CN110892989B - 一种具有缓解便秘功能的副干酪乳杆菌et-22 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种具有缓解便秘功能的副干酪乳杆菌ET‑22。本发明提供一种含乳酸菌菌株的组合物，其包含：副干酪乳酸杆菌(Lactobacillus paracasei)ET‑22菌株，保藏于中国普通微生物菌种保藏中心，保藏编号为CGMCC No.15077；以及赋形剂、稀释剂和/或载体，其中所述组合物为食品组合物、药物组合物或保健品组合物。本发明的副干酪乳杆菌益生菌可以提高肠道推进率，缩短肠道运转时间，从而起到缓解便秘的作用。
Description
技术领域
本发明属于益生菌制品领域。具体而言，本发明涉及一种副干酪乳杆菌和含有所述副干酪乳杆菌的组合物。本发明的副干酪乳杆菌益生菌可以提高肠道推进率，缩短肠道运转时间，从而起到缓解便秘的作用。
背景技术
随着现代人们生活方式的改变，饮食习惯差异、工作压力、环境影响以及抗生素的使用等，导致人体肠道菌群失调，继而引发一系列疾病，例如便秘。美国2011年流行病学调查结果显示，便秘在全世界的平均发病率为16％，其中中国20-30％人口受便秘困扰。且便秘患者通常同时伴有焦虑、抑郁等负面情绪，影响患者生活。而便秘由于个体差异，其治疗方法也多以西药泻剂居多，但是长期服用泻剂会导致消费者引起腹胀、维生素吸收困难、药物依赖性等负面作用。
近年来，益生菌的调节作用日益受到重视。益生菌是指摄入充足数量可以对宿主产生健康益处的活的微生物。益生菌可以在肠道粘膜中的黏附，产生细菌素等可有效抑制有害菌生长繁殖，从而改善肠道菌群结构以及减缓酚类物质堆积危害。
发明内容
发明人进行了深入研究，发现一种副干酪乳杆菌单菌即具有提高肠道推进率、缩短排便时间的作用，从而完成了本发明。
在一些实施方案中，本发明提供副干酪乳酸杆菌(Lactobacillus paracasei)ET-22菌株，保藏编号CGMCC No.15077，保藏于中国典型培养物保藏中心以及中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。
在一些实施方案中，本发明提供一种培养物，其包所述的副干酪乳酸杆菌(Lactobacillus paracasei)ET-22菌株。在一些实施方案中，所述培养物还可以包括适当的乳酸菌培养基，包括固体培养基和液体培养基，例如MRS培养基。在一些实施方案中，所述培养物包括副干酪乳酸杆菌(Lactobacillus paracasei)ET-22菌株的冷冻干燥培养物。
在一些实施方案中，本发明提供一种含乳酸菌菌株的组合物，其包含：
副干酪乳酸杆菌(Lactobacillus paracasei)ET-22菌株，保藏于中国普通微生物菌种保藏中心，保藏编号为CGMCC No.15077；以及赋形剂、稀释剂和/或载体，其中所述组合物为食品组合物、药物组合物或保健品组合物。
在一些实施方案中，所述组合物为用于1)提高肠道推进率，2)缩短排便时间和/或3)缓解便秘的组合物。
在一些实施方案中，所述组合物可以为适合使用的任何组合物形式，例如可以为食品(包括饮料)组合物、药物组合物或保健品组合物。在一些实施方案中，所述食品组合物、药物组合物或保健品组合物为口服组合物，例如用于提高肠道推进率，缩短排便时间和/或缓解便秘的食品组合物、药物组合物或保健品组合物。在一些实施方案中，含有本发明乳酸菌菌株的组合物具有提高肠道推进率，缩短排便时间和/或缓解便秘的作用，且以食品、保健品或药物组合物的形式存在。
在一些实施方案中，所述组合物可以为食品组合物，并且所述食品没有特别限制，可以为任何适当食品，包括例如乳制品、脂肪制品、饮料(冷饮、酒精饮料、碳酸饮料、乳饮料、果汁饮料、茶、咖啡、营养饮料等)、调味品、水果、蔬菜、豆类、食用菌、藻类、坚果、可可制品、糖果、粮食制品、焙烤食品、肉制品、水产品、和蛋制品等。
在一些实施方案中，所述组合物可以为药物组合物，包括例如用于缓解便秘的组合物。
在一些实施方案中，所述组合物可以为保健品组合物，包括例如特定保健功能组合物、营养功能组合物、功能标识组合物、和浓缩营养品组合物。
在一些实施方案中，特定保健功能组合物是含有影响生理功能成分的组合物，可以适用于特定保健用途进行标识。营养功能组合物是指用于补充营养成分的组合物，其可以标识营养成分。功能标识组合物是标识了具有科学依据的相关功能性的组合物。
在一些实施方案中，本发明的组合物可以制备为非药物(如食品、保健品)或药物。在一些实施方案中，本发明的组合物包括任何适当剂型的药物。例如，适用于悬浮剂、乳胶剂、糖浆剂等口服剂型。
本实施方式的药物组合物中，可以自由选择含有一种或两种以上赋形剂、稀释剂和/或载体，包括例如药学上可接受的添加剂等。在一些实施方案中，赋形剂、稀释剂和/或载体包括例如乳化剂、着色剂、调味剂、香料、稳定剂、增溶剂、悬浮剂等。
在一些实施方案中，该乳酸菌菌株为具有活性的菌株。在本文中，益生菌可以指使用活的微生物，其能够添加到组合物如食品(如牛奶、乳酪)、药品(如胶囊、片剂、丸剂、粉剂等)等中，保持活性并且对摄取含有所述益生菌的组合物的对象发挥其生理学作用。在一些实施方案中，本发明的菌株可以作为益生菌添加到组合物中。
在一些实施方案中，本发明提供副干酪乳酸杆菌(Lactobacillus paracasei)ET-22菌株用于制备组合物的用途，所述组合物用于1)提高肠道推进率，2)缩短排便时间和/或3)缓解便秘。在一些实施方案中，所述组合物为食品组合物、药物组合物或保健品组合物。在一些实施方案中，所述组合物为口服组合物。
在一些实施方案中，所述组合物含乳酸菌菌株的数量没有特别限制，只要其能够发挥相应调节功能即可。在一些实施方案中，所述乳酸菌菌株数量可以为102CFU以上，例如103CFU以上，104CFU以上，105CFU以上，106CFU以上，107CFU以上，108CFU以上，109CFU以上，1010以上，1011CFU以上，或更高。
在一些实施方案中，已经发现副干酪乳酸杆菌(Lactobacillus paracasei)ET-22菌株与不含所述菌株的对照相比具有优异的提高肠道推进率，缩短排便时间和/或缓解便秘的作用。在一些实施方案中，副干酪乳酸杆菌ET-22菌株与不含所述菌株的对照相比具备提高肠道推进率和/或缩短排便时间的作用，由此可以用于例如缓解便秘。在一些实施方案中，副干酪乳酸杆菌ET-22菌株与不含所述菌株的对照相比能够提高肠道推进率(例如提高10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％或更多倍)和/或缩短排便时间(例如缩短10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或更多)。在一些实施方案中，副干酪乳酸杆菌(Lactobacillus paracasei)ET-22菌株可以制备用于提高肠道推进率，缩短排便时间和/或缓解便秘的组合物和/或试剂盒。在一些实施方案中，所述提高肠道推进率，缩短排便时间和/或缓解便秘的组合物和/或试剂盒还可以包括其它适当的提高肠道推进率，缩短排便时间和/或缓解便秘的物质。
在一些实施方案中，本发明提供制备组合物如食品组合物、药物组合物或保健品组合物的方法，所述方法包括将副干酪乳酸杆菌(Lactobacillus paracasei)ET-22菌株加入到组合物中。
本发明提供的菌株可以用于缓解便秘，包括：
(1)提高肠道推进率；
(2)提高小鼠首粒排黑便时间；
附图说明
图1.副干酪乳杆菌ET-22对小肠墨汁推进率(％)的影响
图2.副干酪乳杆菌ET-22对首次排黑便时间(min)的影响
图3.副干酪乳杆菌ET-22对排便粒数的影响
图4.副干酪乳杆菌ET-22对排便重量的影响
【生物材料保藏】
本发明的副干酪乳酸杆菌(Lactobacillus paracasei)ET-22菌株保藏于：
中国典型培养物保藏中心/中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏日期为2017年12月18日、保藏编号CGMCC No.15077；该保藏单位的地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。
具体实施方式
除非另外专门定义，本文使用的所有技术和科学术语都与相关领域普通技术人员的通常理解具有相同的含义。
本发明所述的乳酸菌菌株的冷冻干燥培养物已保藏于中国典型培养物保藏中心以及中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。保藏的详细资料如下表所示：
乳酸菌菌株的保藏资料
| 菌株名 | 分类 | 保藏编号 | 保藏日期 |
| ET-22 | 副干酪乳酸杆菌 | CGMCC 15077 | 2017年12月18日 |
乳酸菌菌株的形态学以及一般性质
根据16S rDNA序列分析以及API细菌鉴定系统分析结果来确认菌株在分类学上的特征。上述菌株在形态学及一般性质上的特征详细列于下表：
乳酸菌菌株的形态学及一般性质特征
本菌株的发酵条件为：
MRS液体培养基：蛋白胨，10.0g；牛肉膏，10.0g；酵母浸粉，5.0g；葡萄糖，20.0g；磷酸氢二钾，5.0g；柠檬酸氢二铵，2.0g；乙酸钠，5.0g；七水合硫酸镁，0.5g；四水合硫酸锰，0.2g；吐温80，1.0g；琼脂15.0g；蒸馏水1000mL。调整pH至6.2～6.4之间，121℃灭菌15分钟。
L.paracasei ET-22为微好氧菌，兼性厌氧环境生长较佳，产乳酸，具有耐酸性，可耐受pH值2.5的酸性环境及耐0.4％的胆盐环境4小时，嗜中温菌，生长温度范围在15～45℃，最适生长温度在37℃左右。
实施例1：小肠运动试验
238只健康SPF级BABL/c小鼠，体重18-20g，由北京华阜康生物科技有限责任公司提供。饲养于中国疾病预防控制中心动物房：维持室温(25±2)℃，相对湿度(55±2)％，12h/12h光照/黑暗环境，自由进食和饮水。按照体重，利用随机数字，分为17组，每组14只，使用苦味酸编号，普通饲料常规饲养，分组安排如表1所示。
表1分组安排
适应性喂养3天后开始正式实验。用苦味酸对小鼠进行分组编号后，分别于给予受试物第0周、第1周、第2周、第3周、第4周称重，计算小鼠灌胃量。以灌胃的方式给予受试样品，每天灌胃一次，灌胃体积20mL/kg，对照组与模型组灌胃给予PBS，干预时间30天。
墨汁的配制：准确称取阿拉伯树胶100g，加水800mL，煮沸至溶液透明，称取活性炭(粉状)50g加至上述溶液中煮沸三次，待溶液冷却加水定容至1000mL，于4℃冰箱中保存，用前摇匀。盐酸洛哌丁胺混悬液配制：取盐酸洛哌丁胺(剂量：2mg/粒)20粒，加水至100mL配制浓度为0.04％的溶液，临用前配制。样品的配制：以墨汁作为溶剂，分别配制活菌不同剂量的溶液，临用前配制，低温保存。
受试物干预30天后，各组小鼠禁食不禁水16小时。实验前对小鼠进行称重，依据体重给予模型组与各干预组盐酸洛哌丁胺溶液，对照组给予蒸馏水，剂量为20mL/kg，建立模型。给予蒸馏水及盐酸洛哌丁胺30分钟后，各干预组分别给予含相应剂量活菌的墨汁，对照组及模型组给予墨汁灌胃。
给予墨汁25分钟后立即脱颈处死小鼠，打开腹腔分离肠系膜，剪取上端至幽门，下端至回盲部的肠管，置于托盘上，轻轻将小肠拉成直线，测量肠管长度为“小肠总长度”，从幽门至墨汁前沿为“墨汁推进长度”。
在实验期内，动物表征正常，精神及活动状况良好，每日给予受试物后未出现任何不良反应。由表2体重数据可以看出，实验周期内，各组动物体重并未出现显著差异。与对照组比较，模型组小鼠墨汁推进率显著低于对照组(p＜0.05)，说明成功小鼠小肠蠕动一致模型。
由图1可知，与模型组比较，ET-22益生菌各实验组组小鼠的墨汁推进率均显著高于模型对照组(p＜0.05)，实验结果阳性，表明ET-22副干酪乳杆菌可促进小鼠肠道运动。
表2ET-22副干酪乳杆菌对小鼠体重的影响(g)
实施例2：小鼠小肠推进率与首粒排黑便时间的测定
238只健康BABL/c小鼠，体重18-20g，饲养于SPF级动物房：维持室温(25±2)℃，相对湿度(55±2)％，12h/12h光照/黑暗环境，自由进食和饮水。按照体重，利用随机数字，分为17组，每组14只，使用苦味酸编号，普通饲料常规饲养，分组安排如表1所示。适应性喂养3天后开始正式实验。
使用苦味酸对小鼠进行分组编号后，分别于给予受试物第0周、第1周、第2周、第3周、第4周称重，计算小鼠灌胃量。以灌胃的方式给予受试样品，每天灌胃一次，灌胃体积20mL/kg，对照组与模型组灌胃给予PBS，干预时间30天。
墨汁的配制：准确称取阿拉伯树胶100g，加水800mL，煮沸至溶液透明，称取活性炭(粉状)50g加至上述溶液中煮沸三次，待溶液冷却加水定容至1000mL，于4℃冰箱中保存，用前摇匀。盐酸洛哌丁胺混悬液配制：取盐酸洛哌丁胺(剂量：2mg/粒)20粒，加水至100mL配制浓度为0.04％的溶液，临用前配制。样品的配制：以墨汁作为溶剂，分别配制活菌不同剂量的溶液，临用前配制，低温保存。
实验前，小鼠称重，依据体重给予模型组与各干预组盐酸洛哌丁胺溶液，对照组给予蒸馏水，剂量为20mL/kg，建立模型。给予蒸馏水及盐酸洛哌丁胺30分钟后，各干预组分别给予含相应剂量活菌的墨汁，对照组及模型组给予墨汁灌胃。给予墨汁后，动物单笼饲养，正常饮水进食。从灌墨汁开始计时，记录每只动物首粒黑便时间，5小时内黑便粒数及重量。
对照组和模型组在排首粒黑便时间、排便粒数、排便重量间差异有统计学意义(p<0.05)，对照组排首粒黑便时间短于模型组、排便粒数多于模型组、排便重量大于模型组，说明小鼠便秘模型成立。如图2-图4所示，模型组比较，ET-22实验组小鼠排黑便时间具有下降趋势；ET-22可以缩短排便时间，增加小鼠排黑便粒数和重量。
肠道运动情况可以由小肠推进率与首粒排黑便时间来反应。其中小肠推进率是指一定时间内，食物在小肠内运转的长度占小肠总长度的比例，反应小肠的运动能力。而首粒排黑便时间代表的是食物从消化道进入肛门排出的整个时间，反映了整个肠道的整体运动能力。在测定小鼠小肠推进率与首次排黑便时间时，需要对对照组与干预组小鼠进行急性造模，得到肠道蠕动抑制模型。由上述试验结果可知，模型组与对照组(空白组)相比，小肠推进率显著降低，首粒排黑便时间显著延长，说明造模成功。根据图1可知，副干酪乳杆菌ET-22组小肠推进率显著高于模型组，缩短了模型组与空白组的差距，说明副干酪乳杆菌ET-22可以改善小肠运转，提高小肠运动能力情况。根据图2-图4可知，副干酪乳杆菌ET-22干预，首粒排黑便时间较模型组有下降的趋势，其中1010大幅缩小了模型组与空白组之间排便粒数和排便重量的差距，表明副干酪乳杆菌ET-22可以改善肠道转运作用。
以上研究结果证实：副干酪乳杆菌ET-22可以提高小肠运动能力，缩短排便时间。本发明提供的菌株，可以用于食品，如发酵乳、乳酪、含乳饮料、乳粉或其它含有该菌株及其衍生物的任何一种食品。
除非另有说明，本说明书(包括权利要求书)中使用的所有表示成分、细胞培养、处理条件等的量的数字应当理解为在所有条件下受到术语“约”的修饰。因此，除非另有相反的说明，数值参数为近似值，并且可以根据通过本发明试图获得的期望特性而变化。除非另有说明，一系列元素之前的术语“至少”应当理解为指该系列中的每个元素。本领域技术人员会认识到或者能够利用不超过常规实验确定本文所述的本发明的具体实施方案的许多等同物。所附权利要求书意图涵盖这类等同物。
本领域技术人员会清楚，可以进行本发明的许多修改和变化而不背离其精神和范围。本文所述的具体实施方案仅通过实例的方式提供，并不意味着以任何方式限制。本发明的真正范围和精神通过所附权利要求书示出，说明书和实施例仅是示例性的。
Claims (28)
1.一种含乳酸菌菌株的组合物，其包含：
副干酪乳酸杆菌(Lactobacillus paracasei)ET-22菌株，保藏于中国普通微生物菌种保藏中心，保藏编号为CGMCC No.15077；以及赋形剂、稀释剂和/或载体，其中所述组合物为食品组合物、药物组合物或保健品组合物，其中所述组合物含乳酸菌菌株的数量为102CFU以上。
2.如权利要求1所述的含乳酸菌菌株的组合物，其中所述组合物为用于1)提高肠道推进率，2)缩短排便时间和/或3)缓解便秘的组合物。
3.如权利要求1或2所述的含乳酸菌菌株的组合物，其中所述组合物为食品组合物，其中所述食品组合物包括乳制品、脂肪制品、饮料、水果、蔬菜、豆类、食用菌、藻类、坚果、可可制品、糖果、粮食制品、焙烤食品、肉制品、水产品、调味品、和蛋制品。
4.如权利要求1或2所述的含乳酸菌菌株的组合物，其中所述组合物为药物组合物，其中所述药物组合物包括用于缓解便秘的药物组合物。
5.如权利要求1或2所述的含乳酸菌菌株的组合物，其中所述组合物为保健品组合物，其中所述保健品组合物包括营养功能组合物、功能标识组合物、和浓缩营养品组合物。
6.如权利要求1或2所述的含乳酸菌菌株的组合物，其中该乳酸菌菌株为具有活性的菌株。
7.权利要求1或2所述的含乳酸菌菌株的组合物，其中所述组合物为口服组合物。
8.权利要求1或2所述的含乳酸菌菌株的组合物，其中所述组合物含乳酸菌菌株的数量为103CFU以上。
9.权利要求1或2所述的含乳酸菌菌株的组合物，其中所述组合物含乳酸菌菌株的数量为104CFU以上。
10.权利要求1或2所述的含乳酸菌菌株的组合物，其中所述组合物含乳酸菌菌株的数量为105CFU以上。
11.权利要求1或2所述的含乳酸菌菌株的组合物，其中所述组合物含乳酸菌菌株的数量为106CFU以上。
12.权利要求1或2所述的含乳酸菌菌株的组合物，其中所述组合物含乳酸菌菌株的数量为107CFU以上。
13.权利要求1或2所述的含乳酸菌菌株的组合物，其中所述组合物含乳酸菌菌株的数量为108CFU以上。
14.权利要求1或2所述的含乳酸菌菌株的组合物，其中所述组合物含乳酸菌菌株的数量为109CFU以上。
15.权利要求1或2所述的含乳酸菌菌株的组合物，其中所述组合物含乳酸菌菌株的数量为1010以上。
16.权利要求1或2所述的含乳酸菌菌株的组合物，其中所述组合物含乳酸菌菌株的数量为1011CFU以上。
17.副干酪乳酸杆菌(Lactobacillus paracasei)ET-22菌株用于制备组合物的用途，所述组合物用于1)提高肠道推进率，2)缩短排便时间和/或3)缓解便秘，其中所述组合物含乳酸菌菌株的数量为102CFU以上。
18.权利要求17所述的用途，所述组合物为食品组合物、药物组合物或保健品组合物。
19.权利要求17或18所述的用途，其中所述组合物为口服组合物。
20.权利要求17或18所述的用途，其中所述组合物含乳酸菌菌株的数量为103CFU以上。
21.权利要求17或18所述的用途，其中所述组合物含乳酸菌菌株的数量为104CFU以上。
22.权利要求17或18所述的用途，其中所述组合物含乳酸菌菌株的数量为105CFU以上。
23.权利要求17或18所述的用途，其中所述组合物含乳酸菌菌株的数量为106CFU以上。
24.权利要求17或18所述的用途，其中所述组合物含乳酸菌菌株的数量为107CFU以上。
25.权利要求17或18所述的用途，其中所述组合物含乳酸菌菌株的数量为108CFU以上。
26.权利要求17或18所述的用途，其中所述组合物含乳酸菌菌株的数量为109CFU以上。
27.权利要求17或18所述的用途，其中所述组合物含乳酸菌菌株的数量为1010以上。
28.权利要求17或18所述的用途，其中所述组合物含乳酸菌菌株的数量为1011CFU以上。
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