CN111011854A - 一种枸杞提取物及其制备方法和用途 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种枸杞提取物及其制备方法和用途。所述枸杞提取物中肽含量在35wt％以上，总糖含量不低于25wt％。本发明巧妙地使用了枸杞水提或者醇提后的药渣经过酶解、过滤、浓缩和干燥，得到橙色的枸杞提取物。此枸杞提取物对酒精、有害物质、不良习惯或者不良饮食导致的肝损伤具有治疗作用，同时可以改善肝功能的功效。本发明的方法操作简便，高收率低成本，资源利用率高，产品质量稳定，工艺绿色环保，适合大规模生产。
Description
技术领域
本发明涉及一种富含多肽和糖类的枸杞提取物的产品，其肽含量在35wt％以上，总糖含量不低于25wt％。本发明还涉及到枸杞提取物的制备并酶解，生成颜色为橙色的枸杞提取物的制备方法，该提取物可用作食品、保健食品、或者药品。
背景技术
枸杞为茄科枸杞属植物枸杞的干燥的果实。4500年以来，枸杞在亚洲国家被用作一种传统的中药和功能性食品，广泛用于泡酒、泡茶、泡水、煲汤、煮粥等。在我国，枸杞的药用记载始见于《神农本草经》，列为上品，李时珍在《本草纲目》中以枸杞滋养肝肾，补充能量，改善视力等功效将其称为一流的药材。中国传统中医认为枸杞其味甘、性平,归肝、肾经,有补肝、益肾、明目的功能，用于虚劳精亏、腰膝酸痛、眩晕耳鸣、内热消渴、血虚萎黄、目眩不明等病症。现代医学证明，枸杞具有补肾养肝、润肺明目、增强免疫力、防衰老、抗肿瘤、抗氧化、抗疲劳及协同防癌等多方面的药理作用，被《中国药典》所收录。化学成分研究表明，枸杞含有多糖、甜菜碱、类胡萝卜素、黄酮、氨基酸、多种维生素和对人体有益的多种微量元素。据报道，枸杞多糖是枸杞的最重要的也是最主要的活性成分之一，具有免疫调节的生理活性。因此，目前对于枸杞的开发利用仅仅停留在对枸杞多糖的提取制备。在工业生产中，用于制备枸杞多糖后剩余的枸杞药渣一直没有得到有效的利用，仅仅用于动物饲料等方面。
本发明针对现有问题，将枸杞药渣再次回收利用，使用特别的技术获得了更为营养、功能性更强、更易吸收的枸杞提取物。发明人意外的发现枸杞药渣中有大量的蛋白类和糖类成分，此蛋白类和糖类成分溶解性差，较难以被人体利用。发明人使用蛋白酶别将药渣中的蛋白类成分水解，从而获得溶解性更好的枸杞提取物。本发明所涉及的制备方法简单、绿色环保、可以有效利用植物资源，同时产品纯度高，流动性好，具有多种生理功效成分，为枸杞的开发利用奠定了坚实的基础。
发明内容
本发明的目的是提供了一种富含多肽和糖类的枸杞提取物。
本发明的另一目的是提供了一种富含多肽和糖类的枸杞提取物的制备方法。
本发明的另一目的是提供了本发明枸杞提取物可用于制备预防、缓解或治疗对酒精导致的肝损伤的食品、保健食品或药品的应用；
本发明的另一目的是提供了本发明枸杞提取物可用于制备预防、缓解或治疗对有害物质导致的肝损伤的食品、保健食品或药品的应用；
本发明的另一目的是提供了本发明枸杞提取物可用于制备预防、缓解或治疗不良习惯或者不良饮食引起的肝损伤的食品、保健食品或药品的应用；
本发明的另一目的是提供了本发明枸杞提取物可用于制备预防、缓解或者治疗肝损伤引起的相关疾病的食品、保健食品或药品的应用；
本发明的另一目的是提供了本发明枸杞提取物可用于制备改善或者提高肝功能的食品、保健食品或药品的应用。
本发明的另一目的是提供了含有本发明枸杞提取物的药物和食品组合物。
本发明的目的是通过下述技术方案实现的：
一种枸杞提取物，其特征在于：肽含量在35wt％以上，总糖含量不低于25wt％。
优选地，所述的枸杞提取物，其特征在于：肽含量的检测方法是参照GB/T 22492-2008附录B和GB/T 22729-2008所述的肽含量的测定方法进行。
优选地，所述的枸杞提取物，其特征在于：总糖含量的测定方法是苯酚-硫酸法。
优选地，所述的枸杞提取物的制备方法，其特征在于包括下述步骤：将枸杞药渣，依次经过生物酶酶解、过滤、浓缩干燥后，得到枸杞提取物。
优选地，所述的制备方法，其特征在于：所述的枸杞药渣可以为经水提后或者经醇提后或者经水提再经醇提后药渣，也可以为通过其它方法除去糖类物质之后的药渣。
优选地，所述的制备方法，其特征在于：所述的生物酶酶解所用的生物酶可以为果胶酶、聚糖酶、纤维素酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、碱性蛋白酶、酸性蛋白酶、胃蛋白酶、胰酶、罗汉果蛋白酶中的一种或者它们的混合物。
优选地，所述的制备方法，其特征在于：所述的过滤可以为膜过滤、离心过滤和普通过滤法(如板框过滤法、筛网过滤法)。
优选地，所述的浓缩方法可以为真空浓缩、常压浓缩、膜浓缩法。
优选地，所述的干燥方法可以为真空干燥、加热干燥、晾干、风干、冷冻干燥和喷雾干燥法。
优选地，所述枸杞提取物是通过下述方法制备得到的：
取一定量的枸杞药渣，与水按重量比为1:15～1:30混合，加热至35～60℃，调整pH为4.0～9.0，至少加入原料重量的0.1％生物酶，至少搅拌3h后，升温至80℃以上至少灭活2min，离心取上清液。在40～80℃下浓缩至固含为3～5wt％时，干燥后，得到颜色为橙色的枸杞提取物，产率不低于20wt％。
一种枸杞提取物，肽含量在35wt％以上，总糖含量不低于25％，其特征在于：通过权利要求4-10任一所述的方法制备所得。
优选地，所述枸杞提取物肽含量的检测方法是参照GB/T 22492-2008附录B和GB/T22729-2008所述的肽含量的测定方法进行。
优选地，所述枸杞提取物总糖含量的测定方法是苯酚-硫酸法。
一种组合物，其含有本发明所述的枸杞提取物和，食品、药物或化妆品食品上可接受的助剂。
根据现有技术，本发明可将所述的组合物制备成任意所述剂型，如素片、薄膜包衣片、糖衣片、肠衣片、分散片、胶囊、颗粒剂、口服溶液或口服混悬液，以及液体、乳液、膏霜、粉、块状等化妆品剂型。
本发明所述的枸杞提取物可用于制备预防、缓解或治疗对酒精导致的肝损伤的食品、保健食品或药品；用于制备预防、缓解或治疗对有害物质导致的肝损伤的食品、保健食品或药品；用于制备预防、缓解或治疗不良习惯或者不良饮食引起的肝损伤的食品、保健食品或药品；用于制备预防、缓解或者治疗肝损伤引起的相关疾病的食品、保健食品或药品；用于制备改善或者提高肝功能的食品、保健食品或药品。
本发明所述的组合物可用于制备预防、缓解或治疗对酒精导致的肝损伤的食品、保健食品或药品；用于制备预防、缓解或治疗对有害物质导致的肝损伤的食品、保健食品或药品；用于制备预防、缓解或治疗不良习惯或者不良饮食引起的肝损伤的食品、保健食品或药品；用于制备预防、缓解或者治疗肝损伤引起的相关疾病的食品、保健食品或药品；用于制备改善或者提高肝功能的食品、保健食品或药品。
目前现有技术，获得枸杞提取物的方法是水提、或者醇提、或者水提后再醇提、或者醇提后再水提、或者使用超临界二氧化碳提取等方法，此外，获得的枸杞提取物无法直接进行喷雾干燥，或者直接冷冻干燥，或者直接真空干燥，缺点在于：
1直接进行冷冻干燥或者真空干燥后获得的产品相当黏稠，流动性极其不好，因此无法做成冲饮，而且冷冻干燥造价相当高，真空干燥时间也相当长。
2无法直接进行喷雾干燥或者纯枸杞提取物，或者加入辅料进行喷雾干燥，因而无法获得纯品。
3提取完成后，产生大量的药渣，造成资源浪费，无法满足绿色、环保、节约资源等要求。
4目前技术所获得的枸杞提取物中仅仅含有糖类成分，不含蛋白类和肽类成分，导致生物活性不高，枸杞药材也没有得到有效的利用。
本发明与现有技术相比，具有如下优点：
1.本发明使用的原料可以是水提后的、或者乙醇等其它有机溶剂提取后的、或者水与乙醇等其它有机溶剂混合提取后的、或者水提后再用乙醇等其它有机溶剂提取后的、或者乙醇等其它有机溶剂提取后再用水提取后的、或者使用超临界二氧化碳萃取后的枸杞的药渣，充分利用枸杞植物资源，达到资源再利用，减少废弃物排除、提高产业效益。
2.本发明的制备方法中不使用任何有机溶剂、任何对人体环境有害的化学物质，产品安全、工艺绿色环保、环境资源可持续。
3.本发明所获得的产品制备到了水、乙醇等其它有机溶剂提不到的枸杞成分，同时获得了比原材料营养更高、功效更强、更易吸收的肽类成分。
4.本发明所获得的产品可以不加辅料而直接进行喷雾干燥，产品纯度高、流动性好，可以不加任何助剂直接做成固体冲饮等产品。
附图说明
图1：枸杞提取物处理后斑马鱼肝脏脂肪信号强度典型图。
实施例
下面通过实施例对本发明作进一步说明。应该理解的是，本发明实施例所述方法仅仅是用于说明本发明，而不是对本发明的限制，在本发明的构思前提下对本发明制备方法的简单改进都属于本发明要求保护的范围。如无特别说明，实施例中用到的所有原料和溶剂均为市售产品。
制备实施例1
往枸杞子药材中加入其重量15倍的饮用水，回流提取2h，提取三次后，药渣烘干后备用。
称取100kg枸杞子药渣，加入2000L饮用水，加热至45℃，调整pH约为6，加入100g食品级中性蛋白酶(酶活力为30万u/g)，搅拌3h后，升温至80℃以上灭活5min，离心取上清液。在60℃下浓缩至固含为3wt％时，喷雾干燥后，得到20.5kg颜色为橙色的枸杞提取物(G-1)，采用GB/T 22492-2008附录B的检测方法，测得肽含量为37.5wt％，使用苯酚-硫酸法测定糖类成分的含量为27.8wt％。
制备实施例2
往枸杞子药材中加入其重量10倍体积浓度为90％的乙醇溶液，回流提取2h，提取三次后，再加入原药材10倍饮用水回流提取2h，提取两次后，药渣烘干后备用。
称取100kg枸杞子药渣，加入3000L饮用水，加热至55℃，调整pH为8.5，加入100g食品级碱性蛋白酶(酶活力为20万u/g)，搅拌3h后，升温至80℃以上灭活2min，过200目振荡筛。在80℃下浓缩至固含为5wt％时，真空干燥后，得到21.5kg颜色为橙色的枸杞提取物(G-2)，采用GB/T 22492-2008附录B的检测方法，测得肽含量为36.1wt％，使用苯酚-硫酸法测定糖类成分的含量为26.4wt％。
制备实施例3
往枸杞子药材中加入其重量10倍饮用水回流提取2h，提取两次后，再加入原药材重量10倍体积浓度为90％的乙醇溶液，回流提取2h，提取三次后，药渣烘干后备用。
称取100kg枸杞子药渣，加入1500L饮用水，加热至45℃，调整pH为8.5，加入100g食品级碱性蛋白酶(酶活力为20万u/g)，搅拌3h后，升温至80℃以上灭活2min，使用微滤膜处理后，在80℃下浓缩至固含为4.3wt％时，冷冻干燥后，得到22.2kg颜色为橙色的枸杞提取物(G-3)，采用GB/T 22492-2008附录B的检测方法，测得肽含量为38.8wt％，使用苯酚-硫酸法测定糖类成分的含量为29.0wt％。
制备实施例4
往枸杞子药材中加入其重量10倍纯化水，原药材质量的0.1％食品级纤维素酶(酶活力为2万u/g),3h后，过滤，再往药渣中加入原药材重量10倍体积浓度为90％的乙醇溶液，回流提取2h，提取三次后，再加入原药材10倍饮用水回流提取2h，提取两次后，药渣烘干后备用。
称取100kg枸杞子药渣，加入1500L饮用水，加热至40℃，调整pH为6.0，加入100g食品级酸性蛋白酶(酶活力为20u/g)，搅拌4h后，升温至80℃以上灭活2min，使用微滤膜处理后，在80℃下浓缩至固含为3.6wt％时，喷雾干燥后，得到20.4kg颜色为橙色的枸杞提取物(G-4)，采用GB/T 22492-2008附录B的检测方法，测得肽含量为36.2wt％，使用苯酚-硫酸法测定糖类成分的含量为26.1wt％。
制备实施例5
往枸杞子药材中加入其重量10倍纯化水，原药材质量的0.1％食品级果胶酶(酶活力为1万u/g),3h后，过滤，再往药渣中加入原药材重量10倍体积浓度为90％的乙醇溶液，回流提取2h，提取三次后，再加入原药材10倍饮用水回流提取2h，提取两次后，药渣烘干后备用。
称取100kg枸杞子药渣，加入1500L饮用水，加热至40℃，调整pH为6.5，加入100g食品级无花果蛋白酶(酶活力为5u/g)，搅拌4h后，升温至80℃以上灭活2min，离心取上清液，在80℃下浓缩至固含为40.6wt％时，喷雾干燥后，得到20.9kg颜色为橙色的枸杞提取物(G-5)，采用GB/T 22492-2008附录B的检测方法，测得肽含量为35.3wt％，使用苯酚-硫酸法测定糖类成分的含量为27.4wt％。
生物活性实施例
随机选取180尾受精后5天(5dpf)黑色素等位基因突变型半透明Albino品系斑马鱼于六孔板中，每孔(实验组)均处理30尾斑马鱼，用无水乙醇诱导斑马鱼建立酒精性脂肪肝模型。用水溶给予枸杞提取物(G-1)125μg/mL浓度，阳性对照药“RU21”100μg/mL浓度，同时设置正常对照组(养鱼用水处理斑马鱼)和模型对照组，每孔药液容量为3mL。除正常对照组外，其余实验组分别与无水乙醇共同处理30h。处理结束后，将斑马鱼置入4％多聚甲醛中固定，4℃过夜后取出，用PBS冲洗3遍，用丙二醇进行梯度脱水，再使用新鲜配制并过滤后的0.5％油红O工作液中染色过夜，染色结束后每组随机取10尾斑马鱼在解剖显微镜下观察斑马鱼肝脏，拍照并保存图片。用NIS-Elements D 3.10高级图像处理软件进行图像分析并采集数据，分析统计斑马鱼肝脏中的脂肪信号强度(S)，以肝脏脂肪信号强度的统计学分析结果评价供试品对无水乙醇诱导的酒精性脂肪肝的保护作用，统计学处理结果用mean±SE表示。保肝作用计算公式如下：保肝作用(％)＝(S模型-S供试品)/(S模型-S正常)×100％，用T-test检验进行统计学分析，p<0.05表明具有显著性差异，结果如表1所示。
表1枸杞提取物(G-1)的斑马鱼保肝作用(n＝10)
与正常对照组比较，***p<0.001；与模型对照组比较，△△p<0.01，△△△p<0.001
如表1所示，模型对照组斑马鱼肝脏脂肪信号强度(17863像素)与正常对照组(11883像素)比较p<0.001，表明模型建立成功。阳性对照药“RU21”100μg/mL浓度组斑马鱼肝脏脂肪信号强度为12742像素，与模型对照组比较p<0.001，保肝作用为86％，说明“RU21”对斑马鱼酒精性脂肪肝具有保护作用。枸杞提取物组斑马鱼肝脏脂肪信号强度为14955像素，与模型对照组比较为p<0.01，保肝作用为49％。可见，枸杞提取物对斑马鱼酒精性脂肪肝具有明显的保护作用。
Claims (9)
1.一种枸杞提取物，其特征在于：肽含量在35wt％以上，总糖含量不低于25wt％；优选地，肽含量在40wt％以上，和/或总糖含量不低于30wt％；优选地，肽含量在45wt％以上，和/或总糖含量不低于35wt％；优选地，肽含量在55wt％以上，和/或总糖含量不低于45wt％；肽为低聚肽、小分子肽或糖肽中的一种或多种，总糖为单糖、低聚糖或多糖中的一种或多种；肽含量的检测方法是参照GB/T 22492-2008附录B和GB/T 22729-2008所述的肽含量的测定方法进行；总糖含量的测定方法是苯酚-硫酸法。
2.权利要求1所述枸杞提取物的制备方法，其特征在于：包括下述步骤：将枸杞药渣，依次经过生物酶酶解、过滤、浓缩、干燥后，得到枸杞提取物。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述的枸杞药渣可以为经水提后或者经醇提后或者经水提再经醇提后药渣，也可以为通过其它方法除去糖类物质之后的药渣。
4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述的生物酶酶解所用的生物酶可以为果胶酶(酶活力≥1万u/g)、聚糖酶(酶活力≥1000u/g)、纤维素酶(酶活力≥1万u/g)、中性蛋白酶(酶活力≥30万u/g)、木瓜蛋白酶(酶活力≥40万u/g)、菠萝蛋白酶(酶活力≥30万u/g)、碱性蛋白酶(酶活力≥20万u/g)、酸性蛋白酶、胃蛋白酶(酶活力≥50万u/g)、胰酶(酶活力≥3000u/g)、无花果蛋白酶(酶活力≥5万u/g)、罗汉果蛋白酶(酶活力≥5万u/g)中的一种或者它们的混合物，优选地使用食品级的纤维素酶和中性蛋白酶；所述酶的混合物的比例为1:1～1:10。
5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述的过滤为膜过滤、离心过滤或普通过滤法(如板框过滤法、筛网过滤法)，优选地使用离心过滤法；所述的浓缩方法可以为真空浓缩、常压浓缩、膜浓缩法，优选地使用真空浓缩法；所述的干燥方法可以为真空干燥、加热干燥、晾干、风干、冷冻干燥和喷雾干燥法，优选地使用喷雾干燥法。
6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于包括下述步骤：
取一定量的枸杞药渣，与水按重量比为1:15～1:30混合，加热至35～60℃，调整pH为5.0～7.5，至少加入原料重量的0.05％～0.1％酶，至少搅拌1h后，调整pH为6.0～8.5，至少加入原料重量的0.1％中性蛋白酶，至少搅拌3h后，升温至80℃以上至少灭活2min，离心取上清液。在40～80℃下浓缩至固含为3～5wt％；喷雾干燥，进口温度为140～160℃，出口温度为55～65℃，得到颜色为橙色的枸杞提取物，产率不低于20wt％。
7.权利要求1所述的枸杞提取物，其特征在于：通过权利要求2-5任一所述的方法制备所得；肽含量的检测方法是参照GB/T 22492-2008附录B和GB/T 22729-2008所述的肽含量的测定方法进行；总糖含量的测定方法是苯酚-硫酸法。
8.一种组合物，其特征在于：含有权利要求1所述的枸杞提取物，和药物或食品上可接受的助剂；优选地，其剂型选自素片、薄膜包衣片、糖衣片、肠衣片、分散片、胶囊、颗粒剂、口服溶液或口服混悬液，以及液体、乳液、膏霜、粉、块状等化妆品剂型。
9.权利要求1所述的枸杞提取物或权利要求8所述的组合物可用于制备预防、改善、或治疗肝肾肺损伤引起的相关疾病的食品、保健食品或药品的应用。
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