CN110960439B - 一种琼胶寡糖-寡肽组合物、制备方法及修复皮肤炎症的组合物 - Google Patents

一种琼胶寡糖-寡肽组合物、制备方法及修复皮肤炎症的组合物 Download PDF

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Abstract

本发明属于人体护理产品技术领域，涉及一种琼胶寡糖‑寡肽组合物、制备方法及修复皮肤炎症的组合物，本发明的琼胶寡糖‑寡肽组合物，按重量份数计，包括以下各组分，0.5～6份琼胶寡糖、0.5～6份寡肽、0.1～3份促联剂、0.05～0.5份缓冲剂、0.001～0.05份稳定剂、适量酸或碱、100份水，配方充分发挥琼胶寡糖和寡肽的协同作用，对皮肤炎症具有很好的修复作用。

Description

一种琼胶寡糖-寡肽组合物、制备方法及修复皮肤炎症的组 合物
技术领域
本发明属于人体护理产品技术领域，涉及一种琼胶寡糖-寡肽组合物、制备方法及修复皮肤炎症的组合物。
背景技术
皮肤的角质层细胞和细胞之间通过体表脂膜和天然保湿因子共同组成“砖墙样结构”，形成一道人体天然保护屏障。当表皮完整时，皮肤的细菌、真菌或病毒等共生菌不致病；而一旦表皮受损(即皮肤屏障破坏)，这些共生菌就会进入真皮而引发免疫性炎症反应。
皮肤屏障功能破坏主要表现为皮肤pH值升高、经表皮水分丢失(TEWL值)增多和表皮水合状态下降。近年研究发现，皮肤屏障功能在多种炎症性疾病的发展过程中均发挥了重要作用，如银屑病、特应性皮炎等。受损的皮肤屏障可能通过调节皮肤表面pH值及改变微生物菌群等方式而加重皮肤炎症，不仅如此，削弱的屏障功能对于外界感染源或有毒物质的防御能力降低，使得大量的感染性物质参与到皮肤炎症的发展过程中。
琼胶寡糖是一种提取自海洋红藻的石花菜属(Gelidium sp.)、江蓠藻属(Gracilaria sp.)和鸡毛菜属(Pterocladiasp.)等红藻中提取出的一种低聚糖，其是由1,3-连接的β-D-半乳吡喃糖和1,4-连接的3,6-内醚-α-L-吡哺半乳糖残基重复交替连接的链状中性糖。
近年来研究表明，琼胶寡糖具有抗肿瘤、抗炎、抗氧化等多种生物活性，并且与寡糖的聚合度(DP)密切相关。然而关于新琼寡糖的活性报道相对较少。日本Kobayashi等人发现低分子量的中性新琼二糖具有良好的吸湿和美白双重功效，为开发琼胶寡糖在人体护理产品中的应用提供了有力参考。
然而在国内的这一技术领域仍有大量的空白。
发明内容
本发明的一个目的是提供一种琼胶寡糖-寡肽组合物，琼胶寡糖和寡肽协同作用，发挥更好的修复皮肤炎症的功效。
本发明的另一个目的是提供一种琼胶寡糖-寡肽组合物的制备方法。
本发明还有一个目的是提供一种修复皮肤炎症的组合物。
本发明采用以下的技术方案，
一种琼胶寡糖-寡肽组合物，按重量份数计，包括以下各组分，0.5～6份琼胶寡糖、0.5～6份寡肽、0.1～3份促联剂、0.05～0.5份缓冲剂、0.001～0.05份稳定剂、适量酸或碱、100份水。
优选的，所述琼胶寡糖-寡肽组合物的pH为3.5～7.5。
优选的，所述琼胶寡糖的聚合度不超过20。
琼胶寡糖是一种自海洋红藻的石花菜属(Gelidium sp.)、江蓠藻属(Gracilariasp.)和鸡毛菜属(Pterocladia sp.)等红藻中提取出的低聚糖，由1,3-连接的β-D-半乳吡喃糖和1,4-连接的3,6-内醚-α-L-吡哺半乳糖残基重复交替连接的链状中性糖。琼胶寡糖本身就是一种性质十分优良的化妆品原料，在保湿、抗皱、美白、防晒等领域皆有著述。近年来研究表明，琼胶寡糖具有抗肿瘤、抗炎、抗氧化等多种生物活性。琼胶寡糖的成品纯度一般较高，特别是使用生物法或酶法制备的琼胶寡糖，其杂质含量更可以大大降低，使用更安全，而且分子量通常较低，有非常好的人体利用性。琼胶寡糖的另一个优良的理化性质体现在其易溶于水，具有很好的生产应用价值，可以用于多种剂型的人体护理化妆品开发与生产。本发明优选海洋红藻通过微生物发酵获得或者琼胶通过生物酶解法获得的琼胶寡糖，更优选的，本发明的琼胶寡糖优选新琼二糖、新琼四糖、新琼六糖和新琼八糖中的一种或多种。
优选的，所述寡肽分子量不超过10000Da。所述寡肽更优选鱼鳞胶原蛋白、蜂胶肽、寡肽-3、玉米蛋白、豌豆蛋白、燕麦蛋白、纳豆蛋白、牡蛎肽和蜗牛肽中的一种或多种。
更优选的，所述寡肽分子量不超过2000Da。更优选的，所述寡肽分子量不超过1000Da。
优选的，所述促联剂选自丙二醇、甘油、乙基己基甘油、苯氧乙醇、丁二醇、1,2-戊二醇、戊二醛和京尼平中的一种或多种。
优选的，所述缓冲剂选自柠檬酸钠、EDTA二钠、磷酸二氢钠和磷酸氢二钠的一种或多种。
优选的，所述稳定剂选自羟丙基淀粉磷酸酯、硅酸镁钠、羟乙基纤维素和丙烯酸类聚合物中的一种或多种。
一种上述任一实施方案所述的琼胶寡糖-寡肽组合物的制备方法，包括以下步骤，
(1)在第一反应釜中加入三分之一到三分之二重量的水和所述缓冲剂，搅拌溶解后用所述酸或碱调节pH为3.5～7.5，升温至70～80℃，维持15～30分钟，降温至45～60℃，加入所述稳定剂和所述寡肽，搅拌溶解，恒温陈化3～6小时，获得溶液一；
(2)在第二反应釜中加入剩余的水、所述琼胶寡糖和所述促联剂，常温搅拌溶解后，加入到步骤(1)所述的溶液一中，维持45～60℃，搅拌20～50分钟，降温10～15℃，恒温陈化4～20小时，获得所述琼胶寡糖-寡肽组合物。
一种修复皮肤炎症的组合物，包含上述任一实施方案所述的琼胶寡糖-寡肽组合物。
本发明的有益效果：
(1)使用了成分明确的琼胶寡糖和寡肽作为皮肤抗炎护理的原料。这对于实际应用生产过程中的产品品质管控提供了有力的保障，从源头上避免了由于不明成分的杂质引起皮肤刺激或过敏的可能；
(2)通过琼胶寡糖-寡肽的复配，协同发挥效果，提升了对皮肤的抗炎护理作用。
(3)琼胶寡糖-寡肽组合物的制备方法简单，操作方便。
附图说明
图1为测试1中不同受试物的丝聚蛋白染色结果。
图2为测试1中不同受试物的丝聚蛋白的荧光强度对比。
图3为测试2中裸露皮肤炎症平均改善情况。
图4为测试2中头皮炎症平均改善情况。
具体实施方式
以下藉由特定的具体实施例说明本发明的实施方式，熟悉此技艺的人士可由本说明书所揭示的内容轻易地了解本发明的其他优点及功效。
须知，本说明书所附图式所绘示的结构、比例、大小等，均仅用以配合说明书所揭示的内容，以供熟悉此技艺的人士的了解与阅读，并非用以限定本发明可实施的限定条件，故不具技术上的实质意义，任何结构的修饰、比例关系的改变或大小的调整，在不影响本发明所能产生的功效及所能达成的目的下，均应落在本发明所揭示的技术内容得能涵盖的范围内。同时，本说明书中所引用的如
Figure BDA0002349580130000031
等用语，也仅为便于叙述的明了，而非用以限定本发明可实施的范围，其相对关系的改变或调整，在无实质变更技术内容下，当也视为本发明可实施的范畴。
如无特别指明，以下实施例中所述份数都为重量份数。
实施例1
在第一反应釜中加入50份水和0.1份EDTA二钠，搅拌溶解后用盐酸调节pH为4.0，升温至72℃，维持25分钟，降温至50℃，加入0.005份羟乙基纤维素和4份水解玉米蛋白，搅拌溶解，恒温陈化5小时，获得溶液一；
在第二反应釜中加入50份水、4份琼胶寡糖、2份甘油和0.1份乙基己基甘油，常温搅拌溶解后，加入到上述溶液一中，维持50℃，搅拌40分钟，降温至37℃，恒温陈化12小时，获得琼胶寡糖-寡肽组合物1。
实施例2
在第一反应釜中加入50份水和0.1份EDTA二钠，搅拌溶解后用盐酸调节pH为4.5，升温至75℃，维持20分钟，降温至60℃，加入0.005份羟乙基纤维素、3份水解玉米蛋白和1份豌豆蛋白，搅拌溶解，恒温陈化6小时，获得溶液一；
在第二反应釜中加入50份水、4份琼胶寡糖、2份丙二醇和0.1份乙基己基甘油，常温搅拌溶解后，加入到上述溶液一中，维持60℃，搅拌30分钟，降温至45℃，恒温陈化10小时，获得琼胶寡糖-寡肽组合物2。
实施例3
在第一反应釜中加入50份水和0.3份EDTA二钠，搅拌溶解后用盐酸调节pH为4.0，升温至75℃，维持20分钟，降温至50℃，加入0.02份羟丙基淀粉磷酸酯和1份燕麦蛋白，搅拌溶解，恒温陈化5小时，获得溶液一；
在第二反应釜中加入50份水、5份琼胶寡糖、1.2份丙二醇和0.1份甘油，常温搅拌溶解后，加入到上述溶液一中，维持50℃，搅拌40分钟，降温至35℃，恒温陈化12小时，获得琼胶寡糖-寡肽组合物3。
实施例4
在第一反应釜中加入50份水和0.3份柠檬酸钠，搅拌溶解后加盐酸调节pH为4.0，升温至70℃，维持25分钟，降温至50℃，加入0.03份羟乙基纤维素和5份鱼鳞胶原蛋白，搅拌溶解，恒温陈化5小时，获得溶液一；
在第二反应釜中加入50份水、1份琼胶寡糖、1.3份甘油，常温搅拌溶解后，加入到上述溶液一中，维持50℃，搅拌40分钟，降温至38℃，恒温陈化15小时，获得琼胶寡糖-寡肽组合物4。
实施例5
在第一反应釜中加入50份水和0.1份柠檬酸钠，搅拌溶解后加盐酸调节pH为4.5，升温至75℃，维持20分钟，降温至50℃，加入0.03份硅酸镁钠和3份鱼鳞胶原蛋白，搅拌溶解，恒温陈化6小时，获得溶液一；
在第二反应釜中加入50份水、2份琼胶寡糖、1.8份甘油，常温搅拌溶解后，加入到上述溶液一中，维持50℃，搅拌40分钟，降温至35℃，恒温陈化8小时，获得琼胶寡糖-寡肽组合物5。
对比例
在第一反应釜中加入58份水和0.1份EDTA二钠，搅拌溶解后用盐酸调节pH为4.5，升温至75℃，维持20分钟，降温至60℃，加入0.005份羟乙基纤维素，搅拌溶解，恒温陈化6小时，获得溶液一；
在第二反应釜中加入50份水、2份丙二醇和0.1份乙基己基甘油，常温搅拌溶解后，加入到上述溶液一中，维持60℃，搅拌30分钟，降温至45℃，恒温陈化10小时，获得对比物。
测试1
(一)细胞接种与孵育
以2×104个/孔的细胞接种密度将角质形成细胞接种至含有盖玻片的24孔板中，37℃下5％CO2培养箱孵育过夜。
(二)受试物与实验组设置
根据表1设置受试物与实验组，配制受试样品。其中空白对照为纯水；琼胶寡糖与水解玉米蛋白溶液均是用纯水溶解制得；琼胶寡糖、水解玉米蛋白混合液是使用同浓度的琼胶寡糖溶液和水解玉米蛋白溶液直接混合均匀制得；琼胶寡糖-水解玉米蛋白组合物为实施例1中琼胶寡糖-寡肽组合物1稀释100倍得到。
表1免疫荧光检测试验分组设计
Figure BDA0002349580130000051
(三)给药
依表1的实验设计，待24孔板中细胞铺板率达到30～40％时，进行分组给药，每组设三个平行孔。37℃下5％CO2培养箱继续培养24h。
(四)收样
孵育培养结束后，弃掉24孔板中培养液，采用PBS缓冲溶液清洗爬片三次，用4％多聚甲醛室温固定细胞30min，4℃冰箱保存。
(五)细胞免疫荧光检测
对细胞进行通透处理，山羊血清封闭液37℃封闭30min；一抗工作液4℃孵育过夜；二抗工作液(Goat Anti-Rabbit IgG抗体按照1:200，Goat Ant-Mouse IgG FITC抗体按照1:200稀释)在37℃下孵育2h。
(六)衬染
Hochest染液对细胞进行核衬染(被染上的核区可用紫外激发出蓝色荧光)。
(七)拍照
正置荧光显微镜下拍照。在同一视野下用蓝光通道激发目的蛋白的绿色荧光，用紫外激发细胞核区的蓝色荧光，分别拍照。将两张图片组合即为merge图。
(八)处理分析
利用Image-proPlus(IPP)软件分析细胞在蓝光下激发出绿色荧光的照片中绿色荧光强度，计算单位面积下的荧光强度，用T-Test方法对结果进行统计分析。
(九)试验结果
依测试1试验步骤处理，得到的不同受试物的丝聚蛋白染色结果如图1所示，荧光强度分析结果如表2所示，丝聚蛋白变化趋势如图2所示。
表2荧光强度分析结果
Figure BDA0002349580130000061
Figure BDA0002349580130000071
可以看到在本发明测试1中：与空白对照组相比，琼胶寡糖在400ppm药物浓度下，丝聚蛋白含量显著升高(P＜0.05)；水解玉米蛋白在400ppm药物浓度下，丝聚蛋白含量无显著变化；琼胶寡糖、水解玉米蛋白混合物在400ppm药物浓度下，丝聚蛋白含量显著增高(P＜0.05)；琼胶寡糖-水解玉米蛋白组合物在400ppm药物浓度下，丝聚蛋白含量显著升高(P＜0.05)，增幅最高。
因此，本实施例1中的琼胶寡糖-寡肽组合物1具有明显促进丝聚蛋白表达的作用。
测试2
(一)受试人群
选择年龄在20-40岁，头皮有轻度-中度炎症男性受试者和女性受试者各20名参与头皮炎症改善试验。本测试所述轻度-中度头皮炎症的症状包括发痒、头皮油腻伴有红疹发生。
选择年龄在20-40岁，小腿外侧肌肤有轻度-中度炎症的男性受试者和女性受试者各20名参与裸露皮肤炎症改善试验。本测试所述轻度-中度肌肤炎症的症状包括干燥、发痒伴有显著脱屑。
(二)测试方法
本测试安排了四次与受试者的访视，每两次访视的间隔均为1周。
在签署知情同意书后，试验安排了首次访视，主要为试验介绍、首次数据及图片采集、分发测试样。本测试中肌肤角质层水分含量、经皮水分蒸发量由仪器测定，照片由统一型号的摄像设备采集。在首次访视结束后，受试者即开始对相应皮肤区域进行划分，分别使用对比例的对比物和实施例2获得的琼胶寡糖-寡肽组合物2，持续3周。每次访视前24小时到访视现场测试期间停止使用。
本测试所述改善效果评价计算公式为：
Figure BDA0002349580130000072
本测试实际回收有效的头皮炎症改善试验受试者及裸露皮肤炎症改善试验受试者数据各17例。记录每个用户四次最终获得数据整理如表3与表4所示。
表3琼胶寡糖-寡肽组合物2与空白物对头皮炎症的改善试验结果
Figure BDA0002349580130000081
表4本发明所述组合物与空白对照受试物对裸露皮肤炎症改善试验结果
Figure BDA0002349580130000091
整理本测试人群的平均改善情况为图3和图4。
本测试的测试数据结果表明使用琼胶寡糖-寡肽组合物对皮肤角质层有非常显著的保湿作用，并且可以减少经皮水分流失，说明受损皮肤的“砖墙”结构得到了修复，炎症情况得到了较大改善。

Claims (8)

1.一种琼胶寡糖-寡肽组合物，其特征在于，按重量份数计，由以下各组分组成，0.5～6份琼胶寡糖、0.5～6份寡肽、0.1～3份促联剂、0.05～0.5份缓冲剂、0.001～0.05份稳定剂、适量酸或碱、100份水；
所述促联剂选自丙二醇、甘油、乙基己基甘油、苯氧乙醇、丁二醇、1,2-戊二醇、戊二醛和京尼平中的一种或多种；
所述稳定剂选自羟丙基淀粉磷酸酯、硅酸镁钠、羟乙基纤维素和丙烯酸类聚合物中的一种或多种。
2.如权利要求1所述的琼胶寡糖-寡肽组合物，其特征在于，所述琼胶寡糖-寡肽组合物的pH为3.5～7.5。
3.如权利要求1所述的琼胶寡糖-寡肽组合物，其特征在于，所述琼胶寡糖的聚合度不超过20。
4.如权利要求1所述的琼胶寡糖-寡肽组合物，其特征在于，所述寡肽分子量不超过10000Da。
5.如权利要求4所述的琼胶寡糖-寡肽组合物，其特征在于，所述寡肽分子量不超过2000Da。
6.如权利要求1所述的琼胶寡糖-寡肽组合物，其特征在于，所述缓冲剂选自柠檬酸钠、EDTA二钠、磷酸二氢钠和磷酸氢二钠的一种或多种。
7.一种权利要求1-6任一项所述的琼胶寡糖-寡肽组合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤，
(1)在第一反应釜中加入三分之一到三分之二重量的水和所述缓冲剂，搅拌溶解后用所述酸或碱调节pH为3.5～7.5，升温至70～80℃，维持15～30分钟，降温至45～60℃，加入所述稳定剂和所述寡肽，搅拌溶解，恒温陈化3～6小时，获得溶液一；
(2)在第二反应釜中加入剩余的水、所述琼胶寡糖和所述促联剂，常温搅拌溶解后，加入到步骤(1)所述的溶液一中，维持45～60℃，搅拌20～50分钟，降温10～15℃，恒温陈化4～20小时，获得所述琼胶寡糖-寡肽组合物。
8.一种修复皮肤炎症的组合物，其特征在于，包含权利要求1-6任一项所述的琼胶寡糖-寡肽组合物。
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