CN110982856B - 手性二胺化合物的合成方法 - Google Patents

手性二胺化合物的合成方法 Download PDF

Info

Publication number
CN110982856B
CN110982856B CN202010118060.9A CN202010118060A CN110982856B CN 110982856 B CN110982856 B CN 110982856B CN 202010118060 A CN202010118060 A CN 202010118060A CN 110982856 B CN110982856 B CN 110982856B
Authority
CN
China
Prior art keywords
gly
transaminase
ala
val
glu
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202010118060.9A
Other languages
English (en)
Other versions
CN110982856A (zh
Inventor
洪浩
詹姆斯·盖吉
肖毅
张娜
李响
蒋相军
赵桐
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Asymchem Laboratories Tianjin Co Ltd
Original Assignee
Asymchem Laboratories Tianjin Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Asymchem Laboratories Tianjin Co Ltd filed Critical Asymchem Laboratories Tianjin Co Ltd
Priority to CN202010118060.9A priority Critical patent/CN110982856B/zh
Priority to KR1020227033472A priority patent/KR20220157981A/ko
Priority to JP2022551243A priority patent/JP7345070B2/ja
Priority to PCT/CN2020/082594 priority patent/WO2021168987A1/zh
Priority to EP20921866.8A priority patent/EP4112733A4/en
Priority to US17/905,092 priority patent/US20230151396A1/en
Publication of CN110982856A publication Critical patent/CN110982856A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN110982856B publication Critical patent/CN110982856B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
    • C12P13/001—Amines; Imines
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/10—Transferases (2.)
    • C12N9/1096—Transferases (2.) transferring nitrogenous groups (2.6)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
    • C12P13/02—Amides, e.g. chloramphenicol or polyamides; Imides or polyimides; Urethanes, i.e. compounds comprising N-C=O structural element or polyurethanes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
    • C12P17/02—Oxygen as only ring hetero atoms
    • C12P17/04—Oxygen as only ring hetero atoms containing a five-membered hetero ring, e.g. griseofulvin, vitamin C
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
    • C12P17/10—Nitrogen as only ring hetero atom
    • C12P17/12—Nitrogen as only ring hetero atom containing a six-membered hetero ring
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P41/00—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture
    • C12P41/006—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture by reactions involving C-N bonds, e.g. nitriles, amides, hydantoins, carbamates, lactames, transamination reactions, or keto group formation from racemic mixtures
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y206/00—Transferases transferring nitrogenous groups (2.6)
    • C12Y206/01—Transaminases (2.6.1)
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)

Abstract

本发明提供了一种手性二胺化合物的合成方法。该合成方法包括：利用转氨酶将式I所示底物转化为手性二胺化合物；
Figure 817196DEST_PATH_IMAGE001
………..………….式I，n=1~10，R基表示烷基、环烷基、含杂原子的烷基、含杂原子的环烷基、含杂原子的芳基、酰胺类化合物残基或醚类化合物残基，杂原子为O、S和N种的至少一种；R1、R2相同或不相同，R1和R2各自独立地为氢、C1‑C3烷基或氨基保护基；转氨酶来源于多个菌种。这些转氨酶对多种式1所示底物的反应选择性和活性均较高。利用该生物酶催化合成手性二胺化合物，不仅底物更广泛，且路线短，产品收率高，大大降低了生产成本，减少了有机溶剂和三废产生。

Description

手性二胺化合物的合成方法
技术领域
本发明涉及手性二胺化合物的合成领域，具体而言，涉及一种手性二胺化合物的合成方法。
背景技术
手性二胺化合物广泛存在于许多具有生物活性的天然产物及药物分子中，如：鸟氨酸，赖氨酸，维生素H，药物左旋咪唑等。奥沙利铂（Oxaliplatin） 分子中存在二胺化合物，具有一定的抗肿瘤活性。具有二胺结构的化合物也被广泛应用于有机合成，其作为合成砌块，可以有效构建氮杂环，也可以作为配体与金属络合生成具有高度反应活性的催化剂，二胺化合物还被广泛应用于液晶材料，航空材料，微电子等领域。手性二胺化合物也可以作为手性拆分试剂对醛的对映异构体进行拆分。因此，手性二胺的合成一直是化学家们研究的热点(Angew.Chem.Int.Ed.1998,37,2580)。
目前，手性二胺化合物的合成方法有不对称strecker反应(Chem.Rev.,2011,111，6947)，不对称Michel加成(CN 105367427 A)、吖丙啶不对称开环(CN 105753752 A)等方法，但这些方法在底物的适用范围和实用性上均存在不同程度的局限性，且这些方法合成的均为1,2-二胺类化合物。不对称Michel加成及吖丙啶不对称开环中通常需要昂贵的金属及手性催化剂，这极大地限制了反应体系的应用。此外，反应中会使用剧毒的叠氮化合物或氰基化试剂，化学路线三废量较大，不好处理。
因此，如何改进现有方法，以拓展对底物的适用范围便成了一个亟待解决的技术问题。
发明内容
本发明的主要目的在于提供一种手性二胺化合物的合成方法，以解决现有技术中的方法对底物的适用范围存在局限性的问题。
为了实现上述目的，本发明提供了一种手性二胺化合物的合成方法，该合成方法包括：利用转氨酶将式I所示底物转化为手性二胺化合物；
Figure 251335DEST_PATH_IMAGE001
………..………….式I，
其中，n=1~10，R基表示烷基、环烷基、含杂原子的烷基、含杂原子的环烷基、含杂原子的芳基、酰胺类化合物残基或醚类化合物残基，其中，杂原子为O、S和N种的至少一种；R1、R2相同或不相同，R1和R2各自独立地为氢、C1-C3烷基或氨基保护基；转氨酶来源于Chromobacterium violaceum DSM30191(CVTA)（NCBI Reference Sequence: WP_011135573.1）、Fonsecaea pedrosoi CBS 271.37（NCBI Reference Sequence: XP_013286281.1）、Klebsiella pneumoniae subsp. pneumoniae Ecl8（GenBank:CCN29541.1）、Mycobacterium goodii（GenBank: AKS36000.1）、Paracoccusdenitrificans（NCBI Reference Sequence: WP_011746975.1）、Penicilliumbrasilianum（GenBank: CEJ55334.1）、Enterobacter sp. TL3（NCBI ReferenceSequence: WP_014885677.1）、Aspergillus terreus NIH2624（NCBI ReferenceSequence: XP_001209325.1）、Exophiala spinifera（NCBI Reference Sequence: XP_016233821.1）、Deinococcus geothermalis (strain DSM 11300)（NCBI ReferenceSequence: WP_011530545.1）、Geomyces destructans 20631-21 (GdTA) in E. coli（GenBank: ELR05573.1）、Pseudomonas putida KT2440（NCBI Reference Sequence: WP_010954554.1）、Lysinibacillus sphaericus（NCBI Reference Sequence: WP_024363741.1）、Bacillus megaterium DSM 319（NCBI Reference Sequence: WP_013082219.1）、Trichoderma harzianum（GenBank: KKP07030.1）、Aspergillus fumigatusR-ATAs (AspFum)（NCBI Reference Sequence: XP_748821.1）、Geobacillusthermodenitrificans subsp. thermodenitrificans DSM 465（NCBI ReferenceSequence: WP_008879436.1）、Cladophialophora bantiana CBS 173.52（NCBI ReferenceSequence: XP_016617948.1）、Bacillus megaterium（NCBI Reference Sequence: WP_016763026.1）、Burkholderia thailandensis MSMB121 ( BtS -TA )（GenBank:AGK49399.1）、Klebsiella pneumoniae subsp. pneumoniae MGH 78578（NCBI ReferenceSequence: WP_002920226.1）、Geobacillus toebii（NCBI Reference Sequence: WP_062753894.1）和Talaromyces cellulolyticus（GenBank: GAM37533.1）。
进一步地，转氨酶具有SEQ ID NO：1、 SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：4所示的氨基酸序列。
进一步地，氨基保护基选自叔丁氧羰基，苄氧羰基，甲酰基，三氟乙酰基，苄基，三苯甲基及9-芴基甲氧基羰基中的任意一种。
进一步地，底物选自如下任意一种：
Figure DEST_PATH_IMAGE002
、
Figure 906438DEST_PATH_IMAGE003
、
Figure DEST_PATH_IMAGE004
、
Figure 678478DEST_PATH_IMAGE005
、
Figure DEST_PATH_IMAGE006
、
Figure 492851DEST_PATH_IMAGE007
、
Figure 377630DEST_PATH_IMAGE008
、
Figure DEST_PATH_IMAGE009
、
Figure 457713DEST_PATH_IMAGE010
及
Figure DEST_PATH_IMAGE011
。
进一步地，合成方法包括：将磷酸缓冲液与氨基供体混合，得到第一混合液，向第一混合液中添加式I所示的底物，得到第二混合液；向第二混合液中添加转氨酶，得到反应混合液；从反应混合液中分离得到手性二胺化合物。
进一步地，在向第一混合液中添加底物之前，合成方法还包括：将第一混合液的pH值调节至7.0~9.0；优选地，向第二混合液中添加转氨酶，并调节加入转氨酶后的第二混合液的pH为7.0~9.0，得到反应混合液。
进一步地，从反应混合液中分离得到手性二胺化合物包括：调节反应混合液的酸度使转氨酶变性，优选调节反应混合液的pH值为1~2；将变性后的转氨酶过滤除去，得到初步滤液；将初步滤液的pH值调至碱性，得到碱性滤液；对碱性滤液进行萃取，得到手性二胺类化合物；优选地，碱性滤液的pH值为12~13；优选地，萃取为多次，更优选为2~5次，更优选采用二氯甲烷进行第一次萃取，后续采用二氯甲烷或乙酸乙酯萃取剩余次数。
进一步地，萃取之后还包括对萃取所得有机相进行干燥的步骤，优选地，将每次萃取所得有机相合并，得到萃取物；对萃取物进行干燥，得到干燥有机相产物；将干燥有机相产物置于温度＜45℃，压力≤-0.08Mpa的条件下浓缩至无馏分，得到手性二胺类化合物。
进一步地，转氨酶与底物的质量比为： 0.4：1~ 1.0：1。
进一步地，底物的浓度为60g/L~100g/L。
进一步地，氨基供体选自异丙胺、异丙胺的盐酸盐、丙氨酸、苯乙胺或正丁胺。
应用本发明的技术方案，采用对转氨酶对式I所示底物具有特异性，能够有效催化此类底物转化为手性二胺化合物，而且，该转氨酶对多种式I所示底物的反应选择性和活性均较高。因此，利用该生物酶催化合成手性二胺化合物，不仅适用于更广泛的底物（现有技术反应得到的都是1，2-二胺类化合物，而本申请中还可以合成1，3-二胺，1，4-二胺等化合物），而且该合成方法路线短，产品收率高，大大降低了生产成本，减少了有机溶剂和三废产生。
附图说明
构成本申请的一部分的说明书附图用来提供对本发明的进一步理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。在附图中：
图1示出了本发明的实施例11中不同酶量对相同量的底物的转化率的影响；
图2示出了本发明的实施例12中相同酶量对不同浓度的底物的转化率的影响；
图3示出了本发明的实施例13中不同的氨基供体对同一反应中的底物的转化率的影响；以及
图4示出了本发明的实施例14中不同来源的转氨酶对同一底物均具有转化活性。
具体实施方式
需要说明的是，在不冲突的情况下，本申请中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。下面将结合实施例来详细说明本发明。
如背景技术所提到的，现有技术中，手性二胺化合物的合成方法对底物的适用范围存在局限性的问题。为了改善这一状况，本申请的发明人尝试从高效、绿色环保的角度来改进现有合成路线。在研究过程中，发明人发现，申请人自行研制的一种转氨酶除了具有以PLP为辅酶的转氨酶所具有的催化酮类化合物的通用催化活性外，还具有催化多种不同的底物，并将其转化为手性二胺化合物的活性。并进一步研究发现采用该转氨酶催化合成手性二胺化合物时，不仅底物类型广泛，而且可以通过一步反应获得目标产物。由于使用该转氨酶进行生物转化反应选择性很高，大大提升了目标产物的ee值。而且，采用生物酶催化反应，能够提高底物用量，大大提高了生产效率，减少了有机溶剂和三废产生。
在上述研究结果的基础上，申请人提出了本申请的技术方案。在本申请一种典型的实施方式中，提供了一种手性二胺化合物的合成方法，该合成方法包括：利用转氨酶将式I所示底物转化为手性二胺化合物；
Figure 718930DEST_PATH_IMAGE012
其中，n=1~10，R基表示烷基、环烷基、含杂原子的烷基、含杂原子的环烷基、含杂原子的芳基、酰胺类化合物残基或醚类化合物残基，R1、R2相同或不相同，R1和R2各自独立地为氢、C1-C3烷基或氨基保护基，该转氨酶来源于：Chromobacterium violaceum DSM30191(CVTA)（NCBI Reference Sequence: WP_011135573.1）、Fonsecaea pedrosoi CBS 271.37（NCBIReference Sequence: XP_013286281.1）、Klebsiella pneumoniae subsp. pneumoniaeEcl8（GenBank: CCN29541.1）、Mycobacterium goodii（GenBank: AKS36000.1）、Paracoccus denitrificans（NCBI Reference Sequence: WP_011746975.1）、Penicilliumbrasilianum（GenBank: CEJ55334.1）、Enterobacter sp. TL3（NCBI ReferenceSequence: WP_014885677.1）、Aspergillus terreus NIH2624（NCBI ReferenceSequence: XP_001209325.1）、Exophiala spinifera（NCBI Reference Sequence: XP_016233821.1）、Deinococcus geothermalis (strain DSM 11300)（NCBI ReferenceSequence: WP_011530545.1）、Geomyces destructans 20631-21 (GdTA) in E. coli（GenBank: ELR05573.1）、Pseudomonas putida KT2440（NCBI Reference Sequence: WP_010954554.1）、Lysinibacillus sphaericus（NCBI Reference Sequence: WP_024363741.1）、Bacillus megaterium DSM 319（NCBI Reference Sequence: WP_013082219.1）、Trichoderma harzianum（GenBank: KKP07030.1）、Aspergillus fumigatusR-ATAs (AspFum)（NCBI Reference Sequence: XP_748821.1）、Geobacillusthermodenitrificans subsp. thermodenitrificans DSM 465（NCBI ReferenceSequence: WP_008879436.1）、Cladophialophora bantiana CBS 173.52（NCBI ReferenceSequence: XP_016617948.1）、Bacillus megaterium（NCBI Reference Sequence: WP_016763026.1）、Burkholderia thailandensis MSMB121 ( BtS -TA )（GenBank:AGK49399.1）、Klebsiella pneumoniae subsp. pneumoniae MGH 78578（NCBI ReferenceSequence: WP_002920226.1）、Geobacillus toebii（NCBI Reference Sequence: WP_062753894.1）和Talaromyces cellulolyticus（GenBank: GAM37533.1）。
优选地，该转氨酶具有SEQ ID NO：1 、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：4所示的氨基酸序列，分别为：
MQKQRTCSQWRELDAAHHLHPFTDTASLNQAGARVMTRGEGVYLWDCEGNKIIDGMAGLWCVNVGYGRKDFAEAARRQMEELPFYNTFFKTTHPAVVELSSLLAEVTPAGFDRVFYTNSGSESVDTMIRMVRRYWDVQGKPEKKTLIGRWNGYHGSTIGGASLGGMKYMHEQGDLPIPGMAHIEQPWWYKHGKDMTPDEFGVVAARWLEEKILEIGADKVAAFVGEPIQGAGGVIVPPATYWPEIERICRKYDVLLVADEVICGFGRTGEWFGHQHFGFQPDLFTAAKGLSSGYLPIGAVFVGKRVAEGLIAGGDFNHGFTYSGHPVCAAVAHANVAALRDEGIVQRVKDDIGPYMQKRWRETFSRFEHVDDVRGVGMVLAFTLVKNKAKRELFPDFGEIGTLCRDIFFRNNLIMTACGDHIVSAPPLVMTRAEVDEMLAVAERCLEEFEQTLKARGLA（SEQ ID NO：1）。
MQKQRTCSQWRELDAAHHLHPFTDTASLNQAGARVMTRGEGVYLWDCEGNKIIDGMAGLWCVNVGYGRKDFAEAARRQMEELPFYNTFYKTTHPAVVELSSLLAEVTPAGFDRVFYTNSGSESVDTMIRMVRRYWDVQGKPEKKTLIGRWWGYHGSTIGGASLGGFKYMHEQGDLPIPGMAHIEQPWWYKHGKDMTPDEFGVVAARWLEEKILEIGADKVAAFVGEPIQGAGGVIVPPATYWPEIERICRKYDVLLVADEVICGFGRTGEWFGHQHFGFQPDLFTAAKGLSSGYLPIGAVFVGKRVAEGLIAGGDFNHGFTYSGHPVCAAVAHANVAALRDEGIVQRVKDDIGPYMQKRWRETFSRFEHVDDVRGVGMLLAFTLVKNKAKRELFPDFGEIGTLCRDIFFRNNLIMDSCGDHIVAAPPLVMTRAEVDEMLAVAERCLEEFEQTLKARGLA（SEQ ID NO：2）。
MQKQRTCSQWRELDAAHHLHPFTDTASLNQAGARVMTRGEGVYLWDCEGNKIIDGMAGLWCVNVGYGRKDFAEAARRQMEELPFYNTFYKTTHPAVVELSSLLAEVTPAGFDRVFYTNSGSESVDTMIRMVRRYWDVQGKPEKKTLIGRWWGYHGSTIGGASLGGFKYMHEQGDLPIPGMAHIEQPWWYKHGKDMTPDEFGVVAARWLEEKILEIGADKVAAFVGEPIQGAGGVIVPPATYWPEIERICRKYDVLLVADEVICGFGRTGEWFGHQHFGFQPDLFTAAKGLSSGYLPIGAVFVGKRVAEGLIAGGDFNHGFTYSGHPVCAAVAHANVAALRDEGIVQRVKDDIGPYMQKRWRETFSRFEHVDDVRGVGMLLAFTLVKNKAKRELFPDFGEIGTLCRDIFQRNNLIMDSCGDHIVSAPPLVMTRAEVDEMLAVAERCLEEFEQTLKARGLA（SEQ ID NO：3）。
MQKQRTCSQWRELDAAHHLHPFTDTASLNQAGARVMTRGEGVYLWDCEGNKIIDGMAGLWCVNVGYGRKDFAEAARRQMEELPFYNTFYKTTHPAVVELSSLLAEVTPAGFDRVFYTNSGSESVDTMIRMVRRYWDVQGKPEKKTLIGRWWGYHGSTIGGASLGGFKYMHEQGDLPIPGMAHIEQPWWYKHGKDMTPDEFGVVAARWLEEKILEIGADKVAAFVGEPIQGAGGVIVPPATYWPEIERICRKYDVLLVADEVICGFGRTGEWFGHQHFGFQPDLFTAAKGLSSGYLPIGAVFVGKRVAEGLIAGGDFNHGFTYSGHPVCAAVAHANVAALRDEGIVQRVKDDIGPYMQKRWRETFSRFEHVDDVRGVGMLLAFTLVKNKAKRELFPDFGEIGTLCRDIFHRNNLIMDSCGDHIVSAPPLVMTRAEVDEMLAVAERCLEEFEQTLKARGLA（SEQ ID NO：4）。
如上述，本申请的上述转氨酶对式I所示底物具有底物特异性，能够有效催化此类底物转化为手性二胺化合物，而且，该转氨酶对多种式I所示底物的反应选择性和活性均较高。因此，利用该生物酶催化合成手性二胺化合物，不仅适用于更广泛的底物（现有技术反应得到的都是1，2-二胺类化合物，而本申请中还可以合成1，3-二胺，1，4-二胺等化合物），而且该合成方法路线短，产品收率高，大大降低了生产成本，减少了有机溶剂和三废产生。
上述底物中的“含杂原子的烷基、含杂原子的环烷基、含杂原子的芳基”中的杂原子可以是O、S及N中的至少一种。
上述具有SEQ ID NO:1、 SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4所示氨基酸序列的转氨酶，均来源于ω-转氨酶（ω-transaminase），Chromobacterium violaceumDSM30191(CVTA)。
上述氨基保护基包括但不限于叔丁氧羰基、苄氧羰基、甲酰基、三氟乙酰基、苄基、三苯甲基或9-芴基甲氧基羰基。
在一种优选的实施例中，式I所示底物选自如下任意一种：
Figure DEST_PATH_IMAGE013
、
Figure 699393DEST_PATH_IMAGE003
、
Figure 692757DEST_PATH_IMAGE014
、
Figure 509403DEST_PATH_IMAGE005
、
Figure DEST_PATH_IMAGE015
、
Figure 59464DEST_PATH_IMAGE007
、
Figure 582849DEST_PATH_IMAGE016
、
Figure DEST_PATH_IMAGE017
、
Figure 75011DEST_PATH_IMAGE018
及
Figure DEST_PATH_IMAGE019
。
本申请的转氨酶对上述式I所示底物均具有催化活性和立体选择性。
采用本申请的转氨酶对式I所示底物进行催化转氨基反应的具体步骤与现有转氨反应类似。在一种优选的实施例中，上述合成方法包括：将磷酸缓冲液与氨基供体混合，得到第一混合液；向第一混合液中添加式I所示底物，得到第二混合液；向第二混合液中添加转氨酶，得到反应混合液；从反应混合液中分离得到手性二胺化合物。
该合成方法通过上述分步反应，减少了反应体积，使得转氨酶对底物的催化活性和效率较高，从而获得较高的产品收率，提高了生产效率。
在一种优选的实施例中，在向第一混合液中添加式I所示底物之前，合成方法还包括：将第一混合液的pH值调节至7.0~9.0；优选地，向第二混合液中添加转氨酶，并调节加入转氨酶后的第二混合液的pH为7.0~9.0，得到反应混合液。
上述优选实施例中，通过在在向第一混合液中添加式I所示底物之前，对第一混合液进行pH值调节，加入酶之前调节到酶反应最适pH，防止酶加入过程中失活。而在向第二混合液中添加转氨酶后也对体系的pH值进行调节，其作用是确保反应在最适pH下进行。上述两次pH值调节的范围最好保持一致，比如，前面调节至7.8，加入转氨酶后也同样调节至7.8。
上述从反应后的混合液中分离得到目的产物的步骤采用已知的分离、提纯方法进行即可。在一种优选的实施例中，从反应混合液中分离得到手性二胺化合物包括：调节反应混合液的酸度使转氨酶变性，优选调节反应混合液的pH值为1~2；将变性后的转氨酶过滤除去，得到初步滤液；将初步滤液的pH值调至碱性，得到碱性滤液；对碱性滤液进行萃取，得到手性二胺化合物；优选地，碱性滤液的pH值为12~13；优选地，萃取为多次，更优选为2~5次，更优选采用二氯甲烷进行第一次萃取，后续采用二氯甲烷或乙酸乙酯萃取剩余次数。
采用调节酸度的方式使反应后的酶蛋白变性，相比其他变性方式（比如高温、调减、或盐析）有变性比较彻底，产物大多在酸性条件下稳定，且之后的操作直接在酸性条件下可将体系其他杂质萃取优势。采用二氯甲烷进行首次萃取的目的在于除去体系中酸性条件可被萃取的杂质。相比比采用其他萃取溶剂（比如乙酸乙酯、甲基叔丁基醚或乙酸异丙酯）进行萃取有萃取效率较高的优势。
为进一步提高纯度和收率，在一种优选的实施例中，萃取后还包括对萃取有机相进行干燥的步骤，优选地，将每次萃取所得有机相合并，得到萃取物；对萃取物进行干燥，得到干燥有机相产物；将干燥有机相产物置于温度＜45℃，压力≤-0.05Mpa的条件下浓缩至无馏分（（干燥的目的在于减少产品中的含水量，而压力大小影响浓缩速度）。
在一种优选的实施例中，转氨酶与式I所示底物的质量比为：0.4:1~1.0:1，按照该质量比进行反应，底物的转化效率能够达到92%以上。
在一种优选的实施例中，式I所示底物的浓度为60g/L~100g/L。在该浓度范围下采用生物酶进行反应，底物的转化率高达95%以上，有助于提高生产效率，减少有机溶剂和三废的产生。
在一种优选的实施例中，氨基供体选自异丙胺、异丙胺的盐酸盐、丙氨酸、苯乙胺或正丁胺。
下面将结合具体的实施例来进一步说明本申请的有益效果。需要说明的是，以下实施例中的室温是指10~25℃的常温范围内的温度，以下实施例1至15中所用到的转氨酶为SEQ ID NO：4所示的转氨酶。
实施例 1
室温向250 mL四口瓶内加入50 mL 100 mmol/L 磷酸盐缓冲液（5vol），24ml5mol/ L 异丙胺盐酸盐溶液（2.4 vol， 3eq），调pH=7.5~8.0。再加入0.1g 磷酸吡哆醛（1wt%），10g
Figure 631150DEST_PATH_IMAGE020
，搅拌均匀，再加入转氨酶酶液10 ml（0.5wt，0.5 g/ml）调pH=7.5~8.0。升温至30℃搅拌反应过夜。反应完全后，将体系调酸至pH=1，变性蛋白。过滤后滤液用50mL 二氯甲烷萃取。水相调pH=12，再用50ml 二氯甲烷萃取三次。合并有机相用无水硫酸镁干燥后有机相于T＜35℃，P≤-0.06Mpa条件下浓缩至无馏分。得到目标产物
Figure DEST_PATH_IMAGE021
。
经HPLC检测，纯度＞98%，ee值＞99%，收率90%。
实施例 2
室温向250 mL四口瓶内加入60 mL 100 mmol/L 磷酸盐缓冲液（6vol），18ml5mol/ L 异丙胺盐酸盐溶液（1.8 vol， 3eq），调pH=8.0~8.5。再加入0.1g 磷酸吡哆醛（1wt%），10g
Figure 968591DEST_PATH_IMAGE003
，搅拌均匀，再加入转氨酶酶液10 ml（0.5wt，0.5 g/ml），调pH=8.0~8.5。调温至20℃搅拌反应过夜。反应完全后，将体系调酸至pH=2，变性蛋白。过滤后滤液用50mL 二氯甲烷萃取。水相调pH=13，再用50ml 乙酸乙酯萃取三次。合并有机相用无水硫酸镁干燥后有机相于T＜45℃，P≤-0.08Mpa条件下浓缩至无馏分。得到目标产物
Figure 612062DEST_PATH_IMAGE022
。
经HPLC检测，纯度＞92%，ee值＞99%，收率86%。
实施例 3
室温向250 mL四口瓶内加入70 mL 100 mmol/L 磷酸盐缓冲液（7vol），13ml5mol/ L 异丙胺盐酸盐溶液（1.3 vol， 3eq），调pH=7.0~7.5。再加入0.1g 磷酸吡哆醛（1wt%），10g
Figure 760277DEST_PATH_IMAGE004
，搅拌均匀，再加入转氨酶酶液10 ml（0.5wt，0.5 g/ml）升温至50℃搅拌反应过夜。反应完全后，将体系调酸至pH=1，变性蛋白。过滤后滤液用50mL 二氯甲烷萃取。水相调pH=13，再用50ml 二氯甲烷萃取三次。合并有机相用无水硫酸镁干燥后有机相于T＜35℃，P≤-0.06Mpa条件下浓缩至无馏分。得到目标产物
Figure 489199DEST_PATH_IMAGE023
。
经HPLC检测，纯度大于97%，ee值＞99%，收率78%。
实施例 4
室温向250 mL四口瓶内加入50 mL 100 mmol/L 磷酸盐缓冲液（5vol），38ml5mol/ L 异丙胺盐酸盐溶液（3.8 vol， 3eq），调pH=8.5~9.0。再加入0.1g 磷酸吡哆醛（1wt%），10g
Figure 568013DEST_PATH_IMAGE005
，搅拌均匀，再加入转氨酶酶液10 ml（0.5wt，0.5 g/ml），调pH=8.5~9.0。调温至10℃搅拌反应过夜。反应完全后，将体系调酸至pH=2，变性蛋白。过滤后滤液用50mL 二氯甲烷萃取。水相调pH=13，再用50ml 二氯甲烷萃取三次。合并有机相用无水硫酸镁干燥后有机相于T＜35℃，P≤-0.06Mpa条件下浓缩至无馏分。得到目标产物
Figure 128308DEST_PATH_IMAGE024
。
经HPLC检测，纯度＞95 %，ee值＞99%，收率：79%。
实施例 5
室温向250 mL四口瓶内加入70 mL 100 mmol/L 磷酸盐缓冲液（7vol），17ml5mol/ L 异丙胺盐酸盐溶液（1.7 vol， 3eq），调pH=7.5~8.0。再加入0.1g 磷酸吡哆醛（1wt%），10g
Figure 899955DEST_PATH_IMAGE025
，搅拌均匀，再加入转氨酶酶液10 ml（0.5wt，0.5g/ml），调pH=7.5~8.0。升温至29℃搅拌反应过夜。反应完全后，将体系调酸至pH=1，变性蛋白。过滤后滤液用50mL 二氯甲烷萃取。水相调pH=12，再用50ml 乙酸乙酯萃取三次。合并有机相用无水硫酸镁干燥后有机相于T＜45℃，P≤-0.08Mpa条件下浓缩至无馏分。得到目标产物
Figure 162178DEST_PATH_IMAGE026
。
经HPLC检测，纯度＞98%，ee值＞99%，收率：87%。
实施例 6
室温向500 mL四口瓶内加入140 mL 100 mmol/L 磷酸盐缓冲液（7vol），50ml5mol/ L 异丙胺盐酸盐溶液（1.7 vol， 3eq），调pH=7.5~8.0。再加入0.2g 磷酸吡哆醛（1wt%），20g
Figure 44683DEST_PATH_IMAGE027
，搅拌均匀，再加入转氨酶酶液20 ml（0.5wt，0.5 g/ml），调pH=7.5~8.0。升温至32℃搅拌反应过夜。反应完全后，将体系调酸至pH=1，变性蛋白。过滤后滤液用100mL 二氯甲烷萃取。水相调pH=12，再用100ml 乙酸乙酯萃取三次。合并有机相用无水硫酸镁干燥后有机相于T＜45℃，P≤-0.08Mpa条件下浓缩至无馏分。得到目标产物
Figure 459484DEST_PATH_IMAGE028
。
经HPLC检测，纯度＞97%，ee值＞99%，收率：84%。
实施例 7
室温向500 mL四口瓶内加入220 mL 100 mmol/L 磷酸盐缓冲液（11vol），50ml5mol/ L 异丙胺盐酸盐溶液（2.5 vol， 3eq），调pH=7.5~8.0。再加入0.2g 磷酸吡哆醛（1wt%），20g
Figure 402032DEST_PATH_IMAGE029
，搅拌均匀，再加入转氨酶酶液40 ml（1.0wt，0.5 g/ml），调pH=7.5~8.0。升温至32℃搅拌反应过夜。反应完全后，将体系调酸至pH=1，变性蛋白。过滤后滤液用100mL 二氯甲烷萃取。水相调pH=12，再用100ml 乙酸乙酯萃取三次。合并有机相用无水硫酸镁干燥后有机相于T＜45℃，P≤-0.08Mpa条件下浓缩至无馏分。得到目标产物
Figure 653016DEST_PATH_IMAGE030
。
经HPLC检测，纯度＞95%，ee值＞99%，收率：85%。
实施例 8
室温向500 mL四口瓶内加入180 mL 100 mmol/L 磷酸盐缓冲液（12vol），36ml5mol/ L 异丙胺盐酸盐溶液（2.4 vol， 3eq），调pH=7.5~8.0。再加入0.15g 磷酸吡哆醛（1wt%），15g
Figure 73633DEST_PATH_IMAGE017
，搅拌均匀，再加入转氨酶酶液30ml（1.0wt，0.5 g/ml），调pH=7.5~8.0。升温至35℃搅拌反应过夜。反应完全后，将体系调酸至pH=1，变性蛋白。过滤后滤液用100mL 二氯甲烷萃取。水相调pH=12，再用100ml 乙酸乙酯萃取三次。合并有机相用无水硫酸镁干燥后有机相于T＜45℃，P≤-0.08Mpa条件下浓缩至无馏分。得到目标产物
Figure DEST_PATH_IMAGE031
。
经HPLC检测，纯度＞96%，ee值＞99%，收率：91%。
实施例 9
室温向500 mL四口瓶内加入180 mL 100 mmol/L 磷酸盐缓冲液（12vol），26ml5mol/ L 异丙胺盐酸盐溶液（1.7 vol， 3eq），调pH=7.5~8.0。再加入0.15 g 磷酸吡哆醛（1wt%），15g
Figure 911315DEST_PATH_IMAGE032
，搅拌均匀，再加入转氨酶酶液30 ml（1.0wt，0.5 g/ml），调pH=7.5~8.0。升温至40℃搅拌反应过夜。反应完全后，将体系调酸至pH=1，变性蛋白。过滤后滤液用100mL 二氯甲烷萃取。水相调pH=12，再用100ml 乙酸乙酯萃取三次。合并有机相用无水硫酸镁干燥后有机相于T＜45℃，P≤-0.08Mpa条件下浓缩至无馏分。得到目标产物
Figure DEST_PATH_IMAGE033
。
经HPLC检测，纯度＞97%，ee值＞99%，收率：90%。
实施例 10
室温向500 mL四口瓶内加入110 mL 100 mmol/L 磷酸盐缓冲液（11vol），23ml5mol/ L 异丙胺盐酸盐溶液（2.3 vol， 3eq），调pH=7.5~8.0。再加入0.1g 磷酸吡哆醛（1wt%），10g
Figure 87081DEST_PATH_IMAGE034
，搅拌均匀，再加入转氨酶酶液10 ml（0.5wt，0.5 g/ml），调pH=7.5~8.0。升温至40℃搅拌反应过夜。反应完全后，将体系调酸至pH=2，变性蛋白。过滤后滤液用50mL 二氯甲烷萃取。水相调pH=12，再用50ml 乙酸乙酯萃取三次。合并有机相用无水硫酸镁干燥后有机相于T＜45℃，P≤-0.08Mpa条件下浓缩至无馏分。得到目标产物
Figure DEST_PATH_IMAGE035
。
经HPLC检测，纯度＞95%，ee值＞99%，收率：83%。
实施例 11
以实施例2为例，对反应的酶量进行优化具体操作如下：室温向10 mL小瓶内加入1.2 mL 100 mmol/L 磷酸盐缓冲液（6vol），0.36ml 5mol/ L 异丙胺盐酸盐溶液（1.8 vol，3eq），调pH=8.0~8.5。再加入0.002g 磷酸吡哆醛（1wt%），0.2g
Figure 12312DEST_PATH_IMAGE036
，混匀，分别加入转氨酶酶液 0.04ml，0.08ml，0.12ml，0.16ml，0.2ml，0.24ml，0.28ml，0.32ml，0.36ml，0.4ml，0.44ml，0.48ml，0.52ml，0.56ml，0.6ml（酶液浓度为0.5 g/ml，对应质量比分别为0.1wt，0.2wt，0.3wt，0.4wt，0.5wt，0.6wt，0.7wt，0.8wt，0.9wt，1.0wt，1.1wt，1.2wt，1.3wt，1.4wt，1.5wt），调pH=8.0~8.5。摇床转速170rpm，升温至29℃条件下反应过夜。转化率结果如图1所示，证明0.5~1.0wt底物可转化率大于99%，酶量继续增大也并无显著效果。
实施例 12
以实施例2为例，对反应的底物浓度进行优化具体操作如下：室温向10~50 mL小瓶内（根据反应体积选择合适的摇瓶）分别加入0.58mL，0.66ml，0.78ml，0.9ml，1.06ml，1.24ml，1.44ml，1.74ml，2.1ml，2.56ml，3.24ml，4.24ml，5.84ml，9.24ml 100 mmol/L 磷酸盐缓冲液（分别为2.9vol，3.3vol，3.9vol，4.5vol，5.3vol，6.2vol，7.2vol，8.7vol，10.5vol，12.8vol， 16.2vol，21.2vol，29.2vol，46.2vol），加入0.36ml 5mol/ L 异丙胺盐酸盐溶液（1.8 vol， 3eq），调pH=8.0~8.5。再加入0.002g 磷酸吡哆醛（1wt%），0.2g （1vol,0.2ml）
Figure 49669DEST_PATH_IMAGE037
，混匀，加入转氨酶酶液 0.2ml（1vol, 0.5wt，酶液浓度为0.5 g/ml），调pH=8.0~8.5。摇床转速170rpm，升温至29℃条件下反应过夜。如图2所示，证明60~100 g/L浓度下，底物可转化率大于99%。继续降低底物浓度会导致反应体积增加，三废量增加，且转化率并无进一步显著提高的效果。
实施例 13
以实施例2为例，对反应的氨基供体进行优化具体操作如下：室温向10 mL小瓶内加入1.2 mL 100 mmol/L 磷酸盐缓冲液（6vol），分别使用3eq氨基供体的体系（氨基供体分别为异丙胺、异丙胺盐酸盐、丙氨酸、苯胺，正丁胺），调pH=8.0~8.5。再加入0.002g 磷酸吡哆醛（1wt%），0.2g
Figure 111166DEST_PATH_IMAGE037
，混匀，加入转氨酶酶液 0.2ml（0.5wt，酶液浓度为0.5 g/ml），调pH=8.0~8.5。摇床转速170rpm，升温至29℃条件下反应过夜。转化率结果如图3所示，证明异丙胺、异丙胺盐酸盐、丙氨酸、正丁胺作为氨基供体，底物可转化率大于99%。而苯胺作为氨基供体在此反应条件下转化率仅为89%。
实施例 14
以实施例1底物为例，将来源于Chromobacterium violaceum DSM30191(CVTA)（NCBI Reference Sequence: WP_011135573.1）的转氨酶编号TA1，将来源于Fonsecaeapedrosoi CBS 271.37（NCBI Reference Sequence: XP_013286281.1）的转氨酶编号TA2，将来源于Klebsiella pneumoniae subsp. pneumoniae Ecl8（GenBank: CCN29541.1）的转氨酶编号TA3，将来源于Mycobacterium goodii（GenBank: AKS36000.1）的转氨酶编号TA4，将来源于Paracoccus denitrificans（NCBI Reference Sequence: WP_011746975.1） 的转氨酶编号TA5，将来源于Penicillium brasilianum（GenBank: CEJ55334.1）的转氨酶编号TA6，将来源于Enterobacter sp. TL3（NCBI Reference Sequence: WP_014885677.1）的转氨酶编号TA7，将来源于Aspergillus terreusNIH2624（NCBI Reference Sequence: XP_001209325.1）的转氨酶编号TA8，将来源于Exophiala spinifera（NCBI ReferenceSequence: XP_016233821.1）的转氨酶编号TA9，从Deinococcus geothermalis (strainDSM 11300)（NCBI Reference Sequence: WP_011530545.1）的转氨酶编号TA10，将来源于Geomyces destructans 20631-21 (GdTA) in E. coli（GenBank: ELR05573.1）的转氨酶编号TA11，将来源于Pseudomonas putida KT2440（NCBI Reference Sequence: WP_010954554.1）的转氨酶编号TA12，将来源于Lysinibacillus sphaericus（NCBI ReferenceSequence: WP_024363741.1）的转氨酶编号TA13，将来源于Bacillus megaterium DSM 319（NCBI Reference Sequence: WP_013082219.1）的转氨酶编号TA14，将来源于Trichodermaharzianum（GenBank: KKP07030.1）的转氨酶编号TA15，将来源于Aspergillus fumigatusR-ATAs (AspFum)（NCBI Reference Sequence: XP_748821.1）的转氨酶编号TA16，将来源于Geobacillus thermodenitrificans subsp. thermodenitrificans DSM 465（NCBIReference Sequence: WP_008879436.1） 的转氨酶编号TA17，将来源于Cladophialophorabantiana CBS 173.52（NCBI Reference Sequence: XP_016617948.1）的转氨酶编号TA18，将来源于Bacillus megaterium（NCBI Reference Sequence: WP_016763026.1）的转氨酶编号TA19，将来源于Burkholderia thailandensis MSMB121 ( BtS -TA )（GenBank:AGK49399.1）的转氨酶编号TA20，将来源于Klebsiella pneumoniae subsp. pneumoniaeMGH 78578（NCBI Reference Sequence: WP_002920226.1）的转氨酶编号TA21，将来源于Geobacillus toebii（NCBI Reference Sequence: WP_062753894.1）的转氨酶编号TA22，将来源于Talaromyces cellulolyticus（GenBank: GAM37533.1）的转氨酶编号TA23，以Chromobacterium violaceum DSM30191(CVTA) （NCBI Reference Sequence: WP_011135573.1）来源的转氨酶进化得到的突变体TA1-V1（对应序列为SEQ ID NO：1），TA1-V2（对应序列为SEQ ID NO：2）。TA1-V3（对应序列为SEQ ID NO：3），TA1-V4（对应序列为SEQ IDNO：4）进行10mg级别筛选反应，操作如下：
将100 mmol/L 磷酸盐缓冲液，5mol/ L 异丙胺盐酸盐溶液按照体积比5：2配置成50ml溶液，再加入0.005g 磷酸吡哆醛，搅拌混匀。取上述溶液0.3ml分别加入96孔板中，并加入10mg
Figure 457834DEST_PATH_IMAGE037
，再分别加入上述酶液 0.2ml（10wt，酶液浓度为0.5g/ml），摇床转速170rpm，升温至30℃条件下反应过夜。
筛选结果如图4所示：证明所有来源的酶对该底物均有催化活性，以Chromobacterium violaceum DSM30191(CVTA) 来源的转氨酶最好， 以Chromobacteriumviolaceum DSM30191(CVTA) 来源的转氨酶进行突变，得到具有转化率更好的四个突变体转化率均大于99%。
从以上的描述中，可以看出，本发明上述的实施例实现了如下技术效果：
1）使用转氨酶进行该生物转化反应可以一步反应直接得到所需目标化合物，底物类型适用广泛，不仅可以合成专利也可以合成1，3-二胺，1，4-二胺等化合物，还可以合成1，3-二胺，1，4-二胺等化合物。
2）使用转氨酶进行该生物转化反应选择性很高，产品手性纯度提高大大提升了产品ee值。
3）使用自行提取的前述转氨酶，底物浓度可达到100g/L，大大提高了生产效率。
4）使用转氨酶进行生物催化，不需要使用重金属催化剂及叠氮化合物和氰基化试剂。实现绿色化学。
5）该转氨酶催化效率高，反应体积少，合成路线短，产品收率高，大大降低了三废，节约生产成本。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
序列表
<110> 凯莱英生命科学技术（天津）有限公司
<120> 手性二胺化合物的合成方法
<130> PN118835KLY
<160> 4
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 459
<212> PRT
<213> 转氨酶(Chromobacterium violaceum DSM30191)
<220>
<221> VARIANT
<222> (1)..(459)
<223> TA4-V1
<400> 1
Met Gln Lys Gln Arg Thr Cys Ser Gln Trp Arg Glu Leu Asp Ala Ala
1 5 10 15
His His Leu His Pro Phe Thr Asp Thr Ala Ser Leu Asn Gln Ala Gly
20 25 30
Ala Arg Val Met Thr Arg Gly Glu Gly Val Tyr Leu Trp Asp Cys Glu
35 40 45
Gly Asn Lys Ile Ile Asp Gly Met Ala Gly Leu Trp Cys Val Asn Val
50 55 60
Gly Tyr Gly Arg Lys Asp Phe Ala Glu Ala Ala Arg Arg Gln Met Glu
65 70 75 80
Glu Leu Pro Phe Tyr Asn Thr Phe Tyr Lys Thr Thr His Pro Ala Val
85 90 95
Val Glu Leu Ser Ser Leu Leu Ala Glu Val Thr Pro Ala Gly Phe Asp
100 105 110
Arg Val Phe Tyr Thr Asn Ser Gly Ser Glu Ser Val Asp Thr Met Ile
115 120 125
Arg Met Val Arg Arg Tyr Trp Asp Val Gln Gly Lys Pro Glu Lys Lys
130 135 140
Thr Leu Ile Gly Arg Trp Trp Gly Tyr His Gly Ser Thr Ile Gly Gly
145 150 155 160
Ala Ser Leu Gly Gly Phe Lys Tyr Met His Glu Gln Gly Asp Leu Pro
165 170 175
Ile Pro Gly Met Ala His Ile Glu Gln Pro Trp Trp Tyr Lys His Gly
180 185 190
Lys Asp Met Thr Pro Asp Glu Phe Gly Val Val Ala Ala Arg Trp Leu
195 200 205
Glu Glu Lys Ile Leu Glu Ile Gly Ala Asp Lys Val Ala Ala Phe Val
210 215 220
Gly Glu Pro Ile Gln Gly Ala Gly Gly Val Ile Val Pro Pro Ala Thr
225 230 235 240
Tyr Trp Pro Glu Ile Glu Arg Ile Cys Arg Lys Tyr Asp Val Leu Leu
245 250 255
Val Ala Asp Glu Val Ile Cys Gly Phe Gly Arg Thr Gly Glu Trp Phe
260 265 270
Gly His Gln His Phe Gly Phe Gln Pro Asp Leu Phe Thr Ala Ala Lys
275 280 285
Gly Leu Ser Ser Gly Tyr Leu Pro Ile Gly Ala Val Phe Val Gly Lys
290 295 300
Arg Val Ala Glu Gly Leu Ile Ala Gly Gly Asp Phe Asn His Gly Phe
305 310 315 320
Thr Tyr Ser Gly His Pro Val Cys Ala Ala Val Ala His Ala Asn Val
325 330 335
Ala Ala Leu Arg Asp Glu Gly Ile Val Gln Arg Val Lys Asp Asp Ile
340 345 350
Gly Pro Tyr Met Gln Lys Arg Trp Arg Glu Thr Phe Ser Arg Phe Glu
355 360 365
His Val Asp Asp Val Arg Gly Val Gly Met Leu Leu Ala Phe Thr Leu
370 375 380
Val Lys Asn Lys Ala Lys Arg Glu Leu Phe Pro Asp Phe Gly Glu Ile
385 390 395 400
Gly Thr Leu Cys Arg Asp Ile Phe Phe Arg Asn Asn Leu Ile Met Asp
405 410 415
Ser Cys Gly Asp His Ile Val Cys Ala Pro Pro Leu Val Met Thr Arg
420 425 430
Ala Glu Val Asp Glu Met Leu Ala Val Ala Glu Arg Cys Leu Glu Glu
435 440 445
Phe Glu Gln Thr Leu Lys Ala Arg Gly Leu Ala
450 455
<210> 2
<211> 459
<212> PRT
<213> 转氨酶(Chromobacterium violaceum DSM30191)
<220>
<221> VARIANT
<222> (1)..(459)
<223> TA4-V2
<400> 2
Met Gln Lys Gln Arg Thr Cys Ser Gln Trp Arg Glu Leu Asp Ala Ala
1 5 10 15
His His Leu His Pro Phe Thr Asp Thr Ala Ser Leu Asn Gln Ala Gly
20 25 30
Ala Arg Val Met Thr Arg Gly Glu Gly Val Tyr Leu Trp Asp Cys Glu
35 40 45
Gly Asn Lys Ile Ile Asp Gly Met Ala Gly Leu Trp Cys Val Asn Val
50 55 60
Gly Tyr Gly Arg Lys Asp Phe Ala Glu Ala Ala Arg Arg Gln Met Glu
65 70 75 80
Glu Leu Pro Phe Tyr Asn Thr Phe Tyr Lys Thr Thr His Pro Ala Val
85 90 95
Val Glu Leu Ser Ser Leu Leu Ala Glu Val Thr Pro Ala Gly Phe Asp
100 105 110
Arg Val Phe Tyr Thr Asn Ser Gly Ser Glu Ser Val Asp Thr Met Ile
115 120 125
Arg Met Val Arg Arg Tyr Trp Asp Val Gln Gly Lys Pro Glu Lys Lys
130 135 140
Thr Leu Ile Gly Arg Trp Trp Gly Tyr His Gly Ser Thr Ile Gly Gly
145 150 155 160
Ala Ser Leu Gly Gly Phe Lys Tyr Met His Glu Gln Gly Asp Leu Pro
165 170 175
Ile Pro Gly Met Ala His Ile Glu Gln Pro Trp Trp Tyr Lys His Gly
180 185 190
Lys Asp Met Thr Pro Asp Glu Phe Gly Val Val Ala Ala Arg Trp Leu
195 200 205
Glu Glu Lys Ile Leu Glu Ile Gly Ala Asp Lys Val Ala Ala Phe Val
210 215 220
Gly Glu Pro Ile Gln Gly Ala Gly Gly Val Ile Val Pro Pro Ala Thr
225 230 235 240
Tyr Trp Pro Glu Ile Glu Arg Ile Cys Arg Lys Tyr Asp Val Leu Leu
245 250 255
Val Ala Asp Glu Val Ile Cys Gly Phe Gly Arg Thr Gly Glu Trp Phe
260 265 270
Gly His Gln His Phe Gly Phe Gln Pro Asp Leu Phe Thr Ala Ala Lys
275 280 285
Gly Leu Ser Ser Gly Tyr Leu Pro Ile Gly Ala Val Phe Val Gly Lys
290 295 300
Arg Val Ala Glu Gly Leu Ile Ala Gly Gly Asp Phe Asn His Gly Phe
305 310 315 320
Thr Tyr Ser Gly His Pro Val Cys Ala Ala Val Ala His Ala Asn Val
325 330 335
Ala Ala Leu Arg Asp Glu Gly Ile Val Gln Arg Val Lys Asp Asp Ile
340 345 350
Gly Pro Tyr Met Gln Lys Arg Trp Arg Glu Thr Phe Ser Arg Phe Glu
355 360 365
His Val Asp Asp Val Arg Gly Val Gly Met Leu Leu Ala Phe Thr Leu
370 375 380
Val Lys Asn Lys Ala Lys Arg Glu Leu Phe Pro Asp Phe Gly Glu Ile
385 390 395 400
Gly Thr Leu Cys Arg Asp Ile Phe Phe Arg Asn Asn Leu Ile Met Asp
405 410 415
Ser Cys Gly Asp His Ile Val Ala Ala Pro Pro Leu Val Met Thr Arg
420 425 430
Ala Glu Val Asp Glu Met Leu Ala Val Ala Glu Arg Cys Leu Glu Glu
435 440 445
Phe Glu Gln Thr Leu Lys Ala Arg Gly Leu Ala
450 455
<210> 3
<211> 459
<212> PRT
<213> 转氨酶(Chromobacterium violaceum DSM30191)
<220>
<221> VARIANT
<222> (1)..(459)
<223> TA4-V3
<400> 3
Met Gln Lys Gln Arg Thr Cys Ser Gln Trp Arg Glu Leu Asp Ala Ala
1 5 10 15
His His Leu His Pro Phe Thr Asp Thr Ala Ser Leu Asn Gln Ala Gly
20 25 30
Ala Arg Val Met Thr Arg Gly Glu Gly Val Tyr Leu Trp Asp Cys Glu
35 40 45
Gly Asn Lys Ile Ile Asp Gly Met Ala Gly Leu Trp Cys Val Asn Val
50 55 60
Gly Tyr Gly Arg Lys Asp Phe Ala Glu Ala Ala Arg Arg Gln Met Glu
65 70 75 80
Glu Leu Pro Phe Tyr Asn Thr Phe Tyr Lys Thr Thr His Pro Ala Val
85 90 95
Val Glu Leu Ser Ser Leu Leu Ala Glu Val Thr Pro Ala Gly Phe Asp
100 105 110
Arg Val Phe Tyr Thr Asn Ser Gly Ser Glu Ser Val Asp Thr Met Ile
115 120 125
Arg Met Val Arg Arg Tyr Trp Asp Val Gln Gly Lys Pro Glu Lys Lys
130 135 140
Thr Leu Ile Gly Arg Trp Trp Gly Tyr His Gly Ser Thr Ile Gly Gly
145 150 155 160
Ala Ser Leu Gly Gly Phe Lys Tyr Met His Glu Gln Gly Asp Leu Pro
165 170 175
Ile Pro Gly Met Ala His Ile Glu Gln Pro Trp Trp Tyr Lys His Gly
180 185 190
Lys Asp Met Thr Pro Asp Glu Phe Gly Val Val Ala Ala Arg Trp Leu
195 200 205
Glu Glu Lys Ile Leu Glu Ile Gly Ala Asp Lys Val Ala Ala Phe Val
210 215 220
Gly Glu Pro Ile Gln Gly Ala Gly Gly Val Ile Val Pro Pro Ala Thr
225 230 235 240
Tyr Trp Pro Glu Ile Glu Arg Ile Cys Arg Lys Tyr Asp Val Leu Leu
245 250 255
Val Ala Asp Glu Val Ile Cys Gly Phe Gly Arg Thr Gly Glu Trp Phe
260 265 270
Gly His Gln His Phe Gly Phe Gln Pro Asp Leu Phe Thr Ala Ala Lys
275 280 285
Gly Leu Ser Ser Gly Tyr Leu Pro Ile Gly Ala Val Phe Val Gly Lys
290 295 300
Arg Val Ala Glu Gly Leu Ile Ala Gly Gly Asp Phe Asn His Gly Phe
305 310 315 320
Thr Tyr Ser Gly His Pro Val Cys Ala Ala Val Ala His Ala Asn Val
325 330 335
Ala Ala Leu Arg Asp Glu Gly Ile Val Gln Arg Val Lys Asp Asp Ile
340 345 350
Gly Pro Tyr Met Gln Lys Arg Trp Arg Glu Thr Phe Ser Arg Phe Glu
355 360 365
His Val Asp Asp Val Arg Gly Val Gly Met Leu Leu Ala Phe Thr Leu
370 375 380
Val Lys Asn Lys Ala Lys Arg Glu Leu Phe Pro Asp Phe Gly Glu Ile
385 390 395 400
Gly Thr Leu Cys Arg Asp Ile Phe Gln Arg Asn Asn Leu Ile Met Asp
405 410 415
Ser Cys Gly Asp His Ile Val Ser Ala Pro Pro Leu Val Met Thr Arg
420 425 430
Ala Glu Val Asp Glu Met Leu Ala Val Ala Glu Arg Cys Leu Glu Glu
435 440 445
Phe Glu Gln Thr Leu Lys Ala Arg Gly Leu Ala
450 455
<210> 4
<211> 459
<212> PRT
<213> 转氨酶(Chromobacterium violaceum DSM30191)
<220>
<221> VARIANT
<222> (1)..(459)
<223> TA4-V4
<400> 4
Met Gln Lys Gln Arg Thr Cys Ser Gln Trp Arg Glu Leu Asp Ala Ala
1 5 10 15
His His Leu His Pro Phe Thr Asp Thr Ala Ser Leu Asn Gln Ala Gly
20 25 30
Ala Arg Val Met Thr Arg Gly Glu Gly Val Tyr Leu Trp Asp Cys Glu
35 40 45
Gly Asn Lys Ile Ile Asp Gly Met Ala Gly Leu Trp Cys Val Asn Val
50 55 60
Gly Tyr Gly Arg Lys Asp Phe Ala Glu Ala Ala Arg Arg Gln Met Glu
65 70 75 80
Glu Leu Pro Phe Tyr Asn Thr Phe Tyr Lys Thr Thr His Pro Ala Val
85 90 95
Val Glu Leu Ser Ser Leu Leu Ala Glu Val Thr Pro Ala Gly Phe Asp
100 105 110
Arg Val Phe Tyr Thr Asn Ser Gly Ser Glu Ser Val Asp Thr Met Ile
115 120 125
Arg Met Val Arg Arg Tyr Trp Asp Val Gln Gly Lys Pro Glu Lys Lys
130 135 140
Thr Leu Ile Gly Arg Trp Trp Gly Tyr His Gly Ser Thr Ile Gly Gly
145 150 155 160
Ala Ser Leu Gly Gly Phe Lys Tyr Met His Glu Gln Gly Asp Leu Pro
165 170 175
Ile Pro Gly Met Ala His Ile Glu Gln Pro Trp Trp Tyr Lys His Gly
180 185 190
Lys Asp Met Thr Pro Asp Glu Phe Gly Val Val Ala Ala Arg Trp Leu
195 200 205
Glu Glu Lys Ile Leu Glu Ile Gly Ala Asp Lys Val Ala Ala Phe Val
210 215 220
Gly Glu Pro Ile Gln Gly Ala Gly Gly Val Ile Val Pro Pro Ala Thr
225 230 235 240
Tyr Trp Pro Glu Ile Glu Arg Ile Cys Arg Lys Tyr Asp Val Leu Leu
245 250 255
Val Ala Asp Glu Val Ile Cys Gly Phe Gly Arg Thr Gly Glu Trp Phe
260 265 270
Gly His Gln His Phe Gly Phe Gln Pro Asp Leu Phe Thr Ala Ala Lys
275 280 285
Gly Leu Ser Ser Gly Tyr Leu Pro Ile Gly Ala Val Phe Val Gly Lys
290 295 300
Arg Val Ala Glu Gly Leu Ile Ala Gly Gly Asp Phe Asn His Gly Phe
305 310 315 320
Thr Tyr Ser Gly His Pro Val Cys Ala Ala Val Ala His Ala Asn Val
325 330 335
Ala Ala Leu Arg Asp Glu Gly Ile Val Gln Arg Val Lys Asp Asp Ile
340 345 350
Gly Pro Tyr Met Gln Lys Arg Trp Arg Glu Thr Phe Ser Arg Phe Glu
355 360 365
His Val Asp Asp Val Arg Gly Val Gly Met Leu Leu Ala Phe Thr Leu
370 375 380
Val Lys Asn Lys Ala Lys Arg Glu Leu Phe Pro Asp Phe Gly Glu Ile
385 390 395 400
Gly Thr Leu Cys Arg Asp Ile Phe His Arg Asn Asn Leu Ile Met Asp
405 410 415
Ser Cys Gly Asp His Ile Val Ser Ala Pro Pro Leu Val Met Thr Arg
420 425 430
Ala Glu Val Asp Glu Met Leu Ala Val Ala Glu Arg Cys Leu Glu Glu
435 440 445
Phe Glu Gln Thr Leu Lys Ala Arg Gly Leu Ala
450 455

Claims (15)

1.一种手性二胺化合物的合成方法，其特征在于，所述合成方法包括：
利用转氨酶将如下任意一种底物转化为所述手性二胺化合物；
Figure 379421DEST_PATH_IMAGE002
、
Figure 234245DEST_PATH_IMAGE004
、
Figure 951665DEST_PATH_IMAGE006
、
Figure 753399DEST_PATH_IMAGE008
、
Figure 833351DEST_PATH_IMAGE010
、
Figure 360540DEST_PATH_IMAGE012
、
Figure 34098DEST_PATH_IMAGE014
、
Figure 498578DEST_PATH_IMAGE016
、
Figure 573981DEST_PATH_IMAGE018
及
Figure 770607DEST_PATH_IMAGE020
；
所述转氨酶为SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：4所示的氨基酸序列的转氨酶。
2.根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于，所述合成方法包括：
将磷酸缓冲液与氨基供体混合，得到第一混合液，
向所述第一混合液中添加所述底物，得到第二混合液；
向所述第二混合液中添加所述转氨酶，得到反应混合液；
从所述反应混合液中分离得到所述手性二胺化合物。
3.根据权利要求2所述的合成方法，其特征在于，在向所述第一混合液中添加所述底物之前，所述合成方法还包括：将所述第一混合液的pH值调节至7.0~9.0。
4.根据权利要求3所述的合成方法，其特征在于，
向所述第二混合液中添加所述转氨酶，并调节加入所述转氨酶后的所述第二混合液的pH为7.0~9.0，得到所述反应混合液。
5.根据权利要求4所述的合成方法，其特征在于，从所述反应混合液中分离得到所述手性二胺化合物包括：
调节所述反应混合液的酸度使所述转氨酶变性；
将变性后的所述转氨酶过滤除去，得到初步滤液；
将所述初步滤液的pH值调至碱性，得到碱性滤液；
对所述碱性滤液进行萃取，得到所述手性二胺化合物。
6.根据权利要求5所述的合成方法，其特征在于，调节所述反应混合液的pH值为1~2。
7.根据权利要求5所述的合成方法，其特征在于，所述碱性滤液的pH值为12~13。
8.根据权利要求5所述的合成方法，其特征在于，所述萃取为多次。
9.根据权利要求5所述的合成方法，其特征在于，所述萃取为2~5次。
10.根据权利要求5所述的合成方法，其特征在于，采用二氯甲烷进行第一次所述萃取，后续采用二氯甲烷或乙酸乙酯萃取剩余次数。
11.根据权利要求5所述的合成方法，其特征在于，所述萃取之后还包括对萃取所得有机相进行干燥的步骤。
12.根据权利要求5所述的合成方法，其特征在于，
将每次萃取所得有机相合并，得到萃取物；
对所述萃取物进行干燥，得到干燥有机相产物；
将所述干燥有机相产物置于温度＜45℃，压力≤-0.08Mpa的条件下浓缩至无馏分，得到所述手性二胺化合物。
13.根据权利要求1至12中任一项所述的合成方法，其特征在于，所述转氨酶与所述底物的质量比为： 0.4：1~ 1.0：1。
14.根据权利要求1至12中任一项所述的合成方法，其特征在于，所述底物的浓度为60g/L~100g/L。
15.根据权利要求2所述的合成方法，其特征在于，所述氨基供体选自异丙胺、异丙胺的盐酸盐、丙氨酸、苯乙胺或正丁胺。
CN202010118060.9A 2020-02-26 2020-02-26 手性二胺化合物的合成方法 Active CN110982856B (zh)

Priority Applications (6)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010118060.9A CN110982856B (zh) 2020-02-26 2020-02-26 手性二胺化合物的合成方法
KR1020227033472A KR20220157981A (ko) 2020-02-26 2020-03-31 키랄 디아민 화합물 합성 방법
JP2022551243A JP7345070B2 (ja) 2020-02-26 2020-03-31 キラルジアミン化合物の合成方法
PCT/CN2020/082594 WO2021168987A1 (zh) 2020-02-26 2020-03-31 手性二胺化合物的合成方法
EP20921866.8A EP4112733A4 (en) 2020-02-26 2020-03-31 METHOD FOR SYNTHESIZING A CHIRAL DIAMINE COMPOUND
US17/905,092 US20230151396A1 (en) 2020-02-26 2020-03-31 Method for synthesizing a chiral diamine compound

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010118060.9A CN110982856B (zh) 2020-02-26 2020-02-26 手性二胺化合物的合成方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN110982856A CN110982856A (zh) 2020-04-10
CN110982856B true CN110982856B (zh) 2020-06-23

Family

ID=70081406

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202010118060.9A Active CN110982856B (zh) 2020-02-26 2020-02-26 手性二胺化合物的合成方法

Country Status (6)

Country Link
US (1) US20230151396A1 (zh)
EP (1) EP4112733A4 (zh)
JP (1) JP7345070B2 (zh)
KR (1) KR20220157981A (zh)
CN (1) CN110982856B (zh)
WO (1) WO2021168987A1 (zh)

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108048419A (zh) * 2017-11-15 2018-05-18 凯莱英生命科学技术(天津)有限公司 转氨酶突变体及其应用
CN108384767A (zh) * 2018-02-05 2018-08-10 凯莱英生命科学技术(天津)有限公司 转氨酶突变体及其应用
CN110616236A (zh) * 2019-10-14 2019-12-27 暨明医药科技（苏州）有限公司 一种(r)-n1,n1-二乙基-1,4-戊二胺的制备方法

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105367427B (zh) 2015-11-04 2018-03-13 北京大学深圳研究生院 手性1,2‑二胺类化合物及其制备方法和应用
CN105753752B (zh) 2016-04-15 2018-02-27 安徽师范大学 一种手性邻二胺类化合物的制备方法
JP7105307B2 (ja) 2018-02-05 2022-07-22 アシムケム ライフ サイエンス （ティエンジン） カンパニー リミテッド トランスアミナーゼ突然変異体及びその応用
CN110592042B (zh) * 2019-10-28 2021-04-23 凯莱英医药集团（天津）股份有限公司 转氨酶突变体及其应用

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108048419A (zh) * 2017-11-15 2018-05-18 凯莱英生命科学技术(天津)有限公司 转氨酶突变体及其应用
CN108384767A (zh) * 2018-02-05 2018-08-10 凯莱英生命科学技术(天津)有限公司 转氨酶突变体及其应用
CN110616236A (zh) * 2019-10-14 2019-12-27 暨明医药科技（苏州）有限公司 一种(r)-n1,n1-二乙基-1,4-戊二胺的制备方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Single point mutations reveal amino acid residues important for Chromobacterium violaceum transaminase activity in the production of unnatural amino acids;Sarah A. Almahboub et al;《Scientific reports》;20181126;第8卷(第17397期);第1-10页 *
Substrate spectrum of ω-transaminase from Chromobacterium violaceum DSM30191 and its potential for biocatalysis;Ursula Kaulmann et al;《Enzyme and microbial technology》;20071231;第41卷;第628-637页 *

Also Published As

Publication number Publication date
EP4112733A4 (en) 2023-09-06
JP2023514862A (ja) 2023-04-11
JP7345070B2 (ja) 2023-09-14
KR20220157981A (ko) 2022-11-29
WO2021168987A1 (zh) 2021-09-02
US20230151396A1 (en) 2023-05-18
EP4112733A1 (en) 2023-01-04
CN110982856A (zh) 2020-04-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Pollegioni et al. L-amino acid oxidase as biocatalyst: a dream too far?
CN109134594B (zh) 一种酶法制备谷胱甘肽的方法
EP2557176A1 (en) Enzymatic amination
CN111944856B (zh) 一种普瑞巴林中间体的合成方法
CN110982856B (zh) 手性二胺化合物的合成方法
KR102027201B1 (ko) 히단토이나제의 돌연변이체
WO2017033134A1 (en) Enzymatic process for the for preparation of (r)-1-(1-naphthyl) ethylamine, an intermediate of cinacalcet hydrochloride
CN110950788B (zh) 含氟手性胺类化合物的合成方法
CN112921023B (zh) 一种重组天冬氨酸裂解酶及高重复利用率用于制备r-3-氨基丁酸的方法
EP1257659B1 (en) Method and catalyst system for stereoselectively inverting a chiral center of a chemical compound
CN111172213A (zh) 一种用双酶串联制备l-2-氨基丁酸的方法
CN114686537B (zh) 一种多酶级联催化l-氨基酸生成n-甲基-l-氨基酸的方法及其应用
CN1989246B (zh) L-氨基酸酰胺不对称水解酶及其编码dna
CN113846084B (zh) 卤醇脱卤酶突变体、编码基因、质粒、基因工程菌及其应用
WO2003042393A1 (en) Enzymatic preparation of mycophenolate mofetil
Sharma et al. Microbial transformations: production of D-amino acids using hydantoinase
CN111909907B (zh) 天冬氨酸氧化酶突变体、工程菌及其在氧化-还原偶联制备精草铵膦中的应用
JP2721536B2 (ja) Ｄ―β―ヒドロキシアミノ酸を取得する方法
CN116411033A (zh) 一种来源于巨大芽孢杆菌的氨基转移酶突变体及其应用
CN116731990A (zh) D-氨基酸氧化酶及其应用和酶法制备l-正缬氨酸的方法
CN111676256A (zh) 一种l-叔亮氨酸的生物制备方法
Dürr Screening and description of novel hydantoinases from distinct environmental sources
KR20210143593A (ko) 생산물 동시 분리를 통한 바이오제닉 아민의 생물학적 생산 방법
CN117264936A (zh) 一种催化活性提高的苯丙氨酸解氨酶突变体及其用途
CN116555366A (zh) 一种使用氨基转移酶突变体制备手性内酰胺类化合物的方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant