CN110996902A - 从凝结芽孢杆菌mtcc 5856分离的胞外代谢物的抗衰老潜力 - Google Patents

从凝结芽孢杆菌mtcc 5856分离的胞外代谢物的抗衰老潜力 Download PDF

Info

Publication number
CN110996902A
CN110996902A CN201880051182.1A CN201880051182A CN110996902A CN 110996902 A CN110996902 A CN 110996902A CN 201880051182 A CN201880051182 A CN 201880051182A CN 110996902 A CN110996902 A CN 110996902A
Authority
CN
China
Prior art keywords
bacillus coagulans
skin
effective concentration
extracellular metabolite
aging
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201880051182.1A
Other languages
English (en)
Inventor
M.马吉德
K.纳加布莎娜姆
S.阿鲁姆甘
F.阿里
S.马吉德
L.蒙德库尔
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Sami Chemicals and Extracts Ltd
Original Assignee
Sami Chemicals and Extracts Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Sami Chemicals and Extracts Ltd filed Critical Sami Chemicals and Extracts Ltd
Publication of CN110996902A publication Critical patent/CN110996902A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
    • A61K8/99—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from microorganisms other than algae or fungi, e.g. protozoa or bacteria
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A61K35/741—Probiotics
    • A61K35/742—Spore-forming bacteria, e.g. Bacillus coagulans, Bacillus subtilis, clostridium or Lactobacillus sporogenes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A61Q19/08—Anti-ageing preparations
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
    • A61K2800/74—Biological properties of particular ingredients
    • A61K2800/78—Enzyme modulators, e.g. Enzyme agonists
    • A61K2800/782—Enzyme inhibitors; Enzyme antagonists

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Gerontology & Geriatric Medicine (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Cosmetics (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

公开了从凝结芽孢杆菌MTCC 5856分离的部分纯化的胞外代谢物预防皮肤衰老的用途。更具体地，本发明公开了从凝结芽孢杆菌MTCC 5856分离的胞外代谢物的抗胶原酶、抗弹性蛋白酶、抗糖化活性以及增强人真皮成纤维细胞中的TGF‑β、表皮生长因子和透明质酸表达。

Description

从凝结芽孢杆菌MTCC 5856分离的胞外代谢物的抗衰老潜力
对相关专利申请的交叉引用
本发明是2017年6月6日提交的美国临时专利申请No.62516083和2017年6月6日提交的62516077的非临时提交。
发明领域
一般地，本发明涉及从凝结芽孢杆菌MTCC 5856分离的胞外代谢物的生物学应用。更具体地，本发明公开了从凝结芽孢杆菌MTCC 5856分离的胞外代谢物的抗衰老潜力。
发明背景
随着年龄的增长，人的皮肤经历了许多变化，包括起皱、松垂和松弛增加，它们可见地揭示了衰老体征。有许多影响皮肤衰老的内在和外在因素，例如激素、皮肤相关微生物区系、皮肤pH值、角质层脂质含量降低、活性氧(reactive oxygen species,ROS)吸收降低、较大的金属蛋白酶活性、脱水、松弛、细纹和皮肤萎缩。在上述因素中，许多是自然的，并且不能更改。有其他几种导致皮肤过早衰老，并可受到影响而诱导适度皮肤衰老的因素。
化妆品领域的行业参与者现在广泛地将预防皮肤衰老作为目标，并且现在越来越需要预防皮肤衰老的天然产品。由于益生菌提供的健康益处，目前它们正用于皮肤护理行业。益生菌在衰老、美容、光损伤和皮肤健康中的作用在以下现有技术文献中得到了很好的描述：
1.Sharma D,Kober MM and Bowe WP,Anti-Aging Effects of Probiotics,JDrugs Dermatol.2016Jan；15(1):9-12
2.Benedetta Cinque,Paola Palumbo,Cristina La Torre,EsterinaMelchiorre,Daniele Corridoni,Gianfranca Miconi,Luisa Di Marzio,Maria GraziaCifone and Maurizio Giuliani,Probiotics in Aging Skin,Textbook of Aging Skin,pp.1315-1327
3.Probiotics Provide Anti Aging Defense,LIFE EXTENSION MAGAZINE,October 2015
http://www.lifeextension.com/Magazine/2015/10/Probiotics-Provide- Anti-Aging-Defense/Page-01,2018年5月24日访问。
现在，益生菌和它们的胞外代谢物两者都已被纳入护肤产品中(Katie Schaefer,Anti-aging Probiotic from Bacillus coagulans,https://www.cosmeticsandtoiletries.com/formulating/function/active/142099203.html,2012年3月9日，2018年5月26日访问)。但是，在科学技术中公知，益生菌或其产物的生物学效应是菌株特异性的，不能在属、种和菌株之间推广(Probiotics:In Depth/NCCIH,U.S.Department of Health and Human Services,National Institutes of Health)。因此，需要找到可以有效用于减少皮肤衰老所有体征的优良益生菌菌株及其胞外产物。本发明通过公开凝结芽孢杆菌的部分纯化的胞外代谢物制剂对减少皮肤衰老的有益效果来解决上述问题。
本发明的主要目的是公开含有凝结芽孢杆菌MTCC 5856的胞外代谢物制剂的组合物的抗衰老活性，其通过抑制胶原酶和弹性蛋白酶的活性并增加TGF-β、表皮生长因子和透明质酸的表达来实现。
本发明的另一个目的是公开含有凝结芽孢杆菌MTCC 5856的胞外代谢物制剂的组合物的抗糖化活性。
本发明实现了上述目的并提供了进一步的相关优点。
生物材料保藏
本申请中提及的登录号为MTCC 5856的凝结芽孢杆菌生物材料已于2013年9月19日保藏于微生物典型培养物保藏和基因银行(MTCC)，CSIR-微生物技术研究所，印度昌迪加尔39-A区，160036。
发明概述
本发明公开了从凝结芽孢杆菌MTCC 5856分离的部分纯化的胞外代谢物预防皮肤衰老的能力。更具体地，本发明公开了从凝结芽孢杆菌MTCC 5856分离的胞外代谢物的抗胶原酶、抗弹性蛋白酶、抗糖化活性以及增强人真皮成纤维细胞中的TGF-β、表皮生长因子和透明质酸表达。
附图简述
图1是从凝结芽胞杆菌MTCC 5856分离的部分纯化的胞外代谢物对胶原酶活性的抑制％的图示。
图2是从凝结芽胞杆菌MTCC 5856分离的部分纯化的胞外代谢物对弹性蛋白酶活性的抑制％的图示。
图3是通过从凝结芽孢杆菌MTCC 5856分离的部分纯化的胞外代谢物增加的人皮肤成纤维细胞中的TGF-β、表皮生长因子和透明质酸表达的图示。
发明详述
在最优选的实施方案中，本发明公开了预防哺乳动物中的皮肤衰老的方法，所述方法包括以下步骤：向所述哺乳动物施用有效浓度的含有从凝结芽孢杆菌分离的部分纯化的胞外代谢物的组合物以引起皮肤衰老的体征和症状的下降。在一个相关的实施方案中，皮肤衰老的体征和症状选自下组：皱纹(wrinkles)、皮肤松垂、干燥、斑驳的皮肤(patchyskin)和纹(lines)。在另一个相关的实施方案中，通过抑制酶胶原酶和弹性蛋白酶的活性，抑制糖化和增强TGF-β、表皮生长因子和透明质酸的表达来预防皮肤衰老。在另一个相关的实施方案中，凝结芽孢杆菌的菌株是凝结芽孢杆菌MTCC5856。在另一个相关的实施方案中，部分纯化的胞外代谢物的有效浓度是总组合物的0.01％v/v至2.0％v/v。在另一个相关的实施方案中，将所述组合物与药学/药妆学上可接受的赋形剂、佐剂、基底(bases)、稀释剂、载体、调理剂(conditioning agents)、生物利用度增强剂、抗氧化剂和防腐剂一起配制和/或掺入含有抗衰老成分的制剂中，并且以乳膏、凝胶、洗剂、粉剂、血清、油、悬浮剂、软膏剂、肥皂、磨砂膏(scrubs)、乳剂和粉饼(compacts)的形式局部施用。在一个相关的实施方案中，哺乳动物优选是人。
在另一方面，本发明涉及抑制皮肤成纤维细胞中的胶原酶活性的方法，所述方法包括以下步骤：使所述成纤维细胞与有效浓度的含有来自凝结芽孢杆菌的部分纯化的胞外代谢物的组合物接触以在其中引起胶原酶抑制的效果。在另一个相关的实施方案中，部分纯化的胞外代谢物制剂的有效浓度是总组合物的0.01％v/v至2.0％v/v。在另一个相关的实施方案中，凝结芽胞杆菌菌株是凝结芽胞杆菌MTCC 5856。
在另一个优选的实施方案中，本发明涉及抑制皮肤成纤维细胞中的弹性蛋白酶活性的方法，所述方法包括以下步骤：使所述成纤维细胞与有效浓度的来自凝结芽孢杆菌MTCC 5856的胞外代谢物制剂接触以在其中引起弹性蛋白酶抑制的效果。在另一个相关的实施方案中，部分纯化的胞外代谢物制剂的有效浓度是总组合物的0.01％v/v至2.0％v/v。在另一个相关的实施方案中，凝结芽孢杆菌的菌株是凝结芽孢杆菌MTCC 5856。
在另一个优选的实施方案中，本发明涉及抑制皮肤成纤维细胞中的糖化的方法，所述方法包括以下步骤：使所述成纤维细胞与有效浓度的来自凝结芽孢杆菌MTCC 5856的胞外代谢物制剂接触以在其中引起抗糖化的效果。在另一个相关的实施方案中，部分纯化的胞外代谢物制剂的有效浓度是总组合物的0.01％v/v至2.0％v/v。在另一个相关的实施方案中，凝结芽胞杆菌的菌株是凝结芽胞杆菌MTCC 5856。
在另一个优选的实施方案中，本发明涉及增强人皮肤成纤维细胞中的TGF-β、表皮生长因子和透明质酸表达的方法，所述方法包括以下步骤：使所述成纤维细胞与有效浓度的从凝结芽孢杆菌MTCC 5856制备的胞外代谢物接触以增加的与抗衰老效果相关的基因表达。
下文包括阐明最优选实施方案的具体说明性的实施例。
实施例1：抗胶原酶活性
胞外代谢物的分离
按照US9596861中概述的步骤分离来自凝结芽孢杆菌MTCC 5856的胞外代谢物。该产品可以商品名
Figure BDA0002380438120000041
(INCI：芽孢杆菌发酵物滤液提取物)从SabinsaCorporation,USA购得。
材料和方法
胶原酶是基质金属蛋白酶之一，其消化胞外基质(ECM)的胶原和其他成分。ECM充当稳定皮肤结构的支架，还有助于皮肤细胞的增殖和代谢功能。胶原的损失导致皱纹和皮肤松垂。胶原酶抑制的测定原理基于以下事实：底物DQTM明胶与荧光素(一种荧光化合物)缀合。在DQTM明胶中，荧光被淬灭。DQTM明胶可以被胶原酶有效地消化，从而产生可以测量的荧光化合物。荧光的增加与酶活性成正比。在抗胶原酶化合物的存在下，对于固定浓度的酶和底物，荧光量将减少。
材料
设备-BMG FLUOstar Optima(荧光微板读板仪)
试剂：磷酸盐缓冲液(pH 7.4)
胶原酶测定试剂盒(
Figure BDA0002380438120000051
胶原酶，明胶酶测定试剂盒，Invitrogen,USA)
微量滴定板-96孔微量滴定板(黑色)-Corning,USA
在96孔黑色微量滴定板中进行测定法。使用以DQ明胶为底物的来自溶组织梭菌(Clostridium histolyticum)的IV型进行测定法。将不同浓度的
Figure BDA0002380438120000052
(80μl)与20μl明胶底物(12.5μg/ml)预先温育。加入100μl胶原酶溶液(终浓度-0.4U/ml)，并在30分钟后在Em：485nm和Ex：520nm下测量荧光强度。记录对照(缓冲液)的酶活性
抑制百分比如下计算：-
Figure BDA0002380438120000053
B-在酶的存在下的荧光。
BC-在酶活性的缺乏下的荧光
T-在抑制剂的存在下酶活性的荧光
TC-单独的抑制剂的荧光
结果
胞外代谢物表现出剂量依赖性的抗胶原酶活性，IC50为1.8％(酶活性的50％抑制)(图1)。结果揭示了从凝结芽孢杆菌MTCC 5856分离的胞外代谢物可以保留皮肤的胞外基质，并预防皱纹形成和皮肤松垂，从而预防皮肤衰老。
实施例2：抗弹性蛋白酶活性
胞外代谢物的分离
按照US9596861中概述的步骤分离来自凝结芽孢杆菌MTCC 5856的胞外代谢物。该产品可以商品名
Figure BDA0002380438120000054
(INCI：芽孢杆菌发酵物滤液提取物)从美国SabinsaCorporation购得。
材料和方法
弹性蛋白酶是基质金属蛋白酶之一，其消化胞外基质的弹性蛋白和其他成分，并且对正常皮肤发育是重要的。若此酶不受抑制剂蛋白的调节，则会导致皮肤起皱，过早衰老和致癌作用。通过Enz Chek弹性蛋白酶测定试剂盒进行的抗弹性蛋白酶测定法测定产物的弹性蛋白酶抑制活性。使用EnzChek弹性蛋白酶测定试剂盒进行测定法。底物是DQ弹性蛋白可溶性牛颈韧带。DQ弹性蛋白用BODIPY FL染料标记。弹性蛋白酶能够消化非荧光底物以产生高度荧光的片段，并且在抑制剂的存在下，荧光强度被淬灭。在微板读板仪中测量荧光强度(在485nm处发射，且在520nm处激发)。
材料
设备-BMG FLUOstar Optima(荧光微板读板仪)
试剂：磷酸盐缓冲液(pH 7.4)
胶原酶测定试剂盒(
Figure BDA0002380438120000061
胶原酶，明胶酶测定试剂盒，Invitrogen,USA)
微量滴定板-96孔微量滴定板(黑色)-Corning,USA
在96孔黑色微量滴定板中进行测定法。使用来自猪胰腺的弹性蛋白酶和作为底物的DQ弹性蛋白进行测定法。将不同浓度的
Figure BDA0002380438120000062
(50μl)与50μl明胶底物(25μg/ml)预先温育。加入100μl弹性蛋白酶酶溶液(终浓度-0.1U/ml)，并在30分钟后在Em：485nm和Ex：520nm下测量荧光强度。记录对照(缓冲液)的酶活性
抑制百分比如下计算：-
Figure BDA0002380438120000063
B-在酶的存在下的荧光。
BC-在酶活性的缺乏下的荧光
T-在抑制剂的存在下酶活性的荧光
TC-单独的抑制剂的荧光
总结
胞外代谢物表现出剂量依赖性的抗弹性蛋白酶活性，IC50为1.8％(酶活性抑制50％)(图2)。结果揭示了从凝结芽孢杆菌MTCC 5856分离的胞外代谢物可通过抑制酶弹性蛋白酶来保留皮肤的胞外基质并预防皱纹形成和皮肤松垂，从而预防皮肤衰老。
实施例3：抗糖化
胞外代谢物的分离
按照US9596861中概述的步骤分离来自凝结芽孢杆菌MTCC 5856的胞外代谢物。该产品可以商品名
Figure BDA0002380438120000071
(INCI：芽孢杆菌发酵物滤液提取物)从美国SabinsaCorporation购得。
材料和方法
通过蛋白质(主要是赖氨酸和精氨酸)的氨基与还原糖的羰基之间的非酶促加合物形成(也称为美拉德反应)来生成高级糖化终产物(AGE)。在早期阶段，还原糖与游离氨基反应形成不稳定的醛亚胺化合物，该化合物进行分子重排以形成稳定的早期糖化产物，称为阿马多尔(Amadori)产物。在随后的阶段，通过氧化、脱水和环化反应的糖化过程形成高级糖化终产物，也被称为AGE。已知AGE的各种结构，例如Nε-(羧甲基)-赖氨酸(CML)、吡咯素(pyrraline)、戊糖素(pentosidine)与变性病症有关，包括衰老、糖尿病、动脉粥样硬化阿尔茨海默氏病和肾衰竭。AGE也牵涉皮肤衰老，积累衰老和光衰老皮肤中UV照射的结果。
AGE本质上可以是荧光的以及非荧光的。通常，具有如下文所示的典型结构的AGE的vesperlysine类型具有370nm处的激发和440nm处的发射，而戊糖素样AGE具有335nm处的激发和385nm处的发射。原理基于以下事实：核糖和牛血清白蛋白以特定比率混合并温育24小时。通过在390nm/460nm的Ex/Em处检测的荧光的增加来估算由反应形成的vesperlysine样AGE，并且在320/405nm的Ex/Em处检测戊糖素。
材料
核糖，牛血清白蛋白，96孔黑色微量滴定板
核糖-BSA方法：将10μl各种浓度的样品添加到40μl BSA(牛血清白蛋白，25mg/ml储液)，黑色96孔微孔的每孔添加50μl D-核糖(150mg/ml储液)，并且在37℃温育24小时。仅具有BSA的样品作为对照。通过在390/460nm的Ex/Em处(vesperlysine)的荧光和在320/405nm的Ex/Em(戊糖素AGE)处的荧光检测形成的AGE(高级糖化终产物)。
结果
表1列出了来自凝结芽孢杆菌MTCC 5856的胞外代谢物对AGE vesperlysine和戊糖素的抑制。
表1：来自凝结芽孢杆菌的胞外代谢物制剂对AGE的抑制百分比
Figure BDA0002380438120000072
Figure BDA0002380438120000081
结果
来自凝结芽孢杆菌MTCC 5856的胞外代谢物制剂显示对vesperlysine型高级糖化终产物形成的显著抑制，在0.7％时为50％抑制。还发现代谢物在浓度2％时将戊糖素型AGE形成抑制41.75％，指示来自凝结芽孢杆菌MTCC 5856的胞外代谢物制剂具有防止不同类型糖化终产物的能力，因此可以保护糖化的破坏效果，并且有助于加强皮肤的愈合，从而预防皮肤衰老。
实施例4：基因表达
胞外代谢物的分离
按照US9596861中概述的步骤分离来自凝结芽孢杆菌MTCC 5856的胞外代谢物。该产品可以商品名
Figure BDA0002380438120000082
(INCI：芽孢杆菌发酵物滤液提取物)从美国SabinsaCorporation购得。
材料和方法
真皮成纤维细胞是皮肤结构完整性的关键细胞成分。胞外基质含有决定皮肤完整性的胶原、弹性蛋白和透明质酸。透明质酸(HA)由透明质酸合酶合成，所述透明质酸合酶将UDP-葡糖胺和UDP-葡糖醛酸残基添加到增长的HA聚合物链。转化生长因子(TGF)-β在ECM生物合成中起着核心作用，并通过调节胶原合成和降解两者来控制胶原稳态。表皮生长因子刺激细胞生长并诱导胶原合成。
材料：人真皮成纤维细胞，6孔微量滴定板，成纤维细胞生长培养基，Trizol，可合成试剂盒，用于RT-PCR的SYBR绿色主混合物
方法：
在存在0.25％的来自凝结芽孢杆菌MTCC 5856的胞外代谢物的情况下，在6孔微量滴定板中培养人皮肤成纤维细胞24小时。未处理的细胞用作对照。温育时间结束时，裂解细胞并提取RNA
RNA提取
在第7天第二次进展后收获细胞，并使用Trizol方法提取总RNA。提取的RNA用DNA酶I处理，以除去任何污染的DNA，然后再用酚:氯仿:异戊醇提取物(24:25:1)提取。通过使用Nanodrop(Thermo)检查260/280nm的吸光度来测定RNA的质量。
实时定量PCR
使用SuperScript III第一链合成系统(Life Technologies)将2μg总RNA用于cDNA合成。使用SYBR Green主混合物(Thermo Scientific)在Roche Light循环仪96中进行定量RT-PCR分析以测定棕色脂肪特异性基因的表达。β肌动蛋白用作管家基因。将基因的相对RNA丰度相对于管家β肌动蛋白基因进行标准化，并表示为delta delta CT(相当于通过Log2转化的倍数变化)。表2指示了用于表达研究的引物列表。
表2：引物序列
Figure BDA0002380438120000091
结果
来自凝结芽胞杆菌MTCC 5856的胞外代谢物制剂在人真皮成纤维细胞中显示了透明质酸合酶(2.14倍)、转化生长因子(TGF)-β(1.8倍)和表皮生长因子(2.94倍)的显著增强，指示来自凝结芽孢杆菌MTCC 5856的胞外代谢物制剂具有增加与维持细胞外基质完整性有关的基因表达的能力。细胞外基质(ECM)为皮肤细胞提供结构和支撑，赋予皮肤拉伸强度和紧致度，从而使皮肤看起来更年轻。
实施例5：含有来自凝结芽孢杆菌的胞外代谢物制剂的制剂，用于预防皮肤衰老。
可以将含有来自凝结芽孢杆菌MTCC 5856的胞外代谢物的组合物与药学/药妆学上可接受的赋形剂、佐剂、基底、稀释剂、载体、调理剂、生物利用度增强剂、抗氧化剂和防腐剂一起配制和/或掺入含有抗衰老成分的配制剂中，并且以乳膏、凝胶、洗剂、粉剂、血清、油、悬浮剂、软膏剂、肥皂、磨砂膏、乳剂和粉饼的形式局部施用。
在相关方面，一种或多种抗衰老皮肤护理成分选自下组，但不限于此：Alpha硫辛酸、氧化白藜芦醇(oxyresveratrol)、甜菜根提取物、锯齿乳香(Boswellia serrata)提取物、β乳香酸、锯齿乳香油、积雪草(Centella asiatica)提取物、三萜、印度藤黄(Garciniaindica)提取物、花色苷、椰(Cocos nucifera)提取物和汁、毛喉鞘蕊花(Coleusforskohlii)提取物、福司柯林、毛喉鞘蕊花油、四氢胡椒碱、鞣花酸、没食子(Gallnut)提取物、多酚、高良姜(Galanga)提取物、甘草酸、绿茶提取物、表没食子儿茶素没食子酸酯、甘草提取物、甘草酸单铵盐、柠檬苦素类(Limonoids)、齐墩果酸、化妆品用肽(与Lys-Thr-Thr-Lys-Ser相连的齐墩果酸、与Lys-Val-Lys相连的齐墩果酸)、橄榄苦苷(Oleuropein)、荜茇酰胺(Piper longumine)提取物、胡椒碱、鞣花酸(Ellagic acid)、石榴提取物(水溶性)、紫檀芪(pterostilbene)、白藜芦醇、小叶紫檀(Pterocarpus santalinus)提取物、迷迭香提取物、迷迭香酸、余甘子(Amla)提取物、β葡萄糖没食子鞣苷(glucogallin)、四氢姜黄素(tetrahydrocurcumin)、鼠尾草(Salvia officinalis)(鼠尾草)叶提取物、熊果酸、皂苷、芝麻(Sesamum indicum)(芝麻)种子提取物、芝麻素(Sesamin)和芝麻酚林(sesamolin)、辣木油(moringa oil)、辣木种子提取物、七叶树(Horse Chestnut)提取物、牡荆(Vitex)油、西门木炔酸(Xymenynic Acid)、乙基抗坏血酸、摩洛哥阿甘油(Argan oil)、柠檬皮提取物、姜黄油(turmeric oil)、大麦β葡聚糖、辅酶Q10、橄榄油、鳄梨油和蔓越莓油。
在另一个相关方面，一种或多种抗氧化剂和抗炎药选自下组，但不限于此：维生素A、D、E、K、C、B复合物、迷迭香酸、Alpha硫辛酸、氧化白藜芦醇、鞣花酸、甘草酸、表没食子儿茶素没食子酸酯、植物多酚、光甘草啶(Glabridin)、辣木油、齐墩果酸、橄榄苦苷、鼠尾草酸、尿刊酸、八氢番茄红素、硫辛酸、硫辛酰胺(lipoamide)、铁蛋白、除铁灵(desferal)、胆红素(billirubin)、billiverdin、黑色素、泛醌、泛醇、抗坏血酸棕榈酸酯、抗坏血酸磷酸镁、乙酸抗坏血酸酯、生育酚和衍生物、例如维生素E乙酸酯、尿酸、α-葡糖基芸香苷(α-glucosylrutin)、过氧化氢酶和超氧化物歧化酶、谷胱甘肽、硒化合物、丁基化羟基苯甲醚(BHA),、丁基化羟基甲苯(BHT)、焦亚硫酸钠(SMB)、没食子酸丙酯(PG)和氨基酸半胱氨酸。
在另一个相关方面、一种或多种生物利用度增强剂选自下组，但不限于此：胡椒碱、四氢胡椒碱、槲皮素、大蒜提取物、姜提取物和柚皮苷。
表3-7提供了抗衰老皮肤护理配制剂的示例性实例，该配制剂含有来自凝结芽孢杆菌MTCC 5856(芽孢杆菌发酵物滤液提取物)的部分纯化的胞外代谢物制剂。
表3：抗衰老血清
Figure BDA0002380438120000111
*-Sabinsa Corporation的注册商标
#-Greentech的注册商标
表4：抗衰老清洁剂
Figure BDA0002380438120000112
*-Sabinsa Corporation的注册商标
#-Greentech的注册商标
表5：抗衰老平衡爽肤水(balancing toner)
Figure BDA0002380438120000121
*-Sabinsa Corporation的注册商标
#-Greentech的注册商标
表6：抗衰老润肤霜
Figure BDA0002380438120000122
*-Sabinsa Corporation的注册商标
#-Greentech的注册商标
表7：抗衰老面霜
Figure BDA0002380438120000123
Figure BDA0002380438120000131
以上配制剂仅是示例性的例子；并且含有意图用于所述目的的上述活性成分的任何配制剂认为是等效的。
从前述公开内容和教导，对本发明的其他修改和变型对于本领域技术人员将是明显的。因此，尽管本文仅具体描述了本发明的某些实施方案，但是明显的是，在不脱离本发明的精神和范围的情况下可以对其进行多种修改。仅结合所附权利要求书来解释本发明的范围。
PCT/RO/134表
Figure 0000011

Claims (16)

1.预防哺乳动物中的皮肤衰老的方法，所述方法包括以下步骤：向所述哺乳动物施用有效浓度的含有从凝结芽孢杆菌分离的部分纯化的胞外代谢物的组合物以引起皮肤衰老的体征和症状的下降。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述皮肤衰老的体征和症状选自下组：皱纹、皮肤松垂、干燥、斑驳的皮肤和纹。
3.根据权利要求1所述的方法，其中所述组合物通过抑制酶胶原酶和弹性蛋白酶的活性，抑制糖化和增强TGF-β、表皮生长因子和透明质酸的表达来预防皮肤衰老。
4.根据权利要求1所述的方法，其中所述凝结芽胞杆菌的菌株是凝结芽胞杆菌MTCC5856。
5.根据权利要求1所述的方法，其中所述部分纯化的胞外代谢物制剂的有效浓度是总组合物的0.01％v/v至2.0％v/v。
6.根据权利要求1所述的方法，其中将所述组合物与药学/药妆学上可接受的赋形剂、佐剂、基底、稀释剂、载体、调理剂、生物利用度增强剂、抗氧化剂和防腐剂一起配制和/或掺入含有抗衰老成分的配制剂中，并且以乳膏、凝胶、洗剂、粉剂、血清、油、悬浮剂、软膏剂、肥皂、磨砂膏、乳剂和粉饼的形式局部施用。
7.根据权利要求1所述的方法，其中所述哺乳动物优选是人。
8.抑制皮肤成纤维细胞中的胶原酶活性的方法，所述方法包括以下步骤：使所述成纤维细胞与有效浓度的含有来自凝结芽孢杆菌的部分纯化的胞外代谢物制剂的组合物接触以在其中引起胶原酶抑制的效果。
9.根据权利要求8所述的方法，其中所述部分纯化的胞外代谢物制剂的有效浓度是总组合物的0.01％v/v至2.0％v/v。
10.根据权利要求8所述的方法，所述凝结芽胞杆菌的菌株是凝结芽胞杆菌MTCC 5856。
11.抑制皮肤成纤维细胞中的弹性蛋白酶活性的方法，所述方法包括以下步骤：使所述成纤维细胞与有效浓度的来自凝结芽孢杆菌MTCC 5856的胞外代谢物制剂接触以在其中引起弹性蛋白酶抑制的效果。
12.根据权利要求11所述的方法，其中所述部分纯化的胞外代谢物制剂的有效浓度是总组合物的0.01％v/v至2.0％v/v。
13.根据权利要求11所述的方法，其中所述凝结芽胞杆菌的菌株是凝结芽胞杆菌MTCC5856。
14.抑制皮肤成纤维细胞中的糖化的方法，所述方法包括以下步骤：使所述成纤维细胞与有效浓度的来自凝结芽孢杆菌MTCC 5856的胞外代谢物制剂接触以在其中引起抗糖化的效果。
15.根据权利要求14所述的方法，其中所述部分纯化的胞外代谢物制剂的有效浓度是总组合物的0.01％v/v至2.0％v/v。
16.根据权利要求14所述的方法，其中所述凝结芽胞杆菌的菌株是凝结芽胞杆菌MTCC5856。
CN201880051182.1A 2017-06-06 2018-06-04 从凝结芽孢杆菌mtcc 5856分离的胞外代谢物的抗衰老潜力 Pending CN110996902A (zh)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201762516077P 2017-06-06 2017-06-06
US201762516083P 2017-06-06 2017-06-06
US62/516,077 2017-06-06
US62/516,083 2017-06-06
PCT/US2018/035800 WO2018226556A2 (en) 2017-06-06 2018-06-04 Anti-aging potential of extracellular metabolite isolated from bacillus coagulans mtcc 5856

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN110996902A true CN110996902A (zh) 2020-04-10

Family

ID=64459062

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201880051182.1A Pending CN110996902A (zh) 2017-06-06 2018-06-04 从凝结芽孢杆菌mtcc 5856分离的胞外代谢物的抗衰老潜力

Country Status (10)

Country Link
US (1) US10966919B2 (zh)
EP (1) EP3634375B1 (zh)
JP (1) JP7039626B2 (zh)
KR (1) KR102288904B1 (zh)
CN (1) CN110996902A (zh)
AU (1) AU2018282252B2 (zh)
CA (1) CA3064939C (zh)
ES (1) ES2980228T3 (zh)
PL (1) PL3634375T3 (zh)
WO (1) WO2018226556A2 (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN116064330A (zh) * 2023-01-10 2023-05-05 北京工商大学 凝结芽孢杆菌及其应用

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2018226554A1 (en) * 2017-06-06 2018-12-13 Muhammed Majeed Skin care applications of extracellular metabolites from bacillus coagulans
CA3075635C (en) * 2017-09-21 2023-07-04 Muhammed Majeed Process for preparing tripeptide containing oleanolic acid and its therapeutic applications thereof

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20150044317A1 (en) * 2012-02-28 2015-02-12 Ganeden Biotech, Inc. Topical Compositions for Reducing Visible Signs of Aging and Methods of Use Thereof
CN105189733A (zh) * 2013-12-24 2015-12-23 穆罕迈德.玛杰德 从凝结芽孢杆菌中产生部分纯化的细胞外代谢产物的方法及其生物应用

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6645506B1 (en) * 1997-04-18 2003-11-11 Ganeden Biotech, Inc. Topical compositions containing extracellular products of Pseudomonas lindbergii and Emu oil
US20080038780A1 (en) * 2006-02-15 2008-02-14 Novozymes Biopolymer A/S Production of low molecular weight hyaluronic acid
WO2013130829A1 (en) * 2012-02-28 2013-09-06 Ganeden Biotech, Inc. Cosmetic compositions
KR20150060004A (ko) * 2013-11-25 2015-06-03 주식회사 더마랩 항당화 및 항노화 활성이 우수한 캐럽콩추출물을 유효성분으로 함유하는 항노화 화장료 조성물

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20150044317A1 (en) * 2012-02-28 2015-02-12 Ganeden Biotech, Inc. Topical Compositions for Reducing Visible Signs of Aging and Methods of Use Thereof
CN105189733A (zh) * 2013-12-24 2015-12-23 穆罕迈德.玛杰德 从凝结芽孢杆菌中产生部分纯化的细胞外代谢产物的方法及其生物应用

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
MUHAMMED MAJEED等: "Role of probiotics for balanced skin microflora", 《EURO COSMETICS》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN116064330A (zh) * 2023-01-10 2023-05-05 北京工商大学 凝结芽孢杆菌及其应用
CN116064330B (zh) * 2023-01-10 2024-05-03 北京工商大学 凝结芽孢杆菌及其应用

Also Published As

Publication number Publication date
AU2018282252B2 (en) 2021-07-15
KR102288904B1 (ko) 2021-08-12
ES2980228T3 (es) 2024-09-30
EP3634375A2 (en) 2020-04-15
CA3064939C (en) 2022-08-16
JP2020524662A (ja) 2020-08-20
JP7039626B2 (ja) 2022-03-22
US10966919B2 (en) 2021-04-06
EP3634375A4 (en) 2021-03-17
PL3634375T3 (pl) 2024-09-16
KR20200014848A (ko) 2020-02-11
WO2018226556A3 (en) 2019-01-17
WO2018226556A2 (en) 2018-12-13
CA3064939A1 (en) 2018-12-13
EP3634375B1 (en) 2024-03-13
US20180344628A1 (en) 2018-12-06

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Raeiszadeh et al. Evaluation the effect of Myrtus communis L. extract on several underlying mechanisms involved in wound healing: An in vitro study
CN110996902A (zh) 从凝结芽孢杆菌mtcc 5856分离的胞外代谢物的抗衰老潜力
JP6979518B2 (ja) オレアノール酸を含有するトリペプチドを調製する方法およびその治療用途
Letsiou et al. In vitro protective effects of marine-derived Aspergillus puulaauensis TM124-S4 extract on H2O2-stressed primary human fibroblasts
Kim et al. Effect of red ginseng NaturalGEL on skin aging
CN111973647A (zh) 金银花发酵物的制备方法及其改善皮肤外观与抗老化的用途
Pekmezci et al. Proprietary herbal extract downregulates the gene expression of IL-1α in HaCaT Cells: Possible implications against nonscarring alopecia
CN111093622A (zh) 来自凝结芽孢杆菌的胞外代谢物的皮肤护理应用
WO2013005281A1 (ja) 血小板由来成長因子－ｂｂ産生亢進剤、並びにそれを含む間葉系幹細胞産生促進剤、幹細胞安定化剤、及び真皮再生化剤
Jiang et al. Lactoferrin and the lactoferrin–sophorolipids-assembly can be internalized by dermal fibroblasts and regulate gene expression
KR100853377B1 (ko) 피부세포의 프로테아솜 활성을 촉진시키는 항노화 조성물
JP2011074024A (ja) ヘパラナーゼ活性阻害剤並びにそれを含有するしわ改善剤及び医薬組成物
EP2987486A1 (en) Mitochondria activator
KR20140118960A (ko) 백미 추출물을 함유하는 피부노화 방지를 위한 화장료 조성물
Kim et al. The protective effect of alfalfa (Medicago sativa L.) seed extract containing polysaccharides on human keratinocytes and fibroblasts
KR102041958B1 (ko) 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 미백용 화장료 조성물 및 화장품 조성물, 그리고 미백용 화장물 조성물 및 화장품 조성물의 제조 방법
CN111686137A (zh) 卷柏的萃取物用于提升基因表现量、细胞的线粒体活性、皮肤的保湿能力及抗老化的用途
EP3177283B1 (en) Active compound and related composition for dermatological use in the pharmaceutical or cosmetic field
JP5667774B2 (ja) メラニン産生抑制剤、グルタチオン産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤、及びインボルクリン産生促進剤、並びに皮膚化粧料
Lee et al. Skin regeneration effect of the glycosaminoglycans from Liparis tessellatus eggs
JP7117772B2 (ja) 皮膚老化防止剤及びエラスターゼ阻害活性剤の製造方法
GR20220100088A (el) Συνθεση με αντιγηραντικες, αντιοξειδωτικες ικανοτητες και ευεργετικες ιδιοτητες που συντελουν στην ευζωια
US8481095B2 (en) Method for anti-oxidation, inhibiting activity and/or expression of matrix metalloproteinase, and/or inhibiting phosporylation of mitogen-activated protein kinase using flemingia macrophylla extract
JP2024013900A (ja) グルタチオン産生促進剤、ＳＰＩＮＫ５ ｍＲＮＡ発現促進剤、ＫＬＫ５ ｍＲＮＡ発現促進剤、ＫＬＫ７ ｍＲＮＡ発現促進剤、角層剥離改善剤及び角層剥離正常化剤
Feliciaa et al. Potential ABTS Reducing and Anti-collagenase Activity of Scutellarein and Apigenin

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20200410

RJ01 Rejection of invention patent application after publication