括相同双链二级结构的不同侧。也期望包含这些基序中任一者的序列与牙齿结合，并且作为本发明的实施方案包括在内。由于我们证明该适配体的DNA型态也与牙齿结合，在这一适配体的DNA型态内的相同共有基序将是结合功能所必需的核心元件是顺理成章的。因此，还可预期包含任何对应脱氧核糖核苷酸基序：

SEQ ID NO 239：5’-TTCGCANAAG-3’

SEQ ID NO 240：5’-TGCGGCANGCGCGT-3’的任何序列

能与牙齿结合，并且作为本发明的实施方案包括在内。

C：保守基序在适配体OC1R-A9内的结构上扮演的角色的分析：

以与针对适配体OC1R-B1和OC1R-B9所述相同的方式，进行适配体 OC1R-A9的基序分析和预测二级结构。图9中提供了对适配体OC1R-A9 的基序分析。在图9中，如上文章节A所述，y轴为库中的每个基序提供统计学显著性(Z值)。将Z值计算为观察到的这一基序在库中的频率减去库中所有基序的频率平均值，并且将所得之差除以库中所有基序的标准偏差以提供Z值。十个核苷酸的基序，

SEQ ID NO 241：5’-CUUUUCUUCC-3’

以超过这一选定库内基序的总平均频率两个标准偏差的频率存在。这一基序在适配体结构上扮演的角色提供在图10中。显然，这一基序是在适配体内形成双链区的原因。因此，适配体内的这一双链区域是结合到牙齿所必需的是顺理成章的。这一适配体OC1D-A9的DNA型态内的这一基序也是形成双链区的原因(图11)。因此，还可预期包含这一基序的序列能与牙齿结合，并且作为本发明的实施方案包括在内。因此，任何含有对应脱氧核糖核苷酸基序

SEQ ID NO 242：5’-CTTTTCTTCC-3’的DNA序列

也能被预期与牙齿结合是顺理成章的，并且作为本发明的实施方案包括在内。

D.对适配体库内常见基序的分析：

在来自实验B的频率方面，对前10,000个序列内的常见基序进行了搜索。在与随机分布的显著偏差方面，领头基序是SEQ ID NO 243。

SEQ ID NO 243：5’-GCGCGCGC-3’

这一基序存在于以下序列中的每一个中，其中为了简单起见省略了5’引物识别序列和3'引物识别序列。包含基序SEQ ID NO 243的寡核苷酸作为本发明的实施方案包括在内。

还可预期，包含对应脱氧核糖核苷酸基序

SEQ ID NO 244:5’-GCGCGCGC-3’的任何序列

能与牙齿结合，并且作为本发明的实施方案包括在内。

实施例5.序列相似性分析。

使用软件Align X进行SEQ ID NO 1至SEQ ID NO 111的比对，该软件是赛默飞世尔科技公司(Themo Fisher Scientific)的Vector NTI Advanced 11.5.4的组件。多个序列组具有至少90％、至少70％或至少50％的核苷酸序列同一性，如图12、13和14中的比对所示。在这些比对中，为了简单起见，仅包括适配体的中心可变区。因此，与选自SEQ ID NO 1至SEQ ID NO 111的序列具有至少50％、至少70％或至少90％核苷酸序列同一性的寡核苷酸作为本发明的实施方案而被包括。图12示出了在选择过程中鉴定的具有至少90％的核苷酸序列同一性的示例性序列的比对。图13示出了在选择过程中鉴定的具有至少70％的核苷酸序列同一性的示例性序列的比对。图14示出了在选择过程中鉴定的具有至少50％的核苷酸序列同一性的示例性序列的比对。

实施例7.DNA适配体的结合。

使用位于5'端的FAM荧光团(Eurofins)，化学合成了选定的DNA适配体(OC1D-B1/OC1D-A2、OC1D-B9和OC1D-B25/OC1D-A9)。将1μM的 DNA适配体在1X结合缓冲液(10mM二甲胂酸盐缓冲液、120mM NaCl、 5mM KCl、50μM SnF₂和0.322％牙膏；pH 7.2)中的250μL等分试样放置在显微镜载片(凹面载片，3.2mm厚；United Scientific)的凹陷内。分开地，用水洗涤干净的未萌出的第三臼齿，干燥，并且用从若干个体新鲜收集的人唾液涂覆。然后将牙齿置于包含DNA适配体的载片的凹陷中，并且在室温下温育20分钟。通过测量移除牙齿后溶液中剩余的荧光(参见图15)，来测定适配体结合的量。从载片中移除牙齿并用250μL的中性结合缓冲液洗涤若干次。测量每种洗涤溶液的荧光(参见图16)。通过用250mM NaOH的两个等分试样洗涤牙齿来回收结合的适配体。还测量每种洗脱溶液的荧光(参见图17)。不是所有与牙齿一起温育的适配体都被回收，这可能是由于在牙齿内具有极强的结合或吸附。

考虑到我们已经示出了适配体OC1R-B1/OC1R-A2、OC1R-B9和OC1R-B25/OC1R-A9的DNA型态也有效地结合到牙齿，在本实施例中得出的结论将适用于本文作为本发明的一部分并列于表3中的剩余选定适配体(SEQ ID NO:112至SEQ ID NO:222)的DNA型态是顺理成章的。

实施例8.适配体的截短。

从所选择的适配体(OC1D-B1、OC1D-B9和OC1D-A9)的预测二级结构开始，设计了包含一些二级结构元件的较小的寡核苷酸。对这些预测结构内的共有基序的考虑被包括在截短的适配体的设计中(图5至图10)。截短的适配体全部包含高度选择的基序序列，这些基序序列涉及初始适配体内的茎/环结构。这些选择的结构在截短的适配体中是保守的。

例如，适配体OC1D-B1.1、OC1D-B1.2和OC1D-B1.3来源于适配体 OC1D-B1(参见图18A-18D)。OC1D-B1.1包括完整的弯曲茎/环结构， OC1D-B1.2仅包括弯曲茎/环结构的顶部，而OC1D-B1.3包括紧密茎/环结构。适配体OC1D-B9.1和OC1D-B9.2来源于适配体OC1D-B9(参见图19A-19C)并对应于其双底茎/环子结构。适配体OC1D-A9.1来源于适配体 OC1D-A9(参见图20A和20B)，目的在于将保守基序元件保持在最小的适配体中。

图21A-21C示出了这些截短的适配体的每一个对牙齿的结合结果。以与先前针对全长度适配体所述相同的方式进行和分析这些结合测定(参见实施例7)。对于来自OC1D-B1的适配体，包含整个弯曲茎/环结构的截短的适配体(OC1D-B1.1)与其他两种相比，在牙齿上表现更好。这提供了以下确认：在RNA适配体中鉴定的保守基序是保守的，并且也是该适配体功能的关键。对于来自OC1D-B9的适配体，仅包含底部弯曲茎/环结构的截短的适配体OC1D-B9.2良好地结合在牙齿上。这良好地对应于，与OC1D-B9.1 内的保守基序相比，与OC1D-B9.2内保守基序相关联的统计学显著性水平更高。最后，截短的适配体OC1D-A9.1具有比亲本适配体更高的结合亲和力，但不如其他截短的适配体高。截短的适配体序列的列表包括在表4 中。

表2：来自选择实验A和B的居前序列的列表。所有嘧啶核苷酸在戊糖基团的2'位置 上被氟化。

表3.基于来自选择实验A和B的顶部序列的脱氧核糖核苷酸适配体的列表。

表4.截短的适配体的列表。

表5：保守基序序列的列表。

SEQ ID NO	序列
		235	UUCCUANNUUUAUCUU
236	TTCCTANNTTTATCTT
		237	UUCGCANAAG
238	UGCGGCANGCGCGU
		239	TTCGCANAAG
240	TGCGGCANGCGCGT
		241	CUUUUCUUCC
242	CTTTTCTTCC
		243	NGCGCGCGCN
244	NGCGCGCGCN

Claims (15)

1.一种包含寡核苷酸的适配体组合物，所述寡核苷酸为脱氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、脱氧核糖核苷酸的衍生物、核糖核苷酸的衍生物、或它们的混合物中的至少一种；其中所述适配体组合物具有对牙齿、牙釉质、牙本质、碳酸化缺钙羟基磷灰石、或它们的混合物中的至少一种的结合亲和力。

2.根据权利要求1所述的适配体组合物，其中所述适配体组合物具有对牙齿的结合亲和力。

3.根据权利要求1或2所述的适配体组合物，其包含至少一种与SEQ ID NO 1至SEQ IDNO 234具有至少50％的核苷酸序列同一性的寡核苷酸，优选地其中所述寡核苷酸为SEQ IDNO 1至SEQ ID NO 234中的至少一种。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的适配体组合物，其包含寡核苷酸，所述寡核苷酸为SEQ ID NO 1、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO 25、SEQ ID NO 112、SEQ ID NO 120、SEQ ID NO136、或SEQ ID NO 223至SEQ ID NO 234中的至少一者。

5.根据权利要求1或2所述的适配体组合物，其中所述寡核苷酸包含一个或多个基序，所述基序为SEQ ID NO 235、SEQ ID NO 236、SEQ ID NO 237、SEQ ID NO 238、SEQ ID NO239、SEQ ID NO 240、SEQ ID NO 241、SEQ ID NO 242、SEQ ID NO 243和SEQ ID NO 244中的至少一者。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的适配体组合物，其中所述寡核苷酸包含天然或非天然核酸碱基，优选的其中所述非天然核酸碱基是下列中的至少一种：次黄嘌呤、黄嘌呤、7-甲基鸟嘌呤、5,6-二氢尿嘧啶、5-5-甲基胞嘧啶、5-羟甲基胞嘧啶、硫尿嘧啶、1-甲基次黄嘌呤、6-甲基异喹啉-1-硫酮-2-基、3-甲氧基-2-萘基、5-丙炔基尿嘧啶-1-基、5-甲基胞嘧啶-1-基、2-胺基腺嘌呤-9-基、7-去氮-7-碘腺嘌呤-9-基、7-去氮-7-丙炔基-2-胺基腺嘌呤-9-基、吩噁嗪基、吩噁嗪基-G-clam、或它们的混合物。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的适配体组合物，其中所述寡核苷酸的核苷通过化学基序链接，所述化学基序是下列中的至少一种：天然磷酸二酯、手性硫逐磷酸酯、手性膦酸甲酯、手性氨基磷酸酯、手性磷酸酯手性三酯、手性硼磷酸酯、手性硒代磷酸酯、二硫代磷酸酯、硫代氨基磷酸酯、亚甲基甲基亚胺基、3’-酰胺、3’非手性氨基磷酸酯、3’非手性亚甲基膦酸酯、硫缩醛、乙硫醚、或它们的混合物。

8.根据权利要求1所述的适配体组合物，其中所述核糖核苷酸的衍生物或脱氧核糖核苷酸的衍生物是下列中的至少一种：锁定的寡核苷酸、肽寡核苷酸、二醇寡核苷酸、苏阿糖寡核苷酸、己糖醇寡核苷酸、阿卓糖醇寡核苷酸、丁基寡核苷酸、L-核糖核苷酸、阿拉伯糖寡核苷酸、2’-氟阿拉伯糖寡核苷酸、环己烯寡核苷酸、膦酰二胺吗啉代寡核苷酸、或它们的混合物。

9.根据权利要求1所述的适配体组合物，包含至少一种聚合物材料，其中所述至少一种聚合物材料与所述寡核苷酸共价连接，优选地，其中所述至少一种聚合物材料为聚乙二醇。

10.根据权利要求1至9中任一项所述的适配体组合物，其中所述寡核苷酸的5’端和3’端的核苷酸是反向的。

11.根据权利要求1至10中任一项所述的适配体组合物，其中所述寡核苷酸的至少一个核苷酸在戊糖基的2'位被氟化，优选地，其中所述寡核苷酸的嘧啶核苷酸在所述戊糖基的2'位被氟化。

12.根据权利要求1至11中任一项所述的适配体组合物，其中所述寡核苷酸被共价或非共价地附接到至少一种口腔护理活性成分，所述至少一种口腔护理活性成分包含增白剂、亮白剂、防污剂、抗龋剂、抗蚀剂、抗牙石剂、抗牙结石剂、抗牙斑剂、牙齿再矿化剂、抗破碎剂、强化剂、耐磨损剂、抗齿龈炎剂、抗微生物剂、抗细菌剂、抗真菌剂、抗酵母剂、抗病毒剂、防口臭剂、口气清新剂、芳香剂、凉爽剂、口味增强剂、味道增强剂、抗附着剂、平滑剂、表面修饰剂、抗牙齿疼痛剂、抗敏感剂、抗炎剂、牙龈保护剂、牙周活性剂、组织再生剂、抗凝血剂、抗凝块稳定剂、唾液刺激剂、唾液流变改性剂、保留增强剂、软/硬组织靶向剂、牙齿/软组织清洁剂、抗氧化剂、pH调节剂、H-2拮抗剂、止痛剂、天然提取物和精油、染料、光学亮白剂、阳离子、磷酸盐、氟离子源、肽、营养物质、酶、口喉产品、或它们的混合物。

13.根据权利要求12所述的适配体组合物，其中所述口腔护理活性成分为染料或光学亮白剂中的至少一种。

14.根据权利要求12所述的适配体组合物，其中所述口腔护理活性成分为4,4’-二氨基-2,2’-芪二磺酸。

15.一种用于将一种或多种口腔护理活性成分递送至口腔的方法，所述方法包括施用包含至少一种核酸适配体和一种或多种口腔护理活性成分的口腔护理组合物；其中所述至少一种核酸适配体和所述一种或多种口腔护理活性成分是共价或非共价附接的；并且其中所述至少一种核酸适配体具有对口腔部分的结合亲和力。

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