CN105866416A - 免疫层析试纸条、便携式检测仪及检测方法 - Google Patents

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CN105866416A CN201610329041.4A CN201610329041A CN105866416A CN 105866416 A CN105866416 A CN 105866416A CN 201610329041 A CN201610329041 A CN 201610329041A CN 105866416 A CN105866416 A CN 105866416A
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袁航
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Abstract

本发明提供了一种用于定量检测黄曲霉毒素M1的免疫层析试纸条，包括样品结合区和检测线，该样品结合区喷涂有量子点标记的黄曲霉毒素M1单克隆抗体，该检测线包被有黄曲霉毒素M1抗原/半抗原‑载体蛋白偶联物。该量子点标记的黄曲霉毒素M1单克隆抗体的发光波长为520~650 nm，其中每个量子点至多偶联有2个黄曲霉毒素M1单克隆抗体。本发明还提供了一便携式检测仪，包括光源模块和显示模块，配合该免疫层析试纸条定量检测黄曲霉毒素M1。此外，本发明进一步提供了一种使用该免疫层析试纸条和该便携式检测仪定量检测黄曲霉毒素M1的方法。

Description

免疫层析试纸条、便携式检测仪及检测方法
技术领域
本发明涉及食品检测领域，具体涉及一种以优选材料为基础，利用量子点荧光免疫层析快速定量检测黄曲霉毒素M1的免疫层析试纸条、便携式检测仪及检测方法。
背景技术
黄曲霉毒素是由某些霉菌（如黄曲霉和寄生曲霉）代谢产生的一组化学结构类似、致毒基团相同的化合物，经常在储存方式不当的花生、玉米、水稻、小麦、高粱、葵花籽、坚果、棉花种子等大宗商品中发现。目前已分离鉴定出20余种黄曲霉毒素，其中，主要有黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2及由B1和B2在体内经过羟化而衍生成的代谢产物M1、M2等。黄曲霉毒素B1和M1都是致癌致畸致突变的有毒化合物，主要危害肝脏、肾脏等部位，同时具有免疫毒性，降低免疫能力，对人类健康造成危害。被黄曲霉污染的食品通常包括两种，其一是被黄曲霉毒素（主要为B1）污染的植物性食物，其二是经由饲料被黄曲霉毒素（主要为M1）污染的乳或乳制品（如奶酪、奶粉等）。为了维护人类健康，多个国家和地区都对食品中黄曲霉毒素的含量做了严格限量要求。
乳制品作为婴幼儿食物的主要来源，在我国的消费量逐年升高，其质量安全问题经常会引起社会的广泛关注。我国在《食品安全国家标准——食品中真菌毒素限量》（GB 2761-2011）中规定，在乳及乳制品及特殊膳食用食品（如各类婴儿配方食品）中黄曲霉毒素M1的含量不得超过0.5 μg/kg。欧盟的相关标准更加严格地规定乳及乳制品中黄曲霉毒素M1的含量不得超过0.05μg/kg，婴儿配方食品中黄曲霉毒素M1的含量不得超过0.025μg/kg。黄曲霉毒素M1的检测方法主要有色谱法、免疫化学法、电化学方法、化学发光及各种方法之间的联用。然而，常规的仪器分析方法存在样品前处理复杂、仪器设备昂贵、检测时间长等问题，不能满足在现场对样品进行快速检测的要求。中国专利201410079913.7和中国专利201520275946.9基于免疫层析 (immunochromatography) 技术，分别利用包埋有荧光染料的荧光微球和胶体金标记黄曲霉毒素M1单克隆抗体，制备检测黄曲霉毒素M1的免疫层析试纸条。与传统检测方法相比，这两种免疫层析试纸条具有操作简单、检测时间较短等特点。但是，这些方法仍然存在一定的不足。前者采用基于传统有机荧光染料的荧光微球作为荧光探针，传统有机荧光染料发光寿命较短，稳定性欠佳，容易出现光漂白现象，另外使用该试纸条进行检测的过程中需要加热样品，操作较为繁琐，增加了检测大量样品时所需的工作量；后者采用胶体金颗粒作为吸收探针，胶体金颗粒粒径均一性差，免疫标记物不稳定，灵密度相对较低。更重要的是，现有技术只能进行定性检测，无法在实验室和生产现场快速的检测乳和乳制品等中的黄曲霉毒素M1的含量，难以直接判断相关产品是否达到了相关食品安全标准。
量子点 (quantum dots, QDs) 又被称为半导体纳米晶，通常由II-VI族及III-V族元素组成，具有尺寸可调、激发光谱宽、发射光谱窄、斯托克位移较大等特点。量子点摩尔吸光系数和荧光量子产率较高，可以产生较强的荧光信号，提高了检测的灵敏度。同时，量子点光化学稳定性好、耐光漂白性能佳，提高了检测结果的稳定性。综上所述，量子点是一种理想的荧光探针材料，在基于免疫层析技术的检测领域具有独特的优势和广泛的应用前景。现阶段，用作荧光探针的量子点主要有单核量子点 (CdSe, CdTe, CdS) 和核壳式量子点 (CdSe/ZnS, CdSe/ZnSe)，可以基于有机物与无极金属化合物或有机金属化合物之间的高温裂解反应在非极性有机溶剂中制备。在有机体系中合成得到的量子点具有几乎完美的晶体结构、良好的单分散性、较强的光稳定性和较高的荧光产率，但是常规合成方法中使用的三丁基膦、三辛基膦等有机膦化合物剧毒、易燃、不稳定、易爆炸、价格昂贵，并且对操作环境有较高的要求，限制了量子点产品的大规模生产及应用。此外，在制备量子点荧光探针的过程中，量子点与相应的抗体分子的偶联产物存在均一性和分散性较差、易于发生团聚、发光效率较低、发射光谱半峰宽过宽等问题，影响了相关产品的检测性能。
发明内容
本发明克服了现有技术中的不足，利用免疫层析技术和量子点材料，提供了一种快速定量检测黄曲霉毒素M1的免疫层析试纸条、便携式检测仪及检测方法。
本发明提供了一种用于定量检测黄曲霉毒素M1的免疫层析试纸条，包括样品结合区和检测线。该样品结合区喷涂有量子点标记的黄曲霉毒素M1单克隆抗体，该检测线包被有黄曲霉毒素M1抗原/半抗原-载体蛋白偶联物。该量子点标记的黄曲霉毒素M1单克隆抗体中的每个量子点最多偶联有2个黄曲霉毒素M1单克隆抗体，该量子点标记的黄曲霉毒素M1单克隆抗体的发光波长为520~650 nm。
优选地，该检测线包被有黄曲霉毒素M1半抗原-牛血清白蛋白偶联物
进一步地，该免疫层析试纸条还包括质控线，该质控线包被有羊抗鼠抗体。
优选地，本发明中所使用的量子点为水溶性量子点，该水溶性量子点的直径为30~60 nm。
进一步地，本发明中所使用的水溶性量子点先经油相合成再经水相转移制得。该油相合成步骤采用无膦法制备油溶性量子点。该水相转移步骤中采用两亲性高分子包覆该油溶性量子点。该两亲性高分子与该油溶性量子点之间的相互作用力为非共价键作用。
优选地，该油溶性量子点的直径为10~30 nm，该油溶性量子点为CdS、CdSe、CdTe、ZnS、ZnSe、CdSe/ZnS、CdSe/CdS、CdSe/CdS/ZnS、ZnSe/ZnS、ZnSe/CdSe/ZnS、CuInS2/ZnS、CuInZnxS2+x/ZnS、CdxZn1-xSe/ZnS、CdS/ZnSe、ZnSe/CdSe/ZnS、CdTe/CdSe中的一种或几种的组合。
优选地，该两亲性高分子包括聚马来酸酐十六醇酯。
在一优选实施方式中，该免疫层析试纸条的检测下限为0.05 ng/mL，定量检测范围为0.05~1.0 ng/mL。
优选地，该免疫层析试纸条还包括二维码，该二维码记载免疫层析试纸条信息和检测项目数据。
本发明还提供了一便携式检测仪，配合所述免疫层析试纸条定量检测黄曲霉毒素M1。该便携式检测仪包括光源模块和显示模块。该光源模块产生的光的波长为360~485 nm，用于激发该免疫层析试纸条的量子点发光；该显示模块定量显示被测样品中黄曲霉毒素M1的浓度。
本发明进一步提供了一种使用所述免疫层析试纸条定量检测黄曲霉毒素M1的方法，包括以下步骤：
提供一便携式检测仪；
处理样品；
将所述处理后的样品滴加在该免疫层析试纸条上；
将所述加有处理后的样品的免疫层析试纸条插入该便携式检测仪；以及
用该便携式检测仪定量检测黄曲霉毒素M1的浓度。
进一步地，该样品为奶制品。对于脂肪度大于5%的液态奶制品，通过离心去除上层脂肪层后，取下层液体进行检测；对于脂肪度小于5%的液态奶制品，直接取样进行检测。对于固态奶制品，先将该固态奶制品按比例溶于蒸馏水配置为液体奶制品，混匀后根据其脂肪度进行处理及检测。
本发明通过对免疫层析试纸条所采用的量子点及量子点标记的黄曲霉毒素M1单克隆抗体的结构和性能进行严格控制，该检测卡能够在常温下对黄曲霉毒素M1进行快速、灵敏、准确的定量检测，在较大的浓度区间内具有线性关系，检测结果的稳定性高，定量检测结果的偏差小于15%，检测灵敏度可以达到0.05 ng/mL，满足了国内外相关食品安全标准对样品中黄曲霉毒素M1含量的检测需求。
附图说明
图1为第一实施方式中免疫层析试纸条的结构示意图。
图2为第一实施方式中合成量子点标记的黄曲霉毒素M1单克隆抗体的示意图。
图3为另一实施方式中免疫层析试纸条的结构示意图。
图4为一具体实施例中使用免疫层析试纸条检测黄曲霉毒素M1的标准曲线。
应当指出的是，上述附图不是按比例绘制的，并且附图中相似结构或功能的组件出于说明的目的通常由相同的标号代表。还应当指出的是附图仅是为了便于优选实施例的描述。附图未表明所描述实施例的每一方面，也不限制本发明的范围。
主要元件符号说明
免疫层析试纸条 100，200
加样区 10
加样孔 12
样品 14
样品结合区 20
量子点标记的黄曲霉毒素M1单克隆抗体 22
黄曲霉毒素M1单克隆抗体 24
水溶性量子点 26
油溶性量子点 27
两亲性高分子 28
层析膜 32
检测线 34
质控线 36
吸水区 40
底衬 50
二维码 210
外壳 220
免疫层析检测区 230
如下具体实施方式将结合上述附图进一步说明本发明。
具体实施方式
请参阅图1，本发明的第一实施方式提供了一种用于定量检测黄曲霉毒素M1的免疫层析试纸条100。该免疫层析试纸条100包括底衬50，加样区10、样品结合区20、层析膜32、吸水区40被按顺序粘贴在底衬50上。该加样区10具有加样孔12。该加样区10的始端与该底衬50的始端对齐，该吸水区40的末端与该底衬50的末端对齐，该样品结合区20的末端与该层析膜32的始端相连，该层析膜32的末端与该吸水区40相连。该层析膜32上具有条带状的检测线34和质控线36，垂直于该免疫层析试纸条100较长的两边。该检测线34包被有黄曲霉毒素M1抗原/半抗原-载体蛋白偶联物，位于靠近样品结合区20的一端；该质控线36位于远离样品结合区20的一端。
在一实施例中，该样品结合区20为玻璃纤维膜，该层析膜32为硝基纤维素，该检测线34包被有黄曲霉毒素M1半抗原-牛血清白蛋白偶联物，该质控线36包被有羊抗鼠抗体，该吸水区40为吸水纸，该底衬50为PVC底板。
为实现对黄曲霉毒素M1的定量检测，该样品结合区20喷涂有量子点标记的黄曲霉毒素M1单克隆抗体22，其中每个量子点表面至多偶联有2个黄曲霉毒素M1单克隆抗体，发射波长为520~630 nm。如图2所示，该量子点标记的黄曲霉毒素M1单克隆抗体22是由包覆有两亲性高分子的水溶性量子点26与黄曲霉毒素M1单克隆抗体24通过偶联 (bioconjugation) 反应制得的。该水溶性量子点26的直径为30~60 nm。具体地，该水溶性量子点26的制备包括油相合成和水相转移两个步骤，即通过油相合成制备油溶性量子点27及通过水相转移将两亲性高分子28包覆在该油溶性量子点27表面。
其中，该油溶性量子点27选自CdS、CdSe、CdTe、ZnS、ZnSe、CdSe/ZnS、CdSe/CdS、CdSe/CdS/ZnS、ZnSe/ZnS、ZnSe/CdSe/ZnS、CuInS2/ZnS、CuInZnxS2+x/ZnS、CdxZn1-xSe/ZnS、CdS/ZnSe、ZnSe/CdSe/ZnS、CdTe/CdSe中的一种或几种的组合。该油溶性量子点27是采用无膦法 (phosphine-free synthesis) 制备的具有核壳结构的量子点，其直径为10~30 nm，发光波长为520~650 nm。通过控制反应时间得到所需粒径及发射波长的量子点。
其中，该两亲性高分子28的疏水端通过疏水作用力、范德华力或氢键等非共价键作用与该油溶性量子点27表面的疏水基团相互作用，包覆在该油溶性量子点27的表面，得到该水溶性量子点26。通过进一步控制该两亲性高分子28的分子量及水相转移反应的条件，所制备的该水溶性量子点26的粒径为30~60nm。在一实施例中，该两亲性高分子28为聚马来酸十六醇酯。
其中，该两亲性高分子28的亲水端具有可与该黄曲霉毒素M1单克隆抗体24形成共价键或分子间特异性相互作用的基团，通过偶联反应制备该量子点标记的黄曲霉毒素M1单克隆抗体22。该偶联反应既可以是利用化学交联剂实现的共价键偶联，也可以利用分子间特异性相互作用（或分子识别, molecular recognition）实现的非共价健偶联。在本发明的一实施例中，该偶联反应采用1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺 (EDC)和N-羟基硫代琥珀酰亚胺 (Sulfo-NHS)作为交联剂，其一般步骤为：将该水溶性量子点26与EDC和NHS在缓冲液中混合均匀后，向其中加入一定量的黄曲霉毒素M1单克隆抗体，反应一定时间后，加入1%牛血清白蛋白或水解乳清蛋白 溶液封闭，通过反复离心、洗涤对产物进行纯化。通过控制各反应物之间的摩尔比、添加/混合方式、反应温度、反应时间等使该量子点标记的黄曲霉毒素M1单克隆抗体22中的每个量子点上至多偶联有2个抗体。利用琼脂糖凝胶电泳对所制备的量子点标记的黄曲霉毒素M1单克隆抗体22进行表征，观察其在琼脂糖凝胶中的位移和迁移速率，得到该水溶性量子点26偶联的该黄曲霉毒素M1单克隆抗体24的数量。
该量子点标记的黄曲霉毒素M1单克隆抗体22的光吸收值、荧光值、及荧光回收率可通过连续波长多功能酶标仪进行检测。此外，该方法利用样品溶液的吸光值实现了对样品中量子点的浓度的定量控制。在一具体实施例中，将10 μL样品加入240 μL缓冲液稀释25倍，混匀后，取样100μL稀释后的样品溶液加入酶标板孔中，进行复孔测试。利用终点法在400nm波长处单点扫描检测稀释后的样品溶液的吸收值。对复孔数据结果取平均值，然后以吸收值为2.0为标准对样品进行定容。之后，将1 μL样品加入399 μL的缓冲液稀释400倍。混匀后，取150 μL稀释后的样品溶液加入酶标板孔中，进行复孔测试。在365 nm的激发波长下连续扫描610 nm-650 nm范围内的荧光值，对复孔数据结果取平均值，再还原至原倍（用400乘以该平均值）得到偶联后该量子点标记的黄曲霉毒素M1单克隆抗体22的荧光值。将偶联产物的该荧光值除以采用相同检测方法所得的偶联前水溶性量子点26的荧光值，得到荧光回收率。
在一优选实施例中，对具有相同光吸收值的不同批次的量子点标记的黄曲霉毒素M1单克隆抗体22的荧光值和荧光回收率进行检测。下表示出的检测结果表明，本发明提供的实施方式能够将偶联反应后量子点的荧光损失降到30%之内。
偶联产物编号 偶联后荧光值 荧光回收率 光吸收值
C6816032401 6.9422E+10 75.60% 2.0
C6816032404 6.5011E+10 70.80% 2.0
P6816032413 6.4859E+10 70.63% 2.0
M6816032416 6.4481E+10 70.22% 2.0
M6816032419 6.4877E+10 70.65% 2.0
C7016041214 1.1265E+11 77.43% 2.0
C7016041502 1.164E+11 73.04% 2.0
P7016042003 1.1725E+11 79.19% 2.0
M7016041202 1.1287E+11 79.76% 2.0
F7016042105 1.0738E+11 72.45% 2.0
M7016042110 1.1369E+11 76.12% 2.0
进一步地，本发明所提供的免疫层析试纸条还可以具有二维码。请参阅图3，在另一实施方式中，免疫层析试纸条200包括二维码210、免疫层析检测区230和外壳220。其中，该二维码210被设置于外壳220的表面，该免疫层析检测区230被设置于该外壳220的内部。该二维码210记载有检测项目数据，包括该检测卡的名称信息、检测项目、生产批号、质控区最低有效亮度、标准曲线方程、保质期等。更重要的是，该二维码210所记载的检测项目数据包括该检测项目所对应的一种或多种检测模式，及每种检测模式所需的检测等待时间。该免疫层析检测区230的结构如上文中免疫分析试纸条110基本相同，此处不再赘述。将该免疫层析检测区230装入具有二维码210的外壳220中。
本发明的第二实施方式提供了一便携式检测仪，配合前面所述的免疫层析试纸条实现对黄曲霉毒素M1的定量检测。该便携式检测仪包括光源模块、显示模块和供电模块。其中，该光源模块能够发射波长为360-485 nm的紫外光或蓝光，该显示模块能够直接显示被测样品中黄曲霉毒素M1的浓度，该供电模块为220V电源或机内安装的低电压锂电池。该显示模块所显示的样品中黄曲霉毒素M1的浓度由公式1计算得出：
Y = (A-D)/{1+(X/C)B} + D 公式1
其中，A、B、C、D为四个拟合参数，X为黄曲霉毒素M1的浓度，Y为被同一光源激发时检测区 (T) 和质控区 (C) 检测得到的发光强度的比值（T/C比）。
为配合上述免疫层析试纸条200的使用，在另一实施方式中，该便携式检测仪进一步包括读码模块。该读码模块能够读取该免疫层析试纸条200中该二维码210所记载的检测项目数据。将加有样品的该免疫层析试纸条200插入该便携式检测仪进行检测时，该携式检测仪首先读取该二维码210记载的检测项目数据，判断所使用的检测卡是否过期、检测卡所对应的生产批次是否合格、被测标的物的类型及能够准确检测的被测标的物的浓度范围（线性范围）等信息。若读取的检测项目数据均满足相应条件，该便携式检测仪根据该二维码210记载的检测项目数据确定检测等待时间，在相应时刻用光源激发该免疫层析试纸条200中的量子点发光，处理和分析该免疫层析试纸条200产生的光信号，显示检测结果，即黄曲霉毒素M1的浓度。
本发明的第三实施方式提供了一种使用上述免疫层析试纸条100定量检测样品中黄曲霉毒素M1的方法，包括：
提供一便携式检测仪。该便携式检测仪同第二实施方式所述，此处不再赘述。
准备样品14。在一具体实施方式中，该样品14为奶制品，需根据该奶制品的特征选择不同样品处理方式。如果该样品14为液态奶制品，对于脂肪度大于5%的液态奶制品，将其在4℃下用6 000 rpm的转速离心5分钟，去除上层脂肪层后，取下层液体待检；对于脂肪度小于5%的液态奶制品，可直接用于检测。如果该样品14为固态奶制品，如奶粉等，将固态奶制品按1:8的比例溶于蒸馏水配置为液体奶，即向1g的奶粉中加入8 g 的蒸馏水，混匀后参照液态奶制品的相关方法对样品进行处理。
在一具体实施方式中，检测前先将该免疫层析试纸条100置于室温环境。待其平衡至室温后，检查该免疫层析试纸条100的外包装是否完好，确认其完好后打开包装袋取出该免疫层析试纸条100。同时，提前开启该便携式检测仪，预热光源。将该样品14按上述方法处理后，用移液器取80 μL处理后的该样品14缓慢地垂直滴入该免疫层析试纸条100的该加样孔12。然后，将该免疫层析试纸条100插入该便携式检测仪对该样品14中黄曲霉毒素M1的浓度进行定量检测。
在另一实施方式中，提供了一种使用具有上述二维码210的免疫层析试纸条200，配合具有读码模块的便携式检测仪定量检测样品中黄曲霉毒素M1的方法。在一实施例中，将处理后的样品滴入该免疫层析试纸条200的加样孔后，立即将该免疫层析试纸条200插入该便携式检测仪并选择“标准检测”模式；该便携式检测仪读取该二维码210记载的检测项目数据后，进入倒计时状态，在预先设置的等待时间后进行检测并给出被测样品中黄曲霉毒素M1的浓度。在另一实施例中，将处理后的样品滴入该免疫层析试纸条200的加样孔后，将该免疫层析试纸条200室温静置15分钟后，再将该免疫层析试纸条200插入该便携式检测仪并选择“快速检测”模式；该便携式检测仪读取该二维码210记载的检测项目数据后直接开始进行检测并给出被测样品中黄曲霉毒素M1的浓度。
在一具体实施例中，使用本发明所揭露的免疫层析试纸条100和便携式检测仪，依照本发明的样品处理和检测方法，检测一组不同浓度的标准样品。请参阅图4，x轴为黄曲霉毒素M1的浓度，y轴为检测时免疫层析试纸条100上检测线34（T）上的荧光强度与质控线36（C）上的荧光强度的比值（T/C值）。通过Logistic四参数曲线模型拟合得到定量检测黄曲霉毒素M1的标准曲线方程：y = (7.02+0.34) / {1+(x/0.14)0.84} – 0.34 (即拟合后公式1中的A=7.02，B=0.84，C=0.14，D=0.34)。在0.05 ng/mL ~ 1 ng/mL的浓度范围内，该拟合曲线的相关系数r的平方（r2）为0.993，说明本发明所揭露的免疫层析试纸条在该浓度范围内具有非常好的线性关系，检测灵敏度可以达到0.05 ng/mL，能够满足国内外所有相关食品安全标准对样品中黄曲霉毒素M1含量的检测要求。
本发明实现了在生产现场、实验室或检测机构快速准确地定量检测乳、乳制品及相关膳食用食品中黄曲霉毒素M1的含量。本发明通过控制量子点标记黄曲霉毒素M1单克隆抗体的偶联产物的性质，提高了量子点-抗体偶联物的分散性，避免了量子点-抗体偶联物团聚的发生，从而提高了免疫试纸条产品的稳定性和灵敏性。
此外，本发明简化了基于量子点探针的免疫层析试纸条检测卡的制备工艺，特别是在合成量子点的过程中避免了毒性较高、对反应条件要求苛刻的有机膦类化合物的使用，减轻了对环境的污染及对相关实验人员的潜在危害。本发明还对检测卡所采用的量子点及量子点标记的黄曲霉毒素M1单克隆抗体的结构和性能进行了严格的控制，得到了具有高发光强度、高量子产率、稳定分散的量子点探针，从而提高了检测黄曲霉毒素M1的灵敏度、准确度、适用范围及检测结果的可重复性和可信度。
本发明方法无需对乳及乳制品产品进行复杂的预处理，并通过便携式检测仪读取检测卡上的二维码所记载的检测项目数据对检测卡及被检样品进行一系列预判和信息录入，减轻了检测人员的工作量，简化了检测过程，提高了检测速度，适用于大批量样品的快速定量检测。
本发明公开了一种快速、灵敏、定量检测黄曲霉毒素M1的免疫层析试纸条、便携式检测仪及检测方法。应当理解的是，所述实施方式并不限于已揭露的具体形式或方法，相反地，本发明将涵盖本发明原理范围内的所有更改、替代和改变方式。

Claims (10)

1.一种用于定量检测黄曲霉毒素M1的免疫层析试纸条，包括样品结合区和检测线，所述样品结合区喷涂有量子点标记的黄曲霉毒素M1单克隆抗体，所述检测线包被有黄曲霉毒素M1抗原/半抗原-载体蛋白偶联物；
所述量子点标记的黄曲霉毒素M1单克隆抗体中的每个量子点最多偶联有2个黄曲霉毒素M1单克隆抗体，所述量子点标记的黄曲霉毒素M1单克隆抗体的发光波长为520~650 nm。
2.如权利要求1所述的免疫层析试纸条，其特征在于，还包括质控线，所述检测线包被有黄曲霉毒素M1半抗原-牛血清白蛋白偶联物，所述质控线包被有羊抗鼠抗体。
3.如权利要求1所述的免疫层析试纸条，其特征在于，所述量子点为水溶性量子点，所述水溶性量子点的直径为30~60 nm。
4.如权利要求3所述的免疫层析试纸条，其特征在于，所述水溶性量子点先经油相合成再经水相转移制得；所述油相合成步骤采用无膦法制备油溶性量子点，所述水相转移步骤中采用两亲性高分子包覆所述油溶性量子点；所述两亲性高分子与所述油溶性量子点之间的相互作用力为非共价键作用。
5.如权利要求4所述的免疫层析试纸条，其特征在于，所述油溶性量子点的直径为10~30 nm，所述油溶性量子点为CdS、CdSe、CdTe、ZnS、ZnSe、CdSe/ZnS、CdSe/CdS、CdSe/CdS/ZnS、ZnSe/ZnS、ZnSe/CdSe/ZnS、CuInS2/ZnS、CuInZnxS2+x/ZnS、CdxZn1-xSe/ZnS、CdS/ZnSe、ZnSe/CdSe/ZnS、CdTe/CdSe中的一种或几种的组合；所述两亲性高分子包括聚马来酸酐十六醇酯。
6.如权利要求1所述的免疫层析试纸条，其特征在于，所述免疫层析试纸条的检测下限为0.05 ng/mL，定量检测范围为0.05~1.0 ng/mL。
7.如权利要求1所述的免疫层析试纸条，其特征在于，所述免疫层析试纸条包括二维码，所述二维码记载免疫层析试纸条信息和检测项目数据。
8.一便携式检测仪，配合如权利要求1所述的免疫层析试纸条定量检测黄曲霉毒素M1，包括光源模块和显示模块，所述光源模块产生的光的波长为360~485 nm，用于激发所述免疫层析试纸条的量子点发光，所述显示模块定量显示被测样品中黄曲霉毒素M1的浓度。
9.一种使用如权利要求1所述的免疫层析试纸条定量检测黄曲霉毒素M1的方法，包括以下步骤：
提供一便携式检测仪；
处理样品；
将所述处理后的样品滴加在所述免疫层析试纸条上；
将所述加有处理后的样品的免疫层析试纸条插入所述便携式检测仪；以及
用所述便携式检测仪定量检测黄曲霉毒素M1的浓度。
10.如权利要求9所述的定量检测黄曲霉毒素M1的方法，其特征在于，所述样品为奶制品，对于脂肪度大于5%的液态奶制品，通过离心去除上层脂肪层后，取下层液体进行检测；对于脂肪度小于5%的液态奶制品，直接取样进行检测；对于固态奶制品，先将该固态奶制品按比例溶于蒸馏水配置为液体奶制品，混匀后根据其脂肪度进行处理及检测。
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Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106442973A (zh) * 2016-09-07 2017-02-22 北京热景生物技术股份有限公司 食品安全领域真菌毒素多参数定量检测试剂盒
CN106770090A (zh) * 2016-11-28 2017-05-31 天津科技大学 一种快速检测黄曲霉毒素m1的方法
CN109142703A (zh) * 2017-06-28 2019-01-04 南京理工大学 基于水溶性钙钛矿纳米晶的黄曲霉素m1的检测方法
CN109655614A (zh) * 2019-02-26 2019-04-19 广州维佰生物科技有限公司 牛布氏菌病病毒荧光微球免疫层析试纸及其制备方法与检测方法
CN109884293A (zh) * 2019-03-29 2019-06-14 中国海洋大学 一种基于量子点荧光的食品过敏原快速检测方法
WO2021097816A1 (zh) * 2019-11-22 2021-05-27 京东方科技集团股份有限公司 乳品溶液分析方法和便携式乳品溶液分析设备

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101059513A (zh) * 2007-05-31 2007-10-24 杭州迪恩科技有限公司 检测食品中药物残留的方法及其设备
CN103760363A (zh) * 2014-01-08 2014-04-30 中国科学院长春光学精密机械与物理研究所 基于核壳量子点柔性偶联标记物免疫层析试纸条的检测方法
CN105044346A (zh) * 2015-06-25 2015-11-11 浙江大学 双重定量真菌毒素量子点荧光免疫层析试纸条及制备方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101059513A (zh) * 2007-05-31 2007-10-24 杭州迪恩科技有限公司 检测食品中药物残留的方法及其设备
CN103760363A (zh) * 2014-01-08 2014-04-30 中国科学院长春光学精密机械与物理研究所 基于核壳量子点柔性偶联标记物免疫层析试纸条的检测方法
CN105044346A (zh) * 2015-06-25 2015-11-11 浙江大学 双重定量真菌毒素量子点荧光免疫层析试纸条及制备方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
王素娟: "聚马来酸酐和二氧化硅修饰的水溶性CdSe/ZnS荧光量子点的制备及应用研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库（电子期刊）工程科技I辑》 *
赵卫东等: "利用荧光免疫层析卡测定黄曲霉毒素M1的研究", 《食品研究与开发》 *

Cited By (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106442973A (zh) * 2016-09-07 2017-02-22 北京热景生物技术股份有限公司 食品安全领域真菌毒素多参数定量检测试剂盒
CN106770090A (zh) * 2016-11-28 2017-05-31 天津科技大学 一种快速检测黄曲霉毒素m1的方法
CN106770090B (zh) * 2016-11-28 2024-02-20 天津科技大学 一种快速检测黄曲霉毒素m1的方法
CN109142703A (zh) * 2017-06-28 2019-01-04 南京理工大学 基于水溶性钙钛矿纳米晶的黄曲霉素m1的检测方法
CN109142703B (zh) * 2017-06-28 2021-07-13 南京理工大学 基于水溶性钙钛矿纳米晶的黄曲霉素m1的检测方法
CN109655614A (zh) * 2019-02-26 2019-04-19 广州维佰生物科技有限公司 牛布氏菌病病毒荧光微球免疫层析试纸及其制备方法与检测方法
CN109884293A (zh) * 2019-03-29 2019-06-14 中国海洋大学 一种基于量子点荧光的食品过敏原快速检测方法
WO2021097816A1 (zh) * 2019-11-22 2021-05-27 京东方科技集团股份有限公司 乳品溶液分析方法和便携式乳品溶液分析设备
CN113227766A (zh) * 2019-11-22 2021-08-06 京东方科技集团股份有限公司 乳品溶液分析方法和便携式乳品溶液分析设备
CN113227766B (zh) * 2019-11-22 2024-10-18 京东方科技集团股份有限公司 乳品溶液分析方法和便携式乳品溶液分析设备

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