CN111018696A - 一种当归阿魏酸的提取方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种当归阿魏酸的提取方法，包括如下步骤：步骤一，将新鲜的当归块根预处理；步骤二，将预处理的当归冷冻4‑8h，冷冻温度范围为‑20℃至‑80℃，然后放在水浴中解冻，解冻温度范围为0‑40℃，重复1‑3次；将最后一次解冻后的块茎放入榨汁机，在榨汁机中加入溶剂，冷榨，摇匀，过滤，弃去药渣，得到滤液；步骤三，取滤液离心，取上清，得到供试品溶液；本发明通过使用冻融法大幅度提高了阿魏酸提取率，且通过优化实验找到了最适合提取当归阿魏酸的提取条件，进一步提高提取率，且保留了原材料的营养和有效成分。
Description
技术领域
本发明涉及提取工艺，特别是一种当归阿魏酸的提取方法。
背景技术
当归性甘、辛，温。归肝、心、脾经。有补血活血，调经止痛，润肠通便之功效。《本草纲目》记载，当归治头痛，心腹诸痛，润肠胃筋骨皮肤，治痈疽，排脓止痛，和血补血。现代药理研究表明，当归能降低心肌兴奋性；扩张冠脉，增加冠脉流量；降低心肌耗氧量，血压下降；有抗心律失常作用，抗动脉粥样硬化效应，还有改善微循环作用。当归的化学成分主要分为挥发油部分和水溶性部分，挥发油部分包括中性、酸性以及酚性油3部分，其中，藁苯内酯是当归挥发油部分的主要成分，水溶性部分主要有阿魏酸及多糖等。有机酸类作为为当归的主要活性成分之一，其化合物主要是阿魏酸，具有有效保护心肌细胞，镇静，保肝利胆的作用。根据文献报道，阿魏酸能抑制缺氧诱导的内皮素释放，增加核转录抑制蛋白的表达和脑皮质微血管内皮细胞(BMEC)活性，对大鼠脑皮质BMEC缺氧损伤具有保护作用。
市场进行当归阿魏酸的提取，大多采用热水浸提法和超声波法，但是这样的方法得率都较低，市场也有出现纤维素酶法和果胶酶法的提取方法，但是工艺要求严格，步骤复杂，且得率并没有得到很大的提高，市场需要一种工艺步骤简单，提高阿魏酸提取率的方法，本发明解决这样的问题。
发明内容
为解决现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种当归阿魏酸的提取方法，通过使用冻融法大幅度提高了阿魏酸提取率，且通过优化实验找到了最适合提取当归阿魏酸的提取条件，进一步提高提取率，且保留了原材料的营养和有效成分。
为了实现上述目标，本发明采用如下的技术方案：
一种当归阿魏酸的提取方法，包括如下步骤：
步骤一，将新鲜的当归块根预处理；
步骤二，将预处理的当归冷冻4-8h，冷冻温度范围为-20℃至-80℃，然后放在水浴中解冻，解冻温度范围为0-40℃，重复1-3次；将最后一次解冻后的块茎放入榨汁机，在榨汁机中加入溶剂，冷榨，摇匀，过滤，弃去药渣，得到滤液；
步骤三，取滤液在4000-8000r/min条件下离心15-20min，取上清，得到供试品溶液。
前述的一种当归阿魏酸的提取方法，预处理包括：将新鲜的当归块根洗净并切至1-2cm长。
前述的一种当归阿魏酸的提取方法，冷冻温度为-40℃。
前述的一种当归阿魏酸的提取方法，解冻温度为0℃。
前述的一种当归阿魏酸的提取方法，溶剂为块茎体积5-10倍量的70％的甲醇。
前述的一种当归阿魏酸的提取方法，冷冻解冻重复3次。
前述的一种当归阿魏酸的提取方法，滤液在4000-8000r/min条件下离心20min。
本发明的有益之处在于：
本发明采用的冻融法，通过低温冷冻与室温融化交替进行，实现破壁，使细胞破裂的同时避免了高温对原料所造成的营养损失、有效成分破坏的不良影响，与传统阿魏酸提取方法相比，交替冻融破壁法可直接用于新鲜的当归，且具有能耗低，阿魏酸提取率高，生产成本低；
本发明通过优化实验找到了最适合提取当归阿魏酸的提取条件，进一步提高提取率。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明作具体的介绍。
一种当归阿魏酸的提取方法，包括如下步骤：
步骤一，将新鲜的当归块根预处理；作为一种优选，预处理包括：将新鲜的当归块根洗净并切至1-2cm长。
步骤二，将预处理的当归冷冻4-8h，冷冻温度范围为-20℃至-80℃，然后放在水浴中解冻，解冻温度范围为0-40℃，重复1-3次；将最后一次解冻后的块茎放入榨汁机，在榨汁机中加入溶剂，冷榨，摇匀，过滤，弃去药渣，得到滤液；作为一种优选，冷冻温度为-40℃，解冻温度为0℃，冷冻解冻重复3次，溶剂为块茎体积5-10倍量的70％的甲醇。
步骤三，取滤液在4000-8000r/min条件下离心15-20min，取上清，得到供试品溶液，作为一种优选，离心时间为20min。
以下通过实验验证选择冻融法的有益效果；
实施例1，
本发明方法：选取5g新鲜的当归块根切至1-2cm长，放在-40℃冰箱中，冷冻4h，取出，放在0℃水浴中解冻，重复三次。将最后一次解冻的当归放在榨汁机中，加入10倍量的70％甲醇，冷榨3min。将榨好的当归溶液于50ml容量瓶中，用少量70％甲醇分次洗涤容器，洗液一同并入量瓶中，加入蒸馏70％甲醇至刻度，摇匀以后抽滤，弃去药渣。取10mL滤液在8000r/min条件下离心20min，获得阿魏酸初提物。
检测：用注射器量取上清液1-3mL，过0.22um滤膜，以乙腈-磷酸溶液(17:83)为流动相，检测波长316nm，柱温35℃，于高效液相色谱仪中检测。
式中，C：阿魏酸提取液的浓度(mg/ml)；V：提取液总体积(ml)；m：称取当归的质量(g)。
经实验，该法提取的当归阿魏酸得率为0.206％。
对比实施例1
冷榨提取方法：选取5g新鲜的当归块根切至1-2cm长，放在榨汁机中，加入10倍量的70％甲醇，冷榨3min。将经过处理的溶液于50mL容量瓶中，用少量70％甲醇分次洗涤容器，洗液一同并入量瓶中，加入70％甲醇至刻度，摇匀以后抽滤，弃去药渣。取10mL滤液在8000r/min条件下离心20min，取上清，获得阿魏酸初提物。
检测：用注射器量取上清液1-3mL，过0.22um滤膜，以乙腈-磷酸溶液(17:83)为流动相，检测波长316nm，柱温35℃，于高效液相色谱仪中检测。
式中，C：阿魏酸提取液的浓度(mg/mL)；V：提取液总体积(ml)；m：称取当归的质量(g)。
经实验，该法提取的当归阿魏酸得率为0.163％。
对比实施例2，
干样超声提取方法：选取5g新鲜的当归块根切至1-2cm长，放鼓风干燥箱中40℃烘干，将烘干的当归块茎粉碎，过60目筛。将全部粉碎的当归粉末，加入10倍量的70％甲醇，放入水浴温度20-30℃，超声频率100Hz的超声清洗仪中，超声30min。将经过超声处理的溶液于50ml容量瓶中，用少量70％甲醇分次洗涤容器，洗液一同并入量瓶中，70％甲醇至刻度，摇匀以后用纱布过滤，弃去药渣。取10ml滤液在8000r/min条件下离心20min，取上清，获得阿魏酸初提物。
检测：用注射器量取上清液1-3mL，过0.22um滤膜，以乙腈-磷酸溶液(17:83)为流动相，检测波长316nm，柱温35℃，于高效液相色谱仪中检测。
式中，C：阿魏酸提取液的浓度(mg/mL)；V：提取液总体积(mL)；m：称取当归的质量(g)。
经实验，该法提取的当归阿魏酸得率为0.138％。
对比实施例3
鲜样超声提取方法：
选取30g新鲜的当归块根切至1-2cm长，放在榨汁机中，加入10倍量的70％甲醇，冷榨3min。放入水浴温度20-30℃，超声频率100Hz的超声清洗仪中，超声30min。将经过超声处理的溶液于500ml容量瓶中，用少量70％甲醇分次洗涤容器，洗液一同并入量瓶中，70％甲醇至刻度，摇匀以后抽滤，弃去药渣。取10mL滤液在8000r/min条件下离心20min，取上清，获得阿魏酸初提物。
检测：用注射器量取上清液1-3mL，过0.22um滤膜，以乙腈-磷酸溶液(17:83)为流动相，检测波长316nm，柱温35℃，于高效液相色谱仪中检测。
经实验，该法提取的当归阿魏酸得率为0.182％
表1不同提取方法所得的当归阿魏酸提取液的吸光度和阿魏酸含量
| 提取方法 | 吸光度 | 阿魏酸得率(％) |
| 冷榨 | 0.486 | 0.163 |
| 鲜样超声 | 0.668 | 0.182 |
| 干样超声 | 0.902 | 0.138 |
| 冻融 | 1.096 | 0.206 |
如上表可知：与传统阿魏酸提取方法相比，本发明的冻融法的阿魏酸提取率高。
实验二，冷冻温度优选实验；
实施例2，冷冻温度为-10℃，0℃解冻；
选取30g新鲜的当归块根切至2-3cm长，放在-10℃冰箱中，冷冻4h，取出，放在0℃水浴中解冻，重复三次。将最后一次解冻的当归放在榨汁机中，加入10倍量的70％甲醇，冷榨3min。将榨好的当归溶液于500ml容量瓶中，用少量70％甲醇分次洗涤容器，洗液一同并入量瓶中，加入70％甲醇至刻度，摇匀以后抽滤，弃去药渣。取50mL滤液在8000r/min条件下离心10min，取上清，获得阿魏酸初提物。
检测：用注射器量取上清液1-3mL，过0.22um滤膜，以乙腈-磷酸溶液(17:83)为流动相，检测波长316nm，柱温35℃，于高效液相色谱仪中检测。
式中，C：阿魏酸提取液的浓度(mg/mL)；V：提取液总体积(mL)；m：称取当归的质量(g)。
经实验，该法提取的当归阿魏酸得率为0.138％。
实施例3，冷冻温度为-20℃，0℃解冻；
选取30g新鲜的当归块根切至2-3cm长，放在-20℃冰箱中，冷冻4h，取出，放在0℃水浴中解冻，重复三次。将最后一次解冻的当归放在榨汁机中，加入10倍量的70％甲醇，冷榨3min。将榨好的当归溶液于50ml容量瓶中，用少量70％甲醇分次洗涤容器，洗液一同并入量瓶中，加入70％甲醇至刻度，摇匀以后抽滤，弃去药渣。取10ml滤液在8000r/min条件下离心20min，获得阿魏酸初提物。
检测：用注射器量取上清液1-3mL，过0.22um滤膜，以乙腈-磷酸溶液(17:83)为流动相，检测波长316nm，柱温35℃，于高效液相色谱仪中检测。
式中，C：阿魏酸提取液的浓度(mg/mL)；V：提取液总体积(mL)；m：称取当归的质量(g)。
经实验，该法提取的当归阿魏酸得率为0.160％。
实施例4，冷冻温度为-60℃，0℃解冻；
选取30g新鲜的当归块根切至2-3cm长，放在-60℃冰箱中，冷冻4h，取出，放在0℃水浴中解冻，重复三次。将最后一次解冻的当归放在榨汁机中，加入10倍量的70％甲醇，冷榨3min。将榨好的当归溶液于50ml容量瓶中，用少量70％甲醇分次洗涤容器，洗液一同并入量瓶中，加入70％甲醇至刻度，摇匀以后抽滤，弃去药渣。取10ml滤液在8000r/min条件下离心20min，获得阿魏酸初提物。
检测：用注射器量取上清液1-3mL，过0.22um滤膜，以乙腈-磷酸溶液(17:83)为流动相，检测波长316nm，柱温35℃，于高效液相色谱仪中检测。
式中，C：阿魏酸提取液的浓度(mg/mL)；V：提取液总体积(mL)；m：称取当归的质量(g)。
经实验，该法提取的当归阿魏酸得率为0.170％。
实施例5，冷冻温度为-80℃，0℃解冻；
选取30g新鲜的当归块根切至2-3cm长，放在-80℃冰箱中，冷冻4h，取出，放在0℃水浴中解冻，重复三次。将最后一次解冻的当归放在榨汁机中，加入10倍量的70％甲醇，冷榨3min。将榨好的当归溶液于50ml容量瓶中，用少量70％甲醇分次洗涤容器，洗液一同并入量瓶中，加入70％甲醇至刻度，摇匀以后抽滤，弃去药渣。取10ml滤液在8000r/min条件下离心20min，获得阿魏酸初提物。
检测：用注射器量取上清液1-3mL，过0.22um滤膜，以乙腈-磷酸溶液(17:83)为流动相，检测波长316nm，柱温35℃，于高效液相色谱仪中检测。
式中，C：阿魏酸提取液的浓度(mg/mL)；V：提取液总体积(mL)；m：称取当归的质量(g)。
经实验，该法提取的当归阿魏酸得率为0.168％。
实施例5，冷冻温度为-90℃，0℃解冻；
选取30g新鲜的当归块根切至2-3cm长，放在-80℃冰箱中，冷冻4h，取出，放在0℃水浴中解冻，重复三次。将最后一次解冻的当归放在榨汁机中，加入10倍量的70％甲醇，冷榨3min。将榨好的当归溶液于50ml容量瓶中，用少量70％甲醇分次洗涤容器，洗液一同并入量瓶中，加入70％甲醇至刻度，摇匀以后抽滤，弃去药渣。取10ml滤液在8000r/min条件下离心20min，获得阿魏酸初提物。
检测：用注射器量取上清液1-3mL，过0.22um滤膜，以乙腈-磷酸溶液(17:83)为流动相，检测波长316nm，柱温35℃，于高效液相色谱仪中检测。
式中，C：阿魏酸提取液的浓度(mg/mL)；V：提取液总体积(mL)；m：称取当归的质量(g)。
经实验，该法提取的当归阿魏酸得率为0.135％。
根据实施例1-5的提取方法，只有冰冻温度不同，试验得到如下表1的结果：
| 冷冻温度(℃) | 阿魏酸得率(％) |
| -10 | 0.138 |
| -20 | 0.160 |
| -40 | 0.206 |
| -60 | 0.170 |
| -80 | 0.168 |
| -90 | 0.135 |
表1
结果分析：根据实验可知在本发明要求的冷冻温度-20—80℃之间时，阿魏酸的得率都较好，在这个范围外得率明显下滑，呈现峰度；且-40℃时，得率最高。
实验三，解冻温度优化实验；
实施例6，
与实施例1都一样只有解冻温度为25℃解冻。
检测：用注射器量取上清液1-3mL，过0.22um滤膜，以乙腈-磷酸溶液(17:83)为流动相，检测波长316nm，柱温35℃，于高效液相色谱仪中检测。
式中，C：阿魏酸提取液的浓度(mg/mL)；V：提取液总体积(mL)；m：称取当归的质量(g)。
经实验，该法提取的当归阿魏酸得率为0.172％。
实施例7，
与实施例1都一样只有解冻温度为40℃解冻。
检测：用注射器量取上清液1-3mL，过0.22um滤膜，以乙腈-磷酸溶液(17:83)为流动相，检测波长316nm，柱温35℃，于高效液相色谱仪中检测。
式中，C：阿魏酸提取液的浓度(mg/mL)；V：提取液总体积(mL)；m：称取当归的质量(g)。
经实验，该法提取的当归阿魏酸得率为0.161％。
实施例8，
与实施例1都一样只有解冻温度为50℃解冻。
检测：用注射器量取上清液1-3mL，过0.22um滤膜，以乙腈-磷酸溶液(17:83)为流动相，检测波长316nm，柱温35℃，于高效液相色谱仪中检测。
式中，C：阿魏酸提取液的浓度(mg/mL)；V：提取液总体积(mL)；m：称取当归的质量(g)。
经实验，该法提取的当归阿魏酸得率为0.155％。
实施例9，
与实施例1都一样只有解冻温度为60℃解冻。
检测：用注射器量取上清液1-3mL，过0.22um滤膜，以乙腈-磷酸溶液(17:83)为流动相，检测波长316nm，柱温35℃，于高效液相色谱仪中检测。
式中，C：阿魏酸提取液的浓度(mg/mL)；V：提取液总体积(mL)；m：称取当归的质量(g)。
经实验，该法提取的当归阿魏酸得率为0.147％。
表2不同解冻温度所得的当归阿魏酸提取液的吸光度和阿魏酸含量(冷冻温度均为-40℃)
| 解冻温度(℃) | 阿魏酸提取率(％) |
| 0 | 0.206 |
| 25 | 0.172 |
| 40 | 0.161 |
| 50 | 0.155 |
| 60 | 0.147 |
结果分析：解冻温度在0-40℃时，阿魏酸提取率均较好，高于40℃后，提取率下降明显；最优的解冻温度为0℃。
由以上结果可知：最优的解冻温度为0℃，最优的冷冻温度为-40℃。
本发明采用的冻融法，通过低温冷冻与室温融化交替进行，实现破壁，使细胞破裂的同时避免了高温对原料所造成的营养损失、有效成分破坏的不良影响，与传统阿魏酸提取方法相比，交替冻融破壁法可直接用于新鲜的当归，且具有能耗低，阿魏酸提取率高，生产成本低；本发明再通过优化实验找到了最适合提取当归阿魏酸的提取条件，进一步提高提取率。
以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和优点。本行业的技术人员应该了解，上述实施例不以任何形式限制本发明，凡采用等同替换或等效变换的方式所获得的技术方案，均落在本发明的保护范围内。
Claims (7)
1.一种当归阿魏酸的提取方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤一，将新鲜的当归块根预处理；
步骤二，将预处理的当归冷冻4-8h，冷冻温度范围为-20℃至-80℃，然后放在水浴中解冻，解冻温度范围为0-40℃，重复1-3次；将最后一次解冻后的块茎放入榨汁机，在榨汁机中加入溶剂，冷榨，摇匀，过滤，弃去药渣，得到滤液；
步骤三，取滤液在4000-8000r/min条件下离心15-20min，取上清，得到供试品溶液。
2.根据权利要求1所述的一种当归阿魏酸的提取方法，其特征在于，所述预处理包括：将新鲜的当归块根洗净并切至1-2cm长。
3.根据权利要求1所述的一种当归阿魏酸的提取方法，其特征在于，所述冷冻温度为-40℃。
4.根据权利要求1所述的一种当归阿魏酸的提取方法，其特征在于，所述解冻温度为0℃。
5.根据权利要求1所述的一种当归阿魏酸的提取方法，其特征在于，所述溶剂为块茎体积5-10倍量的70％的甲醇。
6.根据权利要求1所述的一种当归阿魏酸的提取方法，其特征在于，冷冻解冻重复3次。
7.根据权利要求1所述的一种当归阿魏酸的提取方法，其特征在于，滤液在4000-8000r/min条件下离心20min。
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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| CN113945651A (zh) * | 2021-09-26 | 2022-01-18 | 兰州石化职业技术学院 | 一种非离子型表面活性剂萃取当归中阿魏酸的方法及应用 |
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