CN110878313A - 大豆Gm-SEIPIN2家族基因及其在提高植物种子含油量中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种大豆Gm‑SEIPIN2家族基因及其在提高植物种子含油量中的应用，属于基因工程技术领域。大豆Gm‑SEIPIN2家族基因包含Gm‑SEIPIN2A和Gm‑SEIPIN2B两个基因，本发明通过转化酵母突变体技术和转基因拟南芥技术，对Gm‑SEIPIN2家族的两个基因Gm‑SEIPIN2A和Gm‑SEIPIN2B进行了功能验证，通过气相色谱技术测定油分含量和脂肪酸比例发现，Gm‑SEIPIN2A和Gm‑SEIPIN2B两个基因均能不同程度的提高油分含量，酵母中的脂肪酸比例测定结果显示，上述两个基因均能提高油酸含量。拟南芥油分测定结果显示，上述两个基因均能明显提高拟南芥种子的含油量，同时显著降低棕榈酸含量。本发明的Gm‑SEIPIN2家族的两个基因对提高植物种子含油量和提高油酸含量，特别是培育高油和高油酸大豆品种具有重要意义。

Description

大豆Gm-SEIPIN2家族基因及其在提高植物种子含油量中的 应用

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，尤其涉及大豆Gm-SEIPIN2家族基因及其应用。

背景技术

大豆(Glycine max(Linn.)Merr.)在世界范围内广泛种植，是一种重要的豆类作物，为人类和家畜提供饮食蛋白和油脂。在2017年大豆产量占油料种子产量的59％，占了蔬菜油消费的29％，是世界上最重要的油料作物。大豆油主要含有五种脂肪酸，依次为棕榈酸(16:0,PA)、硬脂酸(18:0,ST)、油酸(18:0,ST)、亚油酸(18:1,OL)、亚麻酸(18:3,LN)。其中OL,LI,and LN为不饱和脂肪酸，不饱和脂肪酸可以预防心脑血管疾病和一些癌症。但是多不饱和脂肪酸很不稳定容易被氧化，在加工的过程中容易氢化产生反式脂肪酸。反式脂肪酸能引起冠心病和动脉硬化等疾病。增加油酸的比例可以减少因氢化过程而产生的反式脂肪酸。因此在增加油分的同时提高油酸比例是大豆油分育种的重要目标。

油滴(Lipid droplets，LD)常期以来被认为是沉积在细胞质内含物，近些年来被认为是广泛分布在细胞中的一种复杂的动态细胞器。但是在不同类型细胞中LD的大小差异很大，范围是从1-100μm。它在不同类型的细胞中也有不同的名称，近几年来，科学家逐渐认同使用油滴来描述这一细胞器。LD表面由两亲性的单层磷脂、糖脂和甾醇等等组成，中间含有中性脂质如三酰甘油、二酰甘油、固醇酯和视黄酯等。油滴是储存脂肪的重要场所，通过对脂肪的储存，油滴可以防止细胞因积累过多的脂肪而导致脂中毒现象。此外油滴还参与膜运输、细胞信号转导和细胞蛋白代谢。它不仅与人类病原体的传染周期有关。还为多种反应提供了场所。关于油滴的形成途径有很多模型，至今没有足够多的证据去支持哪一种模型是足够正确的，现在科学家公认的是油滴是在内质网和外核膜合成的。LD的大小可以被一些脂质(如磷脂酰胆碱和磷脂酸)调控，一些关键的蛋白(例如Fsp27，SEIPIN，FITM2和perlipin 1)也能影响LD的大小。这些蛋白质可能通过直接或间接影响LD表面的磷脂的水平和组成来调节LD的大小。其中SEIPIN基因为研究热点基因，该基因最初在脂肪代谢障碍的病人中被鉴定出来，随后酵母、果蝇和小鼠的SEIPIN基因均被研究，研究发现它们均能调控油滴的大小，并能影响细胞中的脂肪含量。证明证明SEIPIN家族蛋白调控LD合成的功能在不同物种中是保守的。

SEIPIN基因定位在内质网上，在油滴合成中具有关键作用，SEIPIN蛋白与油滴结合，能够使油滴固定在内质网上，以此来影响油滴的萌芽。SEIPIN基因突变后，萌芽过程紊乱，将会形成超大型的LD。近年来，植物中的SEIPIN基因也能鉴定出来。研究发现，拟南芥中有三个SEIPIN基因，3个基因均能影响LD的合成，过表达At-SEIPIN1能增加拟南芥种子的油分总含量，并能改变拟南芥油分的脂肪酸组成，RNAi的拟南芥种子显著变小，种子的千粒重也降低。在蓖麻中过表达At-SEIPIN1基因也能增加种子的含油量，并能增加Hydroxy Fatty的含量。最新的研究发现，拟南芥seipin2、seipin3和seipin三突变体的种子和花粉中出现了超大的油滴，它们的萌发速度显著降低。拟南芥SEIPIN家族基因的研究表明，植物SEIPIN基因同样具有调控LD大小和影响油分积累的功能。但是对重要油料作物(大豆、油菜、大豆)的SEIPIN家族，尚无任何功能研究。

发明内容

本发明提供一种大豆Gm-SEIPIN2家族基因及其在提高植物种子含油量中的应用，目的是提供能提高植物种子油含量的大豆Gm-SEIPIN2家族的Gm-SEIPIN2A和Gm-SEIPIN2B基因。

本发明采取技术方案是：一种大豆Gm-SEIPIN2家族基因，包含Gm-SEIPIN2A和Gm-SEIPIN2B两个基因，其中Gm-SEIPIN2A的核苷酸序列如SEQ ID No.1所述，Gm-SEIPIN2B的核苷酸序列如SEQ ID No.2所述。

所述的大豆Gm-SEIPIN2家族基因编码的氨基酸，其中Gm-SEIPIN2A编码的氨基酸序列如SEQ ID No.3所述，Gm-SEIPIN2B编码的氨基酸序列如SEQ ID No.4所述。

一种植物表达载体，所述植物表达载体包含所述Gm-SEIPIN2A或Gm-SEIPIN2B。

所述一种大豆Gm-SEIPIN2家族基因在提高酵母含油量中的应用。

所述一种大豆Gm-SEIPIN2家族基因在提高拟南芥种子含油量中的应用。

一种大豆Gm-SEIPIN2家族基因在提高植物种子含油量中的应用。

所述一种大豆Gm-SEIPIN2家族基因在提高植物种子含油量中的应用，其特征在于所述植物为油料作物。

所述一种大豆Gm-SEIPIN2家族基因在提高植物种子含油量中的应用，其特征在于所述油料作物包括大豆、花生或油菜。

通过鉴定大豆Gm-SEIPIN2家族的基因，发现在大豆中一共存在2个基因，分别是Glyma.05G162700和Glyma.15G087400，将它们命名为Gm-SEIPIN2A和Gm-SEIPIN2B基因。在大豆中，到目前为止，关于Gm-SEIPIN2A和Gm-SEIPIN2B的作用还未见报道。

所述基因编码的蛋白质属于内质网结构蛋白基因。

利用任何一种能够引导外源基因在植物中表达的载体，将本发明所提供的Gm-SEIPIN2A和Gm-SEIPIN2B编码基因导入植物细胞，可获得油分提高的转基因细胞系及转基因植株。使用本发明的基因构建植物表达载体时，在其转录起始核苷酸前可加上任何一种增强启动子或诱导型启动子。为了便于对转基因植物细胞或植物进行鉴定及筛选，可对所使用的载体进行加工，如加入植物可选择性标记(GUS基因、萤光素酶基因等)或具有抗性的抗生素标记物(庆大霉素、卡那霉素等)。携带有本发明Gm-SEIPIN2A和Gm-SEIPIN2B的表达载体可通过使用Ti质粒、Ri质粒、植物病毒载体、直接DNA转化、微注射、电导、农杆菌介导等常规生物学方法转化植物细胞或组织，并将转化的植物组织培育成植株。被转化的宿主既可以是单子叶植物，也可以是双子叶植物。本发明通过转化酵母突变体技术和转基因拟南芥技术，对Gm-SEIPIN2家族的两个基因Gm-SEIPIN2A和Gm-SEIPIN2B进行了功能验证，通过气相色谱技术测定油分含量和脂肪酸比例发现，Gm-SEIPIN2A和Gm-SEIPIN2B两个基因均能不同程度的提高油分含量，酵母中的脂肪酸比例测定结果显示，上述两个基因均能提高油酸含量。拟南芥油分测定结果显示，上述两个基因均能明显提高拟南芥种子的含油量，同时显著降低棕榈酸含量。本发明的Gm-SEIPIN2家族的两个基因对提高植物种子含油量和提高油酸含量，特别是培育高油和高油酸大豆品种具有重要意义。

附图说明

图1是Gm-SEIPIN2A和Gm-SEIPIN2B基因系统进化树分析图；

图2a是Gm-SEIPIN2A基因在大豆不同组织中的表达结果图；

图2b是Gm-SEIPIN2B基因在大豆不同组织中的表达结果图；

图3是pYEP352-DEST-Gm-SEIPIN2A和pYEP352-DEST-Gm-SEIPIN2B的酵母PCR结果电泳图；其中：M：5000bp marker，1-9：Gm-SEIPIN2A，11-18Gm-SEIPIN2B基因；

图4是转Gm-SEIPIN2A和Gm-SEIPIN2B基因酵母的油分测定图；

图5a是转Gm-SEIPIN2A基因酵母的脂肪酸组成测定图；

图5b是转Gm-SEIPIN2B基因酵母的脂肪酸组成测定图；

图6a是转Gm-SEIPIN2A基因的拟南芥在1/2MS固体培养基的筛选结果图；

图6b是转Gm-SEIPIN2B基因的拟南芥在1/2MS固体培养基的筛选结果图；

图7a是转基因Gm-SEIPIN2A拟南芥PCR检测的电泳结果图，其中：M：2000bpmarker，1-6：Gm-SEIPIN2A；

图7b是转基因Gm-SEIPIN2B拟南芥PCR检测的电泳结果图，其中：M：5000bpmarker，1-5：Gm-SEIPIN2B；

图8a是对转基因的拟南芥的Gm-SEIPIN2A实时荧光定量结果图；

图8b是对转基因的拟南芥的Gm-SEIPIN2B实时荧光定量结果图；

图9a是转Gm-SEIPIN2A拟南芥的油分测定结果图；

图9b是转Gm-SEIPIN2B拟南芥的油分测定结果图；

图10a是转Gm-SEIPIN2A拟南芥的脂肪酸组成测定结果图；

图10b是转Gm-SEIPIN2B拟南芥的脂肪酸组成测定结果图。

具体实施方式

实施例1、大豆基因Gm-SEIPIN2A和Gm-SEIPIN2B基因系统进化树

分析用大豆Gm-SEIPIN2A和Gm-SEIPIN2B基因的氨基酸序列输入到NCBI进行blast，将与Gm-SEIPIN2A和Gm-SEIPIN2B基因的氨基酸相似度较高的序列下载下来，同时将已经研究过的拟南芥At-SEIPIN基因的氨基酸序列下载下来，用MEGA7软件进行进化树分析。分析结果(见图1)显示拟南芥在有一个SEIPIN1基因相比大豆中存在两个Gm-SEIPIN2基因，然而这种现象同时存在于其他作物中如植物如苜蓿、花生、辣椒等

实施例2、Gm-SEIPIN2A和Gm-SEIPIN2B基因在大豆不同组织中的表达结果

在种植长春市吉林大学的同一自然环境中，从两个生长于同一自然环境的大豆“Williams82”中收获了根，茎，叶，花和正在发育的种子。在不同时间收集以上材料，并在液氮中立即冷冻，并在进行RNA提取处理后储存在-80℃。

参照sangon公司的柱式植物总RNA抽提纯化试剂盒提取处理材料的总RNA，经1％琼脂糖电泳检测RNA的完整性。cDNA的合成按照Reverse Transcriptase M-MLV(RNase H^-)的说明书进行。利用实时荧光定量PCR对Gm-SEIPIN2A和Gm-SEIPIN2B基因在大豆不同组织及不同胚发育时期的表达情况进行检测。实验操作按照sangong公司SGExcel FastSYBRMixture(With ROX)说明书在在实时荧光定量PCR仪StepOnePlus中进行。以大豆actin为内参基因，引物如下：

表1 PCR反应所用引物

PCR反应体系及程序如表2：

表2 PCR反应体系和反应程序

PCR反应程序

采用2^-ΔΔCT法分析数据，确定基因的相对表达量。试验共设3次技术重复，3次生物学重复。结果(图2a、图2b)表明Gm-SEIPIN2A基因在大豆的根、茎尖、叶片中基本不表达，主要在花和发育中的大豆种子中表达，其中开花后35天(DAF35)时表达量最高。Gm-SEIPIN2B在各个组织中均有表达。其中在开花后15天(DAF15)时表达量最高。总而言之，Gm-SEIPIN2A和Gm-SEIPIN2B基因是在种子中的表达量最高。

实施例3、大豆基因Gm-SEIPIN2A和Gm-SEIPIN2B的克隆

选取籽粒饱满的大豆种子3粒，将种子后播种于花土中盆栽。培养条件为：16h光照，温度26℃，湿度65％，光强30000勒克斯。对大豆开花后25天的种子取样，提取totalRNA，反转录成cDNA,根据soybase上公布的基因序列设计引物，引物为：

按照表1添加反应成分，按表2程序进行PCR：

表1 PCR反应体系

表2 PCR程序

实施例4、Gm-SEIPIN2A和Gm-SEIPIN2B在酵母和拟南芥的表达及其油分的测定

构建酵母表达载体pYEP352-DEST-Gm-SEIPIN2A和pYEP352-DEST-Gm-SEIPIN2B和植物表达载体pCHF3300-Gm-SEIPIN2A和pCHF3300-Gm-SEIPIN2B。制备酵母感受态，利用化学转化法将酵母表达载体pYEP352-DEST-Gm-SEIPIN2A和pYEP352-DEST-Gm-SEIPIN2B转入到酵母中。并对转基因酵母进行PCR检测(图3)，对转基因酵母的油分含量(图4)和脂肪酸比例(图5a、图5b)进行分析。采用拟南芥侵花法将转入EHA105的植物表达载体pCHF3300-Gm-SEIPIN2A和pCHF3300-Gm-SEIPIN2B转到拟南芥中，将筛选出的转基因拟南芥阳性苗(图6a、图6b)移栽至土壤中，并对转基因拟南芥进行PCR检测(图7a、图7b)，同时检测阳性植株中目的基因表达量(图8a、图8b)，并对转基因的油分含量(图9a、图9b)及脂肪酸比例(图10a、图10b)进行分析。具体方法及结果如下：

(一)酵母感受态的制备及转化

1.从YPDA平板上挑取生长1-3周、直径2-3mm的AH109单克隆，接入1ml YPDA液体培养基中，振荡打散菌落，然后接入50ml YPDA液体培养基中，30℃恒温，250rpm振荡培养过夜(16-18hr)，至OD600>1.5；

2.取适量过夜菌液接种于300ml新鲜的YPDA液体培养基，至OD600＝0.2-0.3，30℃恒温，250rpm振荡培养至OD600＝0.4-0.6(约3hr)；

3.室温离心2500rpm×5min，弃上清；加入25-50ml ddH2O或TE重悬洗涤酵母沉淀细胞，离心弃上清，重复洗涤一次，沉淀用1.5ml 1×TE/LiAc重悬后，即为酵母感受态细胞(若仅用于转染质粒，则可置于4℃可几天内使用)；

4.准备下列试剂：

5.分装待转化的质粒DNA，振荡混匀：

pGBKT7-bait 0.1ug

Sperm DNA*(10mg/ml)0.1mg

*Sperm DNA新配制时水浴煮沸20分钟，立即插入冰浴，保存于-20℃

6.每管加入100ul用1×TE/LiAc重悬的酵母感受态细胞，振荡混匀；

7.各加入600ul PEG/LiAc，剧烈振荡(提高转化效率)，30℃恒温，200rpm振荡培养30min；

8.各加入70ul DMSO，缓缓倒置混匀(不能振荡)，42℃水浴热休克15min，迅速插入冰浴冷却1-2min；

9.室温离心14,000rpm×5sec，尽量弃尽上清，以0.5ml 1×TE重悬沉淀细胞，取100ul涂布SD/-Trp固体培养板，30℃倒置培养3天待菌落长出。

3.2酵母阳性菌落PCR检测

按照下表PCR反应体系和PCR程序进行菌落PCR，结果见图3。对阳性菌落扩繁后保菌。

表1 PCR反应体系

表2 PCR程序

(二)浸花法转化拟南芥

拟南芥受体材料选择：

将拟南芥种植在16h/8h光照/黑暗条件，20℃到22℃，拟南芥移栽后大约4周进入花期，转化前将角果及已完全开放的花蕾剪去，仅留下刚刚露白及幼嫩花蕾。

浸花法转化拟南芥

①接种单个菌落于5mL YEP培养基(利福平10μg/mL，卡那霉素100μg/mL)中，培养过夜；

②1：100扩培到500mL YEP的锥形瓶中，继续摇培12hr左右至生长密度为OD600值1.0-1.2；

③室温，5000g离心10min收集菌体；

④用转化介质(1/2MS培养基，5％的蔗糖，0.05％Silwet L-77，0.5g/L MES，pH5.7)悬浮菌体密度至OD600为0.8左右；

⑤将含有农杆菌的转化介质倒入培养皿中，将剪去荚果的拟南芥平放在桌面上，使得整个花序连同莲座基部的叶片都浸入转化介质中。如果再次侵染，一般两次侵染之间间隔时间为一周比较好，具体浸染时间和浸染次数依拟南芥生长条件而定。

⑥取出拟南芥，将其侧卧放在干净的塑料托盘上，并用薄膜覆盖避光保湿恢复24hr；

⑦将拟南芥扶起，培养液浇透后，放在光下正常培养，转化后植株正常的开花生长，3-4周待长角果完全枯黄、欲开裂时，即可收获种子。收获的种子，37℃烘箱放置24h后，放于-20度冰箱中常期储存。

(三)拟南芥筛选

1.拟南芥种子消毒

(1)根据实验需要分出约10mg拟南芥种子装于1.5mL EP管中；

(2)加入1mL 10％的次氯酸钠溶液上下颠倒混匀；

(3)用涡旋仪震荡2min后低速离心后弃掉10％的次氯酸钠溶液；

(4)加入1ml的灭菌水，用移液器吹打数次。

(5)重复操作步骤(4)；

(6)用移液器将种子和少量灭菌水喷洒到含basta筛选剂的1/2MS培养基上；

(7)将拟南芥种子吹打均匀后吸去多余水分后，在超净工作台中吹10min；

(8)将平板封口，黑暗条件下倒置于4℃春化72h；

(9)春化结束后，将平板置于光照培养箱中竖直培养。培养条件为：16h光照/8h黑暗，22/16℃，光照强度60μE m-2s-1。

2.用含4mg/l的basta抗性培养基筛选拟南芥

将培养基上生长约2周的转基因拟南芥阳性幼苗移到土壤中，阳性拟南芥植株见图6。约2周后，取拟南芥叶片，利用CTAB法提取拟南芥叶片DNA，进行PCR检测。检测结果见图7a、图7b。结果显示获得的转基因植株为阳性植株。获得约4周后，取拟南芥叶片，提取总RNA，进行荧光实时定量PCR检测。检测结果见图8a、图8b。结果证明Gm-SEIPIN2A和Gm-SEIPIN2B基因在拟南芥中有所表达。

(四)、酵母和拟南芥种子油分含量测定

提取油分的方法

1取鲜酵母50mg/拟南芥干种子10mg，放入到2ml EP管中，加入2粒小钢珠。用磨样机将其磨碎。

2加入用甲醇溶液作为溶剂配制的2.5％浓硫酸1ml，上下颠倒混匀后将管放在70℃水浴中1小时，期间间隔10分钟晃动一次，提取甲酯化脂肪酸。

4一小时后关掉水浴锅，待自然冷却后，取500μl提取液到新离心管中。

5向其中加入600μl 0.9％NaCl溶液、300μl正己烷，涡旋震荡数分钟，4000rpm离心10分钟，取上清到新离心管中。

6取400μl上清液于气相专用瓶中，加入10μl浓度为10mg/ml的17:0脂肪酸作为内标，用气相色谱仪测定油分含量。每个样品取3个平行作为实验重复。

酵母的油分测定结果见图4，结果表明在酵母seipin突变体ylr404wΔ中，Gm-SEIPIN2A和Gm-SEIPIN2B的表达可以部分恢复突变体表型，表达Gm-SEIPIN2B可以使油分含量提高19.72％。而表达Gm-SEIPIN 2A仅仅使油分含量有少量提高。脂肪酸组成成分见图5a、图5b，在酵母中测了4种脂肪酸包括C16:0(棕榈酸)、C18:0(硬脂酸)、C16:1(十六烷酸)和C18:1(油酸)。结果表明，在seipin突变体菌株中过表达这两个基因均可以增加硬脂酸和油酸的含量。其中Gm-SEIPIN 2A可以使酵母突变体油酸含量增加31.16％，Gm-SEIPIN2B可以使可以使酵母突变体油酸含量增加11.1％。拟南芥的油分测定结果见图9a、图9b，结果显示，在转Gm-SEIPIN2A拟南芥种子中检测到油分最高分别增加了17.38％，转Gm-SEIPIN2B的拟南芥种子油分最高提高16.26％。脂肪酸组成成分见图10a、图10b。在拟南芥中测了6种脂肪酸包括C16:0(棕榈酸)、C18:0(硬脂酸)、C18:1(油酸)、C18:2(亚油酸)、C18:3(亚麻酸)和C20:1(二十烷碳烯酸)。脂肪酸组成成分分析显示转Gm-SEIPIN2A拟南芥种子棕榈酸含量最高降低了31.2％。转Gm-SEIPIN2B拟南芥种子棕榈酸含量最高降低了28.78％。综上所述，通过转化酵母突变体和转化拟南芥实验说明Gm-SEIPIN2A和Gm-SEIPIN2B能起到增加植物种子油分含量的作用，并在酵母中能增加油酸的比例。通过基因过表达技术可以创制高油大豆品种，对这两个基因进行编辑技术和RNA干扰技术可以获得油酸比例的大豆种质资源。

序列表

<110> 吉林大学

<120> 大豆Gm-SEIPIN2家族基因及其在提高植物种子含油量中的应用

<130> jluwangqiyu201912

<160> 4

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1566

<212> DNA

<213> 人工合成()

<400> 1

atggagtcat ctttttcagg cccaaacaac caaaacgacg acgttttcct cgacgcgctt 60

cctcactgcc ccttccacca ttgctccggc gccgccgata aatcgccgga atcttcctcc 120

tcttcttcaa ttctctccga ccccaaccca ccctccccac ctccggcaac cacaatccgc 180

cgccgttcaa cccgccgtaa ctcaccggtt agggagacca cgaataccgg ttccagccac 240

aattcgacca ccggaaacgt cacgaacctt cggagcgatc gaaatctcgg aacttcaaac 300

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tctccaagcg ttggcaccga agaggggaac gaggaatcga cgttaaccac cgccgagaac 420

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<210> 2

<211> 1521

<212> DNA

<213> 人工合成()

<400> 2

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ctcaagattg ctcctcttct tactggctat atatccgaaa cacagactct gaatgtgaag 1200

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cgagcagaat atcaaccagg tgcaggcatt cctgaaatat atgatgcatc tctgatcatt 1320

gaatctgaac ttcccttatt caagaggatg atttggcttt ggaagatgag catatttata 1380

tggatcgcga tgatggcgtt cttcgcggag ttactttttg ctcttgtgtg ttgtacgcct 1440

ataataattc ctaaaacaag gcaaagggta gcttctggtc gcagtcctgc aaccttaaac 1500

catcttcagg cacaacattg a 1521

<210> 3

<211> 521

<212> PRT

<213> 人工合成()

<400> 3

Met Glu Ser Ser Phe Ser Gly Pro Asn Asn Gln Asn Asp Asp Val Phe

1 5 10 15

Leu Asp Ala Leu Pro His Cys Pro Phe His His Cys Ser Gly Ala Ala

20 25 30

Asp Lys Ser Pro Glu Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ile Leu Ser Asp Pro

35 40 45

Asn Pro Pro Ser Pro Pro Pro Ala Thr Thr Ile Arg Arg Arg Ser Thr

50 55 60

Arg Arg Asn Ser Pro Val Arg Glu Thr Thr Asn Thr Gly Ser Ser His

65 70 75 80

Asn Ser Thr Thr Gly Asn Val Thr Asn Leu Arg Ser Asp Arg Asn Leu

85 90 95

Gly Thr Ser Asn Gly Asn Glu Asn Phe Pro Glu Lys Cys Asp Ser Asn

100 105 110

Arg Glu Lys Val Arg Pro Phe Gln Ser Pro Ser Val Gly Thr Glu Glu

115 120 125

Gly Asn Glu Glu Ser Thr Leu Thr Thr Ala Glu Asn Glu Asp Gly Val

130 135 140

Thr Asp Ser Ala Asp Ser Ala Val Glu Phe Ser Asn Ser Pro Leu Asn

145 150 155 160

Ser Leu Asp Tyr Val Thr Gly Leu Val Ile Arg Ser Ile Val Phe Gln

165 170 175

Ile Asn Ile Phe Val Val Leu Met Lys Phe Pro Val Trp Phe Met Leu

180 185 190

His Val Phe Leu Phe Phe Val Asp Pro Phe Gly Thr Ile Ser Lys Gly

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Lys Gly Leu Leu Val Val Ile Leu Gly Lys Phe Trp Cys Phe Val Phe

210 215 220

Arg Cys Ile Asp Pro Ser Ala Gln Gly Trp Phe Lys Glu His Lys Ser

225 230 235 240

Leu Trp Asn Val Ala Phe Arg Cys Gly Trp Gly Phe Leu Arg Ser Met

245 250 255

Tyr Ile Cys Cys Ile Leu Phe Gly Leu Leu Val Ser Ser Leu Val Val

260 265 270

Ser Gly Phe Leu Val Arg Trp Leu Val Glu Glu Pro Phe Gln Met Arg

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Gln Val Leu Asn Phe Asp Tyr Thr Lys Gln Ser Pro Val Ala Phe Val

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Pro Val Met Ser Cys Asp Gly Val Gly Gly Ala His Asp Ser Glu Lys

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Gly Ile Ala Val Arg Glu Trp Met Gly Arg Arg Val Ile Pro Ala Asn

325 330 335

Gln Lys Val Gln Val Thr Val Ser Leu Val Val Pro Glu Ser Glu Tyr

340 345 350

Asn Thr Asn Leu Gly Ile Phe Gln Ile Arg Val Asp Phe Leu Ser Ser

355 360 365

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450 455 460

Ile Ile Trp His Gly Lys Ile Cys Ile Phe Leu Trp Ile Thr Met Met

465 470 475 480

Ala Phe Met Met Glu Leu Leu Leu Val Leu Val Cys Cys Leu Pro Ile

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<210> 4

<211> 506

<212> PRT

<213> 人工合成()

<400> 4

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1 5 10 15

Ala Phe His Gln Cys Pro Ala Glu Gly Ser Thr Glu Pro Ser Asp Ser

20 25 30

Ala Ser Thr Leu Leu Asp His Lys Pro His Ser Pro Pro Thr Thr Ile

35 40 45

Arg Arg Arg Pro Leu Arg Arg Gly Ile Pro Gly Thr Gln Ser Ser Asp

50 55 60

Ser Ser Ile Val Ser Asp Leu Ile Asp Val Asp Ser Arg Arg Ser Phe

65 70 75 80

Arg His Lys Ser Arg Leu Arg Asn Leu Asn Lys Asn Glu Asn Ser Glu

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130 135 140

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Gln Met Lys Leu Ile Phe Met Phe Ile Thr Ser Pro Phe Leu Phe Met

165 170 175

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180 185 190

Gly Lys Asp Phe Val Ile Gly Ile Leu Asn Arg Met Arg Cys Phe Ala

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210 215 220

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500 505

Claims (8)

1.一种大豆Gm-SEIPIN2家族基因，其特征在于：包含Gm-SEIPIN2A和Gm-SEIPIN2B两个基因，其中Gm-SEIPIN2A的核苷酸序列如SEQ ID No.1所述，Gm-SEIPIN2B的核苷酸序列如SEQ ID No.2所述。

2.一种如权利要求1所述的大豆Gm-SEIPIN2家族基因编码的氨基酸，其特征在于：Gm-SEIPIN2A编码的氨基酸序列如SEQ ID No.3所述，Gm-SEIPIN2B编码的氨基酸序列如SEQ IDNo.4所述。

3.一种植物表达载体，其特征在于：所述植物表达载体包含权利要求1所述Gm-SEIPIN2A或Gm-SEIPIN2B。

4.如权利要求1所述一种大豆Gm-SEIPIN2家族基因在提高酵母含油量中的应用。

5.如权利要求1所述一种大豆Gm-SEIPIN2家族基因在提高拟南芥种子含油量中的应用。

6.如权利要求1所述一种大豆Gm-SEIPIN2家族基因在提高植物种子含油量中的应用。

7.如权利要求6所述一种大豆Gm-SEIPIN2家族基因在提高植物种子含油量中的应用，其特征在于所述植物为油料作物。

8.如权利要求7所述一种大豆Gm-SEIPIN2家族基因在提高植物种子含油量中的应用，其特征在于所述油料作物包括大豆、花生或油菜。

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