CN110964085A - 一种卡非佐米及其衍生物的制备方法 - Google Patents
一种卡非佐米及其衍生物的制备方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了卡非佐米及其衍生物的制备方法，包括式(II)化合物与式(III)化合物或式(III)化合物的酸盐在有机溶剂1和缩合剂1以及碱1存在下进行缩合反应，得到式(I)化合物；这里，所述的有机溶剂1选自甲苯、N,N‑二甲基甲酰胺、甲醇、四氢呋喃、乙腈、二氯甲烷和乙酸乙酯中一种或多种的混合溶剂；所述缩合剂1为下列物质中的一种与HOBt的组合：EDCI、HBTU、TBTU和HATU；所述碱1选自二乙胺、三乙胺、N,N‑二异丙基乙胺、碳酸钾、碳酸钠。该制备方法后处理操作简单、纯化容易、直接析晶即可得到纯度及产率均较高的产物的肽键制备方法。
Description
技术领域
本发明属于化学制药领域，具体涉及一种卡非佐米及其衍生物的制备方法。
背景技术
卡非佐米(Calfizomib)，化学名(αS)-α-[(4-吗啉基乙酰基)氨基]苯丁酰基-L-亮氨酰-N[(1S)-3-甲基-1-[[(2R)-2-甲基环氧乙基]羰基]丁基]-L-苯基丙氨酰胺，是一种四肽基环氧骨架蛋白酶体抑制剂。2012年7月20日，美国食品与药物管理局(FDA)经优先审批程序批准了奥尼克斯(Onyx)制药公司开发的卡非佐米注射剂(carfilzomib)上市销售，商品名：Kyprolis。卡非佐米是继硼替佐米后在全球范围内获得批准的第二个蛋白酶体抑制剂，也是FDA近几年来批准的第一个多发性骨髓瘤治疗药物。卡非佐米是经静脉给药的新一代蛋白酶抑制剂，选择性地靶向血液肿瘤细胞中的蛋白酶体，避免了因抑制非恶性细胞中组成型蛋白酶体而产生的毒副作用，其结构式如下所示。
在卡非佐米制备过程中由于连接苄基和苄甲基位的手性中心碳为反应位点，易发生异构化，产生结构式如Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ所示的三个异构体杂质。相关学术文献中有杂质Ⅰ的检测方法，但未提及该异构体杂质的制备方法(中国药师2016,19(06),1094-1095)。由于异构体杂质结构与卡非佐米类似，可参考卡非佐米相关制备专利。中国公开专利CN101044157A中提到卡非佐米及其类似物的合成方法中缩合剂采用PyBOP，缩合剂PyBOP价格较高；缩合溶剂采用了DMF或MeCN，后处理需要经过萃取、浓缩的过程。中国公开专利CN101014612A中提到卡非佐米类似物缩合反应步骤采用的缩合剂为BOP和HBTU，缩合剂BOP在反应过程中产生致癌的有毒物质六甲基磷酰亚胺(HMPA)；缩合溶剂为DMF、MeCN或THF，后处理也需要经过萃取、浓缩的过程。
发明内容
以下是对本文详细描述的主题的概述。本概述并非是为了限制权利要求的保护范围。
本发明人开发了一种卡非佐米及其衍生物的制备方法，是一种后处理操作简单、纯化容易、直接析晶即可得到纯度及产率均较高的产物的肽键制备制备方法。
具体地说，本申请提供了一种式(I)化合物(即卡非佐米及其衍生物)的制备方法，其包括如下步骤：
式(II)化合物与式(III)化合物或式(III)化合物的酸盐在有机溶剂1和缩合剂1以及碱1存在下进行缩合反应，得到式(I)化合物；这里，所述的有机溶剂1选自甲苯、N,N-二甲基甲酰胺、甲醇、四氢呋喃、乙腈、二氯甲烷和乙酸乙酯中一种或多种的混合溶剂；所述缩合剂1为下列物质中的一种与HOBt(1-羟基苯并三唑)的组合：EDCI、HBTU、TBTU(O-苯并三唑-N,N,N′,N′-四甲基脲四氟硼酸酯)和HATU；所述碱1选自二乙胺、三乙胺、NN-二异丙基乙胺、碳酸钾、和碳酸钠中的一种或多种；
其中，在式(I)和式(II)化合物中a构型是S，b构型为S；或者，a构型是R，b构型为S；或者，a构型是S，b构型为R；或者，a构型是R，b构型为R。
在本申请的示例性实施方案中，式(I)中a构型是S，b构型为S；即式(I)化合物为卡非佐米；相应地，式(II)化合物为化合物M3。
在本申请的示例性实施方案中，式(I)和式(II)中a构型是R，b构型为S；式(I)化合物为卡非佐米衍生物A，式(II)化合物为化合物10。
在本申请的示例性实施方案中，式(I)和式(II)中a构型是S，b构型为R；式(I)化合物为卡非佐米衍生物B，式(II)化合物为化合物19。
在本申请的示例性实施方案中，式(I)和式(II)中a构型是R，b构型为R；式(I)化合物为卡非佐米衍生物C，式(II)化合物为化合物23。
在本申请的示例性实施方案中，所述的有机溶剂1为乙酸乙酯。
在本申请的示例性实施方案中，所述缩合剂1为HOBt与TBTU(O-苯并三唑-N,N,N′,N′-四甲基脲四氟硼酸酯)的组合。
在本申请的示例性实施方案中，HOBt与TBTU的摩尔比为1:2.4。
在本申请的示例性实施方案中，式(III)化合物的酸盐优选地为式(III)化合物的三氟乙酸盐。
在本申请的示例性实施方案中，所述碱1为N,N-二异丙基乙胺。
在本申请的示例性实施方案中，式(II)化合物与所述碱1的重量比为1:0.7～0.9。
在本申请的示例性实施方案中，式(II)化合物与有机溶剂1的重量体积比为1:10～20(w/v，g/ml)。
在本申请的示例性实施方案中，式(II)化合物与所述缩合剂1的重量比为1:0.6～0.8。
在本申请的实施方案中，本申请提供的式(I)化合物(即卡非佐米及其衍生物)的制备方法，进一步地包括如下步骤：
4-吗啉乙酸(即化合物8)与式(IV)化合物或式(IV)化合物的酸盐在有机溶剂2和缩合剂2以及碱2存在下进行缩合反应，得到式(V)化合物；
式(V)化合物经水解反应得到式(II)化合物；
这里，所述的有机溶剂2选自甲苯、N,N-二甲基甲酰胺、甲醇、四氢呋喃、乙腈、二氯甲烷和乙酸乙酯中一种或多种的混合溶剂；所述缩合剂2为下列物质的一种与HOBt的组合：EDCI、HBTU、TBTU(O-苯并三唑-N,N,N′,N′-四甲基脲四氟硼酸酯)和HATU；所述碱2选自二乙胺、三乙胺、N,N-二异丙基乙胺、碳酸钾、和碳酸钠中的一种或多种；
其中，式(IV)和式(V)中R1为C1-C4烷基，优选地，R1为甲基；在式(IV)、式(V)和式(II)化合物中a构型是S，b构型为S；或者，a构型是R，b构型为S；或者，a构型是S，b构型为R；或者，a构型是R，b构型为R。
在本申请的制备式(II)化合物示例性实施方案中，式(IV)和式(V)中R1为甲基。
在本申请的制备式(II)化合物示例性实施方案中，式(IV)化合物为化合物M1；式(V)化合物为化合物M2，式(II)化合物为化合物M3。
在本申请的制备式(II)化合物示例性实施方案中，式(IV)化合物为化合物7；式(V)化合物为化合物9，式(II)化合物为化合物10。
在本申请的制备式(II)化合物示例性实施方案中，式(IV)化合物为化合物17；式(V)化合物为化合物18，式(II)化合物为化合物19。
在本申请的制备式(II)化合物示例性实施方案中，式(IV)化合物为化合物21；式(V)化合物为化合物22，式(II)化合物为化合物23。
在本申请的制备式(II)化合物示例性实施方案中，所述的有机溶剂2为乙酸乙酯。
在本申请的制备式(II)化合物示例性实施方案中，所述缩合剂2为HOBt与TBTU(O-苯并三唑-N,N,N′,N′-四甲基脲四氟硼酸酯)的组合。
在本申请的示例性实施方案中，HOBt与TBTU的摩尔比为1:2.4。
在本申请的制备式(II)化合物示例性实施方案中，式(IV)化合物的酸盐优选地为式(IV)化合物的三氟乙酸盐。
在本申请的制备式(II)化合物示例性实施方案中，所述碱2为N,N-二异丙基乙胺。
在本申请的制备式(II)化合物示例性实施方案中，式(IV)化合物与所述碱2的重量比为1:0.7～0.9。
在本申请的制备式(II)化合物示例性实施方案中，式(IV)化合物与有机溶剂2的重量体积比为1:10～20(w/v，g/ml)。
在本申请的制备式(II)化合物示例性实施方案中，式(IV)化合物与所述缩合剂2的重量比为1:0.6～0.8。
在本申请的制备式(II)化合物示例性实施方案中，化合物M1可以采用以下方法制备：
以N-[(S)-2-(叔丁氧羰基氨基)-4-苯基丁酰基]-L-亮氨酰-L-苯丙氨酸甲酯(SM1)为起始原料，脱Boc成盐得到化合物(αS)-α-氨基苯丁酰基-L-亮氨酰基-L-苯丙氨酸甲酯三氟乙酸盐(M1三氟乙酸盐)；
在本申请的制备式(II)化合物示例性实施方案中，化合物7可以采用如下方法制备：
以L-苯丙氨酸甲酯(化合物1)和Boc-L-亮氨酸(化合物2)为起始物料，通过缩合得到N-叔丁氧羰基-L-亮氨酰基-L-苯丙氨酸甲酯(化合物3)，继续脱Boc游离得到化合物L-亮氨酰基-L-苯丙氨酸甲酯(化合物4)，然后与Boc-D-高苯丙氨酸(化合物5)缩合得到N-[(R)-2-(叔丁氧羰基氨基)-4-苯基丁酰基]-L-亮氨酰-L-苯丙氨酸甲酯(化合物6)，继续脱Boc游离得到化合物(αR)-α-氨基苯丁酰基-L-亮氨酰基-L-苯丙氨酸甲酯(化合物7)；
在本申请的制备式(II)化合物示例性实施方案中，化合物17可以采用如下方法制备：
以D-苯丙氨酸甲酯(化合物12)和Boc-L-亮氨酸(化合物2)为起始物料，通过缩合得到N-叔丁氧羰基-L-亮氨酰基-D-苯丙氨酸甲酯(化合物13)，继续脱Boc游离得到化合物L-亮氨酰基-D-苯丙氨酸甲酯(化合物14)，然后与Boc-L-高苯丙氨酸(化合物15)缩合得到N-[(S)-2-(叔丁氧羰基氨基)-4-苯基丁酰基]-L-亮氨酰-D-苯丙氨酸甲酯(化合物16)，继续脱Boc游离得到化合物(αS)-α-氨基苯丁酰基-L-亮氨酰基-D-苯丙氨酸甲酯(化合物17)；
在本申请的制备式(II)化合物示例性实施方案中，化合物21可以采用如下方法制备：
以D-苯丙氨酸甲酯(化合物12)和Boc-L-亮氨酸(化合物2)为起始物料，通过缩合得到N-叔丁氧羰基-L-亮氨酰基-D-苯丙氨酸甲酯(化合物13)，继续脱Boc游离得到化合物L-亮氨酰基-D-苯丙氨酸甲酯(化合物14)，然后与Boc-D-高苯丙氨酸(化合物5)缩合得到N-[(R)-2-(叔丁氧羰基氨基)-4-苯基丁酰基]-L-亮氨酰-D-苯丙氨酸甲酯(化合物20)，继续脱Boc游离得到化合物(αR)-α-氨基苯丁酰基-L-亮氨酰基-D-苯丙氨酸甲酯(化合物21)；
在本申请示例性实施方案中，本申请提供了卡非佐米的制备方法，包括如下步骤：
以N-[(S)-2-(叔丁氧羰基氨基)-4-苯基丁酰基]-L-亮氨酰-L-苯丙氨酸甲酯(SM1)为起始原料，脱Boc成盐得到化合物(αS)-α-氨基苯丁酰基-L-亮氨酰基-L-苯丙氨酸甲酯三氟乙酸盐(M1三氟乙酸盐)；继续与化合物4-吗啉乙酸(化合物8)缩合得到(αS)-α-[(4-吗啉基乙酰基)氨基]苯丁酰基-L-亮氨酰基-L-苯丙氨酸甲酯(M2)，然后经过水解得到(αS)-α-[(4-吗啉基乙酰基)氨基]苯丁酰基-L-亮氨酰基-L-苯丙氨酸(M3)，最后与(2S)-2-氨基-4-甲基-1-[(2R)-2-甲基环氧乙烷基]-1-戊酮三氟乙酸盐(化合物11)缩合得到卡非佐米；
其中，
M1三氟乙酸盐与化合物8缩合所用溶剂为乙酸乙酯，M1与乙酸乙酯的重量体积比为1:10～20(w/v,单位为g/ml)；
M1三氟乙酸盐与化合物8缩合所用缩合剂为TBTU与HOBt的组合；TBTU与HOBt的摩尔比为2.4:1；
M1三氟乙酸盐与TBTU的重量比为1:0.6～0.8；
M1三氟乙酸盐与化合物8缩合所用碱为N,N-二异丙基乙胺；
M1三氟乙酸盐与N,N-二异丙基乙胺的重量比为1:0.7～0.9；
M3与化合物11缩合所用溶剂为乙酸乙酯，M3与乙酸乙酯的重量体积比为1:10～20(w/v,单位为g/ml)；
M3与化合物11缩合所用缩合剂为TBTU与HOBt的组合；TBTU与HOBt的摩尔比为2.4:1；
M3与TBTU的重量比为1:0.6～0.8；
M3与化合物11缩合所用碱为N,N-二异丙基乙胺；
M3与N,N-二异丙基乙胺的重量比为1:0.7～0.9；
反应式如下：
在本申请示例性实施方案中，本申请提供了卡非佐米衍生物A即(αR)-α-[(4-吗啉基乙酰基)氨基]苯丁酰基-L-亮氨酰-N[(1S)-3-甲基-1-[[(2R)-2-甲基环氧乙基]羰基]丁基]-L-苯基丙氨酰胺的制备方法，包括如下步骤：
以L-苯丙氨酸甲酯(化合物1)和Boc-L-亮氨酸(化合物2)为起始物料，通过缩合得到N-叔丁氧羰基-L-亮氨酰基-L-苯丙氨酸甲酯(化合物3)，继续脱Boc游离得到化合物L-亮氨酰基-L-苯丙氨酸甲酯(化合物4)，然后与Boc-D-高苯丙氨酸(5)缩合得到N-[(R)-2-(叔丁氧羰基氨基)-4-苯基丁酰基]-L-亮氨酰-L-苯丙氨酸甲酯(化合物6)，继续脱Boc游离得到化合物(αR)-α-氨基苯丁酰基-L-亮氨酰基-L-苯丙氨酸甲酯(化合物7)，继续与化合物4-吗啉乙酸(化合物8)缩合得到(αR)-α-[(4-吗啉基乙酰基)氨基]苯丁酰基-L-亮氨酰基-L-苯丙氨酸甲酯(化合物9)，然后经过水解得到(αR)-α-[(4-吗啉基乙酰基)氨基]苯丁酰基-L-亮氨酰基-L-苯丙氨酸(化合物10)，最后与(2S)-2-氨基-4-甲基-1-[(2R)-2-甲基环氧乙烷基]-1-戊酮三氟乙酸盐(化合物11)缩合得到卡非佐米衍生物A；
其中，
化合物7与化合物8缩合所用溶剂为乙酸乙酯，化合物7与乙酸乙酯的重量体积比为1:10～20(w/v,单位为g/ml)；
化合物7与化合物8缩合所用缩合剂为TBTU与HOBt的组合；TBTU与HOBt的摩尔比为2.4:1；
化合物7与TBTU的重量比为1:0.6～0.8；
化合物7与化合物8缩合所用碱为N,N-二异丙基乙胺；
化合物7与N,N-二异丙基乙胺的重量比为1:0.7～0.9；
化合物10与化合物11缩合所用溶剂为乙酸乙酯，化合物10与乙酸乙酯的重量体积比为1:10～20(w/v,单位为g/ml)；
化合物10与化合物11缩合所用缩合剂为TBTU与HOBt的组合；TBTU与HOBt的摩尔比为2.4:1；
化合物10与TBTU的重量比为1:0.6～0.8；
化合物10与化合物11缩合所用碱为N,N-二异丙基乙胺；
化合物10与N,N-二异丙基乙胺的重量比为1:0.7～0.9；
反应式如下：
在本申请示例性实施方案中，本申请提供了卡非佐米衍生物B即(αS)-α-[(4-吗啉基乙酰基)氨基]苯丁酰基-L-亮氨酰-N[(1S)-3-甲基-1-[[(2R)-2-甲基环氧乙基]羰基]丁基]-D-苯基丙氨酰胺的制备方法，包括如下步骤：
以D-苯丙氨酸甲酯(化合物12)和Boc-L-亮氨酸(化合物2)为起始物料，通过缩合得到N-叔丁氧羰基-L-亮氨酰基-D-苯丙氨酸甲酯(化合物13)，继续脱Boc游离得到化合物L-亮氨酰基-D-苯丙氨酸甲酯(化合物14)，然后与Boc-L-高苯丙氨酸(化合物15)缩合得到N-[(S)-2-(叔丁氧羰基氨基)-4-苯基丁酰基]-L-亮氨酰-D-苯丙氨酸甲酯(化合物16)，继续脱Boc游离得到化合物(αS)-α-氨基苯丁酰基-L-亮氨酰基-D-苯丙氨酸甲酯(化合物17)，继续与化合物4-吗啉乙酸(化合物8)缩合得到(αS)-α-[(4-吗啉基乙酰基)氨基]苯丁酰基-L-亮氨酰基-D-苯丙氨酸甲酯(化合物18)，然后经过水解得到(αS)-α-[(4-吗啉基乙酰基)氨基]苯丁酰基-L-亮氨酰基-D-苯丙氨酸(化合物19)，最后与(2S)-2-氨基-4-甲基-1-[(2R)-2-甲基环氧乙烷基]-1-戊酮三氟乙酸盐(化合物11)缩合得到卡非佐米衍生物B；
其中，
化合物17与化合物8缩合所用溶剂为乙酸乙酯，化合物17与乙酸乙酯的重量体积比为1:10～20(w/v,单位为g/ml)；
化合物17与化合物8缩合所用缩合剂为TBTU与HOBt的组合；TBTU与HOBt的摩尔比为2.4:1；
化合物17与TBTU的重量比为1:0.6～0.8；
化合物17与化合物8缩合所用碱为N,N-二异丙基乙胺；
化合物17与N,N-二异丙基乙胺的重量比为1:0.7～0.9；
化合物19与化合物11缩合所用溶剂为乙酸乙酯，化合物19与乙酸乙酯的重量体积比为1:10～20(w/v,单位为g/ml)；
化合物19与化合物11缩合所用缩合剂为TBTU与HOBt的组合；TBTU与HOBt的摩尔比为2.4:1；
化合物19与TBTU的重量比为1:0.6～0.8；
化合物19与化合物11缩合所用碱为N,N-二异丙基乙胺；
化合物19与N,N-二异丙基乙胺的重量比为1:0.7～0.9；
反应式如下：
在本申请示例性实施方案中，本申请提供了卡非佐米衍生物C即(αR)-α-[(4-吗啉基乙酰基)氨基]苯丁酰基-L-亮氨酰-N[(1S)-3-甲基-1-[[(2R)-2-甲基环氧乙基]羰基]丁基]-D-苯基丙氨酰胺的制备方法，包括如下步骤：
以D-苯丙氨酸甲酯(化合物12)和Boc-L-亮氨酸(化合物2)为起始物料，通过缩合得到N-叔丁氧羰基-L-亮氨酰基-D-苯丙氨酸甲酯(化合物13)，继续脱Boc游离得到化合物L-亮氨酰基-D-苯丙氨酸甲酯(化合物14)，然后与Boc-D-高苯丙氨酸(化合物5)缩合得到N-[(R)-2-(叔丁氧羰基氨基)-4-苯基丁酰基]-L-亮氨酰-D-苯丙氨酸甲酯(化合物20)，继续脱Boc游离得到化合物(αR)-α-氨基苯丁酰基-L-亮氨酰基-D-苯丙氨酸甲酯(化合物21)，继续与化合物4-吗啉乙酸(化合物8)缩合得到(αR)-α-[(4-吗啉基乙酰基)氨基]苯丁酰基-L-亮氨酰基-D-苯丙氨酸甲酯(化合物22)，然后经过水解得到(αR)-α-[(4-吗啉基乙酰基)氨基]苯丁酰基-L-亮氨酰基-D-苯丙氨酸(化合物23)，最后与(2S)-2-氨基-4-甲基-1-[(2R)-2-甲基环氧乙烷基]-1-戊酮三氟乙酸盐(化合物11)缩合得到卡非佐米衍生物C；
其中，
化合物21与化合物8缩合所用溶剂为乙酸乙酯，化合物21与乙酸乙酯的重量体积比为1:10～20(w/v,单位为g/ml)；
化合物21与化合物8缩合所用缩合剂为TBTU与HOBt的组合；TBTU与HOBt的摩尔比为2.4:1；
化合物21与TBTU的重量比为1:0.6～0.8；
化合物21与化合物8缩合所用碱为N,N-二异丙基乙胺；
化合物21与N,N-二异丙基乙胺的重量比为1:0.7～0.9；
化合物23与化合物11缩合所用溶剂为乙酸乙酯，化合物19与乙酸乙酯的重量体积比为1:10～20(w/v,单位为g/ml)；
化合物23与化合物11缩合所用缩合剂为TBTU与HOBt的组合；TBTU与HOBt的摩尔比为2.4:1；
化合物23与TBTU的重量比为1:0.6～0.8；
化合物23与化合物11缩合所用碱为N,N-二异丙基乙胺；
化合物23与N,N-二异丙基乙胺的重量比为1:0.7～0.9；
反应式如下：
本发明通过在卡非佐米或其衍生物的制备方法中采用TBTU与HOBt作为缩合剂，避免了采用缩合剂BOP在反应过程中产生致癌的有毒物质六甲基磷酰亚胺(HMPA)，缩合溶剂为DMF、MeCN或THF，后处理也需要经过萃取、浓缩过程的缺点，同时，且相较于缩合剂HBTU、HATU分子量更小，投料量更少；同时惊喜地发现采用乙酸乙酯作为制备肽键的缩合溶剂，后处理经水洗后，直接加入惰性溶剂析晶得到纯度及产率均较高的产物，避免了浓缩及纯化步骤。
本发明人同时发现了制备肽键的缩合反应采用乙酸乙酯作为溶剂具有显著的优势。在卡非佐米及其衍生物制备中，对制备肽键的缩合溶剂做了充分的参数优化，卡非佐米制备路线及缩合溶剂参数优化结果如下：
M2制备过程缩合溶剂的选择
从上表可以看出杂质较少的体系为EA和DCM体系，同时甲苯体系有一个可能为系统基线的峰15.811min(1.37％)，另一个为甲苯峰17.179min(7.19％)，除去这两个峰甲苯体系杂质种类也较少，可以继续与EA、DCM两种溶剂做对比。
以EA、DCM和甲苯做溶剂制备M2结果如下：
注：HOBT出峰时间2.184min，甲苯出峰时间17.253min，上表中未列出甲苯出峰
从上表可以看出甲苯体系杂质种类偏多，且甲苯可能有苯残留且甲苯沸点较高后期烘料不易除去，因此制备M2不采用甲苯做溶剂。EA和DCM体系相比，EA体系杂质种类优于DCM体系。
以EA、DCM做溶剂制备M2结果如下：
从上表可以看出：DCM做溶剂时反应19.5h与反应6h相比，6.935min和11.245min杂质明显变大，说明DCM做反应溶剂时稳定性不是很好，EA做反应溶剂时反应19.5h没有明显特别大的单杂，且EA做反应溶剂制备的M2纯度明显较高。
结论：M2制备优选EA做反应溶剂。
卡非佐米制备过程缩合反应溶剂的选择
由上表可以看出：
甲醇体系的产物纯度只有23.44％，直接排除；DMF体系1.892min峰可能为DMF，但是相比其它体系并无优势，且DMF易残留，排除DMF；甲苯有苯残留风险，且纯度和杂质方面并无大的优势，排除甲苯；EA体系比DCM、THF、乙腈体系在纯度和杂质含量方面相对较好。
以DCM制备卡非佐米结果如下：
以EA制备卡非佐米结果如下：
以THF制备卡非佐米结果如下：
以乙腈制备卡非佐米结果如下：
由上表可以看出：EA体系杂质种类较少，优于其他体系。
本发明在以上工艺优化的基础上，采用乙酸乙酯作为制备肽键的缩合溶剂，以TBTU作为缩合剂，找到了一条后处理操作简单、纯化容易、直接析晶即可得到纯度及产率均较高的产物的肽键制备路线。
本申请的其它特征和优点将在随后的说明书中阐述，并且，部分地从说明书中变得显而易见，或者通过实施本申请而了解。本申请的目的和其他优点可通过在说明书以及权利要求书中所特别指出的结构来实现和获得。
具体实施方式
为使本申请的目的、技术方案和优点更加清楚明白，下文中将对本发明的实施例进行详细说明。需要说明的是，在不冲突的情况下，本申请中的实施例及实施例中的特征可以相互任意组合。
下面结合实例对本发明作进一步阐述，但是以下实例不对本发明构成任何限制。
本发明中所用原料商业上均可以获得，本申请涉及的缩写：
EA-乙酸乙酯
DMF-N,N-二甲基甲酰胺
EDCI-1-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳二亚胺
HBTU-2-(1H-苯并三氮唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯
HATU-2-(7-氧化苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐
TFA-三氟乙酸
DIPEA-N,N-二异丙基乙基胺
THF-四氢呋喃
DCM-二氯甲烷
ph-苯基
HPLC检测仪器：Agilent 1260
HPLC检测方法：
取卡非佐米或其衍生物适量，加稀释剂[乙腈-水(50﹕50)]溶解并稀释制成每1ml中含1.0mg的溶液，作为供试品溶液；照高效液相色谱法(中国药典2015年版通则0512)测定。用氰基硅烷键合硅胶为填充剂(推荐使用Waters Symmety C18色谱柱，4.6×250mm，5μm)，以0.1M高氯酸钠pH4.1：乙腈＝70:30为流动相A，0.1M高氯酸钠pH4.1：乙腈＝20:80为流动相B；流速为每分钟1.0ml；柱温为30℃；检测波长为210nm。精密量取供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。
实施例1
(αS)-α-[(4-吗啉基乙酰基)氨基]苯丁酰基-L-亮氨酰-N[(1S)-3-甲基-1-[[(2R)-2-甲基环氧乙基]羰基]丁基]-L-苯基丙氨酰胺(卡非佐米)的制备。
(αS)-α-氨基苯丁酰基-L-亮氨酰基-L-苯丙氨酸甲酯三氟乙酸盐(M1三氟乙酸盐)的制备
在1L的单口瓶中加入30g N-[(S)-2-(叔丁氧羰基氨基)-4-苯基丁酰基]-L-亮氨酰-L-苯丙氨酸甲酯(SM1)、180ml二氯甲烷、60ml三氟乙酸，常温搅拌2h，停止反应。向反应液中加入480ml纯化水，析出大量白色固体，继续搅拌析晶1h，减压抽滤，干燥后得到白色固体30.42g。
(αS)-α-[(4-吗啉基乙酰基)氨基]苯丁酰基-L-亮氨酰基-L-苯丙氨酸甲酯(M2)的制备
在1L的单口瓶中加入27g(αS)-α-氨基苯丁酰基-L-亮氨酰基-L-苯丙氨酸甲酯三氟乙酸盐(M1三氟乙酸盐)、270ml乙酸乙酯、8.29g4-吗啉乙酸(8)、3.22gHOBt、18.36gTBTU、21.52g N,N-二异丙基乙胺,常温搅拌2h，停止反应。向反应体系中加入200ml纯化水洗涤5min，分液，弃去水相；有机相继续用200ml饱和碳酸氢钠溶液洗涤5min，分液，弃去水相。继续向有机相加入1080ml正庚烷，搅拌析晶5h，减压抽滤，干燥后称重的类白色固体25.75g。
(αS)-α-[(4-吗啉基乙酰基)氨基]苯丁酰基-L-亮氨酰基-L-苯丙氨酸(M3)的制备。
在500ml的单口瓶中加入24g(αS)-α-[(4-吗啉基乙酰基)氨基]苯丁酰基-L-亮氨酰基-L-苯丙氨酸甲酯(M2)、3.47g氢氧化锂一水合物、144ml四氢呋喃、72ml纯化水，常温搅拌2h，停止反应。向体系中加入216ml纯化水，用5N稀盐酸调节体系pH5-6，有大量白色固体析出，继续析晶搅拌1h，减压抽滤，得到白色滤饼，干燥后称重，得20.57g白色固体。
(αS)-α-[(4-吗啉基乙酰基)氨基]苯丁酰基-L-亮氨酰-N[(1S)-3-甲基-1-[[(2R)-2-甲基环氧乙基]羰基]丁基]-L-苯基丙氨酰胺(卡非佐米)的制备。
在1L的三口瓶中加入20g(αS)-α-[(4-吗啉基乙酰基)氨基]苯丁酰基-L-亮氨酰基-L-苯丙氨酸(M3)、12.08g(2S)-2-氨基-4-甲基-1-[(2R)-2-甲基环氧乙烷基]-1-戊酮三氟乙酸盐(11)、2.38gHOBt、13.6gTBTU、200ml乙酸乙酯、15.97g N,N-二异丙基乙胺,常温搅拌2h，停止反应。向反应体系中加入200ml纯化水洗涤5min，分液，弃去水相；有机相继续用200ml饱和碳酸氢钠溶液洗涤5min，分液，弃去水相。继续向有机相加入800ml正庚烷，搅拌析晶5h，减压抽滤，干燥后称重的类白色固体18.77g。
1H NMR(DMSO-d6)δ(ppm)：0.70-0.86(m,12H),1.10-1.18(t,2H),1.25-1.41(m,5H),1.46-1.60(m,2H),1.84-1.87(m,2H),2.42-2.53(m,2H),2.70-2.84(m,1H),2.94-3.03(m,4H),3.13-3.16(m,1H),3.50-3.55(m,4H),4.27-4.35(m,3H),4.45-4.50(m,1H),,7.09-7.20(m,10H),7.83-7.90(m,2H),8.12-8.25(m,2H)；
MS-ESI(m/z)[M+Na]+742.4。
实施例2
(αR)-α-[(4-吗啉基乙酰基)氨基]苯丁酰基-L-亮氨酰-N[(1S)-3-甲基-1-[[(2R)-2-甲基环氧乙基]羰基]丁基]-L-苯基丙氨酰胺(卡非佐米衍生物A)的制备。
N-叔丁氧羰基-L-亮氨酰基-L-苯丙氨酸甲酯(化合物3)的制备
在1L单口瓶中加入L-苯丙氨酸甲酯(1)25g、Boc-L-亮氨酸(2)26.8g、TBTU44.7g，HOBt7.83g，乙酸乙酯250ml，最后加入N,N-二异丙基乙胺52.4g，常温搅拌1h，停止反应。向反应体系中加入250ml纯化水洗涤5min，分液，弃去水相；有机相继续用250ml饱和碳酸氢钠溶液洗涤5min，分液，弃去水相。继续向有机相加入1000ml正庚烷，搅拌析晶5h，减压抽滤，干燥后称重的类白色固体29g。
L-亮氨酰基-L-苯丙氨酸甲酯(4)的制备
在1L的单口瓶中加入N-叔丁氧羰基-L-亮氨酰基-L-苯丙氨酸甲酯(3)27.8g、300ml二氯甲烷、100ml三氟乙酸，常温搅拌2h，停止反应。向反应液中滴加25％碳酸钾溶液至pH7～8，分液，水相用200ml二氯甲烷萃取一遍，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得淡黄色油状物22g。
N-[(R)-2-(叔丁氧羰基氨基)-4-苯基丁酰基]-L-亮氨酰-L-苯丙氨酸甲酯(6)的制备。
向装有22g L-亮氨酰基-L-苯丙氨酸甲酯(4)的1L单口瓶中加入250ml乙酸乙酯、5gHOBt、29gTBTU、34g N,N-二异丙基乙胺、21g Boc-D-高苯丙氨酸(5)，常温搅拌2h，停止反应。向反应体系中加入250ml纯化水洗涤5min，分液，弃去水相；有机相继续用250ml饱和碳酸氢钠溶液洗涤5min，分液，弃去水相。继续向有机相加入1000ml正庚烷，搅拌析晶5h，减压抽滤，干燥后称重的类白色固体32g。
(αR)-α-氨基苯丁酰基-L-亮氨酰基-L-苯丙氨酸甲酯(7)的制备
在1L的单口瓶中加入30g N-[(R)-2-(叔丁氧羰基氨基)-4-苯基丁酰基]-L-亮氨酰-L-苯丙氨酸甲酯(6)、300ml二氯甲烷、100ml三氟乙酸，常温搅拌2h，停止反应。向反应液中滴加25％碳酸钾溶液至pH7～8，分液，水相用200ml二氯甲烷萃取一遍，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得淡黄色油状物21g。
(αR)-α-[(4-吗啉基乙酰基)氨基]苯丁酰基-L-亮氨酰基-L-苯丙氨酸甲酯(9)的制备
在1L的单口瓶中加入17.5g(αR)-α-氨基苯丁酰基-L-亮氨酰基-L-苯丙氨酸甲酯(7)、200ml乙酸乙酯、6.7g4-吗啉乙酸(8)、2.6gHOBt、14.9gTBTU、17.5g N,N-二异丙基乙胺,常温搅拌2h，停止反应。向反应体系中加入200ml纯化水洗涤5min，分液，弃去水相；有机相继续用200ml饱和碳酸氢钠溶液洗涤5min，分液，弃去水相。继续向有机相加入800ml正庚烷，搅拌析晶5h，减压抽滤，干燥后称重的类白色固体14.4g。
(αR)-α-[(4-吗啉基乙酰基)氨基]苯丁酰基-L-亮氨酰基-L-苯丙氨酸(10)的制备。
在1L的单口瓶中加入12.4g(αR)-α-[(4-吗啉基乙酰基)氨基]苯丁酰基-L-亮氨酰基-L-苯丙氨酸甲酯(9)、1.8g氢氧化锂一水合物、200ml四氢呋喃、100ml纯化水，常温搅拌2h，停止反应。向体系中加入300ml纯化水，用5N稀盐酸调节体系pH5-6，有大量白色固体析出，继续析晶搅拌1h，减压抽滤，得到白色滤饼，干燥后称重，得8.8g白色固体。
(αR)-α-[(4-吗啉基乙酰基)氨基]苯丁酰基-L-亮氨酰-N[(1S)-3-甲基-1-[[(2R)-2-甲基环氧乙基]羰基]丁基]-L-苯基丙氨酰胺(卡非佐米衍生物A)的制备。
在250ml的单口瓶中加入6.50g(αR)-α-[(4-吗啉基乙酰基)氨基]苯丁酰基-L-亮氨酰基-L-苯丙氨酸(10)、3.93g(2S)-2-氨基-4-甲基-1-[(2R)-2-甲基环氧乙烷基]-1-戊酮三氟乙酸盐(11)、0.78gHOBt、4.42gTBTU、100ml乙酸乙酯、5.20g N,N-二异丙基乙胺,常温搅拌2h，停止反应。向反应体系中加入100ml纯化水洗涤5min，分液，弃去水相；有机相继续用100ml饱和碳酸氢钠溶液洗涤5min，分液，弃去水相。继续向有机相加入400ml正庚烷，搅拌析晶5h，减压抽滤，干燥后称重的类白色固体7.68g。
1H NMR(DMSO-d6)δ(ppm)：0.74-0.92(m,12H),1.13-1.20(t,2H),1.30-1.41(m,6H),1.46-1.62(m,1H),1.69-1.93(m,2H),2.43(s,4H),2.47-2.50(d,2H),2.69-2.76(m,1H),2.90-3.00(m,4H),3.22-3.24(d,1H),3.59(s,4H),4.26-4.39(m,3H),4.53-4.61(m,1H),,7.11-7.29(m,10H),7.82-7.99(m,1H),8.15-8.31(m,3H)；
MS-ESI(m/z)[M+Na]+742.4。
实施例3
(αS)-α-[(4-吗啉基乙酰基)氨基]苯丁酰基-L-亮氨酰-N[(1S)-3-甲基-1-[[(2R)-2-甲基环氧乙基]羰基]丁基]-D-苯基丙氨酰胺(卡非佐米衍生物B)的制备。
N-叔丁氧羰基-L-亮氨酰基-D-苯丙氨酸甲酯(13)的制备
在500ml单口瓶中加入D-苯丙氨酸甲酯(12)12.5g、Boc-L-亮氨酸(2)13.4g、TBTU22.3g，HOBt3.92g，乙酸乙酯150ml，最后加入N,N-二异丙基乙胺26.2g，常温搅拌1h，停止反应。向反应体系中加入150ml纯化水洗涤5min，分液，弃去水相；有机相继续用150ml饱和碳酸氢钠溶液洗涤5min，分液，弃去水相。继续向有机相加入600ml正庚烷，搅拌析晶5h，减压抽滤，干燥后称重的类白色固体14.1g。
L-亮氨酰基-D-苯丙氨酸甲酯(14)的制备
在500ml的单口瓶中加入14.1g N-叔丁氧羰基-L-亮氨酰基-D-苯丙氨酸甲酯(13)、200ml二氯甲烷、70ml三氟乙酸，常温搅拌2h，停止反应。向反应液中滴加25％碳酸钾溶液至pH7～8，分液，水相用200ml二氯甲烷萃取一遍，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得淡黄色油状物12g。
N-[(S)-2-(叔丁氧羰基氨基)-4-苯基丁酰基]-L-亮氨酰-D-苯丙氨酸甲酯(16)的制备。
向装有12g L-亮氨酰基-D-苯丙氨酸甲酯(14)的500ml单口瓶中加入150ml乙酸乙酯、2.5gHOBt、15gTBTU、17g N,N-二异丙基乙胺、11g Boc-L-高苯丙氨酸(15)，常温搅拌2h，停止反应。向反应体系中加入150ml纯化水洗涤5min，分液，弃去水相；有机相继续用150ml饱和碳酸氢钠溶液洗涤5min，分液，弃去水相。继续向有机相加入600ml正庚烷，搅拌析晶5h，减压抽滤，干燥后称重的类白色固体18g。
(αS)-α-氨基苯丁酰基-L-亮氨酰基-D-苯丙氨酸甲酯(17)的制备
在500ml的单口瓶中加入16g N-[(S)-2-(叔丁氧羰基氨基)-4-苯基丁酰基]-L-亮氨酰-D-苯丙氨酸甲酯(16)、200ml二氯甲烷、70ml三氟乙酸，常温搅拌2h，停止反应。向反应液中滴加25％碳酸钾溶液至pH7～8，分液，水相用200ml二氯甲烷萃取一遍，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得淡黄色油状物12g。
(αS)-α-[(4-吗啉基乙酰基)氨基]苯丁酰基-L-亮氨酰基-D-苯丙氨酸甲酯(18)的制备
在500ml的单口瓶中加入12g(αS)-α-氨基苯丁酰基-L-亮氨酰基-D-苯丙氨酸甲酯(17)、150ml乙酸乙酯、4.6g4-吗啉乙酸(8)、1.8gHOBt、10.3gTBTU、12.0g N,N-二异丙基乙胺,常温搅拌2h，停止反应。向反应体系中加入150ml纯化水洗涤5min，分液，弃去水相；有机相继续用150ml饱和碳酸氢钠溶液洗涤5min，分液，弃去水相。继续向有机相加入600ml正庚烷，搅拌析晶5h，减压抽滤，干燥后称重的类白色固体7.0g。
(αS)-α-[(4-吗啉基乙酰基)氨基]苯丁酰基-L-亮氨酰基-D-苯丙氨酸(19)的制备。
在250ml的单口瓶中加入5.0g(αS)-α-[(4-吗啉基乙酰基)氨基]苯丁酰基-L-亮氨酰基-D-苯丙氨酸甲酯(18)、0.8g氢氧化锂一水合物、50ml四氢呋喃、25ml纯化水，常温搅拌2h，停止反应。向体系中加入80ml纯化水，用5N稀盐酸调节体系pH5-6，有大量白色固体析出，继续析晶搅拌1h，减压抽滤，得到白色滤饼，干燥后称重，得3.4g白色固体。
(αS)-α-[(4-吗啉基乙酰基)氨基]苯丁酰基-L-亮氨酰-N[(1S)-3-甲基-1-[[(2R)-2-甲基环氧乙基]羰基]丁基]-D-苯基丙氨酰胺(卡非佐米衍生物B)的制备。
在100ml的单口瓶中加入3.40g(αS)-α-[(4-吗啉基乙酰基)氨基]苯丁酰基-L-亮氨酰基-D-苯丙氨酸(19)、2.08g(2S)-2-氨基-4-甲基-1-[(2R)-2-甲基环氧乙烷基]-1-戊酮三氟乙酸盐(11)、0.40gHOBt、2.34gTBTU、40ml乙酸乙酯、2.75g N,N-二异丙基乙胺,常温搅拌2h，停止反应。向反应体系中加入40ml纯化水洗涤5min，分液，弃去水相；有机相继续用40ml饱和碳酸氢钠溶液洗涤5min，分液，弃去水相。向有机相中加入160ml正庚烷，搅拌析晶5h，减压抽滤，干燥后称重的类白色固体3.97g。
1H NMR(DMSO-d6)δ(ppm)：0.73-0.88(m,12H),1.26-1.40(m,7H),1.50-1.65(m,2H),1.81-1.86(m,2H),2.43(s,4H),2.50(s,2H),2.72-2.83(m,1H),2.90-3.02(m,4H),3.11-3.16(m,1H),3.60(s,4H),4.24-4.37(m,3H),4.51-4.58(m,1H),,7.07-7.29(m,10H),7.86-7.93(m,2H),8.04-8.21(m,2H)；
MS-ESI(m/z)[M+Na]+742.4。
实施例4
(αR)-α-[(4-吗啉基乙酰基)氨基]苯丁酰基-L-亮氨酰-N[(1S)-3-甲基-1-[[(2R)-2-甲基环氧乙基]羰基]丁基]-D-苯基丙氨酰胺(卡非佐米衍生物C)的制备。
①(αR)-α-[(4-吗啉基乙酰基)氨基]苯丁酰基-L-亮氨酰-N[(1S)-3-甲基-1-[[(2R)-2-甲基环氧乙基]羰基]丁基]-D-苯基丙氨酰胺(Ⅲ)以D-苯丙氨酸甲酯(12)和Boc-L-亮氨酸(2)为起始物料，通过缩合得到N-叔丁氧羰基-L-亮氨酰基-D-苯丙氨酸甲酯(13)，继续脱Boc游离得到化合物L-亮氨酰基-D-苯丙氨酸甲酯(14)，然后与Boc-D-高苯丙氨酸(5)缩合得到N-[(R)-2-(叔丁氧羰基氨基)-4-苯基丁酰基]-L-亮氨酰-D-苯丙氨酸甲酯(20)，继续脱Boc游离得到化合物(αR)-α-氨基苯丁酰基-L-亮氨酰基-D-苯丙氨酸甲酯(21)，继续与化合物4-吗啉乙酸(8)缩合得到(αR)-α-[(4-吗啉基乙酰基)氨基]苯丁酰基-L-亮氨酰基-D-苯丙氨酸甲酯(22)，然后经过水解得到(αR)-α-[(4-吗啉基乙酰基)氨基]苯丁酰基-L-亮氨酰基-D-苯丙氨酸(23)，最后与(2S)-2-氨基-4-甲基-1-[(2R)-2-甲基环氧乙烷基]-1-戊酮三氟乙酸盐(11)缩合得到异构体杂质(Ⅲ)。
N-叔丁氧羰基-L-亮氨酰基-D-苯丙氨酸甲酯(13)的制备
在500ml单口瓶中加入D-苯丙氨酸甲酯(12)12.5g、Boc-L-亮氨酸(2)13.4g、TBTU22.3g，HOBt3.92g，乙酸乙酯150ml，最后加入N,N-二异丙基乙胺26.2g，常温搅拌1h，停止反应。向反应体系中加入150ml纯化水洗涤5min，分液，弃去水相；有机相继续用150ml饱和碳酸氢钠溶液洗涤5min，分液，弃去水相。向有机相中加入600ml正庚烷，搅拌析晶5h，减压抽滤，干燥后称重的类白色固体14.2g。
L-亮氨酰基-D-苯丙氨酸甲酯(14)的制备
在500ml的单口瓶中加入14.2g N-叔丁氧羰基-L-亮氨酰基-D-苯丙氨酸甲酯(13)、200ml二氯甲烷、70ml三氟乙酸，常温搅拌2h，停止反应。向反应液中滴加25％碳酸钾溶液至pH7～8，分液，水相用200ml二氯甲烷萃取一遍，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得淡黄色油状物11g。
N-[(R)-2-(叔丁氧羰基氨基)-4-苯基丁酰基]-L-亮氨酰-D-苯丙氨酸甲酯(20)的制备。
向装有11g L-亮氨酰基-D-苯丙氨酸甲酯(14)的500ml单口瓶中加入150ml乙酸乙酯、2.5gHOBt、15gTBTU、17g N,N-二异丙基乙胺、11g Boc-D-高苯丙氨酸(5)，常温搅拌2h，停止反应。向反应体系中加入150ml纯化水洗涤5min，分液，弃去水相；有机相继续用150ml饱和碳酸氢钠溶液洗涤5min，分液，弃去水相。向有机相中加入600ml正庚烷，搅拌析晶5h，减压抽滤，干燥后称重的类白色固体16g。
(αR)-α-氨基苯丁酰基-L-亮氨酰基-D-苯丙氨酸甲酯(21)的制备
在500ml的单口瓶中加入14g N-[(R)-2-(叔丁氧羰基氨基)-4-苯基丁酰基]-L-亮氨酰-D-苯丙氨酸甲酯(20)、200ml二氯甲烷、70ml三氟乙酸，常温搅拌2h，停止反应。向反应液中滴加25％碳酸钾溶液至pH7～8，分液，水相用200ml二氯甲烷萃取一遍，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得淡黄色油状物10.3g。
(αR)-α-[(4-吗啉基乙酰基)氨基]苯丁酰基-L-亮氨酰基-D-苯丙氨酸甲酯(22)的制备
在500ml的单口瓶中加入8.3g(αR)-α-氨基苯丁酰基-L-亮氨酰基-D-苯丙氨酸甲酯(21)、150ml二氯甲烷、3.2g4-吗啉乙酸(8)、1.2gHOBt、7.1gTBTU、8.3g N,N-二异丙基乙胺,常温搅拌2h，停止反应。向反应体系中加入150ml纯化水洗涤5min，分液，弃去水相；有机相继续用150ml饱和碳酸氢钠溶液洗涤5min，分液，弃去水相。有机相用无水硫酸钠干燥后，减压浓缩，得到类白色固体7.3g。
(αR)-α-[(4-吗啉基乙酰基)氨基]苯丁酰基-L-亮氨酰基-D-苯丙氨酸(23)的制备。
在250ml的单口瓶中加入5.3g(αR)-α-[(4-吗啉基乙酰基)氨基]苯丁酰基-L-亮氨酰基-D-苯丙氨酸甲酯(22)、0.9g氢氧化锂一水合物、50ml四氢呋喃、25ml纯化水，常温搅拌2h，停止反应。向体系中加入80ml纯化水，用5N稀盐酸调节体系pH5-6，有大量白色固体析出，继续析晶搅拌1h，减压抽滤，得到白色滤饼，干燥后称重，得3.7g白色固体。
(αR)-α-[(4-吗啉基乙酰基)氨基]苯丁酰基-L-亮氨酰-N[(1S)-3-甲基-1-[[(2R)-2-甲基环氧乙基]羰基]丁基]-D-苯基丙氨酰胺(Ⅲ)的制备。
在100ml的单口瓶中加入3.65g(αR)-α-[(4-吗啉基乙酰基)氨基]苯丁酰基-L-亮氨酰基-D-苯丙氨酸(23)、2.20g(2S)-2-氨基-4-甲基-1-[(2R)-2-甲基环氧乙烷基]-1-戊酮三氟乙酸盐(11)、0.40gHOBt、2.48gTBTU、40ml乙酸乙酯、2.90g N,N-二异丙基乙胺,常温搅拌2h，停止反应。向反应体系中加入40ml纯化水洗涤5min，分液，弃去水相；有机相继续用40ml饱和碳酸氢钠溶液洗涤5min，分液，弃去水相。向有机相中加入160ml正庚烷，搅拌析晶5h，减压抽滤，干燥后称重的类白色固体4.17g。
1H NMR(DMSO-d6)δ(ppm)：0.75-0.90(m,12H),1.33-1.40(m,7H),1.50-1.68(m,2H),1.82-1.98(m,2H),2.42-2.53(m,H),2.75-2.83(m,1H),2.97-3.02(m,4H),3.15-3.16(d,1H),3.58-3.61(m,4H),4.25-4.40(m,3H),4.47-4.55(m,1H),,7.12-7.30(m,10H),7.91-8.00(m,2H),8.14-8.24(m,2H)；
MS-ESI(m/z)[M+Na]+742.4。
虽然本申请所揭露的实施方式如上，但所述的内容仅为便于理解本申请而采用的实施方式，并非用以限定本申请。任何本申请所属领域内的技术人员，在不脱离本申请所揭露的精神和范围的前提下，可以在实施的形式及细节上进行任何的修改与变化，但本申请的专利保护范围，仍须以所附的权利要求书所界定的范围为准。
Claims (10)
1.一种卡非佐米及其衍生物的制备方法，其包括如下步骤：
式(II)化合物与式(III)化合物或式(III)化合物的酸盐在有机溶剂1和缩合剂1以及碱1存在下进行缩合反应，得到式(I)化合物，即卡非佐米及其衍生物；这里，所述的有机溶剂1选自甲苯、N,N-二甲基甲酰胺、甲醇、四氢呋喃、乙腈、二氯甲烷和乙酸乙酯中一种或多种的混合溶剂；所述缩合剂1为下列物质中的一种与HOBt的组合：EDCI、HBTU、TBTU和HATU；所述碱1选自二乙胺、三乙胺、N,N-二异丙基乙胺、碳酸钾、和碳酸钠中的一种或多种的混合碱；
其中，在式(I)和式(II)化合物中a构型为S，b构型为S；或者，a构型是R，b构型为S；或者，a构型是S，b构型为R；或者，a构型是R，b构型为R。
2.如权利要求1所述的制备方法，其中，所述的有机溶剂1为乙酸乙酯。
3.如权利要求1所述的制备方法，其中，所述缩合剂1为HOBt与TBTU的组合。
4.如权利要求1所述的制备方法，其中，所述碱1为N,N-二异丙基乙胺。
5.如权利要求1至4任一项所述的制备方法，其中，式(II)化合物与所述碱1的重量比为1:0.7～0.9；或者
式(II)化合物与有机溶剂1的重量体积比为1:10～20w/v，g/ml；或者
式(II)化合物与所述缩合剂1的重量比为1:0.6～0.8。
6.如权利要求1至4任一项所述的制备方法，还包括如下步骤：
4-吗啉乙酸(即化合物8)与式(IV)化合物或式(IV)化合物的酸盐在有机溶剂2和缩合剂2以及碱2存在下进行缩合反应，得到式(V)化合物；
式(V)化合物经水解反应得到式(II)化合物；
这里，所述的有机溶剂2选自甲苯、N,N-二甲基甲酰胺、甲醇、四氢呋喃、乙腈、二氯甲烷和乙酸乙酯中一种或多种的混合溶剂；所述缩合剂2为下列物质的一种与HOBt的组合：EDCI、HBTU、TBTU和HATU；所述碱2选自二乙胺、三乙胺、N,N-二异丙基乙胺、碳酸钾、和碳酸钠中的一种或多种；
其中，式(IV)和式(V)中R1为C1-C4烷基，优选地，R1为甲基；在式(IV)、式(V)和式(II)化合物中a构型是S，b构型为S；或者，a构型是R，b构型为S；或者，a构型是S，b构型为R；或者，a构型是R，b构型为R。
7.如权利要求6所述的制备方法，其中，式(IV)和式(V)中R1为甲基。
8.如权利要求6所述的制备方法，其中，所述的有机溶剂2为乙酸乙酯。
9.如权利要求6所述的制备方法，其中，所述缩合剂2为HOBt与TBTU的组合；
所述碱2为N,N-二异丙基乙胺。
10.如权利要求6至9中任一项所述的制备方法，其中，式(IV)化合物与所述碱2的重量比为1:0.7～0.9；或
式(IV)化合物与有机溶剂2的重量体积比为1:10～20w/v，g/ml；或
式(IV)化合物与所述缩合剂2的重量比为1:0.6～0.8。
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