CN110974852A - 一种灭活乳酸菌的细胞、细胞碎片与内含物的凝胶剂及其制备方法和应用 - Google Patents

一种灭活乳酸菌的细胞、细胞碎片与内含物的凝胶剂及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明属于生物医药技术领域，特别涉及一种灭活乳酸菌的细胞、细胞碎片与内含物的凝胶剂及其制备方法和应用，按重量计，该凝胶剂按重量份数计，包括以下组分：壳聚糖10‑20份、精油2‑6份、三乙醇胺1‑5份、灭活乳酸菌20‑30份和卡波姆1‑5份；其中，原料中壳聚糖和灭活乳酸菌搭配，同时添加三乙醇胺作为稳定剂，使灭活乳酸菌凝胶剂稳定性更好，再复配抗菌精油。本发明可抑制有害菌，例如白色念球菌、金黄色葡萄球菌、致病性表皮葡萄球菌的效果更好，且有效维持阴道与菌群之间的生态平衡，抑菌效果更持久。

Description

一种灭活乳酸菌的细胞、细胞碎片与内含物的凝胶剂及其制 备方法和应用
技术领域
本发明属于生物医药技术领域，特别涉及一种灭活乳酸菌的细胞、细胞碎片与内含物的凝胶剂及其制备方法和应用。
背景技术
凝胶剂(gels)系指药物与能形成凝胶的辅料制成溶液、混悬或乳状液型的稠厚液体或半固体制剂。通常凝胶剂限局部用于皮肤及体腔(如鼻腔，阴道和直肠)。乳状液型凝胶剂又称为乳胶剂。由高分子基质制成的凝胶剂也可称为胶浆剂。小分子无机物的小粒子以网状结构存在于液体中形成的凝胶剂，属两相分散系统，也称为混悬型凝胶剂。混悬型凝胶剂可具有触变性，静止时为半固体而搅拌或振摇时则成为液体。
凝胶剂是目前发展很快的阴道用给剂型,患者顺应性好,易于涂布,无刺激性,无异物感,能紧密附着在吸收部位,延长滞留时间,达到充分发挥药效目的。此剂型既可克服传统外用剂型成分复杂所致的一些缺陷,又可容纳极细粉，提取等工艺条件也不苛刻,比较适应复方制剂的生产现状,可作为传统外用剂剂型改进的一种选择。
乳酸菌是人类发现最早的益生菌之一，已在全球广泛使用。乳酸菌产品包括乳酸菌体和乳酸菌代谢产物，以及以这两类物质加工而成的产品(如酸奶，乳酸菌饮料)。我国对乳酸菌益生性能的研究始于20世纪80年代，目前对乳酸菌的研究集中于其作用机理方面。乳酸菌作为定居于肠道中的有益菌群，保健功能很多：减缓乳糖消化不良、治疗腹泻、阴道炎、激活免疫系统、抗肿瘤和突变、抗氧化、缓解过敏、增加矿物质的吸收和降低血清胆固醇等。
乳酸菌益生作用机理较复杂，一般分为两种：一是直接作用，菌体本身及其活性代谢物对有害物质的黏附或降解。二是间接作用，乳酸菌及其代谢产物调节肠道菌群及其代谢酶活性，调节机体免疫活性及机体部分酶活性，起间接益生作用。乳酸菌益生作用的物质主要包括乳酸菌的代谢产物，如乳酸，乳酸菌胞外多糖(EPS)，乳酸菌细胞破裂后释放的肽聚糖，细胞内酶等。针对活菌和死菌目前认为上述两者均能发挥益生效果，但是其发挥的机理、安全性和使用上仍然存在一些差异，不能等同。
例如，从安全性来说，活菌制剂有时会引起炎症，如活性乳酸菌在肠管未成熟，炎症或免疫不全时，会突破肠壁，侵入机体，引发炎症，此现象叫位移。活性乳酸菌还存在受抗生素影响及耐性基因转移等问题。而死细胞乳酸菌制剂不受抗生素影响，含菌量稳定，无耐基因转移和菌体位移的危险，安全性更高。
阴道炎作为常见的妇科病，具有反复多发的特点，阴道炎是由多种病原微生物引起的阴道黏膜疾病之总称。滴虫性阴道炎占13％～25％，细菌性阴道炎占10％～30％，真菌性阴道炎占40％～50％。
本发明的目的在于研制出一种对各种阴道炎具有治疗价值的制剂，且具有较高的疗效。
发明内容
鉴于上述现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种灭活乳酸菌的细胞、细胞碎片与内含物的凝胶剂，利用壳聚糖结构，再与灭活乳酸菌细胞壁上的肽聚糖、磷壁酸和蛋白质结合，正负电荷相互吸引结合，使壳聚糖和灭活乳酸菌结合得更稳固，同时添加三乙醇胺作为稳定剂，使制得的凝胶剂稳定性更好，例如在高压、高温、高湿和强光照的条件下，仍能保持稳定的形态，再复配抗菌精油，抑制有害菌，例如白色念球菌、金黄色葡萄球菌、致病性表皮葡萄球菌的效果更好，且有效维持阴道与菌群之间的生态平衡，抑菌效果更持久。
本发明的另一个目的在于提供一种含灭活乳酸菌的细胞、细胞碎片与内含物的凝胶剂的制备方法。
一种灭活乳酸菌的细胞、细胞碎片与内含物的凝胶剂，按重量份数计，包括以下组分：壳聚糖10-20份、精油2-6份、三乙醇胺1-5份、灭活乳酸菌20-30份、卡波姆20-30份。
灭活乳酸菌优势主要是以下几点：
(1)菌数量大：乳酸菌灭活后，菌体细胞、细胞碎片与内含物可以高密度集中，每份含有的菌数等有效物会大幅增加。
(2)安全系数高：灭活乳酸菌不会在体内生长繁殖，不用担心益生菌过敏，益生菌依赖症等问题，安全系数高。
(3)质量稳定：活菌制剂需要冷藏保存，而且为了保证菌的活性，需要添加保护剂和稳定剂；活的益生菌的细胞数和活性都会随着保存时间的延长而降低。而灭活乳酸菌只需在常温保存即可，运输方便，细胞数也不会减少。
(4)去除霉菌毒素和重金属：本产品具有去除霉菌毒素和重金属的作用，而一般常用的活益生菌无此功效。
(5)可与抗生素同时使用：这也是本产品较大的优点之一。
活菌制剂一般不能与抗生素合用，由于抗生素的广谱杀菌性，在杀灭致病菌的同时也会杀灭益生菌，因而会引起肠道的微生态失衡，还可能会引起腹泻，消化不良等症状。因此在生病时，医生为了达到快速治疗效果，一般会选择抗生素而放弃活菌。而灭活乳酸菌则没有上述问题，可以与抗生素同时使用，而且有协同效应，灭活乳酸菌能刺激人体内原本存在得益生菌繁殖，达到辅助治疗的效果，同时能够迅速恢复抗生素治疗后的肠道微生态平衡。
益生菌可以通过与致病菌竞争体内黏膜上皮细胞的脂质和蛋白质上的相同复合糖受体来达到阻止致病菌的定植，构成一层菌膜屏障，并产生细胞外糖苷酶，降解作为潜在致病菌及其定植，形成化学保护屏障，可以保护阴道的微环境，阻止致病菌的侵入、黏附和定植。而灭菌乳酸菌的细胞、细胞碎片与内含物的能促进人体自身益生菌的生长繁殖，特别是乳酸菌定植；同时灭活乳酸菌细胞壁上肽聚糖、磷壁酸和蛋白质构成的新位点更多暴露，使吸附能力增强，细胞壁和外壁层有可极化的基团，如磷酸基团、羧基、羟基等，从而实现脱毒、脱重金属的功效。
壳聚糖是一种从虾、蟹等甲壳类动物的外壳中提取出来的天然高分子化合物--甲壳素经脱乙酰化处理后得到的多糖。壳聚糖具有良好的吸附性，能通过络合、离子交换等对金属离子、蛋白质、氨基酸、核酸、卤素、染料色离子等进行化学吸附作用，对细菌具有杀菌抑菌作用，所以壳聚糖可用作吸附剂、絮凝剂、杀菌剂、离子交换剂等。
壳聚糖是由D-葡萄糖胺以β-1，4糖苷键连接而成的直链高聚物,经研究证实,壳聚糖具有复杂的双螺旋结构,螺距为0.515nm。在壳聚糖大分子链上分布着许多羟基、氨基,还有一些N-乙酰氨基,它们会形成各种分子内和分子间的氢键，因为这些氢键的存在，才形成了壳聚糖大分子的二级结构。如氨基葡萄糖残基的C3-OH可以与相邻的另一条壳聚糖分子链的糖苷键形成分子间氢键，C3-OH也可以与相邻的另一条壳聚糖分子链的一个糖残基呋喃环上的氧原子形成分子间氢键，这些分子间力会使其水溶性减弱。
壳聚糖在一定浓度的稀酸溶液里的溶解过程，先是氢离子与壳聚糖分子链上的游离氨基不断地结合，全部形成阳离子(-NH3+)，当溶液中剩余的氢离子不多时，亦即溶液的离子强度很低时，壳聚糖分子链上的-NH3+基团因阳电荷的同性相斥而使壳聚糖分子链舒展，即成为扩张型线性分子而处于溶解状态，此时，溶液的比浓粘度最大。因此，壳聚糖与氢健形成具有类似网状结构的笼形分子，从而有更稳定的吸附作用。
壳聚糖带的阳离子与灭活乳酸菌带的阴离子(主要是蛋白质和核酸)结合，相吸使两者能更好的结合，从而使制得的凝胶剂稳定性好，抑菌效果更好。
精油抑菌机理主要有以下几种：
(1)影响细胞膜的正常功能，精油中酚类物质可以进攻微生物的细胞壁或细胞膜，从而导致微生物细胞功能的受损，最终杀死细菌起到抑菌作用；(2)溶解包体中的脂质体；(3)影响能量代谢和还原酶系。
三乙醇胺是pH值稳定剂，主要是用来调节和控制凝胶的pH值，使其稳定在3.8-4.4范围之内，同时，三乙醇胺还可以调节凝胶剂的黏度。
优选地，一种灭活乳酸菌的细胞、细胞碎片与内含物的凝胶剂，按重量份数计，包括以下组分：壳聚糖15-20份、精油3-5份、三乙醇胺2-4份、灭活乳酸菌25-30份、卡波姆1-5份。
优选地，所述灭活乳酸菌灭活方法为物理方法或化学方法两种的一种。
优选地，物理方法灭活为高温高压灭活、紫外线灭活或辐射灭活中的任一种。
优选地，化学方式灭活为化学试剂灭活。
优选地，所述灭活乳酸菌完整菌体数量为107-1011个/g，其他为细胞碎片与内含物。
灭活乳酸菌完整菌体数量能体现菌体细胞壁上肽聚糖、磷壁酸和蛋白质等物质的含量，而灭活乳酸菌完整菌体数量为107-1011个/g，与配方中的壳聚糖结合效果更佳，稳定性更好。
优选地，所述灭活乳酸菌选自嗜酸乳杆菌、乳酸乳杆菌、嗜热链球菌、戊糖片球菌、乳酸片球菌、保加利亚乳杆菌、卷曲乳杆菌和双歧杆菌中的一种或多种。
优选地，所述精油为肉桂醛和丁香酚中的一种或两种。
肉桂酸是一种醛类有机化合物，大量存在于肉桂等植物体内。自然界中天然存在的肉桂酸均为反式结构，该分子为一个丙烯酸上连接上一个苯基，因此可被认为是一种丙烯醛衍生物。肉桂醛通常称为桂醛，天然存在于斯里兰卡肉桂油，桂皮油，藿香油，风信子油和玫瑰油等精油中。在医方面、化工方面、香精香料和食品工业应用广泛，其中，医方面作用有(1)杀菌消毒防腐，特别是对真菌有显著疗效；(2)抗溃疡，加强胃，肠道运动；(3)脂肪分解作用；(4)抗病毒作用；(5)抗癌作用；(6)扩张血管及降压作用；(7)壮阳作用。
丁香酚是丁香油的主要成份，占有大约80％，是一种天然的防腐剂。目前对丁香酚的研究已经比较深入，并且已应用于各个领域。丁香酚主要作用是：(1)抗菌作用。根据研究丁香酚对多数真菌、细菌、霉菌都具有很强的抗菌作用。丁香酚对金黄色葡萄球菌、溶血肺炎链球菌、单核增生李氏特菌、鼠伤寒杆菌、志贺痢疾杆菌、铜绿假单孢杆菌、大肠杆菌、都柏林沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌、猪肺炎链球菌、蜡状芽孢杆菌12种常见的细菌具有抑制作用。(2)抗氧化作用。丁香酚与其它抗氧化剂相比，其还原能力、对H2O2的清除能力、减少脂质过氧化能力的效果非常明显。(3)其它应用。丁香酚还可作为化工中间体合成其它的化学产品；促进透皮吸收作用，丁香酚提取物促进5-氟脲啶透皮吸收；有祛蚊作用，有效驱避蚊虫时间可达到6h，可开发为一种天然植物祛蚊剂。
一种含灭活乳酸菌凝胶剂制备方法，包括如下步骤：
S1:三乙醇胺加入去离子水中，形成质量浓度为2％～5％的稳定溶液；
S2：加入壳聚糖，然后加入精油，用乳酸溶液调节pH为3.8-4.4，加入灭活乳酸菌溶解，最后加入卡波姆形成凝胶。
上述反应在常温下即可进行，为促进其溶解加快，在适当温度下加温均可。
该凝胶经灌装，辐照灭菌得灭活乳酸菌妇科外用凝胶产品。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
本发明配方中乳酸溶液调节配方的pH值为3.8-4.4，pH值为3.8-4.4是女性阴道最适宜的酸碱度，能抑制致病菌的生长，同时壳聚糖在酸性条件下，与氢健形成具有类似网状结构的笼形分子，利用壳聚糖带阳电荷离子与灭活乳酸菌带阴电荷的离子(主要是蛋白质和核酸)相结合，再添加三乙醇胺作为pH值稳定剂，使凝胶剂pH值保持在3.8-4.4之间，制得凝胶剂稳定性更好，例如在高压、高温、强光照和高湿度条件下，能保持稳定的状状，灭活乳酸菌凝胶剂还复配抗菌精油，多种抗菌物质发挥抗菌作用，抑制有害菌，例如白色念球菌、金黄色葡萄球菌、致病性表皮葡萄球菌的效果更好，且有效维持阴道与菌群之间的生态平衡，抑菌效果更持久。
具体实施方式
以下结合具体实施例来进一步说明本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明，本发明采用的试剂，方法和设备为本技术领域常规试剂，方法和设备。
除非特别说明，本发明所用试剂和材料均为市购。
灭活乳酸菌制备
将乳酸菌进行常规液体培养基于36±1℃，培养12-36小时后，检测纯度和活菌数，检测达标后，再利用超速离心机对发酵后的菌液进行离心，在3000-5000r/min条件下离心30min,去上清液，收集沉淀物，再将沉淀物充分清洗后，配制成所需浓度混悬液，灭活，干燥。
灭活乳酸菌灭活方法为物理方法或化学方法两种的一种，物理方法灭活为高温高压灭活、紫外线灭活或辐射灭活中的任一种，化学方式灭活为化学试剂灭活。
实施例1
一种灭活乳酸菌的细胞、细胞碎片与内含物的凝胶剂，按重量计，包括以下组分：壳聚糖10g、肉桂醛2g、三乙醇胺3g、灭活乳酸菌20g、卡波姆1g。
灭活乳酸菌细胞为107-1011个/g。
灭活乳酸菌为嗜酸乳杆菌和乳双歧杆菌。
一种灭活乳酸菌凝胶剂制备方法，包括如下步骤：
S1:取三乙醇胺与去离子水混合，制备得到质量浓度为3％的溶液；
S2:加入壳聚糖溶解，然后加入精油，用乳酸溶液调节pH为3.8-4.4，加入灭活乳酸菌，最后加入卡波姆，均质30min，经灌装，辐照灭菌得灭活乳酸菌妇科外用凝胶。
实施例2
一种灭活乳酸菌的细胞、细胞碎片与内含物的凝胶剂，按重量计，包括以下组分：壳聚糖15g、丁香酚4g、三乙醇胺2g、灭活乳酸菌25g、卡波姆2g。
灭活乳酸菌细胞为107-1011个/g。
灭活乳酸菌为乳酸乳杆菌。
一种灭活乳酸菌凝胶剂制备方法，包括如下步骤：
S1:取三乙醇胺与去离子水混合，制备得到质量浓度为2％的溶液；
S2:加入壳聚糖溶解，然后加入精油，用乳酸溶液调节pH为3.8-4.4，加入灭活乳酸菌，最后加入卡波姆，均质30min，经灌装，辐照灭菌得灭活乳酸菌妇科外用凝胶。
实施例3
一种灭活乳酸菌的细胞、细胞碎片与内含物的凝胶剂，按重量计，包括以下组分：壳聚糖20g、肉桂醛6g、三乙醇胺5g、灭活乳酸菌30g、卡波姆2g。
灭活乳酸菌细胞为107-1011个/g。
灭活乳酸菌选自嗜热链球菌。
一种灭活乳酸菌的细胞、细胞碎片与内含物的凝胶剂制备方法，包括如下步骤：
S1:取三乙醇胺与去离子水混合，制备得到质量浓度为5％的溶液；
S2:加入壳聚糖溶解，然后加入精油，用乳酸溶液调节pH为3.8-4.4，加入灭活乳酸菌，最后加入卡波姆，均质30min，经灌装，辐照灭菌得灭活乳酸菌妇科外用凝胶。
实施例4
一种灭活乳酸菌的细胞、细胞碎片与内含物的凝胶剂，按重量计，包括以下组分：壳聚糖15g、精油5g、三乙醇胺2g、灭活乳酸菌25g、卡波姆2g。
灭活乳酸菌细胞为107-1011个/g。
灭活乳酸菌选自戊糖片球菌、乳酸片球菌、保加利亚乳杆菌、卷曲乳杆菌和双歧杆菌五种，按重量计每份灭活乳酸菌戊糖片球菌：乳酸片球菌：保加利亚乳杆菌：卷曲乳杆菌：双歧杆菌为1：1：1：1：1。
每份精油重量份包括肉桂醛：丁香酚为1：1。
一种灭活乳酸菌的细胞、细胞碎片与内含物的凝胶剂制备方法，包括如下步骤：
S1:取三乙醇胺与去离子水混合，制备得到质量浓度为2％的溶液；
S2:加入壳聚糖溶解，然后加入精油，用乳酸溶液调节pH为3.8-4.4，加入灭活乳酸菌，最后加入卡波姆，均质30min，经灌装，辐照灭菌得灭活乳酸菌妇科外用凝胶。
对比例1
对比例1与实施例1相比，不同在于，实施例1组分包括灭活乳酸菌20g，而对比例1组分没有灭活乳酸菌。
一种凝胶剂，按重量计，包括以下组分：壳聚糖10g、肉桂醛2g、三乙醇胺1g、卡波姆2g。
一种凝胶剂制备方法，包括如下步骤：
一种灭活乳酸菌的细胞、细胞碎片与内含物的凝胶剂制备方法，包括如下步骤：
S1:取三乙醇胺与去离子水混合，制备得到质量浓度为1％的溶液；
S2:加入壳聚糖溶解，然后加入精油，用乳酸溶液调节pH为3.8-4.4，加入卡波姆，均质30min，经灌装，辐照灭菌得灭活乳酸菌妇科外用凝胶。
对比例2
对比例2与实施例2相比，不同在于，实施例2组分包括灭活乳酸菌25g，而对比例2组分包括灭活乳酸菌5g。
一种灭活乳酸菌的细胞、细胞碎片与内含物的凝胶剂，按重量计，包括以下组分：壳聚糖15g、丁香酚4g、三乙醇胺2g、灭活乳酸菌5g、卡波姆2g。
灭活乳酸菌细胞为107-1011个/g。
灭活乳酸菌为乳酸乳杆菌。
一种灭活乳酸菌的细胞、细胞碎片与内含物的凝胶剂制备方法，包括如下步骤：
S1:取三乙醇胺与去离子水混合，制备得到质量浓度为2％的溶液；
S2:加入壳聚糖溶解，然后加入精油，用乳酸溶液调节pH为3.8-4.4，加入灭活乳酸菌，最后加入卡波姆，均质30min，经灌装，辐照灭菌得灭活乳酸菌妇科外用凝胶。
对比例3
对比例3与实施例3相比，不同在于，实施例3组分包括灭活乳酸菌30g，而对比例3组分包括灭活乳酸菌35g。
一种灭活乳酸菌的细胞、细胞碎片与内含物的凝胶剂，按重量计，包括以下组分：壳聚糖20g、肉桂醛6g、三乙醇胺5g、灭活乳酸菌35g、卡波姆3g。
灭活乳酸菌灭活方法为化学试剂灭活。
灭活乳酸菌细胞为107-1011个/g。
灭活乳酸菌选自嗜热链球菌。
一种灭活乳酸菌的细胞、细胞碎片与内含物的凝胶剂制备方法，包括如下步骤：
S1:取三乙醇胺与去离子水混合，制备得到质量浓度为5％的溶液；
S2:加入壳聚糖溶解，然后加入精油，用乳酸溶液调节pH为3.8-4.4，加入灭活乳酸菌，最后加入卡波姆，均质30min，经灌装，辐照灭菌得灭活乳酸菌妇科外用凝胶。
实验例1
稳定性试验
1.离心稳定性试验
将实施例组和对比例组制得的含灭活乳酸菌的细胞、细胞碎片与内含物的凝胶剂，分别置于标号的离心管中，以5000r/min，离心20min，观察其外观变化。
表1离心稳定性试验结果
性状
实施例1 无明显变化
实施例2 无明显变化
实施例3 无明显变化
实施例4 无明显变化
对比例1 分层明显
对比例2 分层明显
对比例3 分层明显
2.光照稳定性试验
将实施例组和对比例组制得的含灭活乳酸菌的细胞、细胞碎片与内含物的凝胶剂在检测箱内，于照度为4500lx±300lx的条件下放置十天。于第五和第十天取样，在检测箱上方安装抽风机，排除光源产生的热量。在箱内装配照度计，以便随时检测箱内照度，保持照度恒定。观察样品的外观变化。
表2光照稳定性试验结果
Figure BDA0002309621940000081
Figure BDA0002309621940000091
3.湿度稳定性试验
将实施例组和对比例组制得的含灭活乳酸菌的细胞、细胞碎片与内含物的凝胶剂各取10g放在恒温恒湿箱中,以KNO3饱和溶液(25℃，相对湿度可达92.5％)控制湿度，放置10天。别于第5天和第10天取样检测，主要检测吸湿增重情况。
表3湿度温度性试验结果
Figure BDA0002309621940000092
4.温度稳定性试验
将实施例组和对比例组制得的含灭活乳酸菌的细胞、细胞碎片与内含物的凝胶剂各取50mL样品置于100mL烧杯中，再将烧杯放置在密封洁净容器中，在60℃条件下放置十天。分别于第五天和第十天取样。
表4温度稳定性试验结果
Figure BDA0002309621940000093
Figure BDA0002309621940000101
实施例组含灭活乳酸菌的细胞、细胞碎片与内含物的凝胶剂中壳聚糖和灭活乳酸菌相互结合制备凝胶剂，而对比例组含灭活乳酸菌凝胶剂，缺少灭活乳酸菌或者灭活乳酸菌不在本发明范围内制备凝胶剂，由表1-表4可知，实施例组制得的含灭活乳酸菌凝胶剂在高速离心条件下，持续光照条件下，恒定湿度条件下和高温条件下，稳定性优于对比例组，表明壳聚糖阳离子和灭活乳酸菌阴离子因为异性相吸相互结合，加入pH值稳定剂三乙醇胺，使配方中得pH值恒定，从而使制得灭活乳酸菌凝胶剂稳定性更好，例如再高压、高温、高湿和强光照条件下，灭活乳酸菌凝胶剂，能保持稳定的形态。
实验例2
治疗女性阴道炎效果测试
1.选取患有阴道炎的患者70人，年龄为26-55岁，随机分为37组，每组10人。
2.每组使用同等剂量实施例1-4和对比例1-3制得含灭活乳酸菌的细胞、细胞碎片与内含物的凝胶，1次/天，使用7天，检测白带常规，结果如下：
表5治疗女性阴道炎效果测试
7天后 14天后 28天后 1个月后
实施例1 正常 正常 正常 正常
实施例2 正常 正常 正常 正常
实施例3 正常 正常 正常 正常
实施例4 正常 正常 正常 正常
对比例1 正常 复发 复发 复发
对比例2 正常 复发 复发 复发
由表5可知，实施例组制得含灭活乳酸菌的细胞、细胞碎片与内含物的凝胶剂对治疗维持女性阴道与菌群之间的生态平衡，治疗效果和防复发效果优于对比例组，表面实施例组制得含灭活乳酸菌凝胶对维持女性阴道与菌群之间的生态平衡，治疗效果和防复发效果更优。
实验例3
抑制白色念球菌、金黄色葡萄球菌和致病性表皮葡萄球菌效果检测
1.取白色念球菌，金黄色葡萄球菌和致病性表皮葡萄球菌各1铀环量到10ml胰蛋白胨大豆肉汤(TSB)中，在37℃下培养24±2h。
2.取10ul的上述TSB培养液再次转移到10mlTSB中,如此稀释几次达到细菌生长的指数生长期。随后,这些培养液接种到固体琼脂平板上,以获得102cfu/cm2的目标接种物。
3.胰蛋白胨大豆琼脂TSA(混合30％的实验例1-4和对比1-3制备的含灭活乳酸菌的细胞、细胞碎片与内含物的凝胶作为固体食物的模型凝胶-TSA)。取20g投入到培养皿中，等到培养基固化后，加入各1ml的上述目标接种物于凝胶-TSA的表面,而后加入测试薄覆盖,盖好培养皿的盖子37℃在下培养12天。
4.再之后的培养过程中每隔天对在上述培养的菌种进行检测。
5.检测方法如下：在灭菌实验台上把上述凝胶-TSA琼脂从培养皿中移出并放置在一个内含有100毫升胰蛋白胨憐酸盐水的无菌塑料袋子，用均质机搅拌2min左右，取1ml连续稀释之后，投入到TSA中在37℃下培养24h，将培养24h的平板取出。
6.计数每个平板上的菌落数，可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平板的菌落总数后，求出同稀释度的各平板平均菌落数，计算检测时每毫升样品中的菌落数，单位cfu/ml。
表6抑制白色念球菌、金黄色葡萄球菌和致病性表皮葡萄球菌效果
Figure BDA0002309621940000111
Figure BDA0002309621940000121
由表6可知，实施例组制得含灭活乳酸菌的细胞、细胞碎片与内含物的凝胶剂对抑制白色念球菌、金黄色葡萄球菌和致病性表皮葡萄球菌效果，优于对比例组，表明实施例组制得含灭活乳酸菌凝胶对抑制白色念球菌、金黄色葡萄球菌和致病性表皮葡萄球菌效果更佳。

Claims (8)

1.一种灭活乳酸菌的细胞、细胞碎片与内含物的凝胶剂，其特征在于，按重量份数计，包括以下组分：壳聚糖10-20份、精油2-6份、三乙醇胺1-5份、灭活乳酸菌20-30份、卡波姆1-5份。
2.根据权利要求1所述灭活乳酸菌的细胞、细胞碎片与内含物的凝胶剂，其特征在于，按重量份数计，包括以下组分：壳聚糖15-20份、精油3-5份、三乙醇胺2-4份、灭活乳酸菌25-30份、卡波姆25-30份。
3.根据权利要求1或2所述灭活乳酸菌的细胞、细胞碎片与内含物的凝胶剂，其特征在于，所述灭活乳酸菌灭活方法为物理方法或化学方法中的一种。
4.根据权利要求1或2所述灭活乳酸菌的细胞、细胞碎片与内含物的凝胶剂，其特征在于，所述灭活乳酸菌完整菌体数量为107-1011个/g。
5.根据权利要求1或2所述灭活乳酸菌的细胞、细胞碎片与内含物的凝胶剂，其特征在于，所述灭活乳酸菌选自嗜酸乳杆菌、乳酸乳杆菌、嗜热链球菌、戊糖片球菌、乳酸片球菌、保加利亚乳杆菌、卷曲乳杆菌和双歧杆菌中的一种或多种。
6.根据权利要求1或2所述灭活乳酸菌的细胞、细胞碎片与内含物的凝胶剂，其特征在于，所述精油为肉桂醛和丁香酚中的一种或两种。
7.一种权利要求1所述灭活乳酸菌的细胞、细胞碎片与内含物的凝胶剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1:三乙醇胺加入去离子水中，形成质量浓度为2％～5％的稳定溶液；
S2：加入壳聚糖，然后加入精油，用乳酸溶液调节pH为3.8-4.4，加入灭活乳酸菌溶解，最后加入卡波姆形成凝胶。
8.根据权利要求7所述灭活乳酸菌的细胞、细胞碎片与内含物的凝胶剂的制备方法，其特征在于，混合在常温下进行。
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