CN111024657A - 一种快速检测茶油中Hg2+的荧光方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种快速检测茶油中Hg2+的荧光方法,是将待测茶油加入到环己烷溶液中,然后向体系中加入巯基丙酸修饰的油溶性CdTe QDs,利用CdTe QDs的红色荧光会被Hg2+猝灭、茶油本身呈现的荧光不会被Hg2+猝灭的特性,通过比率荧光体系CdTe QDs的猝灭程度来检测茶油中Hg2+的含量。本发明充分利用油溶性CdTe QDs的红色荧光与Hg2+络合,导致其荧光猝灭的特点,设计出可快速检测Hg2+的荧光方法,具有选择性高、灵敏度高、检测结果直观的特点。
Description
技术领域
本发明涉及一种快速检测茶油中Hg2+的荧光方法,属于食品快速检测、重金属检测等领域。
背景技术
在各类食品安全问题中,重金属污染对我国的生态环境及社会农业的可持续发展有着很大的威胁。当重金属离子进入人体后,可以与蛋白质或酶发生强烈的反应,使蛋白质失活,也可能在人体的各个器官累积,造成慢性中毒,严重者可能会造成死亡。重金属污染是食品安全中的“隐形杀手”,对于茶油来说,重金属含量是食用植物油的一项重要考量指标。汞是环境中具有很强生理毒性的重金属元素之一,即使在极低浓度下,也会通过消化道、呼吸道和皮肤进入人体内,对神经系统和内分泌系统造成实质性的损害。汞中毒和汞污染事件常有报道,相关食品安全问题严重威胁着人们的生命健康。建立一种快速、灵敏、高选择性的食品中Hg2+的检测分析方法具有重要意义。超过正常水平的金属元素可催化加速茶油中脂肪酸的氧化,影响油脂的品质和口感。因此,加快对重金属离子检测方法的研究,建立准确、灵敏和实地快速的检测方法,是当前社会安定的重要保障,对人类健康保护也是具有极其重要的现实意义。
目前常用到的检测重金属离子的检测方法有:1、原子吸收光谱法(AAS);2、原子荧光光谱法(AFS);3、电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS);4、伏安法(SV)。然而,这些检测技术所需要的仪器价格昂贵,并且检测需要专业操作,测试周期长。在最近多年来,研究人员已经研究出许多策略测定铜离子:例如,表面增强拉曼(SERS)、电化学、荧光和动态光散射(DLS)。这些技术的发展突破了传统的分析方法的瓶颈。值得注意的是,荧光传感器对金属离子的分析广泛的研究由于其灵敏、便捷和可视化的优势,逐步被广泛用于重金属离子的检测当中。
量子点(QDs)的高量子产率、大消光系数、宽吸收、尺寸合成可调发射和大斯托克斯位移使得量子点在化学传感领域的应用备受关注,尤其是在金属离子检测的方面已成为检测领域新的热点。
发明内容
本发明旨在提供一种快速检测茶油中Hg2+的荧光方法,在不进行茶油复杂前处理的情况下进行灵敏、准确的检测,可判断茶油中Hg2+是否超标。
本发明快速检测茶油中Hg2+的荧光方法,是将待测茶油加入到环己烷溶液中,然后向体系中加入巯基丙酸修饰的油溶性CdTe QDs,利用CdTe QDs的红色荧光会被Hg2+猝灭、茶油本身呈现的荧光不会被Hg2+猝灭的特性,通过比率荧光体系CdTe QDs的猝灭程度来检测茶油中Hg2+的含量。具体包括如下步骤:
步骤1:巯基丙酸修饰的油溶性CdTe QDs的制备
1a、在制备之前将所有玻璃器皿与磁力搅拌子在王水中浸泡10-120分钟,并用超纯水多次冲洗备用;称取0.01-0.02g碲粉(Te)和1-2ml十八烯(ODE),置于三口烧瓶当中,通氮气20-30min,在真空操作平台中抽取1-2ml磷酸三辛酯(TOP)加入三口烧瓶中,升温至250-350℃,保温3~5h直至黑色粉末完全溶解,制得Te前体;
1b、称取0.01-0.02g氧化镉(CdO)加入1-2ml油酸(OA)和3-4mlODE的混合液中,充入氮气除氧20-30min后加热至200-300℃,直至混合液呈现出无色澄清的状态,此时表明CdO已经完全溶解在OA中,加入20-30μL巯基丙酸(MPA)后将混合液冷却至室温,制得 Cd前体;
1c、称取0.1-0.2g十八胺(ODA)和0.1-0.2g三正辛基氧化磷(TOPO),迅速加入到步骤1b获得的Cd前体中,再充入氮气除氧20-30min,逐步加热混合溶液,待固体溶解后继续升温至200-300℃,将步骤1a获得的Te前体快速注入反应器中,继续搅拌直至反应体系冷却至室温,丙酮洗涤,8000rpm/min速度离心分离30min,析出固体沉淀物,得到CdTe QDs量子点的环己烷溶液,密封后于0-4℃避光保存。
步骤2:标准曲线的绘制
用ICP-MS筛选出无Hg2+的茶油作为样本茶油,以此样本茶油为空白茶油,向空白茶油中加入CdTe QDs量子点,然后加入梯度浓度的Hg2+并记录其荧光强度,以I677/I431荧光强度比对Hg2+的浓度作图,获得标准曲线;
步骤2中,以茶油和CdTe QDs的荧光强度比2:3作为比率荧光体系的最佳配比进行比率体系的构建。
步骤3:待测茶油的检测
将CdTe QDs量子点与待测油样以比3:2的比例相结合来构建比率荧光体系,在待测茶油加入后,茶油中的Hg2+直接猝灭CdTe QDs的荧光,比率荧光体系的溶液显示相应的变化,通过I677/I431荧光强度比结合步骤2获得的标准曲线即可得知待测茶油中Hg2+的相应浓度。
本检测方法适用的Hg2+浓度为0到500nM范围内,此范围内具有良好的线性关系。
本检测方法的检测限为5-10nM。
本发明利用比率荧光检测Hg2+的方法,具有灵敏度搞,选择性好等特点。
本发明方法利用了量子点高量子产率、大消光系数、宽吸收、尺寸合成可调的优势与本身呈现蓝色荧光的茶油构建形成比率荧光体系,灵敏、简便,适用于快速检测。因此,这种灵敏、简便、快捷的研究方法可以为实际茶油样本重金属的检测提供了新的方向。
附图说明
为了便于本领域技术人员理解,下面结合附图对本发明作进一步的阐述说明。
图1是比色荧光体系检测Hg2+原理示意图。
图2是茶油和CdTe QDs的激发和发射谱图。
图3是茶油与CdTe QDs单独对Hg2+的响应的荧光光谱图,其中(A)单独添加Hg2+的茶油的荧光光谱;(B)单独添加Hg2+的CdTe-QDs的荧光光谱。
图4不同配比的比率荧光体系的荧光光谱图系图。
图5比率荧光体系对Hg2+的响应的荧光光谱及线性关系,其中(A)比率荧光体系添加 Hg2+的荧光光谱,(B)比率荧光体系对Hg2+浓度的线性关系图。
图6比率荧光体系对Hg2+抗干扰能力的荧光光谱图。
具体实施方式
下述实施例是对于本发明内容的进一步说明以作为对本发明技术内容的阐释,但本发明的实质内容并不仅限于下述实施例所述,本领域的普通技术人员可以且应当知晓任何基于本发明实质精神的简单变化或替换均应属于本发明所要求的保护范围。
本发明快速检测茶油中Hg2+的荧光方法,是将待测茶油加入到环己烷溶液中,然后向体系中加入巯基丙酸修饰的油溶性CdTe QDs,利用CdTe QDs的红色荧光会被Hg2+猝灭、茶油本身呈现的荧光不会被Hg2+猝灭的特性,通过比率荧光体系CdTe QDs的猝灭程度来检测茶油中Hg2+的含量。具体包括如下步骤:
步骤1:巯基丙酸修饰的油溶性CdTe QDs的制备
1a、在制备之前将所有玻璃器皿与磁力搅拌子在王水中浸泡10-120分钟,并用超纯水多次冲洗备用;称取0.01-0.02g碲粉(Te)和1-2ml十八烯(ODE),置于三口烧瓶当中,通氮气20-30min,在真空操作平台中抽取的1-2ml磷酸三辛酯(TOP)随后加入三口烧瓶中,升温至250-350℃,保温3~5h直至黑色粉末完全溶解,制得Te前体;
1b、称取0.01-0.02g氧化镉(CdO)加入1-2ml油酸(OA)和3-4mlODE的混合液中,充入氮气除氧20-30min后加热至200-300℃,直至混合液呈现出无色澄清的状态,此时表明CdO已经完全溶解在OA中,加入20-30μL巯基丙酸(MPA)后将混合液冷却至室温,制得 Cd前体;
1c、称取0.1-0.2g十八胺(ODA)和0.1-0.2g三正辛基氧化磷(TOPO),迅速加入到步骤1b获得的Cd前体中,再充入氮气除氧20-30min,逐步加热混合溶液,待固体溶解后继续升温至200-300℃,将步骤1a获得的Te前体快速注入反应器中,继续搅拌直至反应体系冷却至室温,丙酮洗涤,8000rpm/min速度离心分离30min,析出固体沉淀物,得到CdTe QDs量子点的环己烷溶液,密封后于0-4℃避光保存。
步骤2:比率荧光体系各组分的表征、对Hg2+的响应及组分配比优化
2a、比率荧光体系组分表征
通过荧光光谱仪对合成出来的CdTeQDs及样本茶油进行表征,CdTeQDs的激发波长范围为360-430nm时,CdTe QDs的荧光光谱在650-680nm处具有发射峰,并且在365nm UV 灯下观察到红色荧光。而茶油本身在365nm UV灯下显示亮蓝色荧光,激发波长为320-380nm时,茶油的荧光光谱在420-440nm处具有发射峰。
把具有红色荧光的CdTe QDs与具有蓝色荧光的茶油混合,可制备成一种新型的比率荧光体系。
2b、比率荧光体系各组分对Hg2+的响应
为了证明Hg2+只对CdTe QDs有着猝灭作用,在QDs和茶油中分别加入浓度为0~200nM 的Hg2+溶液,记录荧光强度的变化。用ICP-MS筛选出无Hg2+的茶油作为样本茶油,以此样本茶油为标准通过加入不同浓度的Hg2+设计标准曲线,用以检测市场中的茶油Hg2+含量是否超标。随着Hg2+浓度的增加,茶油的荧光强度保持不变,而CdTe QDs的荧光强度连续降低,这是由于CdTe QDs与Hg2+形成络合物,Hg2+对荧光具有明显的猝灭作用,当存在Hg2+时, Hg2+和QDs表面上的羧基之间的络合,导致Hg2+的d轨道分裂,QDs激发态的电子具有转移到Hg2+的d轨道的机会,QDs的辐射形式(荧光发射)中的电子跃迁因此受到约束,导致荧光猝灭。
2c、比率荧光体系的配比优化
为找出比率荧光体系的最佳配比,调整茶油和CdTe QDs的荧光强度比分别为2:1、1:1、 2:3和1:2时,加入200nM Hg2+,观察不同配比下猝灭Hg2+前后的颜色变化范围。选择荧光变化最为明显的,可具有较低的检测限。
步骤3:标准曲线的绘制及选择性与抗干扰能力的测试
3a、荧光比率体系标准曲线的绘制
绘制不同浓度的Hg2+对比率荧光体系影响的标准曲线。通过荧光光谱仪记录数据。为了评估比率荧光体系的灵敏度,逐步添加Hg2+浓度时测量了荧光强度。两个发射峰的强度比的变化导致荧光颜色从粉红色变向蓝色转变,荧光颜色的变化可在紫外灯下进行观察。图5B 显示出的荧光强度比(I677/I431)与Hg2+的浓度密切相关。为了定量评估Hg2+的量,通过绘制I677/I431比率与Hg2+浓度的关系,得到Hg2+浓度在0到500nM范围内的良好线性关系。将检测限定义为标准背景偏差(3δ)的3倍,计算得检测限约为5-10nM,低于Hg2+在食品中的国家标准限量0.02mg/kg≈92nM。
3b、比率荧光体系的选择性和抗干扰能力
为了评价比率荧光体系检测Hg2+的选择性,在相同条件下,用不同金属离子对比率荧光体系进行实验。200nM Hg2+淬灭量子点荧光约80-95%,而2μM的Cd2+,Cu2+,Fe3+,Ca2+,Mn2+,Zn2+,Pb2+,Ni+,Al3+等分别加入到探针溶液中,荧光强度和颜色没有明显变化,只有加入Cu2+时,量子点荧光淬灭仅仅下降约5-15%。当分别加入其他离子后,在进一步添加200nM的Hg2+后,探针的荧光强度比(I677/I431)大大降低。这表明此比率荧光体系检测Hg2+具有较强的抗干扰能力。
步骤3:待测茶油的检测
本发明可用于实际茶油样品中汞离子的检测。将CdTe QDs量子点与待测油样以3:2的比例混合来构建比率荧光体系,在待测茶油加入后,茶油中的Hg2+直接猝灭CdTe QDs的荧光,比率荧光体系的溶液显示相应的变化,通过I677/I431荧光强度比结合步骤2获得的标准曲线即可得知待测茶油中Hg2+的相应浓度。
本检测方法适用的Hg2+浓度为0到500nM范围内,此范围内具有良好的线性关系。
本检测方法的检测限为5-10nM。
实施例:检测江西赣州茶油中Hg2+的含量
1、油溶性巯基丙酸修饰的CdTe QDs的制备方法
在制备之前将所有玻璃器皿与磁力搅拌子在王水中浸泡10-120分钟,并用超纯水多次冲洗备用;称取0.1mmol碲粉(Te)和十八烯(ODE),置于三口烧瓶当中,通氩气30min。在真空箱中抽取的1ml磷酸三辛酯(TOP)随后加入三口烧瓶中,升温至300℃,保温3~5h直至黑色粉末完全溶解,制备成Te前体。另称取0.1mmol氧化镉(CdO)加入1ml油酸(OA) 和3ml的ODE的混合液中,充入氩气除氧30min后加热至约250℃,直至混合液呈现出无色澄清的状态,此时表明CdO已经完全溶解在OA中,加入21μL的巯基丙酸(MPA)后将混合液冷却至室温,制成Cd前体。随后,称取0.15g十八胺(ODA)和0.15g三正辛基氧化磷 (TOPO),迅速加入到Cd前体中,再充入氩气除氧30min,逐步加热混合溶液,待固体溶解后继续升温至预定温度,将已经澄清的Te前体快速注入反应器中,继续搅拌直至将反应体系冷却至室温然后使用丙酮洗涤,用8000rpm/min速度离心分离30min,析出固体沉淀物得到所述的油溶性巯基丙酸修饰的CdTe QDs。
如图2所示,由于该地区的赣州茶油的最佳激发波长在358nm处,发射波长在431nm处; CdTe QDs的最佳激发波长在410nm处,发射波长在677nm处,为了使茶油的荧光和CdTeQDs 的荧光可以同时被很好的激发,所以选择370nm为比率荧光体系的最佳激发波长。
同时对构成比率荧光体系的两种组分分别进行对Hg2+的响应。如图3所示,随着Hg2 +浓度的增加,茶油的荧光强度保持不变(如图3A),而CdTe QDs的荧光强度连续降低(如图3B)。
把具有红色荧光的CdTe QDs与去除重金属离子的具有蓝色荧光的茶油混合,制备成一种新型的比率荧光体系。为找出比率荧光体系的最佳配比,调整茶油和CdTe QDs的荧光强度比分别为2:1、1:1、2:3和1:2时,观察不同配比下猝灭Hg2+前后的颜色变化范围。当茶油和CdTe QDs的荧光强度比为2:1(如图4a)和1:1时(如图4b),加入200nM Hg2+,比率荧光体系的颜色分别由蓝紫色变为蓝色和紫色变为蓝色,变化跨度小;当比率荧光体系的的荧光强度比为2:1时(如图4d),加入相同浓度Hg2+,体系颜色只能从粉红色到蓝紫色的颜色,变化范围相对较小,且由于量子点含量较高,需要更高浓度的Hg2+使其完全猝灭;而茶油与CdTe QDs的荧光强度比为2:3时(如图4c),加入相同浓度的Hg2+,比率荧光体系可以看到从粉红色到蓝色的极其明显的荧光变化,同时具有较低的检测限。因此,我们选择茶油和CdTeQDs的荧光强度比2:3作为比率荧光体系的最佳配比。
2、构建比率荧光体系的标准曲线
该样品茶油组建的比率荧光体系,如图5A所示,在添加不同量的Hg2+后,两个发射峰的强度比的变化导致荧光颜色从粉红色变向蓝色转变,荧光颜色的变化可在紫外灯下进行观察。图5B显示出的荧光强度比(I677/I431)与Hg2+的浓度密切相关。为了定量评估Hg2+的量,通过绘制I677/I431比率与Hg2+浓度的关系,得到Hg2+浓度在0到500nM范围内的良好线性关系。(R2=0.99628)。将检测限定义为标准背景偏差(3δ)的3倍,计算得检测限低至6.04nM。
该茶油组建的比率荧光体系检测Hg2+的选择性及对其他金属离子的抗干扰能力,在相同条件下,用不同金属离子对比率荧光体系进行实验。图6(红色柱状图)所示,200nMHg2+淬灭量子点荧光约91%,而2μM的Cd2+,Cu2+,Fe3+,Ca2+,Mn2+,Zn2+,Pb2+,Ni+,Al3+等分别加入到探针溶液中,荧光强度和颜色没有明显变化。如图6(黑色柱状图)所示,当分别加入其他例子后,在进一步添加200nM的Hg2+后,探针的荧光强度比(I677/I431)大大降低。这说明此比率荧光体系检测Hg2+具有较强的抗干扰能力。
称取赣州茶油溶于环己烷溶液中,滴加上述CdTeQDs,配成CdTeQDs:茶油:环己烷(1:2:7)的体积配比,溶液在紫外灯下呈现粉紫色,对照试纸色度卡,该颜色比国标浓度显示的暗紫色偏红,说明此赣州茶油的Hg2+并未超标,属于合格产品。同时,我们运用原子吸收光谱法和原子荧光光谱法进行检测,可以看出该油样远低于国家标准限量,本检测方法与两种传统方法(AAS与AFS)所得到的结果基本一致,说明本发明的准确性以及可靠性。
方法 | 检测结果 |
本检测方法 | 试纸显色(粉紫色)<国标限量(暗紫色) |
原子吸收光谱法(AAS) | 0.000208mg/kg<0.02mg/kg(国标限量) |
原子荧光光谱法(AFS) | 0.000200mg/kg<0.02mg/kg(国标限量) |
Claims (6)
1.一种快速检测茶油中Hg2+的荧光方法,其特征在于:
是将待测茶油加入到环己烷溶液中,然后向体系中加入巯基丙酸修饰的油溶性CdTeQDs,利用CdTe QDs的红色荧光会被Hg2+猝灭、茶油本身呈现的荧光不会被Hg2+猝灭的特性,通过比率荧光体系CdTe QDs的猝灭程度来检测茶油中Hg2+的含量。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于包括如下步骤:
步骤1:巯基丙酸修饰的油溶性CdTe QDs的制备
1a、在制备之前将所有玻璃器皿与磁力搅拌子在王水中浸泡10-120分钟,并用超纯水多次冲洗备用;称取0.01-0.02g碲粉和1-2ml十八烯,置于三口烧瓶当中,通氮气20-30min,在真空操作平台中抽取1-2ml磷酸三辛酯加入三口烧瓶中,升温至250-350℃,保温3~5h直至黑色粉末完全溶解,制得Te前体;
1b、称取0.01-0.02g氧化镉加入1-2ml油酸和3-4mlODE的混合液中,充入氮气除氧20-30min后加热至200-300℃,直至混合液呈现出无色澄清的状态,此时表明氧化镉已经完全溶解在油酸中,加入20-30μL巯基丙酸后将混合液冷却至室温,制得Cd前体;
1c、称取0.1-0.2g十八胺和0.1-0.2g三正辛基氧化磷,迅速加入到步骤1b获得的Cd前体中,再充入氮气除氧20-30min,逐步加热混合溶液,待固体溶解后继续升温至200-300℃,将步骤1a获得的Te前体快速注入反应器中,继续搅拌直至反应体系冷却至室温,丙酮洗涤,8000rpm/min速度离心分离30min,析出固体沉淀物,得到CdTe QDs量子点的环己烷溶液,密封后于0-4℃避光保存;
步骤2:标准曲线的绘制
用ICP-MS筛选出无Hg2+的茶油作为样本茶油,以此样本茶油为空白茶油,向空白茶油中加入CdTe QDs量子点,然后加入梯度浓度的Hg2+并记录其荧光强度,以I677/I431荧光强度比对Hg2+的浓度作图,获得标准曲线;
步骤3:待测茶油的检测
将CdTe QDs量子点与待测油样相结合来构建比率荧光体系,在待测茶油加入后,茶油中的Hg2+直接猝灭CdTe QDs的荧光,比率荧光体系的溶液显示相应的变化,通过I677/I431荧光强度比结合步骤2获得的标准曲线即可得知待测茶油中Hg2+的相应浓度。
3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于:
步骤2中,以茶油和CdTe QDs的荧光强度比2:3作为比率荧光体系的最佳配比进行比率体系的构建。
4.根据权利要求3所述的方法,其特征在于:
步骤3中,将CdTe QDs量子点与待测油样以比3:2的比例相结合来构建比率荧光体系。
5.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于:
本检测方法适用的Hg2+浓度为0到500nM。
6.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于:
本检测方法的检测限为5-10nM。
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