CN110882383A - 一种阳离子脂质体-鱼精蛋白-mRNA肿瘤疫苗及其制备方法和应用方法 - Google Patents
一种阳离子脂质体-鱼精蛋白-mRNA肿瘤疫苗及其制备方法和应用方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN110882383A CN110882383A CN201911174287.9A CN201911174287A CN110882383A CN 110882383 A CN110882383 A CN 110882383A CN 201911174287 A CN201911174287 A CN 201911174287A CN 110882383 A CN110882383 A CN 110882383A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- mrna
- protamine
- cationic liposome
- tumor
- tumor vaccine
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 title claims abstract description 86
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 title claims abstract description 80
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims abstract description 73
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 30
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title abstract description 11
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 claims abstract description 56
- 229940048914 protamine Drugs 0.000 claims abstract description 44
- 239000002502 liposome Substances 0.000 claims abstract description 42
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 28
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 28
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 28
- 102000007327 Protamines Human genes 0.000 claims abstract description 26
- 108010007568 Protamines Proteins 0.000 claims abstract description 26
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims abstract description 13
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 12
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims abstract description 9
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 claims abstract description 6
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 claims abstract description 5
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 claims abstract description 5
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 claims abstract description 5
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 claims abstract description 5
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 claims abstract description 5
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 33
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 24
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 18
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 102000018317 Keratin-19 Human genes 0.000 claims description 16
- 108010066302 Keratin-19 Proteins 0.000 claims description 16
- 230000003053 immunization Effects 0.000 claims description 14
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 14
- 238000002649 immunization Methods 0.000 claims description 13
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 12
- 230000036571 hydration Effects 0.000 claims description 12
- 238000006703 hydration reaction Methods 0.000 claims description 12
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical group P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 claims description 10
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 10
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims description 10
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 10
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 claims description 9
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 claims description 9
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 claims description 9
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 claims description 9
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 claims description 8
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 8
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 claims description 7
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 7
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- PSLWZOIUBRXAQW-UHFFFAOYSA-M dimethyl(dioctadecyl)azanium;bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CCCCCCCCCCCCCCCCCC PSLWZOIUBRXAQW-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 6
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 5
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims description 5
- 238000002390 rotary evaporation Methods 0.000 claims description 5
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 claims description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- CXRFDZFCGOPDTD-UHFFFAOYSA-M Cetrimide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)C CXRFDZFCGOPDTD-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 4
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims description 4
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 4
- LDGWQMRUWMSZIU-LQDDAWAPSA-M 2,3-bis[(z)-octadec-9-enoxy]propyl-trimethylazanium;chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCCOCC(C[N+](C)(C)C)OCCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC LDGWQMRUWMSZIU-LQDDAWAPSA-M 0.000 claims description 3
- KYHYBIADZPAZKE-LQDDAWAPSA-M 2,3-bis[[(z)-octadec-9-enoyl]oxy]propyl-trimethylazanium;bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC(C[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC KYHYBIADZPAZKE-LQDDAWAPSA-M 0.000 claims description 3
- 108010022366 Carcinoembryonic Antigen Proteins 0.000 claims description 3
- 102100025475 Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 5 Human genes 0.000 claims description 3
- LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M Cetrimonium bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)C LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 3
- 101001012157 Homo sapiens Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Proteins 0.000 claims description 3
- 102100030086 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Human genes 0.000 claims description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims description 3
- 101000578784 Homo sapiens Melanoma antigen recognized by T-cells 1 Proteins 0.000 claims description 2
- 102100028389 Melanoma antigen recognized by T-cells 1 Human genes 0.000 claims description 2
- 102000000440 Melanoma-associated antigen Human genes 0.000 claims description 2
- 108050008953 Melanoma-associated antigen Proteins 0.000 claims description 2
- 101710180316 Protease 2 Proteins 0.000 claims description 2
- 102000003425 Tyrosinase Human genes 0.000 claims description 2
- 108060008724 Tyrosinase Proteins 0.000 claims description 2
- 230000005809 anti-tumor immunity Effects 0.000 claims description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 2
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 claims description 2
- 238000007865 diluting Methods 0.000 claims description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims description 2
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 claims description 2
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- XETCRXVKJHBPMK-MJSODCSWSA-N trehalose 6,6'-dimycolate Chemical compound C([C@@H]1[C@H]([C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](COC(=O)C(CCCCCCCCCCC3C(C3)CCCCCCCCCCCCCCCCCC)C(O)CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC)O2)O)O1)O)OC(=O)C(C(O)CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC)CCCCCCCCCCC1CC1CCCCCCCCCCCCCCCCCC XETCRXVKJHBPMK-MJSODCSWSA-N 0.000 claims description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims 2
- 102000015728 Mucins Human genes 0.000 claims 1
- 108010063954 Mucins Proteins 0.000 claims 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 claims 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 claims 1
- 230000011748 cell maturation Effects 0.000 claims 1
- REZZEXDLIUJMMS-UHFFFAOYSA-M dimethyldioctadecylammonium chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CCCCCCCCCCCCCCCCCC REZZEXDLIUJMMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 1
- MWRBNPKJOOWZPW-CLFAGFIQSA-N dioleoyl phosphatidylethanolamine Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC(COP(O)(=O)OCCN)OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC MWRBNPKJOOWZPW-CLFAGFIQSA-N 0.000 claims 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 210000002850 nasal mucosa Anatomy 0.000 abstract description 20
- 238000011282 treatment Methods 0.000 abstract description 11
- 230000035800 maturation Effects 0.000 abstract description 8
- 230000028327 secretion Effects 0.000 abstract description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 7
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 abstract description 6
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 abstract description 6
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 abstract description 3
- 230000005975 antitumor immune response Effects 0.000 abstract 1
- 229940126582 mRNA vaccine Drugs 0.000 description 45
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 27
- 108700021021 mRNA Vaccine Proteins 0.000 description 27
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 15
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 14
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 11
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 11
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 7
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 7
- 239000012646 vaccine adjuvant Substances 0.000 description 6
- 229940124931 vaccine adjuvant Drugs 0.000 description 6
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 5
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 5
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 5
- 239000010408 film Substances 0.000 description 5
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 5
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 5
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 5
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 4
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 4
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 4
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 4
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 4
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- GOZMBJCYMQQACI-UHFFFAOYSA-N 6,7-dimethyl-3-[[methyl-[2-[methyl-[[1-[3-(trifluoromethyl)phenyl]indol-3-yl]methyl]amino]ethyl]amino]methyl]chromen-4-one;dihydrochloride Chemical compound Cl.Cl.C=1OC2=CC(C)=C(C)C=C2C(=O)C=1CN(C)CCN(C)CC(C1=CC=CC=C11)=CN1C1=CC=CC(C(F)(F)F)=C1 GOZMBJCYMQQACI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 description 3
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 3
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 3
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 3
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 3
- 230000006870 function Effects 0.000 description 3
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 3
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 3
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 3
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 3
- 210000003563 lymphoid tissue Anatomy 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 3
- 239000013557 residual solvent Substances 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 3
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 3
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 2
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 2
- 108010041986 DNA Vaccines Proteins 0.000 description 2
- 229940021995 DNA vaccine Drugs 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 2
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 2
- 101710093543 Probable non-specific lipid-transfer protein Proteins 0.000 description 2
- 108700008625 Reporter Genes Proteins 0.000 description 2
- 230000004721 adaptive immunity Effects 0.000 description 2
- 230000030741 antigen processing and presentation Effects 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 2
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 2
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 108010048367 enhanced green fluorescent protein Proteins 0.000 description 2
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000003325 follicular Effects 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 2
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 2
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N sincalide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C1=CC=C(OS(O)(=O)=O)C=C1 IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 239000010409 thin film Substances 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JQDSSKQQSCMUJR-LQDDAWAPSA-M 2,3-bis[(z)-octadec-9-enoxy]propyl-trimethylazanium;bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCCOCC(C[N+](C)(C)C)OCCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC JQDSSKQQSCMUJR-LQDDAWAPSA-M 0.000 description 1
- LKKMLIBUAXYLOY-UHFFFAOYSA-N 3-Amino-1-methyl-5H-pyrido[4,3-b]indole Chemical compound N1C2=CC=CC=C2C2=C1C=C(N)N=C2C LKKMLIBUAXYLOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 208000031648 Body Weight Changes Diseases 0.000 description 1
- 238000011740 C57BL/6 mouse Methods 0.000 description 1
- 102400000888 Cholecystokinin-8 Human genes 0.000 description 1
- 101800005151 Cholecystokinin-8 Proteins 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 101000914484 Homo sapiens T-lymphocyte activation antigen CD80 Proteins 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 102100031413 L-dopachrome tautomerase Human genes 0.000 description 1
- 101710093778 L-dopachrome tautomerase Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 208000006552 Lewis Lung Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 206010027480 Metastatic malignant melanoma Diseases 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 108700001237 Nucleic Acid-Based Vaccines Proteins 0.000 description 1
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 1
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 108010087230 Sincalide Proteins 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 108010008038 Synthetic Vaccines Proteins 0.000 description 1
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 1
- 230000006052 T cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 102100027222 T-lymphocyte activation antigen CD80 Human genes 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 230000033289 adaptive immune response Effects 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000010009 beating Methods 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 238000007664 blowing Methods 0.000 description 1
- 230000004579 body weight change Effects 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 229920006317 cationic polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000010609 cell counting kit-8 assay Methods 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000007969 cellular immunity Effects 0.000 description 1
- 230000004700 cellular uptake Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 229940044683 chemotherapy drug Drugs 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000003501 co-culture Methods 0.000 description 1
- 238000004624 confocal microscopy Methods 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 229940029030 dendritic cell vaccine Drugs 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000010579 first pass effect Methods 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 1
- 230000008826 genomic mutation Effects 0.000 description 1
- 230000013632 homeostatic process Effects 0.000 description 1
- 230000028996 humoral immune response Effects 0.000 description 1
- 230000000887 hydrating effect Effects 0.000 description 1
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 1
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000008088 immune pathway Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000006058 immune tolerance Effects 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 230000007233 immunological mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000006054 immunological memory Effects 0.000 description 1
- 230000036046 immunoreaction Effects 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 231100000053 low toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 208000021039 metastatic melanoma Diseases 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 239000002086 nanomaterial Substances 0.000 description 1
- 239000007923 nasal drop Substances 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000956 nontoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 229940023146 nucleic acid vaccine Drugs 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 229940023041 peptide vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 239000003223 protective agent Substances 0.000 description 1
- 229940023143 protein vaccine Drugs 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 229940126583 recombinant protein vaccine Drugs 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 238000007873 sieving Methods 0.000 description 1
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 229940021747 therapeutic vaccine Drugs 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000002723 toxicity assay Methods 0.000 description 1
- 230000010474 transient expression Effects 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000005924 vaccine-induced immune response Effects 0.000 description 1
- 238000009777 vacuum freeze-drying Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
- A61K39/001184—Cancer testis antigens, e.g. SSX, BAGE, GAGE or SAGE
- A61K39/001186—MAGE
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
- A61K39/001102—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- A61K39/001103—Receptors for growth factors
- A61K39/001106—Her-2/neu/ErbB2, Her-3/ErbB3 or Her 4/ErbB4
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
- A61K39/001154—Enzymes
- A61K39/001156—Tyrosinase and tyrosinase related proteinases [TRP-1 or TRP-2]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
- A61K39/00118—Cancer antigens from embryonic or fetal origin
- A61K39/001182—Carcinoembryonic antigen [CEA]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/28—Steroids, e.g. cholesterol, bile acids or glycyrrhetinic acid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/127—Liposomes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/53—DNA (RNA) vaccination
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
- A61K2039/541—Mucosal route
- A61K2039/543—Mucosal route intranasal
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55516—Proteins; Peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/80—Vaccine for a specifically defined cancer
- A61K2039/86—Lung
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/80—Vaccine for a specifically defined cancer
- A61K2039/876—Skin, melanoma
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Oncology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Gynecology & Obstetrics (AREA)
- Pregnancy & Childbirth (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
本发明涉一种阳离子脂质体‑鱼精蛋白‑mRNA肿瘤疫苗及其制备方法和应用方法，该肿瘤疫苗是以阳离子脂质体‑鱼精蛋白复合物为 mRNA的递送载体兼佐剂，其中阳离子脂质体：鱼精蛋白：mRNA质量比5:1:1～15:2:1，最佳质量比优选为10:1:1，所构建的阳离子脂质体‑鱼精蛋白‑mRNA肿瘤疫苗的粒径是50～800nm，Zeta电位是10～60mv，包封效率为70%～95%。本发明制备的阳离子脂质体‑鱼精蛋白‑mRNA肿瘤疫苗能够有效促进APCs的抗原摄取，诱导DC刺激、成熟，促进细胞因子分泌，引起抗肿瘤免疫应答。该肿瘤疫苗通过肌内、皮下注射或鼻粘膜给药进行免疫治疗，其中鼻黏膜途径给药，可表现出更为优良的肿瘤治疗效果，在肿瘤治疗方面具有广阔的应用前景。
Description
技术领域
本发明属于纳米材料技术领域及核酸疫苗领域，特别是涉及一种阳离子脂质体-鱼精蛋白-mRNA肿瘤疫苗及其制备方法和在肿瘤治疗中的应用。
背景技术
面对癌症等威胁生命的疾病，疫苗接种是目前人类预防和治疗最有效的方法，随着肿瘤免疫疗法的深入研究，治疗性疫苗在治疗癌症以及传染性疾病方面具有巨大的潜力。蛋白、肽和DNA质粒作为传统上疫苗开发的抗原，蛋白、肽类疫苗相对容易制备并且可以大规模生产，但免疫原性弱、引起免疫应答持续时间短，抗原肽选择具有局限性。质粒DNA疫苗免疫效应低且存在不受控制的基因组突变和免疫耐受的风险，存在潜在的安全问题。mRNA 疫苗是在基因治疗基础上发展起来的一种有潜力的疫苗，在肿瘤及其传染病治疗方面具有广阔的应用前景，但mRNA 属于带负电荷的生物大分子，较难透过细胞膜进入细胞发挥作用，mRNA容易被血浆或组织酶降解，且需要佐剂辅助增强免疫应答效应。
脂质体就是一种对疫苗有很强的增效作用的佐剂，脂质体是目前应用最广泛的疫苗佐剂，最有希望成为理想疫苗佐剂的物质之一，由磷脂双分子层构成，结构类似于细胞膜，研究发现脂质体的佐剂功能与它的表面电荷密切相关。一般来说，抗原提呈细胞对正电荷脂质体的吞噬作用要强于负电荷和中性脂质体，阳离子脂质体不仅具有疫苗佐剂功能因表面正电荷能促进细胞摄取、增加抗原提呈、延长刺激细胞免疫， 同时因其具有靶向性、缓释性、低毒性及提高稳定性等特点，也是一种非常理想的疫苗纳米递送载体，因此阳离子脂质体成为一种 mRNA 疫苗的理想佐剂兼递送载体功能。
为了防止脂质体包载抗原过程中容易发生其内包裹 mRNA 抗原的丢失，且体内外容易受核酸酶的作用而影响mRNA 稳定性，需要对阳离子脂质体包载 mRNA 的效率及稳定性不断改善。鱼精蛋白是一种带正电荷无毒，具有生物可降解性的天然碱性蛋白，已被美国FDA 批准用于药用辅料，其抗原性弱，安全性好。已有研究报道富含精氨酸的聚阳离子鱼精蛋白（protamine）可将 mRNA 缩合成纳米大小的复合物，防止核酸酶对mRNA的降解作用，由于阳离子聚合物的加入,能更有效地缩合mRNA，且防止脂质体包裹mRNA过程中出现脂质体融合使其包裹的mRNA丢失，提高 mRNA 递送系统的物理和生物学稳定。
免疫途径是影响疫苗免疫应答效应的关键因素。通常情况下，肿瘤疫苗是通过肌内或皮下注射等传统给药方式进行治疗，鼻腔黏膜免疫是近年来发展的新型免疫途径，相比较传统给药方式不仅能够有效地诱导系统性免疫应答，而且可以诱导局部黏膜免疫。鼻相关淋巴组织（NALT）由滤泡相关的上皮细胞（包括M细胞）和APCs（巨噬细胞和DCs等）、大量B及T淋巴细胞组成。鼻粘膜释放避免肝脏首过效应，能有效诱导系统免疫及黏膜免疫；抗原释放周期长，可在鼻相关淋巴组织及其引流淋巴结保持更长时间的免疫记忆；鼻腔黏膜免疫操作简便，病人依从性高。因此，鼻腔黏膜免疫可成为mRNA疫苗免疫治疗的理想给药途径。
抗原提呈细胞(APCs）指能够摄取且细胞内加工处理抗原，将抗原信息提呈给Ｔ淋巴细胞的一类细胞。抗原提呈细胞又称为专职性抗原提呈细胞，包括树突状细胞、巨噬细胞以及Ｂ淋巴细胞等。树突状细胞(Dendritic cells, DC)是目前发现功能最强的抗原提呈细胞，能够同时激发初始性和获得性免疫应答。DC在免疫系统中对抗原的摄取、处理及提呈过程扮演重要角色，已成为抗病毒和抗肿瘤免疫反应的中心环节。大多数DC在体内稳态时处于未成熟状态，受到抗原刺激，所述抗原可以是蛋白质，肽和核酸，如质粒DNA或编码抗原的mRNA，能够捕获抗原发育为成熟DC, 迁移至引流淋巴结有效激发抗原特异性细胞和体液免疫应答。因此，对于新型mRNA疫苗经鼻腔黏膜免疫后，DC 捕获抗原后在引流淋巴结的分布，影响疫苗的免疫应答效果。
综上所述，构建一种阳离子脂质体-鱼精蛋白-mRNA肿瘤疫苗，探讨其形成条件及理化特性；评价该疫苗递送系统对 DCs 成熟及抗原递呈能力，以及经鼻粘膜免疫后，小鼠体内激发 T 细胞增殖及抗肿瘤效果，探讨其免疫学机制和免疫学效应，具有非常重要的意义。
发明内容
本发明的目的就在于提供一种阳离子脂质体-鱼精蛋白-mRNA肿瘤疫苗，从而克服现有传统疫苗存在的免疫原性弱、接种途径单一、病人顺应性差等缺陷，使其通过鼻黏膜免疫后能有效诱免疫应答反应。mRNA疫苗可通过利用肿瘤抗原物质诱导机体特异性免疫反应，杀伤肿瘤细胞，达到治疗肿瘤的目的。
本发明的另一目的是提供阳离子脂质体-鱼精蛋白-mRNA肿瘤疫苗的制备方法。
本发明的另一目的是提供上述供阳离子脂质体-鱼精蛋白-mRNA肿瘤疫苗的应用方法。
为实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：
一种阳离子脂质体-鱼精蛋白-mRNA肿瘤疫苗，其特征在于，该肿瘤疫苗是以阳离子脂质体-鱼精蛋白复合物为 mRNA的递送载体兼佐剂，其中阳离子脂质体：鱼精蛋白：mRNA质量比5:1:1～15:2:1，最佳质量比优选为10:1:1，所构建的阳离子脂质体-鱼精蛋白-mRNA肿瘤疫苗的粒径是50～800nm，Zeta电位是10～60mv，包封效率为70%～95%。
所述阳离子脂质体是由氯化三甲基-2, 3-二油烯氧基丙基铵（DOTMA）、溴化三甲基-2, 3-二油酰氧基丙基铵（DOTAP）、二甲基双十八烷基铵(DDA)、海藻糖二霉菌酸脂合成类似物（TDB）、溴化二甲基双十八烷基铵（DDAB）、二油酰基磷脂酰乙醇胺（DOPE）、胆固醇（Chol）、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000（DSPE-PEG2000）、溴化三甲基十四烷基铵（TTAB）、溴化三甲基十六烷基铵（CTAB)中的一种或几种组成；优选为溴化三甲基-2, 3-二油酰氧基丙基铵（TTAB）、胆固醇（Chol）和二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000（DSPE-PEG2000）的混合物，其摩尔比为1:1:0.1～1:1:1。
所述mRNA为体外转录mRNA编码肿瘤抗原，该肿瘤抗原包括肿瘤特异性抗原和肿瘤相关抗原，具体为黑色素瘤相关抗原MART-1、酪氨酸酶相关蛋白酶2(TRP2)、细胞角蛋白-19（CK19）、黏蛋白（MUC-1）、人类表皮生长因子受体2（HER-2/neu）或癌胚抗原（CEA）；优选细胞角蛋白-19（CK19）。
所述鱼精蛋白是一个小分子多肽，分子量较低，由30～50个左右氨基酸组成，是精氨酸富集的强碱性蛋白质，带正电荷、无毒，能防止脂质体包裹抗原过程中所造成其内包裹mRNA 抗原的丢失，提高 mRNA 递送系统的物理和生物学稳定。
上述阳离子脂质体-鱼精蛋白-mRNA肿瘤疫苗的制备方法，其特征是：以阳离子脂质体-鱼精蛋白复合物为递送载体兼佐剂，采用薄膜分散法、冻融法或冷冻干燥法将鱼精蛋白缩合的mRNA包载于其中。
本发明以形态、粒径、Zeta电位、包封率等特性为考察指标，对薄膜分散法制备的空白脂质体的主要影响因素：有机溶剂的种类及比例、水化介质的种类及pH、mRNA与脂质体鱼精蛋白复合物的比例、水化时间、水化温度、水化方式、超声时间进行筛选，并对其进行优化，最终得到阳离子脂质体-鱼精蛋白-mRNA疫苗的步骤包括：将阳离子脂质体先溶于有机溶剂中，减压旋转蒸发，用氮气除尽有机溶剂，然后加入水化介质，在50～70℃水浴条件下水化孵育15min～1h，得到空白脂质体；将鱼精蛋白缩合的mRNA加入到上述空白脂质体中，使其充分融合静置20～40min，即得阳离子脂质体-鱼精蛋白-mRNA肿瘤疫苗。或者：取适量体积的脂质载体溶液和鱼精蛋白水溶液，将两者混合后稀释，将 mRNA溶液逐滴加入到上述混合溶液中，mRNA浓度范围为10ng/µl~2000ng/µl，使其充分融合静置20～40min，即得阳离子脂质体-鱼精蛋白-mRNA肿瘤疫苗。
所述有机溶剂为氯仿、甲醇、四氢呋喃、丙酮、二氯甲烷、或乙醇中的一种或几种。
所述水化介质为磷酸缓冲盐溶液（PBS）或三羟甲基氨基甲烷（Tris-HCl）缓冲液，其浓度为5～30mmol/L，pH为5～9。
上述阳离子脂质体-鱼精蛋白-mRNA肿瘤疫苗通过肌内或皮下注射或鼻粘膜途径进行免疫治疗，其中鼻黏膜途免疫具有良好的肿瘤治疗效果，尤其是抑制Lewis肺癌肿瘤生长。
所述mRNA释放到细胞质中翻译成功能性蛋白质，加工为抗原肽提呈到细胞表面，促进Ｔ细胞刺激成熟, 激活抗肿瘤免疫。
本发明具有以下技术优势：
1）本发明阳离子脂质体-鱼精蛋白-mRNA肿瘤疫苗较目前多肽疫苗、重组蛋白疫苗、树突状细胞疫苗、DNA疫苗等有广泛应用前景，mRNA不会插入宿主细胞染色体中不融入基因序列中，无基因插入突变风险，安全性更高；mRNA 合成和纯化快速，简便且成本低。基于以上原因，mRNA 疫苗在肿瘤治疗领域展现了巨大的潜力，已广泛应用于前列腺癌及转移黑色素瘤等肿瘤治疗研究，正在获得更多的关注及发展。肺癌发病率和致死率在男性恶性肿瘤中已居首位，女性中肺癌的发病率也极高，且对目前临床各种治疗手段仍很不理想，尤其是化疗药具有较高的耐受性，限制了其治疗效果。因此，应用 mRNA 肿瘤疫苗治疗肺癌被认为是极具前景的治疗策略。
2）本发明以阳离子脂质体-鱼精蛋白作为疫苗佐剂和载体，尤其是以DOTAP/Chol/DSPE-PEG2000和鱼精蛋白复合物为优选研究对象，将mRNA包载于其中，制得阳离子脂质体-鱼精蛋白-mRNA肿瘤疫苗。用琼脂糖凝胶电泳阻滞实验，考察阳离子脂质体-鱼精蛋白与mRNA的相互作用，阳离子脂质体-鱼精蛋白与mRNA质量比例为5:1:1~15:2:1, 其中，阳离子脂质体-鱼精蛋白-mRNA最佳质量比优选为10:1:1。见图1。此外，用增强型绿色荧光蛋白（EGFP）为报告基因，利用激光共聚焦显微镜成像，并结合流式细胞术测定阳性细胞率及平均荧光强度，考察小鼠骨髓来源树突状细胞对不同纳米疫苗体外的摄取情况，表明阳离子脂质体-鱼精蛋白复合物可以成功将mRNA递送到BMDCs中，翻译成具有功能性的蛋白质，进而被DCs加工提呈给Ｔ细胞, 激活适应性免疫。见图3。
3）本发明以制得DOTAP/Chol/DSPE-PEG2000-鱼精蛋白-mRNA肿瘤疫苗体外的树突状细胞刺激成熟实验结果显示：DOTAP/Chol/DSPE-PEG2000脂质体鱼精蛋白mRNA疫苗能显著上调树突状细胞表面共刺激分子CD86和MHC-II的表达水平，表明DOTAP/Chol/DSPE-PEG2000脂质体鱼精蛋白mRNA疫苗能够有效促进小鼠骨髓未成熟树突状细胞的分化成熟，且检测到体外细胞因子IL-12、TNF-α、IL-6、IFN-β、IFN-γ等分泌从而表明DOTAP/Chol/DSPE-PEG2000脂质体-鱼精蛋白是一种良好的疫苗佐剂和递送系统。见图3、见图4。
4）本发明采用鼻黏膜途径给药，通常情况下，肿瘤疫苗是通过肌内或皮下注射进行治疗，限制纳米粒子的迁移，只有少部分负载抗原的纳米粒子递送到淋巴结，诱导的抗原特异性免疫应答较弱，鼻黏膜途径给药克服了现用接种途径单一，病人顺应性差等问题。动物实验结果显示，该阳离子脂质体-鱼精蛋白-mRNA肿瘤疫苗经小鼠鼻黏膜免疫后，鼻腔黏膜免疫抗原可以很快到 NALT，该淋巴组织富含滤泡相关上皮细胞（包括M 细胞）、DCs 和大量的 B 及 T 淋巴细胞，可诱导较强的肿瘤免疫杀伤效果。表明该阳离子脂质体-鱼精蛋白-mRNA肿瘤疫苗可显著提高小鼠细胞免疫应答水平；同时，表明鼻黏膜免疫是一种理想的肿瘤疫苗免疫给药途径。见图5、见图6。
综上所述，本发明制备的阳离子脂质体-鱼精蛋白-mRNA肿瘤疫苗，可作为肿瘤免疫治疗的新型肿瘤疫苗，能够刺激体外DC细胞成熟，分泌细胞因子，且稳定性较好，经小鼠鼻黏膜免疫后，该新型mRNA肿瘤疫苗能显著提高小鼠细胞免疫应答水平从而引起抗肿瘤免疫效果。
附图说明
图1为本发明DOTAP/Chol/DSPE-PEG2000-鱼精蛋白-mRNA肿瘤疫苗的递送系统构建及特性评价。其中a为模式图，b、c分别为DOTAP/Chol/DSPE-PEG2000-鱼精蛋白-mRNA肿瘤疫苗的电位图与粒径图，d、e分别为空白脂质体、DOTAP/Chol/DSPE-PEG2000-鱼精蛋白-mRNA肿瘤疫苗透射电镜图，f为用琼脂糖凝胶电泳阻滞实验测不同复合物包封mRNA质量比图。
图2为本发明不同制剂的肿瘤疫苗对DC2.4细胞体外毒性测定结果图。
图3为本发明树突状细胞对阳离子脂质体-鱼精蛋白-mRNA肿瘤疫苗摄取的激光共聚焦图（其中a为空白对照，b为鱼精蛋白-mRNA疫苗，c 为阳离子脂质体-mRNA疫苗，d 为DOTAP/Chol/DSPE-PEG2000-鱼精蛋白-mRNA疫苗），以及阳离子脂质体-鱼精蛋白-mRNA肿瘤疫苗对树突状细胞刺激成熟的流式细胞仪测定结果图。
图4为本发明阳离子脂质体-鱼精蛋白-mRNA疫苗刺激树突细胞分泌细胞因子ELISA测定结果图（与其他制剂组疫苗组进行了对比）。
图5为本发明阳离子脂质体-鱼精蛋白-mRNA疫苗在Lewis肺癌模型中的抗肿瘤效力。（a）鼻内阳离子脂质体-鱼精蛋白/ mRNA肿瘤疫苗的治疗性免疫方案。（b）每组疫苗小鼠体重变化。（c）治疗期间携带Lewis肺癌细胞的小鼠的肿瘤生长。（d）阳离子脂质体-鱼精蛋白-mRNA肿瘤疫苗对Lewis肺癌小鼠肿癌生长体积变化图像。
图6为本发明体内鼻粘膜不同接种mRNA疫苗T细胞活化的流式细胞仪测定图以及体内细胞因子分泌ELISA测定结果图。
具体实施方法
以下通过实例对本发明做进一步的阐述。但实施例所叙述的技术内容是说明性的，而不是限定性的，不应依此来局限本发明的保护范围，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
实施例1：薄膜分散法制备DDA/TDB-鱼精蛋白-（CK19）mRNA疫苗
将DDA和TDB按摩尔比为6～10:1置于50 ml圆底烧瓶中，加入1～2 ml的氯仿和甲醇溶解（氯仿：甲醇9:1），37℃恒温水浴加热下减压旋转蒸发除去有机溶剂，形成均匀的脂质薄膜，再通入2 minN2，除尽残留溶剂。然后加入5ml浓度为10 mM的Tris-HCl缓冲液（pH为6 .8～9），60℃下水化30min，得到粒径约为50～800 nm空白脂质体。然后按脂质体：鱼精蛋白：mRNA质量比为5:1:1～15:2:1，将鱼精蛋白缩合的mRNA（将鱼精蛋白加入到mRNA中缩合，静置得到）。加入到上述空白脂质体中，使其充分融合，静止20～40min，得到阳离子脂质体-鱼精蛋白-mRNA疫苗，备用。用马尔文激光粒度仪测粒径、电位。采用透射电镜（TEM）观察疫苗的形态，观察拍照。采用琼脂糖凝胶电泳阻滞实验考察质粒mRNA与载体之间的复合及所形成复合物的稳定性及包封率
实施例2：薄膜分散法制备DOTAP/Chol/DSPE-PEG200-鱼精蛋白-（CK19）mRNA疫苗
将DOTAP、Chol和DSPE-PEG2000按摩尔比为1:1:0.1～1:1:1置于50 ml圆底烧瓶中，加入1～2 ml氯仿和甲醇溶解（氯仿：甲醇9:1），水浴加热下减压旋转蒸发除去有机溶剂，形成均匀的脂质薄膜，再通入2minN2，除尽残留溶剂。随后加入5ml浓度为10 mM的Tris-HCl缓冲液（pH为5～9），60℃条件下水化30min，得到粒径约为50～800 nm空白脂质体。然后按脂质体：鱼精蛋白：mRNA质量比为5:1:1～15:2:1，将鱼精蛋白缩合的mRNA（将鱼精蛋白加入到mRNA中缩合，静置得到）加入到上述空白脂质体中，使其充分融合，静止20～40min，得到阳离子脂质体-鱼精蛋白-mRNA疫苗，备用，用马尔文激光粒度仪测粒径、电位。采用透射电镜（TEM）观察疫苗的形态，观察拍照。采用琼脂糖凝胶电泳阻滞实验考察质粒mRNA与载体之间的复合及所形成复合物的稳定性及包封率。
结果如图1所示，结果表明：可以成功构建阳离子脂质体-鱼精蛋白-mRNA肿瘤疫苗，粒径为170nm，电位为10mv。用透射电镜观察疫苗外观呈圆球形。琼脂糖凝胶电泳阻滞实验表明阳离子脂质体-鱼精蛋白-mRNA疫苗的最佳比例为10:1:1。
实施例3：冷冻干燥法制备DOTAP/Chol/DSPE-PEG200-鱼精蛋白-（CK19）mRNA疫苗
将DOTAP、Chol和DSPE-PEG2000按摩尔比为1:1:0.1～1:1:1置于50 ml圆底烧瓶中，加入1～3 ml氯仿和甲醇溶解（氯仿：甲醇9:1），水浴加热下减压旋转蒸发除去有机溶剂，形成均匀的脂质薄膜，再通入2～4minN2除尽残留溶剂。然后加入2 ml浓度为10 mM的Tris-HCl缓冲液（pH为5～9），50～70℃下水化30min～1h，得到粒径约为50～800 nm空白脂质体。然后按脂质体：鱼精蛋白：mRNA质量比为5:1:1～15:2:1，并加入浓度为2%甘露醇、蔗糖、乳糖、或海藻糖作为冻干保护剂，使其充分融合，再将其放入冰箱预冻4、8、12小时，取出后放在真空冷冻干燥机中冷冻干燥12小时，得冻干制剂，置于4℃储存备用。对冻干所得制剂进行评价。
考察实验1：考察DOTAP/Chol/DSPE-PEG200-鱼精蛋白-mRNA疫苗体外毒性
采用CCK8法检测制剂疫苗体外毒性，调整树突细胞密度接种于96孔板，分别加入不同浓度的制剂组，每一梯度做三个复孔、置37℃ 5％CO2细胞培养箱培养24小时后，通过CCK-8试剂盒考察空白阳离子脂质体、鱼精蛋白、阳离子脂质体-mRNA疫苗、鱼精蛋白-mRNA疫苗、阳离子脂质体-鱼精蛋白-（CK19）mRNA疫苗的细胞毒性。
结果如图2所示，结果表明：各组制剂的细胞毒性较低，在本研究的浓度范围内具有良好的生物安全性。
考察实验2：考察 mRNA 疫苗原代骨髓树突细胞的细胞摄取
调整树突细胞的细胞密度，分别加入DOTAP/Chol/DSPE-PEG2000阳离子脂质体-鱼精蛋白-(eGFP)mRNA 疫苗、对照组 PBS、DOTAP/Chol/DSPE-PEG2000脂质体疫苗、鱼精蛋白-(eGFP)mRNA 疫苗，置 37℃ 5％CO 2 细胞培养箱孵育 24 小时或48小时后，荧光显微镜或激光共聚焦扫描显微镜下观察报告基因 eGFP 在细胞中的瞬时表达，并拍照。用 BDAccuri C6 流式细胞仪进行流式细胞术以测量 eGFP 阳性细胞的百分率及平均荧光强度。
结果如图3所示，结果表明：阳离子脂质体-鱼精蛋白复合物可以成功将mRNA递送到BMDCs中，翻译成具有功能性的蛋白质，进而被DCs加工提呈给Ｔ细胞,，激活适应性免疫。
考察实验3：mRNA疫苗刺激诱导原代骨髓树突细胞的成熟
调整树突细胞的细胞密度，DOTAP/Chol/DSPE-PEG2000-鱼精蛋白-(CK19)mRNA疫苗、对照组 PBS、DOTAP/Chol/DSPE-PEG2000-(CK19)mRNA 疫苗、鱼精蛋白-(CK19)mRNA 疫苗，各组每孔给药，置 37℃5％CO 2 细胞培养箱共培养 24h，轻轻吹打细胞，收集细胞，清洗两次，重悬于PBS 中，加入检测抗体 CD86、MHC-II，CD80在避光条件下室温放置 20 分钟，加入 PBS，离心，弃上清液，重悬细胞，过筛，用 BDAccuri C6 流式细胞仪检测表面分子的表达情况。
实验结果如图3所示，结果表明：DOTAP/Chol/DSPE-PEG2000脂质体鱼精蛋白mRNA疫苗能显著上调树突状细胞表面共刺激分子CD86、CD86、MHC-II的表达水平，表明DOTAP/Chol/DSPE-PEG2000脂质体鱼精蛋白mRNA疫苗能够有效促进小鼠骨髓未成熟树突状细胞的分化成熟。
考察实验4：检测 mRNA 疫苗对原代骨髓树突细胞的细胞因子表达水平
调整树突细胞细胞密度，分别加入DOTAP/Chol/DSPE-PEG2000-鱼精蛋白-(CK19)mRNA、对照组PBS、DOTAP/Chol/DSPE-PEG2000-(CK19)mRNA 疫苗，鱼精蛋白-(CK19)mRNA 疫苗各组每孔给药，置 37℃ 5％CO 2 细胞培养箱共培养 24h，收集细胞上清液，通过 ELISA 方法检测上清中TNF-α、IL-12、IL-6、IL-4、IFN-β、IFN-γ等细胞因子的表达情况。
实验结果如图4所示，结果表明：体外细胞因子IL-12、TNF-α、IL-6、IFN-β、IFN-γ等分泌增加，从而表明DOTAP/Chol/DSPE-PEG2000脂质体-鱼精蛋白是一种良好的疫苗佐剂和递送系统。进一步证明，阳离子脂质体-鱼精蛋白-mRNA疫苗能够激活树突细胞，促进适应性免疫应答。
考察实验5：荷瘤小鼠治疗效果的测定分析
建立荷瘤小鼠模型，检测DOTAP/Chol/DSPE-PEG2000阳离子脂质体-鱼精蛋白-mRNA 疫苗组经鼻粘膜免疫小鼠的肿瘤生长情况和存活率。将雌性 C57BL/6小鼠随机分成 5 组，每组 6 只。将 Lewis 细胞（鼠肺癌细胞）皮下接种小鼠下腹部制备荷瘤小鼠模型。在接种瘤后的第 7 天、第 14 天、第21天分别给予 PBS组、DOTAP/Chol/DSPE-PEG2000阳离子脂质体mRNA疫苗组、鱼精蛋白-mRNA疫苗组、DOTAP/Chol/DSPE-PEG2000阳离子脂质体-鱼精蛋白mRNA疫苗组滴鼻免疫，在不同时间点记录肿瘤的大小和小鼠存活时间。
实验结果如图5所示，结果表明：阳离子脂质体-鱼精蛋白-mRNA疫苗能够抑制小鼠肿瘤生长，延长小鼠的存活时间，进一步证明阳离子脂质体-鱼精蛋白-mRNA疫苗能够通过鼻腔给药引起全身免疫应答，从而抑制肿瘤生长，对Lewis肺癌有一定的抑制作用。
考察实验6：考察疫苗治疗后荷瘤小鼠免疫细胞亚群及其细胞因子分泌
按上述考察实验4给药21天后，处死小鼠，分离脾脏、收集各组制剂脾细胞，红细胞裂解液裂解红细胞后，PBS重新悬浮，调整细胞密度，用标记流式抗体CD3、CD4、CD8标记，在4°冰箱孵育30分钟，通过流式细胞术检测CD8+Ｔ细胞、CD4+T细胞比例和细胞因子IL-4、IL-2、IFN-γ的分泌情况。
实验结果如图6所示，结果表明：阳离子脂质体-鱼精蛋白-mRNA疫苗组小鼠的脾脏CD8+Ｔ细胞、CD4+T细胞比例升高，细胞因子分泌增加，证明阳离子脂质体-鱼精蛋白-mRNA疫苗能够促进T细胞活化，引起免疫应答。
Claims (11)
1.一种阳离子脂质体-鱼精蛋白-mRNA肿瘤疫苗，其特征在于，该肿瘤疫苗是以阳离子脂质体-鱼精蛋白复合物为 mRNA的递送载体兼佐剂，其中阳离子脂质体：鱼精蛋白：mRNA质量比5:1:1～15:2:1，所构建的阳离子脂质体-鱼精蛋白-mRNA肿瘤疫苗的粒径是50～800nm，Zeta电位是10～60mv，，包封效率为70%～95%。
2.按照权利要求1所述的阳离子脂质体-鱼精蛋白-mRNA肿瘤疫苗，其特征在于阳离子脂质体-鱼精蛋白-mRNA最佳质量比优选为10:1:1。
3.按照权利要求1所述的阳离子脂质体-鱼精蛋白-mRNA肿瘤疫苗，其特征在于所述阳离子脂质体是由氯化三甲基-2, 3-二油烯氧基丙基铵、二甲基双十八烷基铵、海藻糖二霉菌酸脂合成类似物、溴化三甲基-2, 3-二油酰氧基丙基铵、溴化二甲基双十八烷基铵、二油酰基磷脂酰乙醇胺、胆固醇、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000、溴化三甲基十四烷基铵、溴化三甲基十六烷基铵中的一种或几种组成；优选为溴化三甲基-2, 3-二油酰氧基丙基铵、胆固醇和二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000的混合物，其摩尔比为1:1:0.1～1:1:1。
4.按照权利要求1所述的阳离子脂质体-鱼精蛋白-mRNA肿瘤疫苗，其特征在于所述mRNA为体外转录mRNA编码肿瘤抗原，该肿瘤抗原包括肿瘤特异性抗原和肿瘤相关抗原，具体为黑色素瘤相关抗原MART-1、酪氨酸酶相关蛋白酶2、细胞角蛋白-19、黏蛋白、人类表皮生长因子受体2或癌胚抗原；优选细胞角蛋白-19。
5.一种如权利要求1-4任意一项所述的阳离子脂质体-鱼精蛋白-mRNA肿瘤疫苗的制备方法，其特征是：以阳离子脂质体-鱼精蛋白复合物为递送载体兼佐剂，采用薄膜分散法、冻融法或冷冻干燥法将鱼精蛋白缩合的mRNA包载于其中。
6.按照权利要求5所述的阳离子脂质体-鱼精蛋白-mRNA肿瘤疫苗的制备方法，其特征在于所述薄膜分散法包括如下步骤：将阳离子脂质体先溶于有机溶剂中，减压旋转蒸发，用氮气除尽有机溶剂，然后加入水化介质，在50～70℃水浴条件下水化孵育15min～1h，得到空白脂质体；将鱼精蛋白缩合的mRNA加入到上述空白脂质体中，使其充分融合静置20～40min，即得阳离子脂质体-鱼精蛋白-mRNA肿瘤疫苗。
7.按照权利要求6所述的阳离子脂质体-鱼精蛋白-mRNA肿瘤疫苗的制备方法，其特征在于所述有机溶剂为氯仿、甲醇、四氢呋喃、丙酮、二氯甲烷、或乙醇中的一种或几种。
8.按照权利要求6所述的阳离子脂质体-鱼精蛋白-mRNA肿瘤疫苗的制备方法，其特征在于所述水化介质为磷酸缓冲盐溶液或三羟甲基氨基甲烷缓冲液，其浓度为5～30mmol/L，pH为5～9。
9.按照权利要求5所述的阳离子脂质体-鱼精蛋白-mRNA肿瘤疫苗的制备方法，其特征在于所述薄膜分散法包括如下步骤：取适量体积的脂质载体溶液和鱼精蛋白水溶液，将两者混合后稀释，将 mRNA溶液逐滴加入到上述混合溶液中，mRNA浓度范围为10ng/µl~2000ng/µl，使其充分融合静置20～40min，即得阳离子脂质体-鱼精蛋白-mRNA肿瘤疫苗。
10.一种如权利要求1-4任意一项所述的阳离子脂质体-鱼精蛋白-mRNA肿瘤疫苗的应用方法，其特征在于，所述阳离子脂质体-鱼精蛋白-mRNA肿瘤疫苗通过肌内或皮下注射或鼻粘膜途径进行免疫治疗，其中鼻黏膜途免疫具有良好的肿瘤治疗效果，尤其是抑制Lewis肺癌肿瘤生长。
11.按照权利要求10所述的阳离子脂质体-鱼精蛋白-mRNA肿瘤疫苗的应用方法，其特征在于，所述mRNA释放到细胞质中翻译成功能性蛋白质，加工为抗原肽提呈到细胞表面，促进Ｔ细胞刺激成熟, 激活抗肿瘤免疫。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201911174287.9A CN110882383A (zh) | 2019-11-26 | 2019-11-26 | 一种阳离子脂质体-鱼精蛋白-mRNA肿瘤疫苗及其制备方法和应用方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201911174287.9A CN110882383A (zh) | 2019-11-26 | 2019-11-26 | 一种阳离子脂质体-鱼精蛋白-mRNA肿瘤疫苗及其制备方法和应用方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN110882383A true CN110882383A (zh) | 2020-03-17 |
Family
ID=69748851
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201911174287.9A Pending CN110882383A (zh) | 2019-11-26 | 2019-11-26 | 一种阳离子脂质体-鱼精蛋白-mRNA肿瘤疫苗及其制备方法和应用方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN110882383A (zh) |
Cited By (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109125740A (zh) * | 2017-06-28 | 2019-01-04 | 四川大学 | 一种新型的肿瘤疫苗及其用途 |
| CN113181136A (zh) * | 2021-06-29 | 2021-07-30 | 青岛大学附属医院 | 一种装载和递送核酸的复合颗粒及其制备方法和用途 |
| CN113350521A (zh) * | 2021-04-08 | 2021-09-07 | 上海大学 | Lpd纳米脂质体及其制备方法和应用 |
| CN113368261A (zh) * | 2021-06-17 | 2021-09-10 | 苏州大学 | 一种非病毒载体及其制备方法与应用 |
| CN113797327A (zh) * | 2021-09-24 | 2021-12-17 | 北京大学 | 一种用于运载mRNA的核酸药物递送载体及其制备方法和应用 |
| CN113995852A (zh) * | 2021-11-08 | 2022-02-01 | 河北大学 | Arg-脂质体微囊、微囊包封的鱼精蛋白-siRNA复合体及其制备方法和应用 |
| CN114288400A (zh) * | 2022-01-26 | 2022-04-08 | 宁夏医科大学 | 一种改善肿瘤免疫微环境DCs失能的mRNA肿瘤疫苗、制备方法及其应用 |
| CN114404580A (zh) * | 2021-12-24 | 2022-04-29 | 苏州大学 | 一种树突状细胞癌症疫苗及其应用 |
| CN114557971A (zh) * | 2022-04-25 | 2022-05-31 | 康希诺生物股份公司 | 一种核酸-脂质纳米颗粒的冷冻干燥保护剂及其制备方法和应用 |
| CN114681599A (zh) * | 2020-12-31 | 2022-07-01 | 中国科学院上海药物研究所 | 一种阳离子脂质体疫苗及其制备方法和用途 |
| WO2022175815A1 (en) * | 2021-02-19 | 2022-08-25 | Pfizer Inc. | Methods of protecting rna |
| CN115154593A (zh) * | 2022-07-05 | 2022-10-11 | 湖南基茵美生命科技有限公司 | 一种mRNA活性细胞的改进式载体注射方法 |
| CN116983431A (zh) * | 2023-08-30 | 2023-11-03 | 山东大学 | 一种包载H-mRNA的脂质纳米颗粒及其制备方法和应用 |
| CN117025592A (zh) * | 2023-07-05 | 2023-11-10 | 北京大学 | 一种靶向jfk的小干扰rna及其用途 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2014057432A2 (en) * | 2012-10-09 | 2014-04-17 | Universita' Degli Studi Di Roma "La Sapienza" | Multicomponent lipid nanoparticles and processes for the preparation thereof |
| CN105920599A (zh) * | 2015-09-17 | 2016-09-07 | 武汉生物制品研究所有限责任公司 | 以阳离子脂质体dotap为佐剂的疫苗及其制备方法 |
| CN107583059A (zh) * | 2017-10-31 | 2018-01-16 | 宁夏医科大学 | 一种可包载量子点的阳离子脂质体流感疫苗及其制备方法 |
-
2019
- 2019-11-26 CN CN201911174287.9A patent/CN110882383A/zh active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2014057432A2 (en) * | 2012-10-09 | 2014-04-17 | Universita' Degli Studi Di Roma "La Sapienza" | Multicomponent lipid nanoparticles and processes for the preparation thereof |
| CN105920599A (zh) * | 2015-09-17 | 2016-09-07 | 武汉生物制品研究所有限责任公司 | 以阳离子脂质体dotap为佐剂的疫苗及其制备方法 |
| CN107583059A (zh) * | 2017-10-31 | 2018-01-16 | 宁夏医科大学 | 一种可包载量子点的阳离子脂质体流感疫苗及其制备方法 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| KE MEN, RUI ZHANG, XUEYAN ZHANG, RONG HUANG, GUONIAN ZHU, RONGSHENG TONG, LI YANG, YUQUAN WEI, XINGMEI DUAN: "Delivery of modified mRNA encoding vesicular stomatitis virus matrix protein for colon cancer gene therapy", RSC ADV, vol. 8, no. 22, pages 12105 * |
| RUI ZHANG, KE MEN, XUEYAN ZHANG, RONG HUANG, YAOMEI TIAN, BAILING ZHOU, CHAOHENG YU, YANTAI WANG, XIAO JI, QIUYUE HU, LI YANG: "Delivery of a Modified mRNA Encoding IL-22 Binding Protein (IL-22BP) for Colon Cancer Gene Therapy", J BIOMED NANOTECHNOL, vol. 14, no. 7, pages 1240 * |
| YAPING MAI, JUESHUO GUO, YUE ZHAO, SHIJIE MA, YANHUI HOU, JIANHONG YANG: "Intranasal delivery of cationic liposome-protamine complex mRNA vaccine elicits effective anti-tumor immunity", CELL IMMUNOL, vol. 354, pages 104143 * |
| 李攀;陈思穆;龚涛;张志荣;孙逊;: "脂质体-鱼精蛋白-DNA复合物的制备及对树突状细胞的成熟诱导", 华西药学杂志, vol. 28, no. 03, pages 246 - 248 * |
Cited By (17)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109125740A (zh) * | 2017-06-28 | 2019-01-04 | 四川大学 | 一种新型的肿瘤疫苗及其用途 |
| CN114681599A (zh) * | 2020-12-31 | 2022-07-01 | 中国科学院上海药物研究所 | 一种阳离子脂质体疫苗及其制备方法和用途 |
| WO2022175815A1 (en) * | 2021-02-19 | 2022-08-25 | Pfizer Inc. | Methods of protecting rna |
| CN113350521A (zh) * | 2021-04-08 | 2021-09-07 | 上海大学 | Lpd纳米脂质体及其制备方法和应用 |
| CN113368261A (zh) * | 2021-06-17 | 2021-09-10 | 苏州大学 | 一种非病毒载体及其制备方法与应用 |
| CN113181136A (zh) * | 2021-06-29 | 2021-07-30 | 青岛大学附属医院 | 一种装载和递送核酸的复合颗粒及其制备方法和用途 |
| CN113797327A (zh) * | 2021-09-24 | 2021-12-17 | 北京大学 | 一种用于运载mRNA的核酸药物递送载体及其制备方法和应用 |
| CN113995852B (zh) * | 2021-11-08 | 2024-01-30 | 河北大学 | Arg-脂质体微囊、微囊包封的鱼精蛋白-siRNA复合体及其制备方法和应用 |
| CN113995852A (zh) * | 2021-11-08 | 2022-02-01 | 河北大学 | Arg-脂质体微囊、微囊包封的鱼精蛋白-siRNA复合体及其制备方法和应用 |
| CN114404580A (zh) * | 2021-12-24 | 2022-04-29 | 苏州大学 | 一种树突状细胞癌症疫苗及其应用 |
| CN114288400A (zh) * | 2022-01-26 | 2022-04-08 | 宁夏医科大学 | 一种改善肿瘤免疫微环境DCs失能的mRNA肿瘤疫苗、制备方法及其应用 |
| CN114557971A (zh) * | 2022-04-25 | 2022-05-31 | 康希诺生物股份公司 | 一种核酸-脂质纳米颗粒的冷冻干燥保护剂及其制备方法和应用 |
| CN115154593A (zh) * | 2022-07-05 | 2022-10-11 | 湖南基茵美生命科技有限公司 | 一种mRNA活性细胞的改进式载体注射方法 |
| CN117025592A (zh) * | 2023-07-05 | 2023-11-10 | 北京大学 | 一种靶向jfk的小干扰rna及其用途 |
| CN117025592B (zh) * | 2023-07-05 | 2024-05-14 | 北京大学 | 一种靶向jfk的小干扰rna及其用途 |
| CN116983431A (zh) * | 2023-08-30 | 2023-11-03 | 山东大学 | 一种包载H-mRNA的脂质纳米颗粒及其制备方法和应用 |
| CN116983431B (zh) * | 2023-08-30 | 2024-06-04 | 山东大学 | 一种包载H-mRNA的脂质纳米颗粒及其制备方法和应用 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN110882383A (zh) | 一种阳离子脂质体-鱼精蛋白-mRNA肿瘤疫苗及其制备方法和应用方法 | |
| Mai et al. | Intranasal delivery of cationic liposome-protamine complex mRNA vaccine elicits effective anti-tumor immunity | |
| CN108992666B (zh) | 靶向共载抗原和tlr激动剂的阳离子磷脂-聚合物杂化纳米粒疫苗佐剂及制备方法与应用 | |
| Varypataki et al. | Cationic liposomes loaded with a synthetic long peptide and poly (I: C): a defined adjuvanted vaccine for induction of antigen-specific T cell cytotoxicity | |
| CN108743939B (zh) | 共载抗原、mpla与imq的阳离子磷脂-聚合物杂化纳米粒疫苗佐剂及制备方法与应用 | |
| Li et al. | Dendritic cell derived exosomes loaded neoantigens for personalized cancer immunotherapies | |
| Hou et al. | Co-delivery of antigen and dual adjuvants by aluminum hydroxide nanoparticles for enhanced immune responses | |
| CN111658767B (zh) | 一种亲水性抗原和/或疏水性抗原疫苗递送系统及其制备方法 | |
| US20230381306A1 (en) | Structure-Function Relationships in the Development of Immunotherapeutic Agents | |
| CN108938568B (zh) | 基于共包载抗原和双免疫激动剂的磷脂杂化聚合物囊泡的DCs疫苗及其制备方法与应用 | |
| CN110898215A (zh) | 一种基于细胞微囊泡的抗肿瘤疫苗的制备方法及其应用 | |
| JP7311560B2 (ja) | 酵母細胞壁粒子を用いたワクチン送達系 | |
| EP3210621B1 (en) | Micellar polypeptide vaccine having pegylated phospholipids as carrier | |
| CN108969771A (zh) | 甘露糖修饰的共载抗原和双免疫激动剂磷脂杂化聚合物囊泡及其制备方法与应用 | |
| Su et al. | Co-delivery of anionic epitope/CpG vaccine and IDO inhibitor by self-assembled cationic liposomes for combination melanoma immunotherapy | |
| CN113855634A (zh) | 多肽修饰的脂质体、mRNA传递系统及树突状细胞疫苗 | |
| CN116763907A (zh) | 一种水凝胶包埋的纳米颗粒疫苗及其制备方法 | |
| Wang et al. | Programmed polymersomes with spatio-temporal delivery of antigen and dual-adjuvants for efficient dendritic cells-based cancer immunotherapy | |
| CN114288400A (zh) | 一种改善肿瘤免疫微环境DCs失能的mRNA肿瘤疫苗、制备方法及其应用 | |
| Choi et al. | Topical DNA vaccination with DNA/Lipid based complex | |
| Yan et al. | Recent Advances in Liposome‐Based Nanoparticles for Antigen Delivery | |
| Chen et al. | Hit-and-run vaccine system that overcomes limited neoantigen epitopes for efficient broad antitumor response | |
| WO2023142999A1 (zh) | 细菌外膜囊泡来源的核酸纳米疫苗及其应用 | |
| CN116212011A (zh) | 一种以细菌为载体的肿瘤个性化疫苗及其制备方法 | |
| Zamani et al. | Improving potency of Nanoliposomal AE36 peptide vaccine by adding CD4+ T cell helper epitope and MPL in TUBO breast cancer mice model |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20200317 |
|
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |