CN110940815B - 定量测定猫血清淀粉样蛋白a的乳胶免疫比浊检测试剂盒 - Google Patents

定量测定猫血清淀粉样蛋白a的乳胶免疫比浊检测试剂盒 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种定量测定猫血清淀粉样蛋白A的胶乳免疫比浊检测试剂盒，包括猫血清淀粉样蛋白A抗体致敏过后的聚苯乙烯胶乳颗粒冻干成的试剂珠、检测用的试剂盘、稀释样本的水杯水、猫血清淀粉样蛋白A校准品和质控品。本产品可以准确地定量检测出猫血清淀粉样蛋白A的含量，可以根据猫血清淀粉样蛋白A含量，监测感染性疾病早期炎症，有助于诊断炎症、评估其活性、监控其活动及治疗，有很高的临床价值。它具有高特异性、高灵敏度、高精确性、高准确性、简便快速等优点。

Description

定量测定猫血清淀粉样蛋白A的乳胶免疫比浊检测试剂盒
技术领域
本发明涉及属于免疫分析技术领域，尤其是一种定量测定猫血清淀粉样蛋白A的胶乳免疫比浊检测试剂盒。
背景技术
猫血清淀粉样蛋白A（SAA）是淀粉样沉积的前体物质，是在研究淀粉样变性的过程中发现的，其后作为一种急性时相反应蛋白，属于载脂蛋白家族中的异质类蛋白质。在急性时相反应中，经白细胞介素-1、白细胞介素-6和肿瘤坏死因子刺激，猫血清淀粉样蛋白A在肝脏中由被激活的巨噬细胞和纤维母细胞合成，可升高到最初浓度的100 -1000倍。在炎症期间，猫血清淀粉样蛋白A能与血浆高密度脂蛋白（HDL）结合，调节高密度脂蛋白的代谢。此外，猫血清淀粉样蛋白A的降解产物能以淀粉样蛋白A(AA)原纤维的方式沉积在不同的器官中，在慢性炎症疾病中这是一种严重的并发症。猫血清淀粉样蛋白A升高可发生在动脉粥样硬化、糖尿病肾病、急性心肌梗死、冠心病、慢性肾脏疾病等炎症性疾病中。
在兽医学中，猫血清淀粉样蛋白A是一种灵敏的炎症和组织损伤标志物，测定血液中的猫血清淀粉样蛋白A可以用于诊断亚临床炎症、监控动物炎症和感染的治疗效果以及监控病患外科手术。猫血清淀粉样蛋白A是一种主要的猫急相蛋白。当猫患有系统性炎症时，猫血清淀粉样蛋白A浓度水平会出现升高。目前，猫血清淀粉样蛋白A已经被建议作为一种合适的标志物用以诊断猫炎症反应。此外，还有报道显示猫血清淀粉样蛋白A可以作为一种患病个体的预后标志物。
血清淀粉样蛋白 A 的含量浓度是反映感染性疾病早期炎症的敏感指标，有助于诊断炎症、评估其活性、监控其活动及治疗。研究发现，在患炎性关节炎的案例中，血清淀粉样蛋白 A 与疾病活动性的关系最密切。同时检测 C 反应蛋白和血清淀粉样蛋白 A 能提高对感染的诊断灵敏度。对于淀粉样蛋白 A 淀粉样变性患者，以将血清淀粉样蛋白 A 水平回复至正常为宗旨的治疗，能改善病情 。
现有的 SAA 检测方法主要是酶联免疫法和免疫荧光层析法，由于酶联免疫测定周期长，不能在自动生化分析仪上使用，不适合急诊的快速检测，是 SAA 检测试剂盒普及的弊端，而本公司采用的胶乳免疫比浊法配套自己公司研发的试剂盘和便携式全自动生化分析仪定量检测猫血清淀粉样蛋白 A是一种全新的检测方式，此发明达到了操作简单，携带方便，经济实惠，灵敏度高、准确性好、抗干扰能力强，特别是急诊能实现快速定量检测的目的，其基本原理是 ：将抗体包被在胶乳颗粒上，与相应抗原发生免疫反应后，形成聚集颗粒，在一定波长下，通过测定聚集物所产生的浊度，即可测出标本中被检物含量。
而血清淀粉样蛋白 A 抗体包被到胶乳上，一般可以采用物理吸附法和化学偶联法，采用物理吸附法得到的致敏胶乳颗粒稳定性较化学偶联法要差，抗体容易从胶乳颗粒上脱落下来 ；而且用物理吸附法得到的胶乳，有可能受到类风湿性因子 (RF) 和嗜异性抗体的干扰，IgM、IgG 型 RF 可以与包被在胶乳上的抗体的 Fc 段直接结合，从而导致检测结果假阳性或假阴性升高。目前采用的化学偶联法多为随机偶联法，因随机偶联的抗体随机偶联到抗体不同部位，将导致抗体损失结合力 ；所以，完全随机偶联会损失抗体大部分结合力，增加了抗体用量和生产成本。同时，若将上述方法得到的致敏胶乳颗粒用于检测试剂盒中，会造成特异性差、准确性低、抗干扰能力弱或生产成本高的缺陷。
发明内容
本发明的目的是提供一种操作简单而快速、携带方便、灵敏度高、准确性好、抗干扰能力强的定量测定猫血清淀粉样蛋白A的胶乳免疫比浊检测试剂盒。
本发明的构思是：鉴于现有技术测定猫血清淀粉样蛋白A存在的上述缺陷，本发明提出了胶乳免疫比浊法配套试剂珠、试剂盘和便携式全自动生化分析仪定量检测猫血清淀粉样蛋白 A的检测试剂盒，通过该试剂盒能够定量测定猫血清淀粉样蛋白A，且具有操作简单而快速、携带方便、灵敏度高、准确性好、抗干扰能力强的优点。
本发明定量检测猫血清淀粉样蛋白A的试剂盒，试剂盒包括：猫血清淀粉样蛋白A抗体致敏过后的聚苯乙烯胶乳颗粒冻干成的试剂珠、配套检测用的试剂盘、稀释样本的水杯水、猫血清淀粉样蛋白A校准品和质控品。同时，试剂盒的制备方法包括：通过化学结合的方法将抗体结合到通过ＥＤＣ活化过后的胶乳微球上然后使用冻干机将其冻干成试剂珠、试剂盘的制作、水杯水的配制、以猫血清淀粉样蛋白A纯品配制猫血清淀粉样蛋白A校准品和质控品、将冻干后的试剂珠装入试剂盘中的12孔，并在试剂盘中部装上一个水杯，最后压盖粘挡圈贴二维码组装为成品。
为了达到上述技术目的，本发明所采用的基本技术方案是：
提供一种定量测定猫血清淀粉样蛋白A的胶乳免疫比浊检测试剂盒，所述的检测试剂盒包括：猫血清淀粉样蛋白A抗体致敏过后的聚苯乙烯胶乳颗粒冻干成的试剂珠、配套检测用的试剂盘、稀释样本的水杯水、猫血清淀粉样蛋白A校准品和质控品。所述EDC活化胶乳微球上的羧基使其转化成氨基然后和猫血清淀粉样蛋白A的单克隆抗体偶联步骤。
所述EDC活化胶乳微球上的羧基使其转化成氨基然后和猫血清淀粉样蛋白A的单克隆抗体偶联（胶乳的活化与抗体的偶联）步骤具体为：
1.取２mLEP管，加入胶乳（50mg/ml）0.2mL/管；
2.向步骤1中加入ＰＨ为6.0的50mMMES缓冲液0.75mL/管，涡旋混匀；
3.取浓度为2.4mg/ml的f－SAA抗体0.5mg加入步骤2中，涡旋混匀后 25℃旋转混匀30min；
4.使用分析天平称取质量为c（0.01 g < c<0.02 g）的EDC至新的2mlEP管中，然后用移液枪加入体积为E（E=C/0.01）的MES缓冲液充分溶解混匀；
5. 向步骤3中旋转混匀完成的EP管内加入刚配制好的EDC溶液0.02mL/管，涡旋混匀后25℃旋转混匀30min；
6.将步骤5的EP管放入离心机， 18000 r/min，4℃，离心10min，用移液器吸去上清；
7.向步骤6离心完成后的EP管中加入灭菌注射水0.8mL/管，PH为7.4 的500mMMOPS 0.1mL/管，用移液器反复吹吸EP管内液体，使沉淀分散，直至无肉眼可见沉淀；
8.接着向步骤7的EP中加入乙醇胺2.5μL/管，20%BSA溶液0.1mL/管，涡旋混匀；超声仪超声30min左右直至液体透光；
9.将步骤8中的液体25℃旋转混匀2.5h后放入离心机，18000 r/min，４℃离心，45min，离心完成后用移液器吸去上清；
10.向上步操作中的EP管加入0.325mL/管灭菌注射水、PH为7.4 的500mM MOPS0.05mL/管，用移液器反复吹吸EP管内液体，使沉淀分散，直至无肉眼可见沉淀；
11.然后向步骤10中的EP管内加入20%BSA溶液0.5mL/管，0.9%的NACL溶液0.5mL/管，10% Tween-20溶液0.025mL/管，超声仪超声25min左右直至液体透光，完成偶联，偶联完成后的乳胶浓度为2%；
12.将步骤11中的液体加入10%的甘露醇和5%的蔗糖，使用冻干机低温程序冻干成球状的白色珠子，得到试剂珠。
本发明所述定量测定猫血清淀粉样蛋白A的胶乳免疫比浊检测试剂盒，还包括试剂盘检测装置，试剂盒包括：通过化学结合的方法将抗体结合到通过ＥＤＣ活化过后的胶乳微球上然后冻干成的试剂珠、试剂盘的制作、水杯水的配制、以猫血清淀粉样蛋白A纯品配制猫血清淀粉样蛋白A校准品和质控品；将冻干后的试剂珠装入试剂盘中的12孔，并在试剂盘中部装上一个水杯，最后压盖粘挡圈贴二维码组装为成品。最后只需要使用者取100ul样本加入试剂盘内然后上机检测即可得出数据，一个样本一个试剂盘。
具体来说，本发明所述定量测定猫血清淀粉样蛋白A的胶乳免疫比浊检测试剂盒，包括猫血清淀粉样蛋白A抗体致敏过后的聚苯乙烯胶乳颗粒冻干成的试剂珠、检测用的试剂盘、稀释样本的水杯水、猫血清淀粉样蛋白A校准品和质控品。
本发明所述猫血清淀粉样蛋白A抗体致敏过后的聚苯乙烯胶乳颗粒冻干成的试剂珠的制备过程，还可以包括EDC活化胶乳微球上的羧基使其转化成氨基，然后和猫血清淀粉样蛋白A的单克隆抗体偶联。
本发明所述EDC活化胶乳微球上的羧基使其转化成氨基然后和猫血清淀粉样蛋白A的单克隆抗体偶联的步骤具体为：
（1）取２mLEP管，加入50mg/mL的胶乳0.2mL/管；
（2）向步骤1中加入ＰＨ为6.0的50mM MES缓冲液0.75mL/管，涡旋混匀；
（3）取浓度为2.4mg/mL的f－SAA抗体0.5mg加入步骤2混合液中，涡旋混匀后在温度为25℃的条件下旋转混匀30min；
（4）使用分析天平称取质量为0.01 g < c<0.02 g的EDC至新的2mLEP管中，然后用移液枪加入体积为E=C/0.01的MES缓冲液充分溶解混匀；
（5）向步骤3中旋转混匀完成的EP管内加入步骤4配制好的EDC溶液0.02mL/管，涡旋混匀后在温度为25℃的条件下旋转混匀30min；
（6）将步骤5的EP管放入离心机， 在转速为18000 r/min、温度为4℃的条件下离心10min，用移液器吸去上清；
（7）向步骤6离心完成后的EP管中依次加入灭菌注射水0.8mL/管和PH为7.4 的500mM MOPS 0.1mL/管，用移液器反复吹吸EP管内液体，使沉淀分散，直至无肉眼可见沉淀；
（8）接着向步骤7的EP中依次加入乙醇胺2.5μL/管和20%BSA溶液0.1mL/管，然后涡旋混匀；再用超声仪超声30min左右直至液体透光；
（9）将步骤8中的液体在温度为25℃的条件下旋转混匀2.5h后放入离心机，在转速为18000 r/min，温度为４℃的条件下离心45min，离心完成后用移液器吸去上清；
（10）向步骤9中的EP管依次加入0.325mL/管灭菌注射水和PH为7.4 的500mM MOPS0.05mL/管，然后用移液器反复吹吸EP管内液体，使沉淀分散，直至无肉眼可见沉淀；
（11）然后向步骤10中的EP管内依次加入20%BSA溶液0.5mL/管、0.9%的NACL溶液0.5mL/管和10% Tween-20溶液0.025mL/管，再用超声仪超声25min左右直至液体透光，进而完成偶联，偶联完成后的乳胶浓度为2%；
（12）将步骤11中的液体依次加入10%的甘露醇和5%的蔗糖，使用冻干机低温程序冻干成球状的白色珠子，最终得到试剂珠。
本发明步骤2中，先将胶乳与PH为6.0的MES缓冲液充分混合均匀，胶乳与MES的比例优选为1：3.75。
本发明步骤3中，取浓度为2.4mg/ml的f－SAA抗体0.5mg加入步骤2中，涡旋混匀后25℃旋转混匀30min，胶乳、MES和抗体的比例优选为10：37.5：10.4。
本发明步骤5中，加入EDC后30min内开始活化微球和偶联抗体，并同时进行。
本发明所述猫血清淀粉样蛋白A校准品和质控品采用如下方法制备：
用80%含BSA的Tris-HCL缓冲液和20%的马血清混合后分别稀释猫血清淀粉样蛋白A校准品，制成浓度分别为200μg/ml、100μg/ml、50μg/ml、12.5μg/ml和6.25μg/ml的猫血清淀粉样蛋白A校准品和浓度为70μg/ml、10μg/ml的猫血清淀粉样蛋白A质控品，使用冻干机冻干然后4℃保存待用；所述含BSA的Tris-HCL缓冲液中，BSA为1%、海藻糖为2.5%、CHAPS为0.05%、曲拉通0.05%、KV300为0.1%、Tris-HCL为PH7.4 50mM。
另外，本发明步骤6中，将步骤5的EP管放入离心机， 18000 r/min，4℃，离心10min，其作用是离心去掉没有偶联上的抗体或多于的胶乳。本发明步骤7中，向步骤6离心完成后的EP管中加入灭菌注射水0.8mL/管，PH为7.4 的500mM MOPS 0.1mL/管，其作用是缓冲液重悬偶联上抗体的胶乳。本发明步骤8中，接着向步骤7的EP中加入乙醇胺2.5μL/管，20%BSA溶液0.1mL/管，其作用是封闭胶乳微球上没有结合上抗体的结合位点。本发明步骤10和11中，向上步操作中的EP管加入0.325mL/管灭菌注射水、PH为7.4 的500mM MOPS0.05mL/管，20%BSA溶液0.5mL/管，0.9%的NACL溶液0.5mL/管，10% Tween-20溶液0.025mL/管，其作用是再次用缓冲液重悬封闭完成的胶乳微球，得到偶联上抗体的胶乳微球。本发明步骤12中，将步骤11中的液体加入10%的甘露醇和5%的蔗糖，使用冻干机低温程序冻干成球状的白色珠子，得到试剂珠，其作用是让试剂珠装试剂盘备用。
与前述现有同类产品相比，本发明的定量测定猫血清淀粉样蛋白A的胶乳免疫比浊检测试剂盒可以准确地定量检测出猫血清淀粉样蛋白A的含量，可以根据猫血清淀粉样蛋白A含量，监测感染性疾病早期炎症，有助于诊断炎症、评估其活性、监控其活动及治疗，有很高的临床价值。它具有高特异性、高灵敏度、高精确性、高准确性、简便快速等优点。
本发明的内容结合以下实施例作更进一步的说明，但本发明的内容不仅限于实施例中所涉及的内容。
具体实施方式
实施例 1：
本实施例中所述定量测定猫血清淀粉样蛋白A的胶乳免疫比浊检测试剂盒，包括猫血清淀粉样蛋白A抗体致敏过后的聚苯乙烯胶乳颗粒冻干成的试剂珠、检测用的试剂盘、稀释样本的水杯水、猫血清淀粉样蛋白A校准品和质控品。
本实施例的猫血清淀粉样蛋白 A 检测试剂盒的制备，试剂盒涉及试剂的主要原材料如下 ：
1.猫血清淀粉样蛋白A抗体；
2.胶乳 ：本实施例仅示例性的采用直径为70-110nm带羧基基团的聚苯乙烯胶乳颗粒进行实验。
本实施例的主要试剂的配制如下 ：
水杯水：20g/l的肌醇、6.4g/l的四甲基铵、注射水；
试剂珠（用猫血清淀粉样蛋白 A 抗体致敏胶乳颗粒后冻干成的试剂珠）内各物料占比：胶乳：1%、抗体：0.05%、BSA：2%、MOPS：50mM、NACL：0.9%、Tween-20：0.5%、甘露醇：10%、蔗糖：5%。
猫血清淀粉样蛋白 A 抗体致敏胶乳颗粒的步骤具体为：
1.取２mLEP管，加入胶乳（50mg/ml）0.2mL/管；
2.向步骤1中加入ＰＨ为6.0的50mMMES缓冲液0.75mL/管，涡旋混匀；
3.取浓度为2.4mg/ml的f－SAA抗体0.5mg加入步骤2中，涡旋混匀后 25℃旋转混匀30min；
4.使用分析天平称取质量为c（0.01 g < c<0.02 g）的EDC至新的2mlEP管中，然后用移液枪加入体积为E（E=C/0.01）的MES缓冲液充分溶解混匀；
5. 向步骤3中旋转混匀完成的EP管内加入刚配制好的EDC溶液0.02mL/管，涡旋混匀后25℃旋转混匀30min；
6.将步骤5的EP管放入离心机， 18000 r/min，4℃，离心10min，用移液器吸去上清；
7.向步骤6离心完成后的EP管中加入灭菌注射水0.8mL/管，PH为7.4 的500mMMOPS 0.1mL/管，用移液器反复吹吸EP管内液体，使沉淀分散，直至无肉眼可见沉淀；
8.接着向步骤7的EP中加入乙醇胺2.5μL/管，20%BSA溶液0.1mL/管，涡旋混匀；超声仪超声30min左右直至液体透光；
9.将步骤8中的液体25℃旋转混匀2.5h后放入离心机，18000 r/min，４℃离心，45min，离心完成后用移液器吸去上清；
10.向上步操作中的EP管加入0.325mL/管灭菌注射水、PH为7.4 的500mM MOPS0.05mL/管，用移液器反复吹吸EP管内液体，使沉淀分散，直至无肉眼可见沉淀；
11.然后向步骤10中的EP管内加入20%BSA溶液0.5mL/管，0.9%的NACL溶液0.5mL/管，10% Tween-20溶液0.025mL/管，超声仪超声25min左右直至液体透光，完成偶联，偶联完成后的乳胶浓度为2%；
12.将步骤11中的液体加入10%的甘露醇和5%的蔗糖，使用冻干机低温程序冻干成球状的白色珠子，得到试剂珠。
本实施例中猫血清淀粉样蛋白 A 的测定检测工具为试剂盘配套SMT120全自动分析仪，分析方法为两点终点法；主波长为630nm；样品量为100ul；试剂R1为370ul ；试剂R2为3.2ul ；校准方式为Logit-log4p；反应方向为上升；测定温度为37°C；向试剂盘孔中加入样品然后立即上机测试，以在630nm处的100s时的吸光度为准。所述的试剂R1中含有缓冲液肌醇、四甲基铵、注射水；所述的试剂R2中含有缓冲液mops、MES、乙醇胺、ＮＡＣＬ、BSA、Tween-20、灭菌注射水、甘露醇、蔗糖、猫血清淀粉样蛋白A抗体致敏聚苯乙烯胶乳颗粒。
计算方法为多点定标，根据吸光度值与校准品的浓度拟合四参数曲线，样品含量可根据其吸光度值在四参数曲线上算出。
本实施例中猫血清淀粉样蛋白 A 检测试剂盒性能评价：
1. 试剂盒灵敏度实验以0点校准品进行20次重复测定，其平均值加上两倍标准差带入曲线方程所得的浓度值为试剂盒的灵敏度，其灵敏度为2mg/L。（见表 1）。
表1
2.试剂盒线性范围测试
将抗原稀释成5个不同浓度的校准品，加上一个空白点，分别测试三次，然后取平均值，即为一条标准的校准曲线（见表2）
表2
3.试剂盒精密性实验
批内变异：取10、70μg/mL两水平质控品分别测试10次，计算测定值的平均值（v）和标准差（s）。按公式CV＝s/v×100％计算变异系数，批内变异系数CV分别为（见表3）；批间变异，选择5份不同浓度的血清样品对每份血清进行3次重复测定，计算其批间变异系数（CV％），批间变异CV为（见表4）。
表3
表4
4. 试剂盒稳定性实验
试剂盒保存温度为2-8℃，经过12个月的测定试剂盒的各项指标均满足要求，考虑到运输和使用过程中对试剂盒的影响，进行温度为37℃，时间长度为7天的加速实验，实验结果表明试剂盒的各项指标完全符合要求。
该试剂盒37℃放置7天后取10、70μg/mL两水平质控品分别测试10次，计算测定值的平均值（v）和标准差（s）。按公式CV＝s/v×100％计算变异系数，批内变异系数CV分别为（见表5），将抗原稀释成5个不同浓度的校准品，加上一个空白点，分别测试三次37℃放置7天后的试剂盒，然后取平均值，即为一条标准的校准曲线（见表6）
表5
表6

Claims (5)

1.一种定量测定猫血清淀粉样蛋白A的胶乳免疫比浊检测试剂盒，其特征在于：包括猫血清淀粉样蛋白A抗体致敏过后的聚苯乙烯胶乳颗粒冻干成的试剂珠、检测用的试剂盘、稀释样本的水杯水、猫血清淀粉样蛋白A校准品和质控品，其中，稀释样本的水杯水成分为：肌醇、四甲基铵和注射水；
所述试剂珠的制备过程，包括EDC活化聚苯乙烯乳胶微球上的羧基使其转化成氨基，然后和猫血清淀粉样蛋白A的单克隆抗体偶联；
所述EDC活化胶乳微球上的羧基使其转化成氨基然后和猫血清淀粉样蛋白A的单克隆抗体偶联的步骤具体为：
（1）取２mLEP管，加入50mg/mL的胶乳微球0.2mL/管；
（2）向步骤1中加入ＰＨ为6.0的50mM MES缓冲液0.75mL/管，涡旋混匀；
（3）取浓度为2.4mg/mL的f－SAA抗体0.5mg加入步骤2中，涡旋混匀后在温度为25℃的条件下旋转混匀30min，所述猫血清淀粉样蛋白A为f－SAA；
（4）使用分析天平称取质量为0.01 g < C <0.02 g的EDC至新的2mLEP管中，然后用移液器加入体积为E=C/0.01的MES缓冲液充分溶解混匀；
（5）向步骤3中旋转混匀完成的EP管内加入步骤4配制好的EDC溶液0.02mL/管，涡旋混匀后在温度为25℃的条件下旋转混匀30min；
（6）将步骤5的EP管放入离心机， 在转速为18000 r/min、温度为4℃的条件下离心10min，离心去掉没有偶联上的抗体或多于的胶乳，用移液器吸去上清；
（7）向步骤6离心完成后的EP管中依次加入灭菌注射水0.8mL/管和PH为7.4 的500mMMOPS 0.1mL/管，缓冲液重悬偶联上抗体的胶乳，用移液器反复吹吸EP管内液体，使沉淀分散，直至无肉眼可见沉淀；
（8）接着向步骤7的EP管中依次加入乙醇胺2.5μL/管和20%BSA溶液0.1mL/管，封闭胶乳微球上没有结合上抗体的结合位点，然后涡旋混匀；再用超声仪超声30min左右直至液体透光；
（9）将步骤8中的液体在温度为25℃的条件下旋转混匀2.5h后放入离心机，在转速为18000 r/min，温度为４℃的条件下离心45min，离心完成后用移液器吸去上清；
（10）向步骤9中的EP管依次加入0.325mL/管灭菌注射水和PH为7.4 的500mM MOPS0.05mL/管，然后用移液器反复吹吸EP管内液体，使沉淀分散，直至无肉眼可见沉淀；
（11）然后向步骤10中的EP管内依次加入20%BSA溶液0.5mL/管、0.9%的NACL溶液0.5mL/管和10% Tween-20溶液0.025mL/管，缓冲液重悬封闭完成的胶乳微球，得到偶联上抗体的胶乳微球，再用超声仪超声25min左右直至液体透光，进而完成偶联，偶联完成后的胶乳微球浓度为2%；
（12）将步骤11中的液体依次加入10%的甘露醇和5%的蔗糖，使用冻干机低温程序冻干成球状的白色珠子，最终得到试剂珠，让试剂珠装试剂盘备用。
2.根据权利要求1所述的定量测定猫血清淀粉样蛋白A的胶乳免疫比浊检测试剂盒，其特征在于：步骤2中，先将胶乳微球与PH为6.0的MES缓冲液充分混合均匀，胶乳微球与MES缓冲液的比例为1：3.75。
3.根据权利要求1所述的定量测定猫血清淀粉样蛋白A的胶乳免疫比浊检测试剂盒，其特征在于：步骤3中，取浓度为2.4mg/ml的f－SAA抗体0.5mg加入步骤2中，涡旋混匀后 25℃旋转混匀30min，胶乳微球、MES缓冲液和f－SAA抗体的比例为10：37.5：10.4。
4.根据权利要求1所述的定量测定猫血清淀粉样蛋白A的胶乳免疫比浊检测试剂盒，其特征在于：步骤5中，加入EDC后30min内开始活化胶乳微球和偶联抗体，并同时进行。
5.根据权利要求1所述的定量测定猫血清淀粉样蛋白A的胶乳免疫比浊检测试剂盒，其特征在于：所述猫血清淀粉样蛋白A校准品和质控品采用如下方法制备：
用80%含BSA的Tris-HCL缓冲液和20%的马血清混合后分别稀释猫血清淀粉样蛋白A校准品，制成浓度分别为200μg/ml、100μg/ml、50μg/ml、12.5μg/ml和6.25μg/ml的猫血清淀粉样蛋白A校准品和浓度为70μg/ml、10μg/ml的猫血清淀粉样蛋白A质控品，使用冻干机冻干然后4℃保存待用；所述含BSA的Tris-HCL缓冲液中，BSA为1%、海藻糖为2.5%、CHAPS为0.05%、曲拉通为0.05%、KV300为0.1%、Tris-HCL为PH7.4 50mM。
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