CN109247455A - 淡水鱼用保肝护肝免疫增强颗粒剂及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明属于水产养殖领域，尤其涉及一种淡水鱼用保肝护肝免疫增强颗粒剂及其制备方法，一种淡水鱼用保肝护肝免疫增强颗粒剂，由以下原料组成：柠檬酸、乳酸、磷酸、芽孢杆菌发酵复合中药、膨润土、胆汁酸、小麦次粉，其中各原料重量份数为：柠檬酸5‑10份、乳酸5‑10份、磷酸5‑10份、芽孢杆菌发酵复合中药5‑15份、膨润土10‑30份、胆汁酸5‑10份、小麦次粉5‑15份；本发明通过多种原料经过简单工艺的制备，饲喂本免疫增强颗粒剂可增强鱼类的免疫力，提高血清抗氧化酶、免疫酶活性，减少发病率，提高成活率。

Description

淡水鱼用保肝护肝免疫增强颗粒剂及其制备方法
技术领域
本发明属于水产养殖领域，尤其涉及一种淡水鱼用保肝护肝免疫增强颗粒剂及其制备方法。
背景技术
伴随集约化水产养殖模式的发展，养殖鱼类疾病呈多发现象，其中肝胰脏是最易受损器官。肝胰脏是鱼类最重要的消化、解毒、免疫器官，参与体内的消化、代谢、排泄、解毒免疫等多种功能。特别是来自消化系统吸收的物质，几乎皆由肝胰脏分泌消化酶消化和进行解毒，因此水产动物肝胰脏最易受病毒、病原菌、药物或营养因素等导致损伤。肝胰脏损伤严重的水产动物表现为：肝胰脏成弥散状，触之易碎，解剖后水产动物肝胰脏明显肿大，肝色逐渐变黄发白，或呈斑块状，黄红白相间，形成明显的“脂肪肝”、“土肝”、“花肝”、“绿肝”、“死肝”等症状。疾病后期鱼类腹水严重，肝损伤后期水产动物体色偏黑，色泽晦暗，眼球充血、凸出、鳍条、鳃及腹部充血发红，肛门充血红肿；有的水产动物体表有局部的颜色发白或皮肤溃烂，尤其以鳍条末端腐烂表现明显，体形浮肿、肥胖，鳞片松动易脱落，游动不规则，失去平衡，或静止于水中，失去食欲，反应呆滞，呼吸困难，甚至昏迷翻转，不久便死亡。
肝胰脏损伤的形成，使水产动物的营养代谢失调，造成饵料系数增大；且造成水产动物的免疫系统功能紊乱，抗病能力下降，更容易暴发大规模的传染性疾病。水产养殖动物一旦形成肝胰脏损伤，其毛细血管就容易破裂，血液难以凝固，一旦受到应激性刺激(如拉网、运输、水温突变、水质不良等)将发生应激性出血综合症，死亡率可高达40％～50％，给生产造成巨大损失。因此迫切需要发明一种复合型保肝护肝制剂并转化应用，减少鱼类肝胰脏损伤引起的损失。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术点不足，避免水产养殖鱼类肝胰脏受损，而提供了一种淡水鱼用保肝护肝免疫增强颗粒剂及其制备方法，本发明通过多种原料经过简单工艺的制备，饲喂本免疫增强颗粒剂可增强鱼类的免疫力，提高血清抗氧化酶、免疫酶活性，减少发病率，提高成活率。
本发明的目的是通过如下措施来实现的：一种淡水鱼用保肝护肝免疫增强颗粒剂，由以下原料组成：柠檬酸、乳酸、磷酸、芽孢杆菌发酵复合中药、膨润土、胆汁酸、小麦次粉，其中各原料重量份数为：柠檬酸5-10份、乳酸5-10份、磷酸5-10份、芽孢杆菌发酵复合中药5-15份、膨润土10-30份、胆汁酸5-10份、小麦次粉5-15份。
优选的，柠檬酸8份、乳酸8份、磷酸8份、芽孢杆菌发酵复合中药10份、膨润土20份、胆汁酸8份、小麦次粉10份。
优选的，所述芽孢杆菌发酵复合中药的制备方法为：
a：按照重量百分数，将茵陈15%-23%、大黄15%-23%、连翘15%-23%、柴胡15%-23%、郁金7%-13%、栀子7%-13%，粉碎至60目，混合均匀，得复合中药；
b：向a步骤的复合中药中添加枯草芽孢杆菌菌液、红糖，复合中药、枯草芽孢杆菌菌液、红糖混合的重量比为：3:1:1，复合中药、枯草芽孢杆菌菌液、红糖混合均匀在30℃下静置发酵10天，得粉状芽孢杆菌发酵复合中药。
上述的淡水鱼用保肝护肝免疫增强颗粒剂的制备方法，包括如下步骤：
（1）备料：称取柠檬酸5-10份、乳酸5-10份、磷酸5-10份、芽孢杆菌发酵复合中药5-15份、膨润土10-30份、胆汁酸5-10份、小麦次粉5-15份，备用；
（2）混合、制粒：将步骤（1）备好的柠檬酸、乳酸、磷酸、芽孢杆菌发酵复合中药、膨润土、胆汁酸、小麦次粉混合均匀，利用鱼用饲料颗粒机挤压制成直径为0.2-0.5cm颗粒，即得成品。
各组分的生理功能：
胆汁酸是肠道的一个重要的化学屏障，当水产动物发生细菌性疾病时，常常施用抗生素防治疾病，细菌被抗生素杀灭后会产生大量的内毒素；肠道是机体最大的内毒素池，内毒素可引起肠道粘膜水肿，肠绒毛顶部细胞坏死，肠通透性增加，从而破坏肠粘膜屏障功能，在肠粘膜屏障遭到破坏时，内毒素可通过肠粘膜屏障经门静脉计入肝脏，危害鱼体健康；胆汁酸对内毒素是一个重要的化学屏障：肠道内的胆汁酸可通过与内毒素的结合而阻止其从肠道吸收入门静脉；胆汁酸为去污剂，已证明两者在体外对内毒素脂多糖具有直接作用，而且胆汁酸可在肠道内改变大肠杆菌内毒素，使其不再引起裂物凝聚，其机制可能为将内毒素分解成无毒性的亚单位或形成微聚物；因此胆汁酸可以减少内毒素对肠道、肝脏乃至整个鱼体的危害。
胆汁酸抑制肠道细菌的过度增殖，维护肠道微生态环境：胆汁酸的缺失将会引发细菌在动物肠道内过度生长，从而与宿主竞争营养，导致宿主对营养的吸收障碍；由于胆汁酸的表面活性剂活性，脱氧胆汁酸可以破坏细菌的细胞膜，使细胞完整性受损，进而抑制菌的生长，甚至造成细菌死亡；外源补充胆汁酸增加了胆汁分泌，使肠肝循环中胆汁池容量增加，肝脏胆汁酸分泌速度恢复至正常水平，使肠腔内结合胆汁酸的浓度提高，肠腔内结合胆汁酸对小肠内细菌的抑制作用增强，从而抑制肠道细菌过度生长，降低细菌移位和内毒素血症的发生率。
合理使用胆汁酸，能有效促进脂肪的乳化、消化和吸收；促进胆汁分泌，保肝利胆，改善肝脏的健康状况和功能；促进动物摄食，提高饲料效率，降低饲料成本，从而改善动物的生产性能。添加胆汁酸可以提高鱼类高超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）和谷胱甘肽还原酶（GR）的活性，清除体内过多的氧自由基，提高机体的抗应激能力。
复合酸化剂生理功能，此处的复合酸化剂即柠檬酸、乳酸、磷酸，酸化剂对鱼类的主要作用包括提高饲料的适口性，增加摄食量，降低饲料pH值，刺激肠道和肝胰脏分泌更多的消化酶，提高消化酶活性，提高饲料转化率，促进鱼类生长，抑制肠道有害微生物，促进部分矿物元素吸收，作为营养物质直接被机体吸收等功能；由柠檬酸、乳酸和磷酸配伍组成复合酸化剂，能够使不同酸化剂的生理功能互相补充、相互协同，具有全面高效的生理功能。
复合中药成分功能及芽孢杆菌发酵提高生理效用：中草药作为绿色药品, 毒副作用小、无残留、病原体不易产生抗药性。其作用机理是中草药能够防治疾病主要是通过调整阴阳和扶正祛邪，多糖、甙类、生物碱等活性物质，可通过调动和激发机体抗病因素，提高器官组织功能，增强细胞免疫而发挥抗病毒感染效果调动和激发机体抗病因素，提高器官组织功能，增强抵御病菌侵袭的能力，增强白细胞及单核巨噬细胞对病原体的吞噬和消化能力，诱生干扰素，增强溶菌酶活力、酚氧化酶活力，促进机体非特异免疫机能。同时，有些中草药本身就具有抗菌能力。本发明所选中药中大黄、连翘、柴胡、郁金、连翘等具有清热解毒类中草药对嗜水气单胞菌、温和气单胞菌、假单胞菌、屈挠杆菌、弧菌等有抑制或杀灭作用，同时可激发机体免疫细胞生长，提高抗氧化酶活性，从而改善肝胰脏功能，起到保肝护肝作用。而且，复合中药的生理作用远大于单一中草药效用。
所选复合中药对肝脏的保护作用归结有以下几种作用机理：直接清除自由基、提高抗氧化物酶的活性和降低脂质过氧化物水平，调节免疫功能。
质膜损害是肝细胞受损的最基本表现，生物体内，自由基作用于脂质发生过氧化反应的产物丙二醛（MDA），可严重损伤肝细胞膜结构，导致肿胀、坏死性。中草药可保护肝细胞膜，增加肝细胞膜的稳，促进肝细胞内蛋白合成。
复合中药可提高血清超氧化物歧化酶（SOD）活性、红细胞过氧化氢酶活性（CAT）。可降低机体血液丙二醛（MDA）含量，降低血清谷丙胺酸氨基转移酶（ALT）活性、血清谷草转氨酶活性、血清碱性磷酸酶（AKP）、酸性磷酸酶活性（ACP），具有显著的抗肝损伤作用。
鱼类肝胰脏正常的血液循环对维持肝胰脏正常的生理功能有十分重要的意义。复合中药主要通过降低血清谷丙转氨酶活性、降低血清总胆红素水平、升高血清蛋白等改善肝脏的生理功能。促进肝细胞的再生是改善肝脏功能。
T淋巴细胞介导的特异性免疫应答是造成免疫性肝损伤的重要机制，复合中药能够调节T和B淋巴细胞增殖能力，起到调整细胞免疫功能的作用。
更重要的是本发明把复合中药接种芽孢杆菌发酵，中药的植物细胞壁的阻碍其生理作用发挥，使其大量有效成分难以释放出来，导致其药效慢，使用剂量大。本发明接种芽孢杆菌中草药来提高其药效；芽孢杆菌在发酵中草药的过程中能产生大量消化酶，可提高药效，同时中草药的某些成分可能对芽孢杆菌的生长和代谢有促进或抑制作用，从而改变芽孢杆菌的代谢途径，进而形成新的成分；而中草药通过芽孢杆菌的发酵，可能将中草药中的有毒物质进行分解，从而降低中草药的毒副作用。
膨润土生理功能：膨润土主要成分为蒙脱石，富含多种矿物元素是鱼类各种代谢和骨骼生长所需要的，饲喂膨润土可补充微量元素，促进鱼类代谢，提高生长率，增加抗病力；膨润土有多孔空间结构，具有良好的吸附性和离子交换能力，可快速絮凝水体中的悬浮有机物，去除水体重金属，降低水中含氮有机物氨氮、亚硝酸盐的含量，改善水体溶氧状况，防止鱼类“浮头”，改善鱼类生活环境。
小麦次粉作为能量物质，饲喂鱼类可以增加能量，同时也具有粘结性好，在颗粒制粒中常作为粘合剂使用，本颗粒制剂选用做粘合剂，方便制粒投喂。
上述成分混合均匀施用饲料颗粒机制成颗粒大小直径为2mm～5mm的长圆柱型颗粒，以方便直接应用自动投饵机投喂，因此本发明组方和制备方法不但具有综合性的保肝护肝的生理功能，也具有较好的使用便利性。
本发明的有益效果是：本发明所制备的淡水鱼用保肝护肝免疫增强颗粒剂，提高血清抗氧化酶、免疫酶活性，保证谷丙转氨酶、谷草转氨酶、总蛋白、白蛋白、球蛋白、白蛋白/球蛋白以及总胆红素、胆固醇在合理范围内，改善肝脏功能，保证肝脏解毒，可提高饲喂鱼类的免疫力，减少发病率，提高成活率；可改善提高肝胰脏消化酶活性，促进消化吸收，降低饵鱼类料系数，促进鱼类生长，增加经济效益。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1：一种淡水鱼用保肝护肝免疫增强颗粒剂，由以下原料组成：柠檬酸、乳酸、磷酸、芽孢杆菌发酵复合中药、膨润土、胆汁酸、小麦次粉，其中各原料重量为：柠檬酸5Kg、乳酸5 Kg、磷酸5 Kg、芽孢杆菌发酵复合中药5 Kg份、膨润土10 Kg、胆汁酸5 Kg、小麦次粉5 Kg。
芽孢杆菌发酵复合中药的制备方法为：
a：按照重量百分数，将茵陈23%、大黄19%、连翘15%、柴胡23%、郁金7%、栀子13%，粉碎至60目，混合均匀，得复合中药；
b：向a步骤的复合中药中添加枯草芽孢杆菌菌液、红糖，复合中药、枯草芽孢杆菌菌液、红糖混合的重量比为：3:1:1，复合中药、枯草芽孢杆菌菌液、红糖混合均匀在30℃下静置发酵10天，得粉状芽孢杆菌发酵复合中药。
上述的淡水鱼用保肝护肝免疫增强颗粒剂的制备方法，包括如下步骤：
（1）备料：称取柠檬酸5 Kg、乳酸5 Kg、磷酸5 Kg、芽孢杆菌发酵复合中药5 Kg份、膨润土10 Kg、胆汁酸5 Kg、小麦次粉5 Kg，备用；
（2）混合、制粒：将步骤（1）备好的柠檬酸、乳酸、磷酸、芽孢杆菌发酵复合中药、膨润土、胆汁酸、小麦次粉混合均匀，利用鱼用饲料颗粒机挤压制成直径为0.2cm颗粒，即得成品。
实施例2：一种淡水鱼用保肝护肝免疫增强颗粒剂，由以下原料组成：柠檬酸、乳酸、磷酸、芽孢杆菌发酵复合中药、膨润土、胆汁酸、小麦次粉，其中各原料重量为：柠檬酸10Kg、乳酸10 Kg、磷酸10 Kg、芽孢杆菌发酵复合中药15 Kg、膨润土30 Kg、胆汁酸10 Kg、小麦次粉15 Kg。
芽孢杆菌发酵复合中药的制备方法为：
a：按照重量百分数，将茵陈15%、大黄17%、连翘23%、柴胡20%、郁金12%、栀子13%，粉碎至60目，混合均匀，得复合中药；
b：向a步骤的复合中药中添加枯草芽孢杆菌菌液、红糖，复合中药、枯草芽孢杆菌菌液、红糖混合的重量比为：3:1:1，复合中药、枯草芽孢杆菌菌液、红糖混合均匀在30℃下静置发酵10天，得粉状芽孢杆菌发酵复合中药。
上述的淡水鱼用保肝护肝免疫增强颗粒剂的制备方法，包括如下步骤：
（1）备料：称取柠檬酸10 Kg、乳酸10 Kg、磷酸10 Kg、芽孢杆菌发酵复合中药15 Kg、膨润土30 Kg、胆汁酸10 Kg、小麦次粉15 Kg，备用；
（2）混合、制粒：将步骤（1）备好的柠檬酸、乳酸、磷酸、芽孢杆菌发酵复合中药、膨润土、胆汁酸、小麦次粉混合均匀，利用鱼用饲料颗粒机挤压制成直径为0.5cm颗粒，即得成品。
实施例3：一种淡水鱼用保肝护肝免疫增强颗粒剂，由以下原料组成：柠檬酸、乳酸、磷酸、芽孢杆菌发酵复合中药、膨润土、胆汁酸、小麦次粉，其中各原料重量为：柠檬酸8Kg、乳酸8 Kg、磷酸8 Kg、芽孢杆菌发酵复合中药10 Kg、膨润土20 Kg、胆汁酸8 Kg、小麦次粉10 Kg。
芽孢杆菌发酵复合中药的制备方法为：
a：按照重量百分数，将茵陈18%、大黄22%、连翘20%、柴胡15%、郁金13%、栀子12%，粉碎至60目，混合均匀，得复合中药；
b：向a步骤的复合中药中添加枯草芽孢杆菌菌液、红糖，复合中药、枯草芽孢杆菌菌液、红糖混合的重量比为：3:1:1，复合中药、枯草芽孢杆菌菌液、红糖混合均匀在30℃下静置发酵10天，得粉状芽孢杆菌发酵复合中药。
上述的淡水鱼用保肝护肝免疫增强颗粒剂的制备方法，包括如下步骤：
（1）备料：称取柠檬酸8 Kg、乳酸8 Kg、磷酸8 Kg、芽孢杆菌发酵复合中药10 Kg、膨润土20 Kg、胆汁酸8 Kg、小麦次粉10 Kg，备用；
（2）混合、制粒：将步骤（1）备好的柠檬酸、乳酸、磷酸、芽孢杆菌发酵复合中药、膨润土、胆汁酸、小麦次粉混合均匀，利用鱼用饲料颗粒机挤压制成直径为0.3cm颗粒，即得成品。
实施例4：一种淡水鱼用保肝护肝免疫增强颗粒剂，由以下原料组成：柠檬酸、乳酸、磷酸、芽孢杆菌发酵复合中药、膨润土、胆汁酸、小麦次粉，其中各原料重量为：柠檬酸6Kg、乳酸9 Kg、磷酸8 Kg、芽孢杆菌发酵复合中药15 Kg、膨润土11 Kg、胆汁酸5 Kg、小麦次粉13Kg。
芽孢杆菌发酵复合中药的制备方法为：
a：按照重量百分数，将茵陈15%、大黄23%、连翘17%、柴胡22%、郁金11%、栀子12%，粉碎至60目，混合均匀，得复合中药；
b：向a步骤的复合中药中添加枯草芽孢杆菌菌液、红糖，复合中药、枯草芽孢杆菌菌液、红糖混合的重量比为：3:1:1，复合中药、枯草芽孢杆菌菌液、红糖混合均匀在30℃下静置发酵10天，得粉状芽孢杆菌发酵复合中药。
上述的淡水鱼用保肝护肝免疫增强颗粒剂的制备方法，包括如下步骤：
（1）备料：称取柠檬酸6 Kg、乳酸9 Kg、磷酸8 Kg、芽孢杆菌发酵复合中药15 Kg、膨润土11 Kg、胆汁酸5 Kg、小麦次粉13Kg，备用；
（2）混合、制粒：将步骤（1）备好的柠檬酸、乳酸、磷酸、芽孢杆菌发酵复合中药、膨润土、胆汁酸、小麦次粉混合均匀，利用鱼用饲料颗粒机挤压制成直径为0.4cm颗粒，即得成品。
开封水稻乡养殖户，池塘10亩，养殖品种草鱼，草鱼个体体重500克，检测水体理化指标氨氮0.15mg/l、亚硝酸盐0.1mg/l，溶氧5 mg/l，常规指标皆在正常范围，草鱼由零星死亡，每天5至10尾，逐渐发展死亡较多，每日死亡20尾以上，但草鱼体表症状无明显细菌性或寄生虫性疾病，解剖观察内脏可见肝胰脏色泽不均，有黄色斑块、白色树枝状条纹，部分区域有胆汁返流形成的蓝色组织，肝胰脏脆性增加，胆囊肿胀，诊断为肝胆综合征。处理方案：全池遍洒聚维酮碘隔天撒施，消毒2次，同时由投料机直接投喂本发明免疫增强颗粒剂，颗粒免疫增强颗粒剂投喂率为体重的2%，连续投喂5天，发现死鱼数量逐渐减少，最后停止死亡，解剖观察内脏，可见肝胰脏色泽粉红均匀，弹性好，胆囊色泽淡黄绿，不肿胀，完全控制肝胆综合征发展。
表1 按鱼体重2%投喂本发明复合颗粒制剂2周对体重50克草鱼抗氧化酶、免疫酶活性影响
表2 按鱼体重2%投喂连续饲喂本发明复合颗粒制剂2周对体重30克鲤鱼肝胰脏消化酶、肠消化酶活性影
各指标说明：
GSH－PX具有清除机体内脂质过氧化物、消除活性氧自由基对组织损伤的功能，是一种常见的活性氧自由基清除剂。
MDA 作为氧自由基攻击多不饱和脂肪酸形成的脂质过氧化物，可间接反映机体内活性氧自由基水平和脂质过氧化程度，间接反映出机体受损伤的情况。
谷丙转氨酶ALT谷丙转氨酶升高分析：说明有急性和慢性病毒性肝炎、胆囊炎或胆道疾病、病毒性肝炎、药物引起的肝脏损伤。
谷草转氨酶（AST）增高表明急性肝炎、药物中毒性肝细胞坏死等。
过氧化氢酶（CAT）在肝脏中以高浓度存在，是一种酶类清除剂，清除体内生物氧化产生的自由基，它可促使H2O2分解为分子氧和水，清除体内的过氧化氢，从而使细胞免于遭受H2O2的毒害，是生物防御体系的关键酶之一。
超氧化物歧化酶（SOD）是生物体内重要的抗氧化酶，SOD具有特殊的生理活性，是生物体内清除自由基的首要物质。SOD在生物体内的水平高低意味着衰老与死亡的直观指标；它可对抗与阻断因氧自由基对细胞造成的损害，并及时修复受损细胞。

Claims (4)

1.一种淡水鱼用保肝护肝免疫增强颗粒剂，其特征在于：由以下原料组成：柠檬酸、乳酸、磷酸、芽孢杆菌发酵复合中药、膨润土、胆汁酸、小麦次粉，其中各原料重量份数为：柠檬酸5-10份、乳酸5-10份、磷酸5-10份、芽孢杆菌发酵复合中药5-15份、膨润土10-30份、胆汁酸5-10份、小麦次粉5-15份。
2.根据权利要求1所述的淡水鱼用保肝护肝免疫增强颗粒剂，其特征在于：各原料重量份数为：柠檬酸8份、乳酸8份、磷酸8份、芽孢杆菌发酵复合中药10份、膨润土20份、胆汁酸8份、小麦次粉10份。
3.根据权利要求1或2所述的淡水鱼用保肝护肝免疫增强颗粒剂，其特征在于：所述芽孢杆菌发酵复合中药的制备方法为：
a：按照重量百分数，将茵陈15%-23%、大黄15%-23%、连翘15%-23%、柴胡15%-23%、郁金7%-13%、栀子7%-13%，粉碎至60目，混合均匀，得复合中药；
b：向a步骤的复合中药中添加枯草芽孢杆菌菌液、红糖，复合中药、枯草芽孢杆菌菌液、红糖混合的重量比为：3:1:1，复合中药、枯草芽孢杆菌菌液、红糖混合均匀在30℃下静置发酵10天，得粉状芽孢杆菌发酵复合中药。
4.制备一种如权利要求1所述的淡水鱼用保肝护肝免疫增强颗粒剂的方法，其特征在于：包括如下步骤：
（1）备料：称取柠檬酸5-10份、乳酸5-10份、磷酸5-10份、芽孢杆菌发酵复合中药5-15份、膨润土10-30份、胆汁酸5-10份、小麦次粉5-15份，备用；
（2）混合、制粒：将步骤（1）备好的柠檬酸、乳酸、磷酸、芽孢杆菌发酵复合中药、膨润土、胆汁酸、小麦次粉混合均匀，利用鱼用饲料颗粒机挤压制成直径为0.2-0.5cm颗粒，即得成品。
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