CN111000867B - 一种化疗药物作用后的肿瘤细胞上清液的应用 - Google Patents

一种化疗药物作用后的肿瘤细胞上清液的应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种化疗药物作用后的肿瘤细胞上清液的应用，化疗药物作用后的肿瘤细胞上清液用于制备抑制该肿瘤细胞的增殖、诱导该肿瘤细胞分化的药物。本发明首次提出了临床化疗药物短暂作用后的恶性肿瘤细胞的上清液对未治疗的肿瘤细胞具有抑制其增殖、诱导其分化的作用，可将上清液应用于制备抑制肿瘤细胞的增殖、诱导肿瘤细胞分化的药物，创造性地发现了化疗药物作用后的恶性肿瘤细胞的上清液与肿瘤治疗存在级联效应，打破现有医学上认为化疗药物只有直接杀伤恶性肿瘤细胞的作用。

Description

一种化疗药物作用后的肿瘤细胞上清液的应用
技术领域
本发明属于肿瘤细胞上清液技术领域，具体涉及一种化疗药物作用后的肿瘤细胞上清液的应用。
背景技术
化疗是癌症的主要治疗选择，特别是对于无法获得局部治疗的患者。化疗药物可以通过细胞毒作用直接杀死肿瘤细胞。因此，虽然在临床实践中，一些患者在化疗后病理性完全缓解后长期存活，但目前认为化疗药物并不是癌细胞死亡的唯一原因，或许免疫系统可能起着重要作用。
到目前为止，研究人员主要集中在化疗药物对肿瘤及其直接靶点的直接杀伤或破坏作用。然而，用化疗药物短暂处理的癌细胞上清液随后对未治疗的肿瘤细胞的级联效应以及相关机制尚不清楚。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于针对上述现有技术的不足，提供一种化疗药物作用后的肿瘤细胞上清液的应用，该化疗药物作用后的肿瘤细胞上清液具有促进肝癌细胞分化、抑制肝脏肿瘤干细胞标志物转录、抑制肝癌细胞增殖的作用，可用于制备抑制肿瘤细胞的增殖、诱导肿瘤细胞分化的药物。
为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种化疗药物作用后的肿瘤细胞上清液的应用，所述化疗药物作用后的肿瘤细胞的上清液用于制备抑制该肿瘤细胞的增殖、诱导该肿瘤细胞分化的药物；所述化疗药物包括临床中使用的所有肿瘤化疗药物；所述化疗药物作用后的肿瘤细胞上清液中不含有化疗药物；所述肿瘤细胞为恶性肿瘤细胞；
优选地，所述上清液为化疗药物短暂作用后的肿瘤细胞的分泌物、细胞裂解产物和细胞间质中的一种或者两种以上的混合物；短暂作用是上清液作用于肿瘤细胞后，根据肿瘤细胞的增殖和分化相关指标最佳控制水平确定。
优选地，所述上清液中包括核酸、蛋白因子、肽、脂类和小分子物质。
优选地，化疗药物对肿瘤细胞的损伤作用包括化学损伤和物理损伤，所述化学损伤为药物；所述物理损伤包括粒子、射线、电疗、射频、激光或超声。
优选地，所述上清液单独或联合应用于抑制肿瘤细胞的增殖、诱导肿瘤细胞分化。
优选地，所述肿瘤细胞包括所有被诊断为肿瘤的细胞类型，所述肿瘤的细胞类型包括为黑素瘤和神经胶质瘤，以及肾上腺、膀肌、骨、骨髓、脑、脊柱、胸、颈部、胆囊、神经节、胃肠道、胃、结肠、心脏、肾、肝、肺、肌肉、卵巢、胰、甲状旁腺、阴茎、前列腺、唾液腺、皮肤、脾、翠丸、胸腺、子宫或乳腺的癌细胞。
本发明与现有技术相比具有以下优点：
本发明首次提出了临床化疗药物短暂作用后的恶性肿瘤细胞的上清液对未治疗的肿瘤细胞具有抑制其增殖、诱导其分化的作用，可将上清液应用于制备抑制肿瘤细胞的增殖、诱导肿瘤细胞分化的药物，创造性地发现了化疗药物作用后的恶性肿瘤细胞的上清液与肿瘤治疗存在级联效应，打破现有医学上认为化疗药物只有直接杀伤恶性肿瘤细胞的作用。
下面结合附图和实施例对本发明作进一步详细说明。
附图说明
图1是本发明的实施例1的不同浓度的硫酸长春新碱作用于肝癌细胞后的上清液的甲胎蛋白(AFP)的mRNA的表达图。
图2是本发明的实施例1的不同浓度的硫酸长春新碱作用于肝癌细胞后的上清液的甲胎蛋白(AFP)的蛋白水平的表达图。
图3是本发明的实施例1的浓度为4μM的硫酸长春新碱水溶液刺激后上清液对肝癌细胞刺激不同时间的甲胎蛋白(AFP)的mRNA的表达图。
图4是本发明的实施例1的浓度为4μM的硫酸长春新碱水溶液刺激后上清液对肝癌细胞刺激不同时间的甲胎蛋白(AFP)的蛋白水平的表达图。
图5是本发明的实施例1的浓度为4μM的硫酸长春新碱水溶液刺激后上清液对肝癌细胞刺激15min后的肝癌分化相关标志物(HNF4α和HNF6)、肝脏肿瘤干细胞标志物(CD133和EpCAM)和增殖相关基因(PCNA和c-Myc)的mRNA的表达图。
图6是本发明的实施例1的浓度为4μM的硫酸长春新碱水溶液刺激后上清液对肝癌细胞刺激15min后的肝癌分化相关标志物(HNF4α和HNF6)、肝脏肿瘤干细胞标志物(CD133和EpCAM)和增殖相关基因(PCNA和c-Myc)的蛋白水平的表达图。
具体实施方式
实施例1
本实施例的化疗药物作用后的肿瘤细胞上清液的应用，所述化疗药物为硫酸长春新碱(硫酸长春新碱简称为VCR)，硫酸长春新碱作用于肝癌细胞后的上清液(硫酸长春新碱作用于肝癌细胞后的上清液简称为TSN)能够抑制该肿瘤细胞的增殖、诱导该肿瘤细胞分化；即每种癌细胞的上清液只作用于未经药物作用的该类癌细胞，如肝癌细胞系SMMC7721的上清液作用于肝癌细胞系SMMC7721；肝癌细胞系Bel7402的上清液作用于肝癌细胞系Bel7402；肝癌细胞系Huh7的上清液作用肝癌细胞系Huh7；所述VCR作用于肝癌细胞后的上清液中不含有化疗药物VCR。
将人肝癌细胞系SMMC7721培养在含有10％胎牛血清、100U/mL青霉素和100mg/mL的链霉素的DMEM培养基中使细胞丰度达到80-90％，然后在直径为60mm的培养皿或6孔板或12孔板中培养24h，得到SMMC7721细胞液；
将人肝癌细胞系Bel7402培养在含有10％胎牛血清、100U/mL青霉素和100mg/mL的链霉素的DMEM培养基中使细胞丰度达到80-90％，然后在直径为60mm的培养皿或6孔板或12孔板中培养24h，得到Bel7402细胞液；
将人肝癌细胞系Huh7培养在含有10％胎牛血清、100U/mL青霉素和100mg/mL的链霉素的DMEM培养基中，使细胞丰度达到80-90％，然后在直径为60mm的培养皿或6孔板或12孔板中培养24h，得到Huh7细胞液；
(1)用于刺激产生肝癌细胞后的上清液(TSN)的VCR的浓度优化：
将得到的SMMC7721细胞液、Bel7402细胞液和Huh7细胞液，均分别用浓度为4μM、6μM、8μM或10μM的VCR水溶液刺激30min，离心后，分别取不同浓度的VCR作用于肝癌细胞后的上清液(TSN)，所述TSN中不含VCR，通过qRT-PCR和Western blot(免疫印迹法)检测TSN中的甲胎蛋白(AFP)的mRNA的表达和AFP蛋白水平的表达，由图可知，VCR可浓度依赖性地降低AFP的mRNA的表达(图1)和AFP蛋白水平的表达(图2)，降低肝癌细胞的增殖和分化。
图1中，Con为空白对照，由图可知，随着VCR的浓度不同，不同程度的降低AFP的mRNA的表达水平；图2中，GAPDHA(甘油醛-3-磷酸脱氢酶)蛋白为内参，Con为空白对照，图2中上图为免疫印迹图，图2中下图为AFP蛋白的表达量数值图，由图1-2由图可知，随着加入的VCR的浓度不同，不同程度的降低AFP的mRNA的表达水平和AFP的蛋水平的表达，在VCR在4μM时，对AFP的mRNA的表达和AFP蛋白水平的表达的抑制水平较好。
将浓度为4μM的VCR水溶液刺激后的TSN作为用于抑制肿瘤细胞的增殖、诱导肿瘤细胞分化的前处理条件。
(2)用于抑制肿瘤细胞的增殖、诱导肿瘤细胞分化的作用时间的确定：
将得到的SMMC7721细胞液、Bel7402细胞液和Huh7细胞液分别均用上述浓度为4μM的VCR水溶液刺激后的TSN作用5min、10min、15min、20min和25min，呈时间性依赖地降低甲胎蛋白(AFP)的mRNA的表达(图3)和AFP蛋白水平的表达(图4)。
图3中，Con为空白对照，由图可知，随着作用时间不同，不同程度的降低甲胎蛋白AFP的mRNA的表达水平；图4中，GAPDHA(甘油醛-3-磷酸脱氢酶)蛋白为内参，Con为空白对照，图4中上图为免疫印迹图，图4中下图为AFP蛋白的表达量数值图，由图3-4由图可知，随着TSN作用时间的不同，不同程度的降低AFP的mRNA的表达水平和AFP的蛋水平的表达，在作用时间为15min时，对AFP的mRNA的表达和AFP蛋白水平的表达的抑制水平较好。
综上，将浓度为4μM的VCR水溶液刺激后的TSN对肝癌细胞刺激15min，作为用于抑制肿瘤细胞的增殖、诱导肿瘤细胞分化的处理因素。
(3)TSN的作用：
将上述浓度为4μM的VCR水溶液刺激后的TSN分别对SMMC7721细胞液、Bel7402细胞液和Huh7细胞液分别刺激15min后，通过qRT-PCR和Western blot(免疫印迹法)检测TSN对SMMC7721、Bel7402和Huh7细胞分化相关标志物(HNF4α和HNF6)、肝脏肿瘤干细胞标志物(CD133和EpCAM)和增殖相关基因(PCNA和c-Myc)表达的调节作用。
由图5可知，以Con为空白对照，TSN抑制了SMMC7721、Bel7402和Huh7细胞分化相关标志物(HNF4α和HNF6)、肝脏肿瘤干细胞标志物(CD133和EpCAM)和增殖相关基因(PCNA和c-Myc)的mRNA的表达。
由图6可知，以GAPDHA(甘油醛-3-磷酸脱氢酶)蛋白为内参，Con为空白对照，TSN抑制了SSMMC7721、Bel7402和Huh7细胞分化相关标志物(HNF4α和HNF6)、肝脏肿瘤干细胞标志物(CD133和EpCAM)和增殖相关基因(PCNA和c-Myc)的的蛋白水平的表达。
说明TSN具有促进肝癌细胞分化、抑制肝脏肿瘤干细胞标志物转录、抑制肝癌细胞增殖的作用，可用于制备抑制肿瘤细胞的增殖、诱导肿瘤细胞分化的药物。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例，并非对本发明作任何限制。凡是根据发明技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、变更以及等效变化，均仍属于本发明技术方案的保护范围内。

Claims (2)

1.一种化疗药物作用后的肿瘤细胞上清液的应用，其特征在于，所述化疗药物作用后的肿瘤细胞的上清液用于制备抑制该肿瘤细胞的增殖、诱导该肿瘤细胞分化的药物；所述化疗药物作用后的肿瘤细胞上清液中不含有化疗药物；所述肿瘤细胞为肝癌细胞；所述肿瘤细胞的上清液只作用于未经药物作用的肿瘤细胞；所述化疗药物为硫酸长春新碱。
2.根据权利要求1所述的一种化疗药物作用后的肿瘤细胞上清液的应用，其特征在于，所述上清液中包括核酸、肽、脂类。
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Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111000867B (zh) * 2020-01-07 2022-04-29 河北医科大学 一种化疗药物作用后的肿瘤细胞上清液的应用
CN113491712A (zh) * 2020-03-20 2021-10-12 祝康生物科技有限公司 一种受损细胞提取物及其制备方法和应用

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102258772B (zh) * 2010-05-25 2014-08-13 中国人民解放军第二军医大学 一种新的肿瘤树突状细胞治疗性疫苗的制备方法及其用途
CN102600462B (zh) * 2012-03-29 2015-06-17 戚春建 人树突状细胞肿瘤疫苗及其制备方法和应用
CN103861107B (zh) * 2014-03-04 2015-01-14 中国人民解放军总医院第一附属医院 一种药物组合物及其用途
CN105169379A (zh) * 2015-10-28 2015-12-23 崔长友 一种用于治疗胃癌的肿瘤疫苗及其制备方法
CN109498651A (zh) * 2019-01-14 2019-03-22 华中科技大学同济医学院附属协和医院 一种抗肿瘤微颗粒的制备方法、药剂及应用
CN111000867B (zh) * 2020-01-07 2022-04-29 河北医科大学 一种化疗药物作用后的肿瘤细胞上清液的应用

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