CN110916015A - 一种提高草鱼抗氧化应激能力的添加剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种提高草鱼抗氧化应激能力的添加剂，包括以下重量份的原料：小麦次粉20～40份、玉米蛋白粉20～32份、骨粉8～15份、富硒酵母12～20份、几丁聚糖6～14份、谷胱甘肽4～9份、2‑硫代咪唑氨基酸3～6份、白藜芦醇3～6份、黄酮类化合物6～12份、维生素P 10～20份、中药中药预混4～11份、植物乳杆菌3～5份、胶红酵母1～2份。本发明通过采用胶红酵母制备能够抗氧化应激的活性成分，促进生长的营养成分，能够增强草鱼自身的免疫能力，提高抗氧化应激能力和抗病能力，并同时提高饲料利用率，降低水质污染，促进草鱼的健康生长。

Description

一种提高草鱼抗氧化应激能力的添加剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种提高草鱼抗氧化应激能力的添加剂及其制备方法，属于饲料添加剂技术领域。

背景技术

肝脏是鱼类物质和能量代谢的主要器官，也是机体重要的屏障器官，其解毒和吞噬功能对机体具有保护作用。肝损伤或病变往往导致机体代谢机能紊乱和抗病力降低，极易造成继发传染性疾病的爆发，肝脏疾病在多种鱼类中频繁发生，病因复杂，但共同点为均伴随着严重的氧化应激。水环境中多种胁迫因子如氨氮、亚硝酸盐、有机毒物、重金属等可引起氧化应激，导致鱼类肝损伤发生。因此，氧化应激被认为是鱼类多种肝损伤疾病的共同诱发因素。

我国的水产养殖业发展迅速，水产养殖总量多年来稳居全世界第一。在所有养殖鱼类中，草鱼的养殖产量位居第一位。养殖过程中，集约化高密度的养殖、大量残余的饵料等导致养殖水质恶化，引起氧化应激，病害频发，因此，为降低养殖风险、提升水产品质量，饲料添加剂愈来愈被人们所重视。目前市面上草鱼应用的较为广泛的饲料添加剂多为营养性添加剂，使用效果不佳，为此，寻求一种提高草鱼抗氧化应激能力的添加剂，以增强草鱼自身的免疫能力是一种可行的方法。

发明内容

针对上述现有技术存在的问题，本发明提供一种提高草鱼抗氧化应激能力的添加剂，能够增强草鱼自身的免疫能力，提高抗氧化应激能力和抗病能力，同时提高饲料利用率，降低水质污染，促进草鱼的健康生长。本发明的另一个目的通过采用胶红酵母制备能够抗氧化应激的活性成分，促进生长的营养成分。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：一种提高草鱼抗氧化应激能力的添加剂，包括以下重量份的原料：小麦次粉20～40份、玉米蛋白粉20～32份、骨粉8～15份、富硒酵母12～20份、几丁聚糖6～14份、谷胱甘肽4～9份、2-硫代咪唑氨基酸3～6份、白藜芦醇3～6份、黄酮类化合物6～12份、维生素P10～20份、中药中药预混4～11份、植物乳杆菌3～5份、胶红酵母1～2份；所述中药预混料包括以下重量配比的组分：桑叶25～45％、黄耆20～30％、柴胡12～35％、白术10～25％、五味子8～24％、铁皮石斛6～15％。

优选地，小麦次粉28份、玉米蛋白粉24份、骨粉11份、富硒酵母17份、几丁聚糖10份、谷胱甘肽4.5份、2-硫代咪唑氨基酸4份、白藜芦醇5份、黄酮类化合物10份、维生素P16份、中药中药预混料9份、植物乳杆菌4.2份、胶红酵母1.55份。

优选地，所述黄酮类化合物包括以下重量配比的组分：葛根素25～40％、黄岑素13～35％、补骨脂乙素12～26％、槲皮素8～20％、银杏素7～23％。

优选地，所述黄酮类化合物包括以下重量配比的组分：葛根素30％、黄岑素25％、补骨脂乙素14％、槲皮素16％、银杏素15％。

选地，所述中药预混料包括以下重量配比的组分：桑叶27％、黄耆16％、柴胡22％、白术15％、五味子13％、铁皮石斛7％。

优选地，所述植物乳杆菌保藏于中国工业微生物菌种保藏中心，保藏号为CICC21790；所述胶红酵母保藏于中国工业微生物菌种保藏中心，保藏号为CICC 31029。

本发明还提供了一种提高草鱼抗氧化应激能力的添加剂的制备方法，包括以下步骤：

S1：将所述桑叶、黄耆、柴胡、白术、五味子、铁皮石斛置于粉碎机中粉碎至50～80目，混合均匀，得到中药预混料，备用；

S2：将斜面保藏的所述胶红酵母接入灭菌后冷却的液体培养基中，置于培养箱中培养，培养温度为50℃，摇床转速80-140rpm，培养时间为24h，制备成胶红酵母种子液，备用；

S3：将所述小麦次粉、玉米蛋白粉、骨粉混合后置于已灭菌的发酵罐中，添加入水、富硒酵母、几丁聚糖、谷胱甘肽、白藜芦醇，搅拌混匀后，添加上述步骤S2中得到的胶红酵母种子液进行无菌有氧发酵，转速为150～250rpm，发酵温度为45～50℃，发酵时间为48～72h，发酵结束后过滤，得到发酵液、发酵渣；

S4：将上述步骤S1中得到的中药预混料平铺在已灭菌的发酵盘，平铺厚度为3～4cm，倒入将上述步骤S3中得到的发酵液，再在发酵盘上覆盖已灭菌的湿纱布，在送入已灭菌的发酵室内进行发酵，室内环境温度为为45～50℃，发酵时间36～48h，得到固态发酵物；

S5：将上述步骤S1中得到的发酵渣和上述步骤S4中得到的固态发酵物置于搅拌机，添加所述植物乳杆菌、2-硫代咪唑氨基酸、黄酮类化合物、维生素P进行混合，得到混合生物料；

S6：将上述步骤S5中得到的混合生物料置入膨化机中进行膨化造粒，随后冷风干燥，得到添加剂。

优选地，所述步骤S1的液体培养基的组分：牛肉膏0.3g/100ml，蛋白胨1g/100ml，NaCl 0.5g/100ml，琼脂15g/100ml，pH值为7～7.2。

优选地，在所述步骤S6中，冷风温度为5～10℃，风速为4～6m/s。

本发明的有益效果：

1、本发明以小麦次粉、玉米蛋白粉、骨粉为载体，诱导草鱼的捕食，经草鱼吸收后可为肝细胞提供多种氨基酸、多肽等营养成分，有利于草鱼吸收转化，从而提高饲料的利用率，降低水质污染，促进草鱼的健康生长；选用谷胱甘肽、富硒酵、维生素P、2-硫代咪唑氨基酸、白藜芦醇、黄酮类化合物具有显著的抗氧化剂效果，提高抗氧化应激能力，清除草鱼体内的过量氧化自由基，对干细胞具有良好的活化和保护作用，调节草鱼免疫力的作用；选用白藜芦醇可以激活乙酰化酶，增加酵母菌的寿命，具有抗菌、抗氧化、免疫调节功能，从而延长草鱼的寿命，提高草鱼的存活率；选用几丁聚糖能够与草鱼体内的细胞组织具有较好的亲和性，可以诱导免疫细胞的分化修复受伤细胞、加强自身的稳定性，从而强化草鱼肝脏机能，增强草鱼自身的免疫力。

2、本发明选用以葛根素、黄岑素、补骨脂乙素、槲皮素、银杏素混合的黄酮类化合物，提高草鱼机体的非特异免疫功能和体液免疫功能，增强草鱼机体健康。

3、本发明以桑叶、黄耆、柴胡、白术、五味子、铁皮石斛作为中药预混料，具有良好的生理活性、协同增效作用，能够清除草鱼体能过多的自由基，增强机体对非特异性刺激的防御能力，有效恢复草鱼肝脏损伤，提高肝脏功能，促进草鱼自身的免疫力，进而提高抗氧化应激能力和抗病能力；桑叶富含黄酮类、生物碱、γ-氨基丁酸、槲皮素、酚类化合物、维生素C等多种活性成分，能够防止草鱼的氧化损伤，提高草鱼体内超氧化物歧化酶的活性，具有抗菌、解毒的作用；黄耆富含胆碱、豆香素、叶酸、氨基、铁、钙、磷及硒、锌、铜、锰等多种微量，能够防止草鱼的肝糖减少，对肝脏有保护作用；铁皮石斛能够促进草鱼腺体分泌、脏器运动，增强机制免疫力；柴胡、白术、五味子药性温和，具有护肝作用。

4、本发明添加植物乳杆菌，有助于草鱼消化吸收，促进草鱼生长，提高草鱼肉质。

5、本发明通过采用胶红酵母进行发酵，发酵过程中产生的虾青素、胡萝卜素、丙酮酸、蛋白酶、淀粉酶、维生素B等活性成分，能够清除草鱼内过多的氧化自由基和抑制自由基的产生，有效提高草鱼抗氧化应激能力；发酵物中含有丰富的氨基酸、类胡萝卜素等，能够改善草鱼生长；胶红酵母具有抗金黄色葡萄球菌，提高草鱼抗肠道病毒能力，从而提高抗病能力；同时和中药预混料进行发酵，对免疫系统具有协同作用，防病促生长，还降低发酵成本。

6、本发明采用冷风干燥，避免活性成分的失活。

具体实施方式

下面用具体实施例说明本发明，但并不是对发明的限制。

所述植物乳杆菌保藏于中国工业微生物菌种保藏中心，保藏号为CICC21790；所述胶红酵母保藏于中国工业微生物菌种保藏中心，保藏号为CICC31029。

所述液体培养基的组分：牛肉膏0.3g/100ml，蛋白胨1g/100ml，NaCl0.5g/100ml，琼脂15g/100ml，pH值为7～7.2。

实施例1

一种提高草鱼抗氧化应激能力的添加剂，包括以下重量份的原料：小麦次粉20份、玉米蛋白粉20份、骨粉8份、富硒酵母12份、几丁聚糖6份、谷胱甘肽4份、2-硫代咪唑氨基酸3份、白藜芦醇3份、黄酮类化合物6份、维生素P10份、中药中药预混4份、植物乳杆菌3份、胶红酵母1份；中药预混料包括以下重量配比的组分：桑叶27％、黄耆16％、柴胡22％、白术15％、五味子13％、铁皮石斛7％。

其中，所述黄酮类化合物包括以下重量配比的组分：葛根素30％、黄岑素25％、补骨脂乙素14％、槲皮素16％、银杏素15％。

制备方法：

S1：将所述桑叶、黄耆、柴胡、白术、五味子、铁皮石斛置于粉碎机中粉碎至50～80目，混合均匀，得到中药预混料，备用；

S2：将斜面保藏的所述胶红酵母接入灭菌后冷却的液体培养基中，置于培养箱中培养，培养温度为50℃，摇床转速80-140rpm，培养时间为24h，制备成胶红酵母种子液，备用；

S3：将所述小麦次粉、玉米蛋白粉、骨粉混合后置于已灭菌的发酵罐中，添加入水、富硒酵母、几丁聚糖、谷胱甘肽、白藜芦醇，搅拌混匀后，添加上述步骤S2中得到的胶红酵母种子液进行无菌有氧发酵，转速为150～250rpm，发酵温度为45～50℃，发酵时间为48～72h，发酵结束后过滤，得到发酵液、发酵渣；

S4：将上述步骤S1中得到的中药预混料平铺在已灭菌的发酵盘，平铺厚度为3～4cm，倒入将上述步骤S3中得到的发酵液，再在发酵盘上覆盖已灭菌的湿纱布，在送入已灭菌的发酵室内进行发酵，室内环境温度为为45～50℃，发酵时间36～48h，得到固态发酵物；

S5：将上述步骤S1中得到的发酵渣和上述步骤S4中得到的固态发酵物置于搅拌机，添加所述植物乳杆菌、2-硫代咪唑氨基酸、黄酮类化合物、维生素P进行混合，得到混合生物料；

S6：将上述步骤S5中得到的混合生物料置入膨化机中进行膨化造粒，随后冷风干燥，冷风温度为5～10℃，风速为4～6m/s，得到添加剂。

实施例2

本实施例与实施例1的不同在于，原料的重量份不同：

一种提高草鱼抗氧化应激能力的添加剂，包括以下重量份的原料：小麦次粉28份、玉米蛋白粉24份、骨粉11份、富硒酵母17份、几丁聚糖10份、谷胱甘肽4.5份、2-硫代咪唑氨基酸4份、白藜芦醇5份、黄酮类化合物10份、维生素P16份、中药中药预混料9份、植物乳杆菌4.2份、胶红酵母1.55份。

实施例3

本实施例与实施例1的不同在于，原料的重量份不同：

一种提高草鱼抗氧化应激能力的添加剂，包括以下重量份的原料：小麦次粉40份、玉米蛋白粉32份、骨粉15份、富硒酵母20份、几丁聚糖14份、谷胱甘肽9份、2-硫代咪唑氨基酸6份、白藜芦醇6份、黄酮类化合物12份、维生素P 20份、中药中药预混11份、植物乳杆菌5份、胶红酵母2份。

实施例4

本实施例与实施例2的不同在于，黄酮类化合物的组分重量配比不同：

所述黄酮类化合物包括以下重量配比的组分：葛根素28％、黄岑素22％、补骨脂乙素17％、槲皮素15％、银杏素18％。

实施例5

本实施例与实施例2的不同在于，中药预混料的组分重量配比不同：

所述中药预混料包括以下重量配比的组分：桑叶33％、黄耆25％、柴胡15％、白术12％、五味子8％、铁皮石斛7％。

对比例1

本对比例与实施例2的不同在于，黄酮类化合物的组分及重量配比不同：

所述黄酮类化合物包括以下重量配比的组分：黄岑素35％、补骨脂乙素25％、槲皮素18％、银杏素33％。

对比例2

本对比例与实施例2的不同在于，中药预混料的组分及重量配比不同：

所述中药预混料包括以下重量配比的组分：桑叶33％、柴胡25％、白术12％、五味子18％、铁皮石斛12％。

对比例3

本对比例与实施例2的不同在于，发酵种菌不同：

小麦次粉20份、玉米蛋白粉20份、骨粉8份、富硒酵母12份、几丁聚糖6份、谷胱甘肽4份、2-硫代咪唑氨基酸3份、白藜芦醇3份、黄酮类化合物6份、维生素P10份、中药中药预混4份、植物乳杆菌3份、枯草芽孢杆菌1份。所述枯草芽孢杆菌保藏于中国工业微生物菌种保藏中心，保藏号为CICC21794。

对比例4

本对比例与实施例2的不同在于，膨化后的颗粒采用热风干燥：

热风温度为55～65℃。

效果实施例

日常饲料选用市场常规草鱼饲料，选用健康、大小均匀的草鱼(100±2g)900条，分成9组，对应投喂实施例1～实施例5、对比例1～对比例3制备的添加剂，1kg日常饲料分别添加为草鱼重量的6～8％的添加剂，另外一组为对照组，不投喂添加剂，每天投喂三次(8:30、14:00、19:30)，连续喂养14d，测定每组草鱼的存活率，草鱼血清中的谷丙转氨酶、溶菌酶、超氧化歧化酶，草鱼肝脏中的超氧化歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶，测试结果如下表。

从上表结果可以看出，投喂本发明制备的添加剂，草鱼的抗氧化应激能力增强，草鱼免疫力明显提高，草鱼存活率提高。投喂本发明实施例1～实施例5制备的草鱼血清中的谷丙转氨酶活力显著下降，氧化应激减小，血清中的溶菌酶、超氧化物歧化酶活力，免疫功能增加，草鱼肝脏中的超氧化物歧化酶、过氧化氢酶活力、谷胱甘肽过氧化物酶活力提高，草鱼抗氧化应激能力增强，自身免疫力增加，提高提高抗病能力；其中，实施例2的试验效果最好，其次是实施例1、实施例3，再之是实施例4、实施例5。

最后应说明的是，以上实施例仅用以说明而非限制本发明的技术方案，尽管参照上述实施例对本发明进行了详细说明，本领域技术人员应当理解，依然可以对本发明进行修改或者等同替换，而不脱离本发明的精神和范围的任何修改或局部替换，其均应涵盖在本发明的权利要求范围中。

Claims (9)

1.一种提高草鱼抗氧化应激能力的添加剂，其特征在于，包括以下重量份的原料：小麦次粉20～40份、玉米蛋白粉20～32份、骨粉8～15份、富硒酵母12～20份、几丁聚糖6～14份、谷胱甘肽4～9份、2-硫代咪唑氨基酸3～6份、白藜芦醇3～6份、黄酮类化合物6～12份、维生素P10～20份、中药中药预混4～11份、植物乳杆菌3～5份、胶红酵母1～2份；所述中药预混料包括以下重量配比的组分：桑叶25～45％、黄耆20～30％、柴胡12～35％、白术10～25％、五味子8～24％、铁皮石斛6～15％。

2.根据权利要求1所述的一种提高草鱼抗氧化应激能力的添加剂，其特征在于，小麦次粉28份、玉米蛋白粉24份、骨粉11份、富硒酵母17份、几丁聚糖10份、谷胱甘肽4.5份、2-硫代咪唑氨基酸4份、白藜芦醇5份、黄酮类化合物10份、维生素P16份、中药中药预混料9份、植物乳杆菌4.2份、胶红酵母1.55份。

3.根据权利要求1所述的一种提高草鱼抗氧化应激能力的添加剂，其特征在于，所述黄酮类化合物包括以下重量配比的组分：葛根素25～40％、黄岑素13～35％、补骨脂乙素12～26％、槲皮素8～20％、银杏素7～23％。

4.根据权利要求3所述的一种提高草鱼抗氧化应激能力的添加剂，其特征在于，所述黄酮类化合物包括以下重量配比的组分：葛根素30％、黄岑素25％、补骨脂乙素14％、槲皮素16％、银杏素15％。

5.根据权利要求1所述的一种提高草鱼抗氧化应激能力的添加剂，其特征在于，所述中药预混料包括以下重量配比的组分：桑叶27％、黄耆16％、柴胡22％、白术15％、五味子13％、铁皮石斛7％。

6.根据权利要求1所述的一种提高草鱼抗氧化应激能力的添加剂，其特征在于，所述植物乳杆菌保藏于中国工业微生物菌种保藏中心，保藏号为CICC21790；所述胶红酵母保藏于中国工业微生物菌种保藏中心，保藏号为CICC31029。

7.一种用于权利要求1所述的提高草鱼抗氧化应激能力的添加剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1：将所述桑叶、黄耆、柴胡、白术、五味子、铁皮石斛置于粉碎机中粉碎至50～80目，混合均匀，得到中药预混料，备用；

S2：将斜面保藏的所述胶红酵母接入灭菌后冷却的液体培养基中，置于培养箱中培养，培养温度为50℃，摇床转速80-140rpm，培养时间为24h，制备成胶红酵母种子液，备用；

S3：将所述小麦次粉、玉米蛋白粉、骨粉混合后置于已灭菌的发酵罐中，添加入水、富硒酵母、几丁聚糖、谷胱甘肽、白藜芦醇，搅拌混匀后，添加上述步骤S2中得到的胶红酵母种子液进行无菌有氧发酵，转速为150～250rpm，发酵温度为45～50℃，发酵时间为48～72h，发酵结束后过滤，得到发酵液、发酵渣；

S4：将上述步骤S1中得到的中药预混料平铺在已灭菌的发酵盘，平铺厚度为3～4cm，倒入将上述步骤S3中得到的发酵液，再在发酵盘上覆盖已灭菌的湿纱布，在送入已灭菌的发酵室内进行发酵，室内环境温度为为45～50℃，发酵时间36～48h，得到固态发酵物；

S5：将上述步骤S1中得到的发酵渣和上述步骤S4中得到的固态发酵物置于搅拌机，添加所述植物乳杆菌、2-硫代咪唑氨基酸、黄酮类化合物、维生素P进行混合，得到混合生物料；

S6：将上述步骤S5中得到的混合生物料置入膨化机中进行膨化造粒，随后冷风干燥，得到添加剂。

8.根据权利要求7所述的一种提高草鱼抗氧化应激能力的添加剂的制备方法，其特征在于，所述步骤S1的液体培养基的组分：牛肉膏0.3g/100ml，蛋白胨1g/100ml，NaCl 0.5g/100ml，琼脂15g/100ml，pH值为7～7.2。

9.根据权利要求7所述的一种提高草鱼抗氧化应激能力的添加剂的制备方法，其特征在于，在所述步骤S6中，冷风温度为5～10℃，风速为4～6m/s。