CN109738405B - 一种定量测定黄酮类化合物的方法 - Google Patents

Abstract

一种定量测定黄酮类化合物的方法，属于纳米材料制备及化学分析检测技术领域。本发明利用自组装纳米化的四‑(4‑吡啶基)锌卟啉光敏效应和ZnCdSe量子点在缓冲溶液体系中制备得到一种具有双重复合纳米效应的可逆纳米卟啉荧光传感器；再利用黄酮类化合物与纳米卟啉间强作用力，将纳米卟啉与量子点间可逆复合传感界面拉开不同程度的特异性变化，从而实现黄酮类化合物的定量检测。本发明所涉及的制备方法简单可控且对黄酮类化合物检测方法灵敏度高、选择性好、特异性强，不仅能在黄酮类化合物检测中发挥重要作用，也可望在生物化学等领域具有重要的应用价值。

Description

一种定量测定黄酮类化合物的方法

技术领域

本发明属于纳米材料制备及化学分析检测技术领域，具体涉及一种新型可逆纳米卟啉荧光传感器可控制备及其高灵敏检测黄酮类化合物的方法。

背景技术

黄酮类物质是植物次生代谢的产物，在各种各样的食品和饮料中，如茶，咖啡，葡萄酒，水果，蔬菜和全麦谷物中广泛存在，具有明显的药理活性作用，如抗氧化、抗炎、抗病毒等。到目前为止，已有多种分析方法，包括电化学高效液相色谱法、毛细管电泳、电喷雾质谱、高速逆流色谱法、二极管阵列被用于检测多酚类物质。虽然这些方法具有高精密度，高灵敏度，交叉干扰小，但是实验过程需要繁复的样品前处理，耗时，成本昂贵，且只能由训练有素的专业人员操作，不方便进行现场检测。因此，我们需要一种高效、简便、可靠的手段检测黄酮类化合物。

发明内容

本发明的目的之一提供一种制备简单、反应条件温和的新型可逆纳米卟啉荧光传感器可控制备方法；目的之二是提供一种灵敏度高、选择性好，基于荧光开-关-开模式法快速定量识别槲皮素，芦丁，山奈素，山奈酚的可逆纳米卟啉荧光传感器。

本发明使用的特异性识别定量槲皮素，芦丁，山奈素，山奈酚的可逆纳米卟啉荧光传感器，采用ZnCdSe量子点作为荧光探针，四-(4-吡啶基)锌卟啉溶液与甜菜碱制备得到的自组装纳米卟啉为荧光猝灭剂，两者的特异性结合得到开关纳米卟啉荧光传感器。开关纳米卟啉荧光传感器与槲皮素，芦丁，山奈素，山奈酚作用得到可逆(开-关-开)纳米卟啉荧光传感器。

一种定量测定黄酮类化合物的方法，其特征在于，具体步骤如下：

(1)将二氯化锌和N-乙酰-L-半胱氨酸溶于超纯水中，在冰浴、常压下搅拌20分钟后用氢氧化钠溶液将溶液pH调为9.7，然后加入二氯化镉充氮气冰浴搅拌5分钟。加入NaHSe，搅拌5分钟。最后将此溶液放入反应釜中，在200℃的烘箱中反应65分钟，得到ZnCdSe量子点；

(2)将四-(4-吡啶基)锌卟啉即ZnTPyP溶于N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中，超声溶解后置于4℃下备用；然后加入ZnTPyP的DMF溶液和十二烷基二甲基甜菜碱的水溶液室温下混合搅拌10min后得到一种非常稳定的绿色透明胶体四-(4-吡啶基)锌卟啉自组装体纳米棒即纳米卟啉溶液；

(3)将四-(4-吡啶基)锌卟啉自组装体溶液加入ZnCdSe量子点荧光探针，再加入pH＝8.0的Tris-HCl缓冲溶液，四-(4-吡啶基)锌卟啉自组装体通过电子转移和荧光共振能量转移作用，猝灭量子点荧光，通过特异性结合得到的复合物，提供量子点一个“Turn-off”的状态，荧光强度由840左右降至360左右；从而得到具有双重复合纳米效应的开关纳米卟啉荧光传感器；

(4)将不同标准浓度的黄酮类化合物分别加入到相同的开关纳米卟啉荧光传感器中，开关纳米卟啉荧光传感器中的量子点荧光恢复，不同浓度的黄酮类化合物致使量子点荧光恢复的现象产生明显的差异，实现了在可逆纳米卟啉荧光传感模式下黄酮类化合物的识别与定量；从而得到可逆“开-关-开”纳米卟啉荧光传感器；得到标准的现象，

或直接将步骤(3)和(4)合并：分别将不同浓度范围的黄酮类化合物与步骤(2)中合成的四-(4-吡啶基)锌卟啉自组装溶液、pH＝8.0的Tris-HCl缓冲溶液混合，静置5分钟；再加入步骤(1)合成的ZnCdSe量子点，在400-550nm处进行荧光光谱测定，测得其5分钟后的光谱，得到标准的光谱；

(5)将待测浓度的黄酮类化合物溶液加入到步骤(4)相同的开关纳米卟啉荧光传感器中，或按照得到标准的光谱的步骤进行操作，将得到的现象或光谱对照步骤(4)即可得到浓度；

进一步优选：

本发明中二氯化锌、N-乙酰-L-半胱氨酸、二氯化镉、NaHSe的物质的量的比为：1.0:3.0:0.01:0.1，一般步骤(1)ZnCdSe量子点荧光探针发射波长为465～480nm；

本发明步骤(2)中四-(4-吡啶基)锌卟啉与十二烷基二甲基甜菜碱的物质的量比为1:14～16；

本发明中步骤(3)四-(4-吡啶基)锌卟啉纳米棒与ZnCdSe量子点溶液的物质的量比为277～280:1；

本发明中步骤(3)最后混合溶液中四-(4-吡啶基)锌卟啉纳米棒的浓度、ZnCdSe量子点浓度分别为0.84～5.04μmol/L、4.2×10^-9mol/L。

进一步优选：本发明的可逆纳米卟啉荧光传感器是通过量子点与纳米卟啉特异性结合得到的复合物。荧光强度由840左右降至360左右。

本发明的可逆纳米卟啉荧光传感器灵敏度高。ZnCdSe量子点荧光探针的荧光强度随着四-(4-吡啶基)锌卟啉自组装溶液的增加逐渐减弱，甚至可以猝灭到底，本发明只要进行了部分淬灭或完全猝灭(优选在直线关系部分范围内)，均能实现步骤(4)的定性定量检测；四-(4-吡啶基)锌卟啉纳米棒浓度(0.84～5.04μmol/L)与ZnCdSe量子点(4.2×10^-9mol/L)的荧光强度成很好的线性关系；在一定的范围内检测槲皮素、芦丁、山奈酚、山奈素的荧光强度具有线性关系。

本发明的可逆纳米卟啉荧光传感器定量检测槲皮素浓度从(2.0×10^-8～1.0×10^-7mol/L)。随着槲皮素的浓度增加而增强，并成很好的线性关系。线性相关系数分别为0.9670。芦丁(1.0×10^-8～1.0×10^-7mol/L)与可逆纳米卟啉荧光传感器结合后的荧光强度随着芦丁的浓度增加而增强，并成线性关系。线性相关系数分别为0.8974。山奈酚(5.0×10^-9-1.0×10^-8mol/L)与可逆纳米卟啉荧光传感器结合后的荧光强度随着山奈酚的浓度增加而增强，并成很好的线性关系。线性相关系数分别为0.9940。山奈素(5.0×10^-9-1.0×10^-8mol/L)与可逆纳米卟啉荧光传感器结合后的荧光强度随着山奈素的浓度增加而增强，并成很好的线性关系。线性相关系数分别为0.9992。从而得到可逆“开-关-开”纳米卟啉荧光传感器；所以步骤(3)和(4)合并和分开能得到相同的效果。

本发明的可逆纳米卟啉传感器稳定性好。该可逆纳米卟啉荧光传感器在1.0×10^{- 5}mol/L离子(KCl、Na₂SO₄、CaCl₂、Mg₂SO₄、ZnCl₂)、1μg/mL生物基质(细胞培养液、小牛血浆、新生牛血清、牛血清白蛋白)和1μg/mL混合干扰的情况下，与槲皮素，芦丁，山奈酚，山奈素作用荧光恢复的强度几乎不变

本发明的可逆纳米卟啉荧光传感器对黄酮类物质响应速度快。可逆纳米卟啉荧光传感器中加入槲皮素，芦丁，山奈酚，山奈素后，荧光快速恢复，5分钟达到最稳定值。

本发明所述的方法，相比传统以色谱发法测定黄酮类物质的方法有诸多优势，包括制备简单、反应条件温和，对黄酮类物质检测的灵敏度高、抗干扰能力强、响应良好，该纳米卟啉荧光传感器在生物化学、食品、医药等领域具有实际的应用价值。

附图说明

图1为本发明新型可逆(开-关-开)纳米卟啉荧光传感器的可控制备方法及其高灵敏检测黄酮类物质的方法示意图。

图2为本发明可逆纳米卟啉传感器中的四-(4-吡啶基)锌卟啉自组装溶液的紫外可见光光谱，横坐标为波长，纵坐标为吸光度。

图3为本发明可逆纳米卟啉传感器中的四-(4-吡啶基)锌卟啉自组装溶液的透射式电子显微镜图片，其为纳米棒。

图4为本发明可逆纳米卟啉传感器中ZnCdSe量子点与四-(4-吡啶基)锌卟啉自组装溶液特异性结合后的荧光光谱图，横坐标为波长，纵坐标为荧光强度。

图5为本发明可逆纳米卟啉传感器的灵敏度。四-(4-吡啶基)锌卟啉自组装溶液(0.84～5.04μmol/L)与ZnCdSe量子点在Tris-HCl缓冲溶液(pH＝8.0)作用后的荧光光谱图，横坐标为波长，纵坐标为荧光强度。

图6为本发明可逆纳米卟啉传感器与不同浓度槲皮素(2.0×10^-8～1.0×10^-7mol/L)作用后的荧光恢复光谱，横坐标为波长，纵坐标为荧光强度。

图7为本发明可逆纳米卟啉传感器与不同浓度芦丁(1.0×10^-8～1.0×10^-7mol/L)作用后的荧光恢复光谱，横坐标为波长，纵坐标为荧光强度。

图8为本发明可逆纳米卟啉传感器与不同浓度山奈酚(5.0×10^-9-1.0×10^-8mol/L)作用后的荧光恢复光谱，横坐标为波长，纵坐标为荧光强度。

图9为本发明可逆纳米卟啉传感器与不同浓度山奈素(5.0×10^-9-1.0×10^-8mol/L)作用后的荧光恢复光谱，横坐标为波长，纵坐标为荧光强度。

图10为本发明可逆纳米卟啉传感器与不同浓度槲皮素作用后线性相关图，横坐标为槲皮素的浓度，纵坐标为荧光恢复强度(F₂)与ZnCdSe量子点原始荧光强度(F₀)的比值。

图11为本发明可逆纳米卟啉传感器与不同浓度芦丁作用后线性相关图，横坐标为芦丁的浓度，纵坐标为荧光恢复强度与ZnCdSe量子点原始荧光强度的比值。

图12为本发明可逆纳米卟啉传感器与不同浓度山奈酚作用后线性相关图，横坐标为山奈酚的浓度，纵坐标为荧光恢复强度(F₂)与ZnCdSe量子点原始荧光强度(F₀)的比值。

图13为本发明可逆纳米卟啉传感器与不同浓度山奈素作用后线性相关图，横坐标为山奈素的浓度，纵坐标为荧光恢复强度与ZnCdSe量子点原始荧光强度的比值。

图14为本发明可逆纳米卟啉传感器的稳定性。可逆纳米卟啉传感器与槲皮素在Ca²⁺、Zn²⁺、Mg²⁺、K⁺、Na⁺、细胞培养液、小牛血浆、新生牛血清、牛血清白蛋白和混合干扰(Mixture)的情况下作用后的稳定性。横坐标为所加入的干扰物质，纵坐标为荧光恢复强度(F₂)与ZnCdSe量子点原始荧光强度(F₀)的比值。

图15为本发明可逆纳米卟啉传感器的稳定性。可逆纳米卟啉传感器与芦丁在Ca²⁺、Zn²⁺、Mg²⁺、K⁺、Na⁺、细胞培养液、小牛血浆、新生牛血清、牛血清白蛋白和混合干扰(Mixture)的情况下作用后的稳定性。横坐标为所加入的干扰物质，纵坐标为荧光恢复强度(F₂)与ZnCdSe量子点原始荧光强度(F₀)的比值。

图16为本发明可逆纳米卟啉传感器的稳定性。可逆纳米卟啉传感器与山奈酚在Ca²⁺、Zn²⁺、Mg²⁺、K⁺、Na⁺、细胞培养液、小牛血浆、新生牛血清、牛血清白蛋白和混合干扰(Mixture)的情况下作用后的稳定性。横坐标为所加入的干扰物质，纵坐标为荧光恢复强度(F₂)与ZnCdSe量子点原始荧光强度(F₀)的比值。

图17为本发明可逆纳米卟啉传感器的稳定性。可逆纳米卟啉传感器与山奈素在Ca²⁺、Zn²⁺、Mg²⁺、K⁺、Na⁺、细胞培养液、小牛血浆、新生牛血清、牛血清白蛋白和混合干扰(Mixture)的情况下作用后的稳定性。横坐标为所加入的干扰物质，纵坐标为荧光恢复强度(F₂)与ZnCdSe量子点原始荧光强度(F₀)的比值。

具体实施方式

下面申请人将结合具体的实施例对本发明作进一步的详细说明，以使本领域的技术人员更加清楚地理解本发明。但以下内容不应理解为是对本发明的权利要求书请求保护范围的限制。

实施例：

实施例中所使用的化学试剂和溶剂均为分析纯。所述实验操作为磁力搅拌方式。所述的荧光光谱测定条件均为发射波长400-550nm，激发波长为360nm，狭缝宽度为10-15nm。

实施例1：可逆纳米卟啉荧光传感器对槲皮素的识别和定量分析，所述方法示意图如1，步骤如下：

(1)ZnCdSe量子点荧光探针的合成

将二氯化锌(0.035g,6.4mM)和N-乙酰-L-半胱氨酸(0.1253g,19.2mM)溶于40mL超纯水中，在冰浴、常压下搅拌20分钟后用氢氧化钠溶液将溶液pH调为9.7，调好pH加入100μL二氯化镉(0.00058g,0.237mM)，然后充氮气冰浴搅拌5～10分钟。加入NaHSe，搅拌5分钟。最后将此溶液放入反应釜中，在200℃的烘箱中反应65分钟。冷却至室温，得到4.9×10^-9mol/LZnCdSe量子点荧光探针。

(2)纳米卟啉溶液的合成

将适量四-(4-吡啶基)锌卟啉溶于N,N-二甲基甲酰胺溶液中，得到浓度为3×10^{- 4}mol/L四-(4-吡啶基)锌卟啉N,N-二甲基甲酰胺溶液，其紫外光谱图如图2。向圆底烧瓶中加入2.8ml ZnTPyP的DMF溶液和45.5ml2.7％十二烷基二甲基甜菜碱，室温下搅拌10min后得到一种非常稳定的绿色透明胶体溶液。利用紫外-可见分光光度计观察卟啉纳米化，得到纳米化卟啉浓度为1.68×10^-5mol/l，其紫外光谱图如图2。其透射式电子显微镜表征显示为粒径160nm左右的纳米棒，如图3。

(3)开关纳米卟啉荧光传感器的制备

在1.5mL比色皿中加入80μL4.9×10^-9mol/L步骤(1)合成的ZnCdSe量子点和890μLpH＝8.0的Tris-HCl缓冲溶液，在400-550nm处进行荧光光谱测定，476nm处得到荧光强度为840的峰，如图4。

在1.5mL比色皿中加入80μL4.9×10^-9mol/L步骤(1)合成的ZnCdSe量子点和300μL1.68×10^-5mol/L步骤(2)中合成的四-(4-吡啶基)锌卟啉自组装溶液，再加入620μLpH＝8.0的Tris-HCl缓冲溶液，混匀5分钟后，在400-550nm处进行荧光光谱测定,474nm处得到荧光强度为350的峰，如图4。

(4)可逆纳米卟啉荧光传感器对槲皮素的定量分析

在1.5mL比色皿中加入100μL槲皮素水溶液，300μL1.68×10^-5mol/L步骤(2)中合成的四-(4-吡啶基)锌卟啉自组装溶液和520μLpH＝8.0的Tris-HCl缓冲溶液，静置5分钟。再加入80μL4.9×10^-9mol/L步骤(1)合成的ZnCdSe量子点，在400-550nm处进行荧光光谱测定，测得其5分钟后的光谱。槲皮素(2.0×10^-8～1.0×10^-7mol/L)与纳米卟啉荧光传感器结合后的荧光强度随着槲皮素的浓度增加而增强，如图6，线性相关系数为0.9670，如图10。

在1.5mL比色皿中加入100μL槲皮素(2.0×10^-8mol/L)、100μL干扰物质(1.0×10^{- 6}mol/L)、300μL1.68×10^-5mol/L步骤(2)中合成的四-(4-吡啶基)锌卟啉自组装溶液和520μLpH＝8.0的Tris-HCl缓冲溶液，静置5分钟。再加入80μL4.9×10^-9mol/L步骤(1)合成的ZnCdSe量子点，在400-550nm处用荧光光谱测定,测得其5分钟后的光谱，荧光恢复几乎不受干扰因素的影响，表现出很强的抗干扰能力，如图14。

实施例2：可逆纳米卟啉荧光传感器对芦丁定量分析，所述方法示意图如1，步骤如下：

(1)ZnCdSe量子点荧光探针的合成

采用实施例1中步骤(1)的方法合成ZnCdSe量子点荧光探针。

(2)四-(4-吡啶基)锌卟啉自组装溶液的合成

采用实施例1中步骤(2)的方法合成四-(4-吡啶基)锌卟啉自组装溶液。

(3)开关纳米卟啉荧光传感器的制备

采用实施例1中步骤(3)的方法制备纳米卟啉荧光传感器。

(4)可逆纳米卟啉荧光传感器对芦丁的定量分析

在1.5mL比色皿中加入100μL芦丁水溶液，300μL1.68×10^-5mol/L步骤(2)中合成的四-(4-吡啶基)锌卟啉自组装溶液和520μLpH＝8.0的Tris-HCl缓冲溶液，静置5分钟。再加入80μL4.9×10^-9mol/L步骤(1)合成的ZnCdSe量子点，在400-550nm处进行荧光光谱测定，测得其5分钟后的光谱。芦丁(1.0×10^-8～1.0×10^-7mol/L)与纳米卟啉荧光传感器结合后的荧光强度随着芦丁的浓度增加而增强，如图7，线性相关系数为0.8974，如图11。在1.5mL比色皿中加入100μL芦丁(1.0×10^-8mol/L)、100μL干扰物质(1.0×10^-5mol/L)、300μL1.68×10^-5mol/L步骤(2)中合成的四-(4-吡啶基)锌卟啉自组装溶液和520μLpH＝8.0的Tris-HCl缓冲溶液，静置5分钟。再加入80μL4.9×10^-9mol/L步骤(1)合成的ZnCdSe量子点，在400-550nm处用荧光光谱测定,测得其5分钟后的光谱，荧光恢复几乎不受干扰因素的影响，表现出很强的抗干扰能力，如图15。

实施例3：可逆纳米卟啉荧光传感器对山奈酚定量分析，所述方法示意图如1，步骤如下：

(1)ZnCdSe量子点荧光探针的合成

采用实施例1中步骤(1)的方法合成ZnCdSe量子点荧光探针。

(2)四-(4-吡啶基)锌卟啉自组装溶液的合成

采用实施例1中步骤(2)的方法合成四-(4-吡啶基)锌卟啉自组装溶液。

(3)开关纳米卟啉荧光传感器的制备

采用实施例1中步骤(3)的方法制备纳米卟啉荧光传感器。

(4)可逆纳米卟啉荧光传感器对山奈酚的定量分析

在1.5mL比色皿中加入100μL山奈酚水溶液，300μL1.68×10^-5mol/L步骤(2)中合成的四-(4-吡啶基)锌卟啉自组装溶液和520μLpH＝8.0的Tris-HCl缓冲溶液，静置5分钟。再加入80μL4.9×10^-9mol/L步骤(1)合成的ZnCdSe量子点，在400-550nm处进行荧光光谱测定，测得其5分钟后的光谱。山奈酚(5.0×10^-9-1.0×10^-8mol/L)与纳米卟啉荧光传感器结合后的荧光强度随着山奈酚的浓度增加而增强，如图8，线性相关系数为0.9940，如图12。在1.5mL比色皿中加入100μL山奈酚(5.0×10^-9mol/L)、100μL干扰物质(1.0×10^-5mol/L)、300μL1.68×10^-5mol/L步骤(2)中合成的四-(4-吡啶基)锌卟啉自组装溶液和520μLpH＝8.0的Tris-HCl缓冲溶液，静置5分钟。再加入80μL4.9×10^-9mol/L步骤(1)合成的ZnCdSe量子点，在400-550nm处用荧光光谱测定,测得其5分钟后的光谱，荧光恢复几乎不受干扰因素的影响，表现出很强的抗干扰能力，如图16。

实施例4：可逆纳米卟啉荧光传感器对山奈素定量分析，所述方法示意图如1，步骤如下：

(1)ZnCdSe量子点荧光探针的合成

采用实施例1中步骤(1)的方法合成ZnCdSe量子点荧光探针。

(2)四-(4-吡啶基)锌卟啉自组装溶液的合成

采用实施例1中步骤(2)的方法合成四-(4-吡啶基)锌卟啉自组装溶液。

(3)开关纳米卟啉荧光传感器的制备

采用实施例1中步骤(3)的方法制备纳米卟啉荧光传感器。

(4)可逆纳米卟啉荧光传感器对山奈素的定量分析

在1.5mL比色皿中加入100μL山奈素，300μL1.68×10^-5mol/L步骤(2)中合成的四-(4-吡啶基)锌卟啉自组装溶液和520μLpH＝8.0的Tris-HCl缓冲溶液，静置5分钟。再加入80μL4.9×10^-9mol/L步骤(1)合成的ZnCdSe量子点，在400-550nm处进行荧光光谱测定，测得其5分钟后的光谱。山奈素(5.0×10^-9-1.0×10^-8mol/L)与纳米卟啉荧光传感器结合后的荧光强度随着山奈素的浓度增加而增强，如图9，线性相关系数为0.9992，如图13。在1.5mL比色皿中加入100μL山奈素(5.0×10^-9mol/L)、100μL干扰物质(1.0×10^-5mol/L)、300μL1.68×10^-5mol/L步骤(2)中合成的四-(4-吡啶基)锌卟啉自组装溶液和520μLpH＝8.0的Tris-HCl缓冲溶液，静置5分钟。再加入80μL4.9×10^-9mol/L步骤(1)合成的ZnCdSe量子点，在400-550nm处用荧光光谱测定，测得其5分钟后的光谱，荧光恢复几乎不受干扰因素的影响，表现出很强的抗干扰能力，如图17。

Claims (8)

1.一种定量测定黄酮类化合物的方法，其特征在于，具体步骤如下：

将二氯化锌和N-乙酰-L-半胱氨酸溶于超纯水中，在冰浴、常压下搅拌20分钟后用氢氧化钠溶液将溶液pH调为9.7，然后加入二氯化镉充氮气冰浴搅拌5分钟；加入NaHSe，搅拌5分钟；最后将此溶液放入反应釜中，在200℃的烘箱中反应65分钟，得到ZnCdSe量子点；

（2）将四-（4-吡啶基）锌卟啉即ZnTPyP溶于N,N-二甲基甲酰胺（DMF）中，超声溶解后置于4℃下备用；然后加入ZnTPyP的DMF 溶液和十二烷基二甲基甜菜碱的水溶液室温下混合搅拌10min后得到一种非常稳定的绿色透明胶体四-（4-吡啶基）锌卟啉自组装体纳米棒溶液；

（3）将四-（4-吡啶基）锌卟啉自组装体纳米棒溶液加入ZnCdSe量子点荧光探针，再加入pH=8.0的Tris-HCl缓冲溶液，四-（4-吡啶基）锌卟啉自组装体纳米棒通过电子转移和荧光共振能量转移作用，猝灭量子点荧光，通过特异性结合得到的复合物，提供量子点一个“Turn-off”的状态，荧光强度由840左右降至360左右；从而得到具有双重复合纳米效应的开关纳米卟啉荧光传感器；

（4）将不同标准浓度的黄酮类化合物分别加入到相同的开关纳米卟啉荧光传感器中，开关纳米卟啉荧光传感器中的量子点荧光恢复，不同浓度的黄酮类化合物致使量子点荧光恢复的现象产生明显的差异，实现了在可逆纳米卟啉荧光传感模式下黄酮类化合物的识别与定量；从而得到可逆“开-关-开”纳米卟啉荧光传感器，得到标准的现象；

或直接将步骤(3)和(4)合并：分别将不同浓度的黄酮类化合物与步骤(2)中合成的四-（4-吡啶基）锌卟啉自组装体纳米棒溶液、pH＝8.0的Tris-HCl缓冲溶液混合，静置5分钟；再加入步骤(1)合成的ZnCdSe量子点，在400-550nm处进行荧光光谱测定，测得其5分钟后的光谱，得到标准的光谱；

上述所述的不同浓度的黄酮类化合物指的是：槲皮素浓度2.0×10^-8~1.0×10^-7mol/L、芦丁浓度1.0×10^-8~1.0×10^-7mol/L）、山奈酚浓度5.0×10^-9-1.0×10^-8mol/L、山奈素浓度5.0×10^-9-1.0×10^-8mol/L；

（5）将待测浓度的黄酮类化合物溶液加入到步骤（4）相同的开关纳米卟啉荧光传感器中，或按照得到标准的光谱的步骤进行操作，将得到的现象或光谱对照步骤（4）即可得到浓度。

2.根据权利要求书1所述的一种定量测定黄酮类化合物的方法，其特征在于：二氯化锌、N-乙酰-L-半胱氨酸、二氯化镉、NaHSe的物质的量的比为：1.0:3.0:0.01:0.1。

3.根据权利要求书1所述的一种定量测定黄酮类化合物的方法，其特征在于：步骤（1）ZnCdSe量子点荧光探针发射波长为465～480nm。

4.根据权利要求书1所述的一种定量测定黄酮类化合物的方法，其特征在于：步骤（2）中四-（4-吡啶基）锌卟啉与十二烷基二甲基甜菜碱的物质的量比为1 : 14～16。

5.根据权利要求书1所述的一种定量测定黄酮类化合物的方法，其特征在于：步骤（3）四-（4-吡啶基）锌卟啉自组装体纳米棒与ZnCdSe量子点的物质的量比为277～280:1。

6.根据权利要求书1所述的一种定量测定黄酮类化合物的方法，其特征在于：步骤（3）最后混合溶液中四-（4-吡啶基）锌卟啉自组装体纳米棒的浓度、ZnCdSe量子点浓度分别为0.84～5.04μmol/L、4.2×10^-9mol/L。

7.根据权利要求书1所述的一种定量测定黄酮类化合物的方法，其特征在于：黄酮类化合物选自槲皮素、芦丁、山奈酚、山奈素。

8.根据权利要求书1所述的一种定量测定黄酮类化合物的方法，其特征在于：用于检测离子、生物基质和混合溶液中的黄酮类化合物浓度。

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